肺炎链球菌溶血素致脑损伤中细胞凋亡及凋亡诱导因子的变化及意义

目的 探讨肺炎链球菌溶血素(PLY)致感染性脑损伤中细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)的表达及意义. 方法 SD大鼠80只按随机数字表法分为PLY组[颈内动脉注射0.2 mL(7μg) PLY]和生理盐水(NS)组(颈内动脉注射等体积NS),每组40只.每组按观察时间点分为6h、12h、24 h、48 h4个亚组,每亚组10只,其中5只注射髓,甲酰胺法测定脑组织EB含量判断血脑屏障(BBB)的破坏程度.5只不注射EB,取脑组织切片,应用免疫组化和TUNEL染色分别检测脑组织神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、AIF蛋白含量和细胞凋亡. 结果 与NS组比较,造模后各时间点PLY组大鼠脑组织EB、NSE、GFAP、AIF蛋白含量均较高,细胞凋亡较多,差异均有统计学意义(P＜0.05); PLY组大鼠脑组织凋亡细胞数与AIF蛋白的表达呈正相关关系(r=0.959,P=0.000). 结论 细胞凋亡参与了PLY诱导的脑损伤的发展过程,AIF可能介导了神经细胞的凋亡.     

大鼠急性局灶性脑挫裂伤后神经细胞线粒体膜电位变化及其意义

目的 研究大鼠急性局灶性脑挫裂伤后神经细胞线粒体膜电位变化及其意义. 方法 70只SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(n=10)和脑损伤组,损伤组按伤后1、6、24、48、72和168 h观察时间点分为6个亚组(n=10).用Feeney氏自由落体撞击法制作重型颅脑损伤模型.利用激光扫描共聚焦显微镜观察损伤后不同时间荧光探剂JC-1标记的活体脑片细胞线粒体膜电位的动态变化,应用Hochest33342荧光染色和Tunel法观察神经细胞凋亡程度,透射电镜观察神经细胞超微结构. 结果 (1)与假手术组相比,损伤组脑皮质神经细胞线粒体膜电位在伤后1 h即开始显著降低.24h降至最低,之后一直无恢复(P<0.01).(2)Hochest33342荧光染色发现神经细胞呈现凋亡的特征.(3)Tunel染色显示损伤组在1 h可见少量阳性细胞,6h阳性细胞数明显增加.48h达峰值,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),与线粒体膜电位下降时间比较延迟24 h.(4)电镜发现脑损伤后6h神经细胞核发生染色质散在,核仁边集.细胞核核膜增宽等凋亡特征;24h出现核皱缩,核内染色质溶解. 结论 创伤性脑损伤早期(<1 h)神经细胞线粒体膜电位即下降.并引起神经细胞凋亡.     

亚低温对大鼠脑创伤后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察亚低温对大鼠创伤性脑损伤(TBI)后海马CA3区细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响,探讨亚低温脑保护的分子生物学机制.方法将大鼠随机分成假手术、单纯脑损伤和脑损伤后亚低温治疗3组,应用改良Marmarou方法制作大鼠TBI模型,分别用流式细胞仪(FCM)和免疫组化法检测各组动物脑海马CA3区细胞凋亡率和Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达.结果与假手术组相比,大鼠TBI后海马CA3区细胞凋亡率及Caspase-3表达增高(P<0.05),Bcl-2/Bax表达比下降(P<0.05).亚低温治疗后,大鼠脑海马CA3区细胞凋亡率及Caspase-3表达较单纯脑损伤组降低(P<0.05),而Bcl-2/Bax表达比升高(P<0.05).结论亚低温对TBI的脑保护作用机制可能与干预伤后凋亡相关基因表达并减少神经细胞凋亡有关.     

