大蒜素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨大蒜素对体外培养的人肝癌HepG2细胞凋亡的促进作用及其分子机理.方法 采用TUNEL法检测大蒜素对HepG2细胞凋亡的影响,提取Bcl-2基因的mRNA,以RT-PCR方法研究大蒜素对Bcl-2基因表达的影响.结果 大蒜素使人HepG2细胞凋亡指数增加(P<0.01),且呈剂量依赖效应;Bc1-2基因mRNA水平随大蒜素浓度升高而降低.结论 大蒜素可促进人HepG2细胞的凋亡过程,并使Bcl-2基因mRNA水平降低,从而起到抗肿瘤的治疗作用.探讨大蒜素体内外诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的作用及机制.     

体外培育牛黄诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的研究体外培育牛黄诱导人肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法用单层培养法培养HepG2细胞，用不同剂量的体外培育牛黄作用于HepG2细胞不同时间，用荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态的改变及细胞凋亡，用流式细胞仪检测HepG2细胞的亚G1峰细胞（凋亡）率的变化。结果体外培育牛黄100～800ug／ml作用于HepG2细胞48h后，HepG2细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征性形态学改变；流式细胞直方图上可见亚二倍体峰，不同浓度作用于HepG2细胞24、36、48、72h后的细胞凋亡率均显著高于空白对照组（P〈0．01），400ug／ml浓度组与阳性对照FT207（100ug／ml）组比较无明显差异。结论体外培育牛黄能诱导人肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡。     

野西瓜多糖诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的观察野西瓜多糖诱导人肺癌HepG2细胞凋亡作用。方法通过MTT法测定野西瓜多糖对HepG2细胞的细胞毒作用;倒置显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;PI染色法,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示野西瓜多糖对HepG2细胞有抑制作用,IC50为471.53mg/L;倒置显微镜、激光共聚焦扫描显微镜下观察细胞形态,表现为细胞皱缩、碎裂、甚至出现凋亡小体;流式细胞术检测到野西瓜高剂量组凋亡率为74.926%。结论野西瓜多糖具有诱导HepG2细胞凋亡的作用。     

黄芩苷联合顺铂体外诱导人肝癌细胞HepG2.0凋亡的实验研究

目的观察黄芩苷联合顺铂是否能诱导HepG2.0细胞凋亡及探讨其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用体外细胞培养方法,分别用黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂干预HepG2.0细胞。用CCK-8法检测细胞活性;光学显微镜观察HepG2.0细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测HepG2.0细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc表达的影响。结果光学显微镜下可观察到药物组细胞凋亡的形态改变;各药物组细胞早期凋亡率显著升高;各药物组细胞Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax、c-myc和Caspase-3表达升高。结论黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂均能诱导HepG2.0细胞凋亡,其机制可能通过调控Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc蛋白的表达有关。     

辣椒素对肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨辣椒素对肝癌HepG2细胞生长抑制及凋亡诱导作用的机制。方法:以100、200、400μmol/L浓度辣椒素处理肝癌HepG2细胞后分别培养12、24、48 h,MTT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western Blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果:随着作用浓度及时间增加,经辣椒素处理的肝癌HepG2细胞增殖活性明显降低(P<0.01);抑制率均显著增加,呈浓度和时间依赖性(P<0.01);HepG2细胞凋亡率也随辣椒素浓度增加而上升;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax、Bad表达上升(P<0.05)。结论:辣椒素对肝癌HepG2细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

姜黄素诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡及对细胞生长周期的影响

目的研究中药姜黄素在体外诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡的机制及对细胞生长周期的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,用不同浓度的姜黄素（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0μmol/L）刺激人肝癌HepG2细胞24、36和48h,MTT法及台盼蓝拒染法检测姜黄素对人肝癌HepG2细胞生长增值的影响并绘制生长曲线图,流式细胞术（FCM）检测其对细胞生长周期的影响。结果MTT法结果表明姜黄素对人肝癌细胞HepG2的生长具有抑制作用,2.0μmol/L浓度组在24h与对照组比较便具有统计学意义（P〈0.05）,16μmol/L浓度组与HepG2细胞作用48h后对HepG2细胞的生长抑制作用最强（54.78±2.35）%,台盼蓝拒染法发现细胞存活率与姜黄素浓度间具有剂量和时间效应;流式细胞仪检测结果表明8.0μmol/L姜黄素诱导了人肝癌HepG2细胞发生凋亡,并对细胞生长的S期有明显的阻滞作用。结论姜黄素在体外能阻滞HepG2细胞的生长增值,诱导了人肝癌HepG2细胞发生凋亡。     

