不同单克隆抗体检测结肠癌P-糖蛋白表达的对比研究

目的:用单克隆抗体(JSB1、C219和C494)检测结肠癌组织中P-糖蛋白(P-gp)的表达。方法:应用免疫组化S-P法,通过JSB1、C219和C494分别检测96例结肠癌组织中P-gp表达的阳性率,分析与组织学类型、浸润程度、淋巴结转移和Dukes分期之间的关系以及结肠癌患者的生存情况。结果:96例结肠癌组织中用JSB1检测出P-gp阳性率为57.3%,C21933.3%,C494 95.8%,其与结肠癌的组织学类型、浸润程度、淋巴结转移和Dukes分期等均无明显相关;C494的检测结果与其它单克隆抗体检测结果的不同形式组合所显示出的结肠癌患者1、3和5年的生存率之间比有统计学意义(P<0.05)。结论:JSB1、C219和C494检测结肠癌组织中P-gp表达明显不同。     

JSB1和C219蛋白在结肠腺癌的表达及其意义

目的:研究P糖蛋白(P gp)的单克隆抗体JSB1和C219蛋白与结肠腺癌的耐药、生物学行为及预后的关系。方法:用免疫组化S P法检测32例正常结肠黏膜、20例结肠腺瘤、96例结肠腺癌、30例死胎结肠黏膜组织中JSB1和C219蛋白的表达。结果:JSB1在正常结肠黏膜、结肠腺瘤、结肠腺癌及死胎结肠黏膜表达的阳性率显著高于C219(P<0.01)。JSB1和C219在死胎结肠黏膜的表达均比正常结肠黏膜高,其中前者有统计学意义(P<0.01)。JSB1和C219在结肠腺癌的表达均比正常结肠黏膜高,其中后者有统计学意义(P<0.05)。二者表达阳性率分别为57.29%(5596)、33.33%(3296)与结肠腺癌的组织学类型、浸润程度、淋巴结转移及Dukes分期无明显相关性(P>0.05)。单独表达JSB1或C219、无阳性表达的结肠腺癌病例5年存活率均显著高于二者均呈阳性表达的病例(P<0.01)。结论:结肠腺癌由P gp介导的多药耐药性是天然性的,并且是由多种P gp异构体共同形成的。检测JSB1和C219的表达可作为指导结肠腺癌化疗用药和判断预后的参考指标。     

C-myc、nm23-H1 基因在宫颈癌中表达的意义及相互关系

目的：探讨C－myc、nm23-H1两种基因在宫颈癌中表达及其临床意义。方法：应用免疫组化法检测宫颈癌40例、宫颈上皮内瘤形成（CIN）10例及正常宫颈20例组织标本中C－myc和nm23-H1蛋白表达，采用统计学χ^2检验方法，分析这2种蛋白表达与临床病理及预后关系。结果：（1）C－myc蛋白表达率：宫颈癌组织为40．00％，正常宫颈组织为10．00％，CIN为20．00％，表达与病理分类有关，腺癌表达率高于鳞癌，但差异无显著性（P＜0．05）；过表达与临床分期及病理学分级相关（P＜0．05）；（2）宫颈癌nm23-H1蛋白表达率为40．00％，宫颈炎组织表达率为5．00％，不典型增生组织未见阳性表达，差异有极显著性（P＜0．01），腺癌表达率为83．33％高于鳞癌32．35％，差异有显著性（P＜0．05）；（3）2种基因蛋白表达的比较：C－myc、nm23-H1 2种基因在宫颈癌中表达差异无显著性（P＞0．05）。结论：C－myc表达与宫颈癌发生发展有一定关系；nm23-H1表达在宫颈腺癌早期呈高表达，可能为机体抑制肿瘤转移的防御性反应。     

多耐药基因在多种肿瘤细胞中的表达

瘤细胞在药物环境中的存活和生长能力与它的多耐药基因密切相关,已引起了病理及临床医生的广泛关注。多向耐药基因(Multi Drug Resistance MDR)本质上是一种能量依赖性“泵”,可将细胞内的药物泵出,从而降低细胞内药物浓度。是MDR在细胞膜上有一种分子量为170Ku的膜糖蛋白,称之为P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)。P-糖蛋白单克隆抗体有多种不同的克隆号,不同克隆号的单克隆抗体可以识别不同的P-gp异构体。本组选用C219和C494两种抗体,其中C219可识别细胞膜内位点,C494可识别细胞膜外位点。两者容易产生耐药的药物主要为长春花碱类和阿霉素类等。     