西洛他唑对大鼠脑缺血再灌注损伤后PARP/AIF介导的细胞凋亡途径的影响

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和凋亡诱导因子(AIF)在海马CAI区的表达,探讨西洛他唑预处理能否通过PARP/AIF途径发挥脑保护作用. 方法 将135只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、模型组、西洛他唑组,每组45只.采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型.西洛他唑组造模前灌胃给予30 mg/kg剂量西洛他唑(2次).每组根据再灌注时间点不同(6 h、24 h、72 h)分为3个亚组,每亚组15只.应用TUNEL法检测神经细胞凋亡变化,Western blotting法检测AIF、腺苷二磷酸核糖(PAR)在不同时间点的变化,RT-PCR法检测AIF mRNA的表达变化. 结果 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后出现AIF核移位.与假手术组比较,模型组凋亡细胞数明显增加,AIF、PAR含量及AIF mRNA表达明显增加,24 h时最显著,差异均有统计学意义(P＜0.05).西洛他唑组再灌注6h、24 h、72 h各亚组凋亡细胞数较模型组中各亚组明显减少,AIF、PAR含量较模型组各亚组明显降低,AIF mRNA表达亦明显减少,24h时最显著,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 西洛他唑对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其抗神经细胞凋亡的机制之一可能是通过抑制脑缺血损伤引起的PARP的过度活化及AIF的易位而实现的.     

人参总皂苷对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

目的 研究人参总皂苷对脑外伤大鼠神经细胞凋亡的影响,探讨其抑制创伤性脑损伤(TBI)后继发性损伤的作用机制.方法 采用改良的Feeney自由落体法建立脑外伤模型,将Sprague-Dawley大鼠54只按照随机数字表法分为假手术组、脑外伤组、人参总皂苷治疗组(治疗组),每组18只.模型建立后24h处死大鼠,采用干湿重法测量脑水含量,光镜下观察尼氏染色海马细胞形态,凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法观察大脑皮质、海马神经细胞凋亡及凋亡基因bax、bcl-2、caspase-3的蛋白表达情况.结果 与脑外伤组比较,人参总皂苷治疗后的治疗组脑含水量明显减低,损伤侧海马病理学改变明显减轻,神经细胞凋亡减少,bcl-2的表达增高,bax、caspase-3的表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 人参总皂苷可以减轻脑外伤后继发性损伤,其机制可能是升高bcl-2的表达,抑制bax、caspase-3的表达,从而阻滞TBI后神经细胞凋亡.     

亚低温抑制大鼠创伤性神经细胞凋亡的实验研究

目的 研究创伤性脑损伤后神经细胞凋亡机理及其时序空间分布,并探讨亚低温脑保护机理。方法 末端标记法(TUNEL)、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞技术检测大鼠重度脑损伤后不同脑区神经细胞凋亡的动态变化过程。实验分假手术组、常温脑伤组、亚低温治疗6、12、24h三组。结果 创伤后12h皮层、皮层下、白质、海马等脑区神经细胞凋亡明显增加,其高峰在伤后12～72h,持续可达14d,与对照组相较,相差显著或非常显著。琼脂糖凝胶电泳显示创伤脑组织DNA出现特异凋亡电泳带。流式细胞检测呈现典型亚二倍体核型峰(AP峰)。亚低温治疗明显抑制创伤性神经细胞凋亡。结论 创伤性脑损伤后存在神经细胞凋亡现象。亚低温对创伤性神经细胞凋亡具有明显抑制作用。     

