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1.
目的:观察成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)贴壁层的形成,体外传代培养,扩增的情况,研究各阶段(CFU-F)对粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)和红细胞集落形成单位(CFU-E)生长及细胞因子对造血的支持作用,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力,方法:利用改进的液体培养法,培养骨髓基质细胞并传代,利用甲基纤维素半固体培养法,培养人骨髓细胞,观察CFU-GM,CFU-E集落数,:人骨髓基质细胞在体外可以传代培养4代并能扩增28倍,其中F3代对CFU-GM和CFUE的促进增殖作用最强,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强,结论:人,骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长。  相似文献   

2.
目的 了解全反式维甲酸(ATRA)在体外对正常人脐血造血细胞的作用以及其在体内对正常小鼠造血细胞的作用。方法 (1)在人脐血单个核细胞(MNC)的粒系集落形成单位(CFU-GM),红系集落形成单位(BFU-E)和混合集落形成单位(CFU-GEMM)的半固体培养基中加入不同浓度的维甲酸,观察其对人脐血造血细胞集落形成的影响;(2)用含0.5μmol/L ATRA和IL-6,G-CSF,EPO,SCF的体系培养人脐血MNC,第7,14天时检测扩增后的人脐血有核细胞(NC)数,CD34^ 细胞数并观测其CFU-GM,BFU-E和CFU-GEMM形成;(3)用不同剂量的ATRA处理BABL/c小鼠,分别于处理后2,4,6,8,10d检测小鼠外周血中CD34^ 细胞,WBC,RBC及PLT含量的变化,从而观察ATRA在体内对造血2细胞的影响。结果 (1)一定浓度的ATRA在体外能明显促进人脐血CFU-GM的生长,但对BFU-E,CFU-GEMM的形成无影响;高浓度时抑制CFU-GM,BFU-E和CFU-GEMM的形成。促进CFU-GM形成的最佳ATRA浓度为0.5μmol/L,浓度为5.0μmol/L时开始起抑制作用;当浓度达到10μmol/L时,无任何集落形成。(2)0.5μmol/LATRA联合IL-6,SCF,G-CSF和EPO须体外孵育人脐血MNC,第7天和第14天时,ATRA组NC数与对照组相比无显性差异;但其CD34^ 细胞数明显高于对照组,差异有显性(P<0.05);且ATRA组CFU-GM, CFU-GEMM及BFU-E的形成数均明显高于对照组(P<0.05);(3)不同剂量的ATRA处理小鼠8d后,其WBC及CD34^ 细胞均开始升高,与对照组相比,差异有显性(P<0.05);但不同剂量的ATRA对小鼠的RBC及PLT均无明显影响。结论 (1)浓度为0.1-0.5μmol/L的ATRA在体外能促进人脐血造血细胞CFU-GM的生长,但对BFU-E及CFU-GEMM的形成无影响;当浓度达到5μmol/L时,ATRA对各系集落的形成均起抑制作用,且随浓度的增加抑制作用增强。(2)液体培养时,ATRA联合造血细胞刺激因子能延迟人脐血CD34^ 细胞的分化。(3)在正常小鼠体内ATRA能促进小鼠WBC及CD34^ 细胞的增殖,但对小鼠RBC及PLT无影响。  相似文献   