中药诱导肝癌细胞凋亡

凋亡(apoptosis)一词由Kerr于1972年首先提出.细胞凋亡是指在特定时空中发生的、受机体严密调控的细胞"自杀"现象,它呈现其独特的、有别于细胞坏死的形态学和生物化学特点,被普遍认为是有机体维持个体内稳态恒定的极其重要的机制之一.它与有丝分裂相反而又互补,并共同参与调控细胞群落、细胞数量的恒定,其调控机制的失常则是包括肿瘤在内的一系列疾病的产生根源.因此,细胞凋亡已成为当前细胞生物学,尤其是肿瘤学基础与临床研究的前沿与热点.近年来,有关中药诱导肝癌细胞凋亡的研究报道逐年增多.作者简介:李柏(1964-),男,博士研究生,副教授.     

蛋白激酶C活性与电离辐射诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的关系

目的探讨蛋白激酶C(PKC)活性与X线电离辐射诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的关系.方法PKC调节剂PMA和SP预处理HepG2细胞,分辐射组、PMA0.5h组、PMA24h组、SP组;32P掺入法检测细胞的PKC活性,Varian2100直线加速器辐射细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果6Gy X线辐射诱导HepG2细胞凋亡率是21.9%,辐射后细胞PKC活性是辐射前的2.79倍.辐射组、PMA0.5h组、PMA24h组、SP组的PKC活性分别为1.07、3.86、051、0.48 pmol/(min·μg),细胞凋亡率分别为21.9%、5.73%、31.70%和32.83%.结论辐射可以引起HepG2细胞凋亡,PKC活性增加/降低对辐射诱导的凋亡起抑制/促进作用,提示PKC可能参与了细胞凋亡保护机制.     

中药诱导肝癌细胞凋亡的实验研究进展

原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,近年来发病率呈上升趋势,全世界每年新增30万-100万病例,且已居我国癌症的第二位,在城市仅次于肺癌,在农村次于胃癌,年病死率为1.46-4.60／万,平均2.04／万。我国每年因肝癌而死亡的人数约20余万,约占世界肝癌死亡人数45％^[1]。     

丹参酮ⅡA抑制HepG2细胞生长及诱导其凋亡的实验研究

目的:研究丹参酮ⅡA对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用和凋亡诱导作用.方法:以0μg/mL丹参酮ⅡA作阴性对照,MTT法检测0.5～10.0 μg/mL丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞HepG2 24,48,72 h的生长抑制率;HT33258荧光染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA作用HepG2细胞72 h后的细胞凋亡.结果:0.5～10.0 μg/mL丹参酮ⅡA均能抑制人肝癌细胞HepG2生长,并有明显的时间和剂量依赖性;在24,48,72 h的半数抑制浓度分别为14.7,7.4,3.9 μg/mL;经丹参酮ⅡA作用后,荧光染色可以观察到典型的凋亡细胞形态特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示除1.0 μg/mL组外均可见明显的凋亡细胞形成的梯状条带;流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA作用72 h后的细胞凋亡率分别为20.32%±2.16%,28.01%±2.35%,33.87%±3.43%,46.73%±4.08%和57.85%±3.74%,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:丹参酮ⅡA在体外能明显抑制人肝癌细胞HepG2生长,抑制其生长的机制可能是诱导细胞凋亡.     