腺病毒介导kallikrein基因过度表达对脑梗死周边区细胞凋亡的作用

目的 探讨激肽释放酶(kallikrein)对脑梗死周边区域缺血神经细胞凋亡的作用.方法 建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,将造模成功的30只大鼠采用随机数字表法分为以下几组:A组,空白对照组;B组,注射生理盐水;C组,注射pAdCMV-人类组织激肽释放酶(HTK):每组10只.观察每组大鼠处理前后神经功能损害评分(NSS),用免疫组化技术检测外源性HTK的表达,并通过TUNEL染色、RT-PCR检测细胞凋亡及凋亡因子bcl-2、bax、caspase-3 mRNA水平.结果 治疗后24h在C组中可见HTK表达阳性细胞并逐渐增多,72h后达高峰.与B组以及A组相比差异有统计学意义(112±6.1、68±4.2、59±3.9,P<0.05).治疗后72h,C组大鼠NSS神经功能评分明显低于B组以及A组(6.70±0.16、8.13±0.16、7.93±0.20,P<0.05);治疗后7 d差异更明显(5.14±0.18、7.82±0.14、7.91±0.10,P<0.01).凋亡神经细胞集中于梗死周边区,治疗后72h及7d时,C组平均TUNEL阳性细胞数较B组与A组明显减少(72 h:10.1±0.9、16.7±1.1、20.4±0.8;7 d:15.2±1.2、33.6±1.3、28.8±1.7,P<0.05).与B、A组比较,C组中bc1.2 mRNA水平增高不明显(P>0.05);治疗后72 h及7 d,bax与caspase.3 mRNA水平则明显降低(P<0.05). 结论 Kallikrein可能通过减少凋亡因子bax、caspase-3的表达,抑制脑梗死周边区域的神经细胞凋亡,从而达到保护缺血神经细胞,改善神经功能的作用.     

亚低温通过抑制AIF核转位改善大鼠颅脑损伤

目的 探讨亚低温对颅脑损伤（TBI）大鼠脑组织凋亡诱导因子（AIF）核转位的影响。方法 将36只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、TBI组、亚低温组，每组12只。采用控制性皮质撞击建立TBI模型，亚低温组大鼠给予亚低温处理。TBI后24 h，HE染色观察大鼠脑组织病理学变化；免疫组织化学方法检测大鼠脑组AIF的表达部位；免疫印迹法检测损伤脑组织线粒体和细胞核AIF、caspase-3的表达情况。结果 HE染色结果显示，TBI后，损伤侧脑组织可见沿灰白质界面的挫伤和出血，亚低温组挫伤和出血灶明显减轻。免疫印迹法检测结果显示，TBI后，损伤脑组织caspase-3表达量明显增加（P<0.01），细胞核AIF表达量明显增加（P<0.01），而线粒体AIF表达量明显降低（P<0.05）；亚低温组损伤脑组织caspase-3表达量明显下降（P<0.01），细胞核AIF表达量明显下降（P<0.01），而线粒体AIF表达量明显升高（P<0.05）。免疫组织化学染色结果显示，假手术组AIF位于大脑皮质和海马神经元细胞核外；TBI组后，损伤侧皮质及海马区AIF从线粒体转移至细胞核内的阳性细胞数量明显增多（P<0.01）；亚低温组损伤侧皮质及海马区AIF发生核内转移的阳性细胞数量减少（P<0.01）。结论 亚低温可能通过抑制AIF的核转位减轻颅脑损伤后神经细胞凋亡，从而起到神经保护作用。     

黄体酮对创伤性脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的 观察黄体酮对脑外伤后神经细胞凋亡的影响,探讨其对脑外伤(TBI)继发性脑损伤是否存在保护作用.方法 雄性Wistar 大鼠随机分为无脑损伤的假手术(sham)组、脑损伤(TBI)组、脑损伤后注射黄体酮治疗(P-TBI)组及注射二甲基亚砜(DMSO)溶剂(D-TBI)组,每大组24 只,再分1 d、3 d、5 d 和7 d 四个小组,每小组6 只.采用Freeney 法造成鼠脑挫裂伤模型,在伤后四个不同时相点用TUNEL 染色法分别检测四组大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况.结果 创伤性脑损伤后凋亡细胞数量在TBI 第1 d 明显增加,TBI后第7 d 神经细胞凋亡达到高峰.伤后注射黄体酮治疗组神经细胞凋亡指数明显下降(P ＜0.05).结论 大鼠TBI 后周围脑组织神经细胞凋亡在伤后持续增加,注射黄体酮能抑制细胞凋亡,对脑组织有一定保护作用.     