3.
目的:探讨以人骨髓间充质干细胞(bone nlarrow-mesenchymal stem cells,BM-MSC)为基质的无血清培养方法,体外扩增脐血造血干细胞(cord blood stem cells,CBSC),研究BM—MSC支持造血的功能,以能最终用于临床。方法:用含血小板生成素(TPO)、干细胞因子(SCF)、fit3/flk2配体(FL)和粒细胞-集落刺激因子(G—CSF)的无血清培养液,比较有或无MSC条件下,体外扩增脐血CD34^ 细胞两周后检测总细胞TC、CD34^ 细胞、集落形成单位(CFU)和长期培养-起始细胞(LTC—IC)增加倍数。结果:在TPO、FL、SCF、和G-CSF的作用下,经两周体外扩增后有MSC组的TC、CD34^ 细胞、CFU—GM、CFU—C和LTC—IC数较起始分别增加了427、39、125、104和16倍。单纯用上述4种细胞因子的无MSC组,TC、CD34^ 细胞、CFU—GM、CFU—C数分别增加了62、11、25、24倍,但LTC-IC只有扩增前的0.8倍。结论:以人BM—MSC为基质的无血清体外培养体系可以更有效扩增CBSC,有潜在的临床应用价值。  相似文献   

4.
目的 培养脐血中具有造血潜能的造血细胞 ,分析脐血中造血细胞的特性。方法 用密封的采血袋采集脐血 ,采用羟乙基淀粉一次沉淀法分离有核细胞 ,用半固体培养体系培养 ,7天计数红系集落形成单位 (CFU E) ,14天后计数红系爆式集落形成单位 (BFU E)、粒单系集落形成单位 (CFU GM) ,同时染色分析集落的组成成分。结果 采集 34份脐血 ,平均体积为 (99± 2 2 )ml;有核细胞数为 (0 6 4~ 2 5 9)×10 9,有核细胞回收率为 79 2 %± 13 7% ,回收的有核细胞绝对值为 (1 2 2± 0 43)× 10 9;平均每份脐血中含有BFU E(1 39± 0 75 )× 10 6,CFU GM (2 15± 1 2 2 )× 10 6。结论 脐血富含各期具有造血潜能细胞 ,每份脐血在有核细胞数和各种集落总数都可以满足成人移植的需求。  相似文献   

5.
目的 :观察成纤维细胞集落形成单位 (CFU- F)贴壁层的形成、体外传代培养、扩增的情况 ,研究各阶段 (CFU- F)对粒 -单核细胞集落形成单位 (CFU- GM)和红细胞集落形成单位 (CFU- E)生长及细胞因子对造血的支持作用 ,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力。方法 :利用改进的液体培养法 ,培养骨髓基质细胞并传代 ,利用甲基纤维素半固体培养法 ,培养人骨髓细胞 ,观察 CFU- GM、CFU- E集落数。结果 :人骨髓基质细胞在体外可以传代培养 4代并能扩增 2 8倍 ,其中 F3代对 CFU- GM和 CFU-E的促进增殖作用最强 ,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强。结论 :人骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长  相似文献   

6.
采用体外单层半固体琼脂培养法及液体培养法检测了脐血中CFU—GM和CFU-F,并与成人骨髓和外周血对照。结果显示:脐血培养7dCFU-GM产率约相当于成人外周血的5~6倍,但低于骨髓;培养14d的产率略高于骨髓,与骨髓培养7d结果相比无统计学差异;脐血中CFU-GM的集落大小、细胞构成明显不同于成人外周血及骨髓;脐血中可培养出CFU—F,但产率仅为骨髓的1/5,而外周血中则无CFU-F形成。提示人脐血富含造血祖细胞,且有不同于骨髓及外周血的性质。  相似文献   

7.
当归补血汤对内皮细胞和骨髓造血细胞的增殖和分化作用   总被引:7,自引:1,他引:6  
目的:探讨当归补血汤对内皮细胞及骨髓造血细胞的刺激增殖和诱导分化作用。方法:在培养的内皮细胞及骨髓造血细胞半固体和液体培养体系中加入不同浓度的当归补血汤,采用流式细胞术、双抗夹心法检测其对内皮细胞及骨髓造血细胞增殖的影响。结果:当归补血汤能够促进内皮细胞由G1期进入S期及细胞因子的分泌,但对BFU—E,CFU—E,CFU—GM和CFU—MK集落产率的提高及细胞表面表达CD13和CD71的细胞数量没有统计学上的意义。结论:在体外,当归补血汤能够促进内皮细胞的增殖及细胞因子的分泌,但未发现促进骨髓造血干细胞增殖与分化的作用。  相似文献   