MTA1和VEGF—C在结肠癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的探讨转移相关基因（MTA1）和血管内皮生长因子C（VEGF—C）在人结肠癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系。方法选择78例结肠癌标本,应用免疫组织化学染色方法检测MTA1和VEGF—C在人结肠癌组织中的表达,同时对其与临床病理参数的关系进行统计学分析。结果MTA1在结肠癌组织中的阳性表达率为62．8％;在有淋巴结转移的患者中表达率为73．9％,无淋巴结转移的患者中表达率为46．9％,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。VEGF—C结肠癌组织中的阳性表达率为71．8％;在有淋巴结转移的患者中表达率为84．8％,无淋巴结转移的患者中表达率为53．1％,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。MTA1表达与VEGF-C表达呈正相关（r=0．418,P=0．004）。结论MTA1和VEGF—C的表达与结肠癌患者的淋巴结转移相关,可作为判断预后的一个观测指标。     

C—rbB—2,PCNA和Ki67在乳腺癌中的表达及临床意义

目的：研究乳腺癌中原癌蛋白C－erbB-2，细胞增殖标志物PCNA和Ki67的表达与临床病理参数（癌组织大小，淋巴结转移，年龄，雌，孕激素受体ER，PR表达）之间的关系。方法：免疫组化SP法，结果：54例乳腺癌中，C－erbB-2,PCNA和Ki67阳性表达率分别为51．9％，68．5％和48．1％，C－erbB-2,PCNA和Ki67表达之间显著正相关（P＜0．01），C－erbB-2,及其和PCNA共同高表达与癌组织大，淋巴结转移＋，ER－和PR－，PCNA高表达与癌组织大，ER－和PR－，Ki67及其和C－erbB-2共同高表达与癌组织大，淋巴结转移＋和ER－这些不良预后因素分别显著相关（P＜0．05或P＜0．01），结论：C－erbB-2,PCNA和Ki67高表达是乳腺癌预后不良的指标，PCNA与Ki67是独立的乳腺癌细胞增殖的指标。     

MMP －7、VEGF －C 和 VEGFR －3在结肠癌组织中的表达及相关性

目的：观察基质金属蛋白酶－7（ MMP－7）、血管内皮生长因子－C （ VEGF－C）和血管内皮生长因子受体－3（ VEGFR－3）在结肠癌组织中的表达,并探讨其相关性。方法采用免疫组化SP法检测MMP－7、VEGF－C和VEGFR－3在20例正常结肠黏膜、58例结肠癌组织蜡块标本中的表达情况,分析其与肿瘤浸润深度、淋巴转移、临床分期、病理分化、患者年龄、性别等临床特征之间的关系及三者之间的相关性。结果结肠癌组织中MMP－7、VEGF－C和VEGFR－3的阳性表达率明显高于正常结肠黏膜组织（ P＜0．05）;结肠癌组织中MMP－7的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期（Dukes分期）有关（P＜0．05）,与患者年龄、性别及肿瘤病理分化无关（P＞0．05）;VEGF－C和VEGFR－3则与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关（P＜0．05）,与临床分期（Dukes分期）、病理分化、患者年龄、性别均无关（P＞0．05）;结肠癌组织中MMP－7与VEGF－C（rs ＝0．158,P＝0．064）、MMP－7与VEGFR－3（rs ＝0．142,P＝0．076）的表达无相关性,VEGF－C与VEGFR－3的表达呈正相关（rs＝0．450,P＝0．034）。结论结肠癌组织MMP－7、VEGF－C和VEGFR－3的阳性表达率均显著升高,VEGF－C与VEGFR－3的表达呈正相关,联合检测3种因子的表达有利于指导结肠癌的预后判断和后续治疗。     