亚低温抑制大鼠弥漫性脑损伤后细胞凋亡的研究

目的：探讨大鼠不同程度弥漫性脑损伤后脑组织的凋亡变化过程及亚低温治疗对脑细胞凋亡的抑制作用。方法：采用大鼠Marmarou颅脑创伤装置制作弥漫性脑损伤模型,然后将128只Wistar大鼠分为未损伤组（对照组）、重度损伤组、轻度损伤组和亚低温治疗组。通过电子显微镜、组织切片原位末端标记DNA片段（TUNEL染色）、琼脂糖凝胶电泳（DNA Ladder法）等方法,观察和比较不同程度脑损伤后,大鼠脑皮层及海马区凋亡细胞的形态、特点和数量。结果：（1）损伤后24-48h,皮层及海马区可见大量细胞皱缩、核碎裂、核不规则等细胞凋亡现象,48h较24h更为严重;亚低温治疗后24-48h,电子显微镜观察皮层及海马区未见细胞皱缩、核碎裂等细胞凋亡现象。（2）TUNEL染色结果显示,随着损伤程度的加重凋亡明显加重,损伤后48h达高峰,然后逐渐下降。轻度损伤组细胞凋亡主要限于海马CA2和CA3区;重度脑损伤组细胞凋亡涉及整个海马结构,同时还广泛累及额顶区皮质。损伤后第24、48、72h,皮层及海马区的凋亡细胞数量较同期未治疗组明显减少。（3）重度损伤后48h,海马和皮层区细胞琼脂糖电泳可见典型的DNA梯状带,其他时间未见梯状带。亚低温治疗组、轻度脑损伤组及未损伤组亦未见梯状带。结论：轻度弥漫性脑损伤后,脑细胞凋亡多发生于海马CA2和CA3区;重度脑损伤后皮层及海马区细胞可发生广泛凋亡。细胞调亡随着损伤程度的加重而加重,高峰位于伤后第2d。亚低温治疗可有效地抑制大鼠弥漫性脑损伤的细胞凋亡。     

大鼠轻型颅脑损伤后星形胶质细胞与神经元的病理改变

目的 探讨轻型颅脑损伤（TBI）后神经元及星形胶质细胞改变的病理生理过程。方法 将24只成年SD大鼠随机分为轻型TBI组（n=18）和假手术组（n=6）,轻型TBI组又分为伤后3 h（n=6）、伤后24 h（n=6）、伤后72 h（n=6）三亚组。采用液压冲击法制作轻型TBI模型。采用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色检测星形胶质细胞,采用Fluoro-Jade B（FJ-B）荧光染色检测变性神经元。结果 与假手术组相比,轻型TBI后3 h、24 h、72 h邻近顶叶皮质、海马CA2/3区GFAP阳性细胞数量均明显减少（P<0.05）;缺失区周围星形胶质细胞肿胀增生明显。FJ-B阳性神经元在损伤后3 h无明显增加（P>0.05）,伤后24 h皮层区FJ-B阳性神经元显著增加（P<0.05）,伤后72 h海马区FJ-B阳性神经元显著增加（P<0.05）。伤后72 h伤侧皮层区与海马区GFAP阳性细胞数和FJ-B阳性细胞数呈显著负相关（r=-0.8285,P<0.05）。结论 轻型TBI后星形胶质细胞超急性期（3 h）即出现损害和胶质反应,神经元则在急性期（24 h）至亚急性期（72 h）出现明显损害,星形胶质细胞缺失程度可以反应神经元损伤程度。     

急性颅脑损伤后进展性出血性损伤极高危因素分析及定时复查CT时间探讨

目的 探讨急性创伤性颅脑损伤后进展性出血性损伤(PHI)极高危患者的影响因素及伤后首次定时复查CT的时间窗.方法 对苏州大学附属第二医院神经外科自2009年6月至2010年5月收治的329例闭合性创伤性颅脑损伤住院患者的临床资料进行回顾性分析,将患者按是否于常规首次定时复查CT前出现临床症状恶化分为PHI极高危组、非PHI极高危组并进行对照研究.结果 PHI极高危组41例患者出现临床症状恶化而提前复查头颅CT,时间为(3.67±0.96)h(Md=3.8 h),与非PHI极高危组288例患者常规首次定时复查CT时间[(8.38±3.03)h(Md=7.6h)]比较差异有统计学意义(P<0.05).PHI极高危组与非PHI极高危组在首次CT颅内血肿>10 mL、颅内血肿类型≥2、合并蛛网膜下腔出血、入院时意识障碍、瞳孔扩大、GCS评分≤12分、平均动脉压增高、Plt减少、PT延长、APTT延长、FIB降低、首次CT为双侧伤、合并脑挫裂伤、骨折处硬膜外血肿上的差异有统计学意义(P<0.05).Logistic多元回归分析示PHI极高危患者与首次CT颅内血肿>10 mL、入院时意识障碍、瞳孔扩大密切相关(P<0.05).结论 急性创伤性颅脑损伤患者伤后早期特别是2 h内首次CT颅内血肿>10 mL或入院时存在意识障碍或瞳孔扩大,最好于颅脑损伤后3～4 h甚至更早进行首次定时复查CT扫描.