8.
基质细胞对小鼠骨髓单个核细胞体外扩增的促进作用   总被引:5,自引:2,他引:3  
目的 阐明基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用。方法 采用骨髓基质细胞培养、骨髓单个核细胞(BMMNC)体外液体培养和各种造血相细胞集落培养技术,进行基质细胞支持条件下骨髓单个核细胞体外扩增的研究,并与单纯细胞因子支持下的细胞扩增进行比较。结果 在照射后细胞层存在的条件下,同时含有细胞因子组合的培养体系,对细胞总数和集落形成细胞数的扩增作用明显高于其它各组。结论 基质细胞对细胞因子作用下的造血细胞体外扩增有明显的促进作用。  相似文献   

9.
目的:探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法:取正常肋骨分离骨髓,制备单个核细胞贴壁培养,约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养,传代、将分选的脐血造血干/祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上,比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干/祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果:人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上,经流式细胞仪检测证实基质干细胞,单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞,而后者有维持长期造血的作用。结论:该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞,培养的细胞有体外支持长期造血的作用。  相似文献   

10.
张伶  黄宗干  涂植光  冯文莉 《医学争鸣》2003,24(12):1075-1077
目的 :探讨不同造血生长因子组合对人脐血造血细胞的体外增殖效应 .方法 :采用免疫荧光染色和祖细胞集落测定 ,观察人脐血单个核细胞 (MNC)经多种造血生长因子的不同组合作用 2wk后其有核细胞、CD34+ 细胞和祖细胞数量的变化 ,并用脾结节形成实验和骨髓祖细胞培养等观察其在小鼠体内的短期造血能力 .结果 :脐血MNC分别与A(SCF /IL 3/IL 6 /G CSF/GM CSF) ,B(SCF/IL 3/IL 6 /FL/EPO) ,C(SCF/IL 3/IL 6 /EPO ) ,3种造血生长因子组合悬浮培养 2wk ,有核细胞、CD34+ 细胞和祖细胞数量增加 .有核细胞总数在B组因子作用下增加最显著 [(2 6± 5 )倍 ],而CD34+ 细胞数量在A组因子作用下增加最明显 [(8± 2 )倍 ].3种因子组合对不同种类祖细胞的增殖效应不同 ,其中A组因子主要刺激早期混合系祖细胞CFU Mix扩增 [(11± 2 )倍 ],B组因子主要刺激粒单系祖细胞CFU GM扩增 [(2 2± 3)倍 ],C组因子主要刺激早期红系祖细胞BFU E扩增 [(13± 4 )倍 ].此外 ,给受照小鼠输注A组因子作用后的人脐血细胞 ,13d在小鼠脾脏形成脾结节 (CFU S) ,30d从小鼠骨髓检出造血祖细胞(CFU GM和CFU E) ,造血细胞数量与从输注新鲜脐血细胞的小鼠体内检出的结果无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :造血细胞生长因子对人脐血单个核细胞具有体外  相似文献   

11.
人脐血基质细胞自发分泌多种造血生长因子的实验研究   总被引:6,自引:3,他引:3  
目的探讨体外培养的人脐血基质细胞分泌血小板生成素(thrombopoietin,TPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、干细胞生长因子(stem cell factor,SCF)的能力.方法留取不同培养时相点的培养液上清,ELISA法检测上清中TPO、GM-CSF、SCF的浓度,并与骨髓基质细胞的培养上清液对照比较其特点.结果人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可分泌TPO、GM-CSF和SCF等造血生长因子,二者造血生长因子的分泌随着培养时间的延长而逐渐下降,其中人脐血基质细胞分泌TPO和SCF的高峰期出现在第7天,而GM-CSF的分泌则无高峰期的出现;通过与骨髓基质细胞分泌三种造血生长因子量进行对比发现,人脐血基质细胞SCF和GM-CSF的分泌量低于骨髓基质细胞,而TPO的分泌高于同期培养的骨髓基质细胞.结论人脐血基质细胞与骨髓基质细胞一样具有分泌造血生长因子,支持调控造血的作用.  相似文献   