MTA1和VEGF-C在结肠癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的探讨转移相关基因（MTA1）和血管内皮生长因子C（VEGF—C）在人结肠癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系。方法选择78例结肠癌标本，应用免疫组织化学染色方法检测MTA1和VEGF—C在人结肠癌组织中的表达，同时对其与临床病理参数的关系进行统计学分析。结果MTA1在结肠癌组织中的阳性表达率为62．8％；在有淋巴结转移的患者中表达率为73．9％，无淋巴结转移的患者中表达率为46．9％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。VEGF—C结肠癌组织中的阳性表达率为71．8％；在有淋巴结转移的患者中表达率为84．8％，无淋巴结转移的患者中表达率为53．1％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。MTA1表达与VEGF-C表达呈正相关（r=0．418，P=0．004）。结论MTA1和VEGF—C的表达与结肠癌患者的淋巴结转移相关，可作为判断预后的一个观测指标。     

胃和结肠癌组织中u－PA受体表达的病理意义

用尿型纤溶酶原活化素（ｕ－ＰＡ）单抗（ＭｏＡｂ），以抗配体抗体ＬｓＡＢ免疫组化法，检测了３５例胃癌和１９例结肠癌组织中尿型纤溶酶原活化素受体（ｕ－ＰＡＲ）。结果表明，胃和结肠癌组织中ｕ－ＰＡＲ阳性表达率分别为２８．５７％和３６．８４％，两者间无明显差异（Ｐ＞０．０５）。浸润型肿瘤组织的ｕ－ＰＭ阳性表达率显著高于膨胀型（Ｐ＜０．０５），且ｕ－ＰＡＲ阳性表达多见于癌组织中散在的肿瘤细胞表面，成团或巢状生长的肿瘤细胞表面表达则较少。同时检测同一组织标本癌基因蛋白Ｃ－ｅｒｂＢ－２，经图像分析ｕ－ＰＡＲ和Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达间具有显著相关性（ｒ＝０．８０２８，Ｐ＜０．０５）。提示ｕ－ＰＡＲ阳性表达与肿瘤细胞浸润能力增强有关。     

鼻咽癌中PK,p53,和EBER—1表达的初步研究

采用地高辛标记的ＥＢＥＲ－１寡脱氧核苷酸探针原位杂交，ｐ５３，Ｒｂ单克隆抗体和细胞角质多克隆抗体免疫组织化学技术对４０例鼻咽癌进行了研究。结果发现９５．２％的鼻咽癌表达ＥＢＥＲ－１，８５％的病例细胞角质染色阳性，７７．５％ｐ５３的阳性，９２．５％Ｒｂ阳性，非癌组织基本上不表达ｐ５３。     

肝外胆管癌中TGF-β1, TGF-β2, TGF-β RI和TGF-β RⅡ的表达及意义

目的：探讨TGF－β1，TGF－β2，TGF－βRI及TGF－βRⅡ在肝外胆管癌中的表达及其与肿瘤的临床分期、病理分级的关系。方法：用抗TGF－β1，TGF－β2，TGF－βR I及TGF－βRⅡ的多克隆抗体，进行免疫组化染色，分别检测38例肝外胆管癌、14例非肿瘤胆管组织（8例胆总管囊肿、6例正常胆管)中TGF－β1，TGF－β2，TGF－βR I及TGF－βRⅡ的表达。结果：(1)TGF－β1及TGF－β2的阳性表达率增高（94．75％与92．11％）；TGF－βR I及TGF－βⅡ的阳性表达率明显降低（31．58％与28．95％）。（2）TGF－βRI，TGF－βRⅡ的阳性表达率在转移组中明显低于未转移组（12．5％，14．29％，33．33％对66．67％及18．75％，14．29％，0对58．33％）。结论：TGF－β1，TGF－β2，TGF－βRI及TGF－βRⅡ在肝外胆管癌中的异常表达，提示它们在肝外胆管癌的发生中起着重要作用，对其进行检测可作为肝外胆管癌的辅助诊断参考指标之一，并可为肝外胆管癌自然病程的判断和治疗方法的选择提供部分依据。     

鼻咽癌组织C—erbB—2表达与细胞增殖和预后的关系

应用免疫组化及原位杂交方法，对良恶性鼻咽组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行检测。结果显示：鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白和ｍＲＮＡ阳性率分别为８７．８％和８４．０％，二者同时表达为８４．０％；癌旁粘膜中二者阳性率分别为７４．６％和７６．５％，同时表达为８２．４％。泡状核细胞癌ＰＣＮＡ ＳⅡ值明显高于低分化鳞癌（Ｐ〈０．０１）。癌组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白阳性病例     