Abstract：

Objective To investigate the high-risk factors of progressive hemorrhagic injury (PHI)after acute traumatic brain injury(TBI)and discuss its time for first scheduled brain CT.Methods Retrospective analysis of clinical data of 329 adult patients with blunt TBI,admitted to second affiliated hospital of Suzhou University from August 2009 to July 2010,was performed.Patients were divided into PHI high-risk group and non-PHI high-risk group based on whether clinical symptoms worsened before the first routine scheduled brain CT;and control study was established. Results Forty-one patients from the PHI high-risk group were performed first routine scheduled brain CT ahead of time([3.67±0.96]h)for appearing worsened clinical symptoms,while 288 patients with non-PHI high-risk group were performed first routine brain CT as schedule(8.38±3.03 h);significant difference on the time for the first brain CT was noted between the 2 groups(P<0.05).Statistical differences in aspects of intracranial hematoma volume>10 mL,intracranial hematoma type≥2,associated subarachnoid hemorrhage on initial brain CT,disturbance of consciousness,pupil dilation and scores of Glasgow Coma Scale≤12 on admission were noted between the 2 groups(P<0.05),and statistical differences in aspects of reduced platelet(Plt),prolonged prothrombin time(PT),prolonged activated partial thromboplastin time(APTT),decreased Fibrinogen(FIB)on admission,bilateral brain injury,associated brain contusion,and skull fracture with epidural hematoma on initial brain CT were found between the 2 groups(P<0.05).Logistic regression analysis showed that intracranial hematoma volume>10 mL on initial brain CT, disturbance of consciousness and pupil dilation on admission were predictors for PHI high-risk patients (P<0.05). Conclusion For patients with intracranial hematoma volume>10 mL on initial brain CT, disturbance of consciousness and pupil dilation on admission within 2 h of TBI, first routine scheduled brain CT should be performed within 3-4 h of TBI or even earlier.     

大鼠颅脑创伤后肝细胞生长因子表达变化的实验研究

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在颅脑创伤后的表达趋势,为颅脑创伤治疗中的HGF干预策略提供前期研究基础. 方法 96只wistar大鼠按随机数字表法分为实验组和假手术组,实验组为液压冲击中度颅脑创伤大鼠,并分为伤后2h、6h、12h、24 h、72h、168 h、336 h组,假手术组不致伤,每组再分为两个亚组.每亚组6只,一组行HE及免疫组化染色,观察伤后病理变化及HGF的表达部位和表达量,另外一组用RT-PCR的方法 观察创伤后HGF mRNA表达情况.结果 在创伤后的大鼠大脑皮层组织中,HGF在蛋白水平以及基因水平都出现表达增高的情况.创伤边缘区HGF阳性细胞数从伤后24 h开始增多,168 h达高峰,336 h有所下降,但仍高于伤前水平,差异有统计学意义(P<0.05).HGF mRNA表达量从创伤后72 h开始增加,168 h达高峰,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 HGF作为神经营养因子和血管生长因子,可能参与了颅脑创伤后神经元的保护和组织的修复、再生.     