12.
人脐血CD34+细胞体外DEXTER基质细胞培养的动态观察   总被引:5,自引:1,他引:5  
目的 动态观察人脐血CD34^ 细胞DEXTER基质细胞培养的情况。方法 应用MACS磁珠分离系统分离脐带血CD34^ 细胞,按照DEXTER法行脐血基质细胞培养,观察不同时间、不同细胞因子组合基质细胞的生长状态。结果 SCF及SCF BFGF组合可促进基质细胞集落的生成,脐血基质细胞在生长情况、组成成分、细胞形态等方面与骨髓基质细胞有不同的生物学特性。结论 脐血CD34^ 细胞在生长因子的辅助下能促进基质细胞集落的形成,有望成为新的基质细胞来源。  相似文献   

13.
目的在分子生物学水平上探讨体外培养的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达TPO、GM-CSF、SCF的mRNA的能力的差异.方法收集培养28d的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞,采用RT-PCR方法在mRNA水平上分析其造血生长因子GM-CSF、SCF、TPO的表达,比较二者表达TPO、GM-CSF、SCF等造血生长因子的mRNA能力的差异.结果体外培养的人脐血基质细胞与骨髓基质细胞均能表达:(1)TPO的mRNA,人脐血基质细胞表达能力强于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为1.57;(2)SCF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.83;(3)GM-CSF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.68.结论人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可以表达造血生长因子TPO、GM-CSF、SCF的mRNA,具有支持调控造血的物质基础.  相似文献   

14.
目的:探讨何首乌提取物对放射线照射后小鼠血小板(Plt)生成功能的促进作用。方法:24只BALB/C小鼠随机分为正常组(A组。不接受照射和药物处理),对照组(B组)和何首乌提取物组(C组),每组8只。B、C组予3.5Gy Cs137射线全身照射;照射后C组每天腹腔注射何首乌提取物125mg.kg-1.d-1,连续21 d,B组注射等容积NS。于照射前及照射后第7、14、21 d采集尾部静脉血,观察全血细胞计数变化;第21 d采血后取骨髓行巨核细胞集落形成(CFU-MK)、骨髓基质细胞集落形成(CFU-F)、红系爆增性集落形成(BFU-E)及粒单系集落形成(CFU-GM)培养。观察6只正常小鼠体外骨髓CFU-MK、CFU-F在不同浓度(0、10、50、100、200、500μg/mL)何首乌提取物作用下的生长情况。结果:C组Plt计数回升明显高于B组(P〈0.01),体内C组的CFU-MK、CFU-F、BFU-E、CFU-GM集落生长明显优于B组(P〈0.05,P〈0.01)。体外小鼠骨髓CFU-F的生长对何首乌提取物有浓度-依赖性。而何首乌提取物对体外骨髓CFU-MK生长无明显作用。结论:何首乌提取物对照射后小鼠骨髓的Plt生成功能有促进作用,它的作用机制可能通过刺激骨髓基质细胞增殖,改善巨核细胞造血微环境,进而提升外周血Plt数量。  相似文献   