半边莲的化学成分研究

目的 研究半边莲的化学成分。方法 利用硅胶柱、凝胶柱、制备HPLC等分离和纯化,通过化合物的波谱数据和理化特性进行结构鉴定。结果 从半边莲中分离鉴定了12个化合物,分别为环桉烯醇(cycloeucalenol,Ⅰ)、24-亚甲基环木波罗醇(24-methylenecycloartanol,Ⅱ)、植物醇(phytol,Ⅲ)、植物烯醛(phytenal,Ⅳ)、β-香树脂醇(Ⅴ)、腺苷(Ⅵ)、正丁基-β-D-呋喃果糖苷(Ⅶ)、正丁基-α-D-呋喃果糖苷(Ⅷ)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(Ⅸ)、正丁基-α-D-吡喃果糖苷(Ⅹ)、水杨苷(Ⅺ)、5-羟甲基糠醛(Ⅻ)。结论 其中化合物Ⅰ～Ⅳ及Ⅵ～Ⅻ为首次从半边莲属植物中分离得到,化合物Ⅴ为首次从该植物中分离得到。     

半边莲生物碱对内皮素诱导损伤的人血管内皮细胞纤溶系统的影响

目的：研究半边莲生物碱对内皮素诱导损伤的人血管内皮细胞的保护作用。方法：常规提取半边莲生物碱,培养人血管内皮细胞．ELISA法测定细胞培养上清中组织纤溶酶原激活物（t-PA）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）的含量。结果：内皮素组PAI-1含量显著高于正常对照组（P〈0．01）．t-PA含量在数值上低于正常对照组,但无统计学意义。半边莲生物碱各组PAI-1含量均低于内皮素组（P〈0．01）．与内皮素B受体拮抗剂BQ7S8作用相似。半边莲生物碱低剂量组t-PA含量高于内皮素组（P〈0．01）．高、中剂量组t-PA含量虽然有增高趋势．但无统计学意义。结论：内皮素能够使人血管内皮细胞释放PAI-1增加．半边莲生物碱通过抑制该效应而起到保护血管内皮细胞的作用。     

流式细胞术检测石见穿多糖诱导的肝癌细胞凋亡率

目的 探讨石见穿多糖抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖的机制. 方法 利用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测经不同浓度石见穿多糖作用的SMMC-7721肝癌细胞的凋亡率.结果石见穿多糖各浓度组平均细胞凋亡率为(7.87±1.860)%、(13.63±2.87)%、(21.05±2.68)%,显著高于对照组(0.67±0.28)%. 结论 石见穿多糖能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,且凋亡率随着石见穿多糖浓度的增加而增高.     

C2-神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡

目的 观察无血清条件下神经酰胺对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用。方法 采用AO-EB荧光染色、流式细胞术DNA倍体分析和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果 终浓度10μmol/L的C2-神经酰胺作用24h，可诱导无血清培养的SMMC-7721细胞发生凋亡，AO-EB染色可见典型的细胞凋亡表现，细胞核固缩、浓染、裂解，细胞质芽突脱落成为凋亡小体。经流式细胞仪检测可见典型的亚二倍体峰。DNA凝胶电泳呈现典型的180-200bp的DNA梯状条带。结论 C2-神经酰胺可诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

二硫化二砷对肝癌细胞凋亡和坏死的影响

目的观察二硫化二砷（As2S2）对人肝癌细胞株（BEL-7402）凋亡和坏死的影响。方法人肝癌细胞株BEL-7402经不同浓度A82s2处理后,采用MTT法进行细胞增殖抑制率的测定,台盼蓝排染法观察As2S2对肝癌细胞的细胞毒作用,通过流式细胞仪定量检测细胞凋亡和坏死的情况,同时检测凋亡相关蛋白Fas和Apo2．7的表达。结果As2S2对细胞有明显细胞毒作用,并且可诱导细胞凋亡的产生,上调Apo2．7和Fas蛋白的表达。结论A22S2具有促肝癌细胞凋亡和坏死的作用。     