硫氧还蛋白还原酶 TrxR2在颅脑损伤大鼠皮质的表达变化

目的：探究硫氧还蛋白还原酶2（TrxR2）在颅脑损伤大鼠皮质的动态表达变化。方法54只雄性 SD 大鼠,随机分为正常对照组（n =6）和颅脑损伤组（n =48）。颅脑损伤组采用改良的 Freeny＆#39;s 自由落体装置制作颅脑损伤大鼠模型,正常对照组不做处理。伤后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d,采用实时荧光定量 PCR （quantitative real-time PCR,qRT-PCR）和Western blot 检测挫伤区周围皮质 TrxR2 mRNA 和蛋白的表达变化情况。结果 qRT-PCR 结果显示：皮质中 TrxR2 mRNA 颅脑损伤后1 h 表达增加,24 h 达到高峰,7 d 恢复正常;颅脑损伤组伤后1 h~3 d 各时间点 TrxR2 mRNA 表达明显高于正常对照组（均 P ＜0.05）。Western blot 检测显示：TrxR2蛋白在颅脑损伤后1 h 表达增加,24 h 达到高峰,14 d 恢复正常;颅脑损伤组1 h~7 d 各时间点 TrxR2蛋白表达高于正常对照组（均 P ＜0.05）。结论颅脑损伤后 TrxR2表达增多,提示 TrxR2作为一种急性应激反应蛋白参与颅脑损伤早期抗氧化应激反应。     

Activation of Rho after traumatic brain injury and seizure in rats

Traumatic brain injury (TBI) is characterized by a progressive cell loss and a lack of axonal regeneration. In the central nervous system (CNS), the Rho signaling pathway regulates the neuronal response to growth inhibitory proteins and regeneration of damaged axons, and Rho activation is also correlated with an increased susceptibility to apoptosis. To evaluate whether traumatic brain injury (TBI) results in changes in Rho activation in vulnerable regions of the brain, GTP-RhoA pull down assays were performed on rat cortical and hippocampal tissue homogenates obtained from 24 h to 3 days following lateral fluid percussion brain injury (FPI). Following FPI, a significantly increased RhoA activation was observed from 24 h to 3 days post-injury in the cortex and by 3 days in the hippocampus ipsilateral to the injury. We also detected activated RhoA in the cortex and hippocampus contralateral to the injury, without concomitant changes in total RhoA levels. To determine if immediate post-traumatic events such as seizures may activate Rho, we examined RhoA activation in the brains of rats with kainic acid-induced seizures. Severe seizures resulted in bilateral RhoA activation in the cortex and hippocampus. Together, these results indicate that RhoA is activated in vulnerable brain regions following traumatic and epileptic insults to the CNS.     

Increased ornithine decarboxylase activity and protein level in the cortex following traumatic brain injury in rats

There is increasing evidence that the elevated levels of polyamines play an important role in the secondary injury following traumatic brain injury (TBI). Ornithine decarboxylase (ODC) is the rate-limiting enzyme of polyamine biosynthesis. Presently, we measured the ODC protein levels by Western blot analysis in the cerebral cortex of rats sacrificed at 2 h, 6 h, 24 h, 72 h and 168 h after controlled cortical impact injury. TBI resulted in a significant increase in ODC protein levels (2.5 to 5.5 fold, P<0.05) and enzyme activity (13 to 21 fold, p<0.01) between 2 and 6 h after the injury. ODC protein levels and enzyme activity returned to normal, control levels by 72 h after the injury. Increased ODC protein and enzyme activity could contribute to vasogenic edema and the pathogenesis of neuronal dysfunction after TBI by stimulating the formation of polyamines.     