EGF—R和C—erbB—2在前列腺癌中的表达及其相关性研究

目的：探讨EGF－R（CerbB-1)和C-erbB-2在前列腺癌（PCa）中的表达及其相关性。方法：采用免疫组化ABC法,分别对29例前列腺癌患者进行了EGF－R（C－erbB-1)和C-erbB-2表达的研究。结果：29例前列腺癌患者,EGF－R表达仅有5例阳性（17．2％,5／29）,C－erbB-2阳性表达有13例（44．8％,13／29）,阳性表达率之间有显著性差异（P＜0．05）;EGF－R阳性表达与肿瘤的临床分期及病理分级无显著性差异（P＞0．05）,而同时C－erbB-2的阳性表达与肿瘤的分期、分级有显著性差异（P＜0．05）。结论：EGF－R表达与前列腺癌的临床分期和分级可能无关,而C-erbB-2表达与前列癌的临床分期和分级等因素可能有关。     

人体良、恶性病变p53、C—erbB—2、PCNA的异常表达免疫组化检测研究

目的：检测p53、C-erbB -2与PCNA的异常表达可能为区别不同组织良、恶性病变提供可靠客观的指标。方法：对663例恶性肿瘤（包括鳞癌、腺癌、黑色素瘤）及566例良性病变（包括乳头状瘤、腺瘤及慢性炎病变）组织p53、C-erbB-2及PCNA表达进行免疫组化检测。结果：恶性肿瘤p53、C-erbB-2及PCNA表达阳性的检出率分别为62．7％、85．8％及94．7％,明显较良性肿瘤与炎性病变为高（分别为0－11％,12．8％－45．5％及13．6％－61．8％）（P＜0．05－0．001）。结论：抑癌基因p53的突变、癌基因C－erbB-2的过度表达与扩增及PCNA的过高表达这是恶性病变的共同特征,可以作为诊断或区别诊断恶性病变的重要分子标志。     

低氧条件下HIF-1α及P-gp在结肠癌组织及多种细胞系中的表达

目的 探讨肿瘤低氧环境对低氧诱导因子1α(HIF-1α)及P-糖蛋白(P-gp)表达的影响及二者的相关性.方法 选取2013年6月至2015年6月邢台市人民医院58例结肠癌患者手术切除后标本,采用免疫组织化学法检测HIF-1α与P-gp在结肠癌组织中的表达情况,分析其与患者临床病理特征的关系;采用细胞爬片法检测常氧与低氧条件下HIF-1α与P-gp在结肠癌细胞株中的表达情况,并分析HIF-1α与P-gp表达的相关性.结果 58例患者结肠癌组织标本HIF-1α蛋白阳性表达率为58.62％,P-gp阳性表达率为46.55％;HIF-1α与P-gp阳性表达率在Dukes分期C+D期者均明显高于A+B期者,且有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α与P-gp的表达呈正相关(r=0.574,P＜0.01).同一细胞株中,低氧下HIF-1α及P-gp表达水平均高于常氧,差异均有统计学意义(P＜0.01);而相同氧环境下不同结肠癌细胞株间HIF-1α及P-gp表达水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 HIF-1α与P-gp在结肠癌组织中存在过表达和共表达现象,在不同Dukes分期和是否伴随淋巴结转移等因素中二者阳性表达率存在明显差异,且HIF-1α与P-gp表达呈明显正相关;低氧可诱导结肠癌细胞中HIF-1α与P-gp蛋白表达水平的升高.     

GST-PPARγC1原核表达载体的构建、表达及抗GST-PPARγC1多克隆抗体的制备

目的 在大肠杆菌中表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1(PPARγC1)与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白，并制备抗PPARγC1的多克隆抗体。方法 从肝癌细胞系HepG2提取总RNA，用RT-PCR扩增出PPARγC1 cDNA的编码序列，克隆入表达载体pGEX-4T-1中，重组载体在酶切鉴定后，在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-PPARγC1蛋白，SDS-PAGE分析表达产物，通过亲和层吸法纯化表达的GST-PPARγC1融合蛋白，并以此为抗原制备多克隆抗体。Western blotting检测重组抗原的免疫活性。结果 经测序、酶切鉴定证明，PPARγC1基因已正确插入到pGEX-4T-1中，经IPTG诱导后，表达出相对分子量为44000的融合蛋白。Western blotting鉴定所制备的多克隆抗体可以与PPARγC1特异性结合。结论 PPARγC1片段在大肠杆菌中的成功表达及制备得到的多克隆抗体，为检测PPARγC1及其在其他组织中的表达提供了一种检测途径。     