基于王三虎“燥湿相混致癌说”探究半边莲治疗癌症的作用及物质基础

【目的】基于王三虎教授的"燥湿相混致癌说"探讨半边莲治疗癌症的作用及物质基础,分析中药半边莲提取物的化学成分,为进一步研究其抗癌的活性成分提供依据。【方法】运用硅胶柱层析、硅胶薄层层析、反相RP-C18柱层析、MCI柱层析、高效液相等多种色谱手段对半边莲展开系统的化学成分研究,并通过各种波谱、光谱手段鉴定各化合物的结构。对分离所得的化合物,采用人乳腺癌细胞MCF-7和人胃癌细胞MGC-803模型进行抗癌活性评价。【结果】从半边莲中分离鉴定得到6个化合物,分别为:matairesino(1)、(8S,9S,8’S)-4,4’-Dihydroxy-3,3’,9-trimetoxy-9,9’-epoxylignan(2)、3β-hydroxyhop-22(29)-ene(3)、parietin(4)、chrysophanol(5)、gaultheriadiolide(6)。木脂素类化合物1、2在20μmol/L时,细胞抑制率大于50%。【结论】木脂素类化合物1、2具有潜在的抗胃癌和乳腺癌活性,其中化合物2活性最好,对MGC-803细胞增殖活性的半数抑制浓度(IC50)为9.2μmol/L。     

榄香烯体外诱导急性白血病细胞凋亡的研究

目的 探讨榄香烯诱导白血病细胞凋亡的作用及其机制。方法 采用MTT法、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞术（FCM）、DNA电泳方法观察榄香烯对HL．60白血病细胞株的促凋亡作用，并进行细胞周期分析和采用RT-PCR、FCM检测bcl-2基因表达的变化。结果 榄香烯在体外诱导HL-60细胞凋亡，呈细胞凋亡典型的形态和生化特征，可见凋亡小体和梯形条带，并具有时间剂量依赖性，凋亡率最高达51．8％，在凋亡过程中细胞阻滞于S期，并检测到bcl-2基因表达下调。结论 榄香烯具有诱导细胞凋亡的作用，其机制可能与bcl-2基因表达下调有关。     

β1整合素过表达抑制顺铂诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨β1整合素过表达对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法功能性β1整合素稳定过表达Hep3B细胞系用于实验。采用WST-1细胞增殖实验试剂盒检测细胞增殖,DNA梯形条带和Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。结果与亲株、空载体转染Hep3B细胞相比,β1整合素过表达明显抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。细胞外信号调节激酶(ERK)抑制物PD98059和p38促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制物SB203580能够明显减弱β1整合素对细胞凋亡的保护作用,但Jun激酶抑制物SP600125不能减弱β1整合素的保护作用。结论β1整合素能够通过ERK和p38MAPK信号通路抵抗顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。β1整合素介导的细胞外基质信号与肝细胞肝癌化疗耐药有关。     

假鹰爪叶的化学成分研究

目的：研究假鹰爪叶的化学成分。方法：采用硅胶柱层析及Sephadex LH-20等色谱分离技术分离纯化化合物,根据理化性质及波谱数据来鉴定结构。结果：从假鹰爪叶的乙酸乙酯提取部分和正丁醇提取部分分离到4个黄酮类化合物,分别为(2R,3R)5,7,3’,4‘-四羟基二氢黄酮醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(astilbin,Ⅰ),5,7-二羟基色原酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(eucryphin,Ⅱ),荠宁黄酮(mosloflavone,Ⅲ),黄芩素-7-甲醚(negletein,Ⅳ);其中化合物Ⅰ,Ⅱ为该属植物中首次发现。     

榄香烯诱导喉癌细胞凋亡的实验观察

目的：研究榄香烯对喉癌细胞的作用及机制。方法：用MTT法测定榄香榄香烯对喉癌细胞的抑制作用，在透射电镜下观察其形态学变化，用流式细胞仪研究不同浓度、不同时间细胞凋亡的发生和对细胞周期的影响。结果：榄香烯明显抑制Hep-2细胞的生长，对Hep-2细胞的半数生长的抑制剂量（IC50）值24h为61．3μg/ml。透射电镜观察发现染色质浓缩，沿着核膜排列，形成不同形状和大小的块状。流式细胞术证实，凋亡细胞具有时间和药物浓度双相依赖性。榄香烯阻滞Hep-2细胞从S期进入G2M期。结论：在实际室条件下，榄香烯能够抑制喉癌细胞的生长，其抑制作用与细胞凋亡有关。