脑室内注射碱性成纤维细胞生长因子治疗大鼠创伤生脑外伤的实验研究

目的 探讨脑室内注射碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对创伤性脑外伤大鼠是否具有治疗作用. 方法 24只成年SD大鼠按随机数字表法分为治疗组和对照组,采用改良的Feeney氏自由落体撞击方法建立大鼠创伤性脑外伤模型,致伤后24 h分别给予脑室内注射bFGF和等量的生理盐水;采用行为测试试验(前肢放置试验、平衡试验)评分观察肢体功能恢复情况;采用免疫组化法,以5溴脱氧嘧啶尿苷(Brdu)标记神经干细胞,观察并比较两组大鼠致伤后第3、7、14天侧脑室室管膜下区(SVZ)、海马齿状回及损伤区域Brdu阳性细胞的表达. 结果 治疗组前肢放置试验评分在第3～12天、平衡试验在第3～11天的评分低于对照组,比较差异有统汁学意义(P<0.05).治疗组双侧SVZ、海马齿状回和损伤区域出现的Brdu阳性细胞数较对照组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05).两组损伤侧Brdu阳性细胞数均高于损伤对侧,比较差异有统计学意义(P<0.05).行为学评分与Brdu阳性细胞数之间呈负相关关系. 结论 脑室内注射bFGF有助于创伤性脑外伤大鼠模型内源性神经干细胞的增殖,并能促进其肢体功能的恢复.     

小容量复苏对脑外伤合并休克大鼠脑超微结构和vWF表达的影响

目的 观察小容量高晶体-高胶体渗透压混合液(HHS)复苏对脑外伤合并休克大鼠脑超微结构和Ⅷ因子相关抗原(vWF)表达的影响.方法 SD大鼠54只随机分为:(1)假手术组;(2)脑外伤+休克组;(3)HHS组;每组各18只.脑外伤+休克组和HHS组建立脑外伤合并急性失血性休克模型,随后在HHS组进行小容量HHS复苏.观察各组脑超微结构和vWF的表达.结果 电镜显示HHS对神经元、星形细胞和血脑屏障均有保护作用.脑外伤+休克组在损伤后4h和24h vWF的表达显著减少(P＜0.01),48h开始恢复,但显著低于假手术组和HHS组(P＜0.01);HHS组在损伤后4h,vWF的表达显著减少(P＜0.0l),24h开始恢复,至48h恢复正常.结论 小容量HHS复苏治疗脑外伤合并休克大鼠,可以抑制脑血管内皮损伤,促进微血管修复,减轻继发性脑损伤.     

Combined inhibition of cell death induced by apoptosis inducing factor and caspases provides additive neuroprotection in experimental traumatic brain injury

Neuronal programmed cell death (PCD) contributes to delayed tissue damage after traumatic brain injury (TBI). Both caspase-dependent and caspase-independent mechanisms have been implicated, with the latter including apoptosis inducing factor (AIF). The peptidyl-proplyl isomerase Cyclophilin A (CypA) transports AIF from the cytosol to the nucleus, a key step for AIF-dependent cell death. We compared the effects of single versus combined inhibition of caspase and AIF pathways in a mouse controlled cortical impact (CCI) model, by examining the effects of CypA gene knockout (CypA(-/-)), caspase inhibition with a pan-caspase inhibitor (boc-aspartyl(OMe)-fluoromethylketone, BAF), or combined modulation. TBI caused caspase activation as well as translocation of AIF to the nucleus. Markers of caspase activation including caspase-specific fodrin cleavage fragments and number of FLIVO-positive cells were reduced in BAF-treated CypA(+/+) mice, whereas markers of AIF activation including AIF/H2AX interaction and AIF translocation to the nucleus were attenuated in CypA(-/-) mice. Each single intervention, (CypA(-/-) or BAF-treated CypA(+/+)) reduced the number of apoptotic cells (TUNEL-positive) in the cortex and improved long-term sensorimotor function; CypA(-/-) also attenuated microglial activation after injury. Importantly, BAF-treated CypA(-/-) mice, showed greater effects than either intervention alone on multiple outcomes including: reduction in TUNEL-positive cells, decrease in neuroinflammation, improved motor and cognitive recovery, and attenuation of lesion volume and neuronal loss in the hippocampus. Using two in vitro neuronal cell death models known to induce AIF-mediated PCD, we also showed that neurons from CypA(-/-) animals were protected and that effects were unrelated to caspase activation. These data indicate that AIF-mediated and caspase-dependent pathways contribute independently and in parallel to secondary injury after TBI, and suggest that combined therapeutic strategies directed at multiple PCD pathways may provide superior neuroprotection than those directed at single mechanisms.