胰腺癌组织中C—erbB—2,nm23基因蛋白的表达及其意义

目的：研究胰腺癌组织中C－erbB-2、nm23癌基因蛋白的表达及其与临床生物学行为之间的关系。方法：应用免疫组织化学ABC法对39例存档胰腺癌标本进行检测。结果：39例胰腺癌C－erbB-2、nm23癌基因蛋白的表达率分别为46.1%,66.7%。C-erbB-2在组织学Ⅰ级的阳性表达率（10／16）明显高于组织学Ⅲ级者（1／11）（P＜0．01），而nm23在组织学Ⅰ级阳性表达率（7／16）明显低于组织学Ⅲ级者（10／11）（P＜0．05）。两基因蛋白在临床分期阳性表达率差异无显著性（P＞0．05）。在淋巴结转移阳性病例中，C-erbB-2、nm23的阳性表达率（15／25、20／25）均明显高于阴性组（3／14，6／14）（P＜0．05）。结论：C－erbB-2,nm23的表达是反映胰腺癌生物学行为和预后的重要指标，阳性表达者可能恶性程度高和预后不良。nm23在胰腺癌组织中可能不显示肿瘤抑制作用。     

卵巢癌中C—kit、C—ab1、PDGFRα的表达及意义

目的探讨酪氨酸激酶受体在卵巢癌中的表达及意义。方法应用免疫组化SP方法,检测20例正常卵巢组织和60例卵巢癌中酪氨酸激酶受体C—kit、C—abl和PDGFRα的表达。结果至少含一种酪氨酸激酶受体的阳性率为79％;C—kit、C—abl和PDGFRα在卵巢癌中阳性表达率分别为58．3％,70％,73．3％,其中C—kit和PDGFRα蛋白的阳性表达率较高,明显高于正常卵巢组织,差异有显著性（P〈0．01）。C—abl在卵巢癌中表达高于正常卵巢组织,差异无显著性。结论C—kit和PDGFRα与卵巢癌的发生和发展密切相关,应用酪氨酸激酶抑制剂治疗有可能性。     

P-糖蛋白在喉癌组织中的表达及意义

目的：探讨P－gp在喉癌组织中的表达及意义。方法：应用免疫组织化学键霉素抗生物素蛋白－－过氧化物酶连结法（LSAB法）检测80例喉鳞癌P-gp表达。结果：P-gp在喉癌组织中的表达升高，阳性率为47．5％。P－gp的高表达与淋巴结转移、癌肿浸润深度及死亡率有关（P＜0．05）。P－gp阳性与组织学分级无关（P＞0．05）。结论：检测喉癌组织中P-gp表达有助于判断肿瘤恶性程度，转移潜能及预后，对制定喉癌化疗方案有重要的意义。     

膀胱移行细胞癌中P-gp、p53、GST-π、Bcl-2的表达与多药耐药性

目的：探讨膀胱移行细胞癌中P-箔蛋白（P-gp）、p53、Bcl-2、谷胱甘肽S-转移酶-π（GST-π）的表达，了解多药耐药性与膀胱移行细胞癌细胞凋亡的相关性。方法：采用链霉素-生物素（SP）免疫组化技术检测75例膀胱移行细胞癌和10例无病变膀胱（正常对照组）坏率P-gp、p53、GST-π、Bcl-2的表达。结果：膀胱移行细胞癌中P-gp、p53、GST-π、Bcl-2的阳性表达牢分别为81．66％、69．33％、80．00％、65．33％；不同病理分级膀胱移行细胞癌中P—gp、GST-π、Bcl-2的阳性表达差异有统计学意义（P〈0．05～0．01），不同病理分期膀胱移行细胞癌中P—gp、GST-π、p53、Bcl-2阳性表达差异有统计学意义（P均〈0．05）；复发病例中P—gp、GST-π表达异常与p53、Bcl-2之间存在联系。结论：P—gp、p53、Bcl-2、GST-π等表达与膀胱移行细胞癌的分期有关；P—gp、GST-π高表达在膀胱移行细胞癌中是一种常见现象；耐药指标P-gp、GST-π与凋亡指标p53、Bcl-2影响因素有一定的内在联系。