15.
[目的]探讨Transwell系统中人胚主动脉-性腺-中肾(AGM)区基质细胞对脐带血造血干/祖细胞的造血能力长期维持及扩增的作用.[方法]采用免疫磁珠方法分离人脐带血CD34 细胞,接种于底层铺有人AGM区基质细胞的Transwell培养板的Inserts中,非接触共培养7~35 d,每星期取样检测细胞总数,用半固体培养基分析CFU-C及HPP-CFU集落形成数,流式细胞术检测CD34 、CD34 CD38-细胞百分率.[结果]在Transwell中非接触共培养条件下,人AGM区基质细胞培养体系较胚胎躯干基质细胞和无饲养层培养体系对有核细胞总数、CFC和CD34 细胞均具有明显的扩增作用,共培养14 d的CD34 、CD34 CD38-造血干/祖细胞均获得峰值扩增(2.62±0.8和2.15±1.04,P<0.05),而MNC总数和CFC均在21 d获得最大扩增(32.5±4.3和4.2±0.6倍,P<0.05).克隆分析发现CFU-Mix、CFU-GM、BFU-E在共培养4~5星期后均仍然可见.原始祖细胞HPP-CFC在3星期也得到2.23倍的扩增,较空白及hFT对照组均有显著性差异(P<0.05),并在共培养35 d后仍可见HPP-CFU集落形成.[结论]人AGM区基质细胞hAGM-S3/hAGM-S4均具有造血支持作用,在非接触共培养条件下中可长期维持脐血中造血干/祖细胞的多系造血能力和高增殖潜能达21~35 d,对脐血CD34 /CD34 CD38-细胞数也有一定程度的扩增作用.  相似文献   

16.
目的:为观察骨髓内皮细胞务件培养液(mouse bone marrow stromal cell-conditional medium,mBMEC-CM)对鼠胚胎干细胞生成造血集落形成细胞的影响.方法:将鼠胚胎干细胞系D3细胞(embry-onic stem cell line-D3,ES-D3)形成4 d拟胚体(day-4 embryoid bodies,4dEBs),再用mBMEC-CM诱导4dEBs生成高增殖潜能集落形成细胞(high proliferation potential-colony formation cell,HPP-CFC)和红系爆式集落形成单位(burst forming unit-erythroid,BFU-E).以形成造血集落的数量为检测指标,观察mBMEC-CM诱导浓度、天数和诱导生成的细胞数与形成HPP-CFC和BFU-E数之间的关系.结果:形成的HPP-CFC和BFU-E集落数均与诱导生成的4dEBs细胞数呈正相关(HPP-CFC:r=0.916,P<0.05;BFU-E:r=0.927,P<0.05),且均随着种入的细胞数(在1×107~4×107/L范围内)增加而呈现相应的增加.当种入的细胞数增加到5×107/L时两种集落数均不再增加.mBMEC-CM诱导浓度(在0~20%范围内)与其诱导生成的HPP-CFC和BFU-E数呈剂量依赖性正相关(HPP-CFC:r=0.909,P<0.05;BFU-E:r=0.927,P<0.01).20%浓度mBMEC-CM诱导4dEBs来源的细胞于3,6和9 d形成的HPP-CFC和BFU-E数,以诱导3 d者最高,6 d次之,9 d最低.结论:骨髓内皮细胞条件培养液能促进鼠胚胎干细胞分化为HPP-CFC和BFU-E.  相似文献   

17.
目的探讨再生障碍性贫血(再障)的发病机制。方法采用甲基纤维素及胶原半固体培养法对56例再障骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K进行培养;采用APAAP法及双抗体夹心酶联免疫吸附法(EL ISA)对再障患者外周血T细胞亚群、血清sIL-2R进行检测。结果再障患者CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K集落数均低于对照组,且严重型再障集落数减少程度与慢性再障相近;再障患者CD 3亚群细胞无变化,CD 4亚群细胞减低,CD 8亚群细胞增高,CD 4/CD 8降低,重型再障患者血清sIL-2R中水平高于正常对照组与慢性再障。结论骨髓造血祖细胞数量减少是再障发病的重要因素,其减少程度与再障的病情有关;细胞免疫功能异常及造血负调控因子可能在再障发病中起一定的作用。  相似文献   

18.
目的:观察不同剂量的X射线照射对体外培养的胎鼠皮肤间充质干细胞(MSCs)支持造血细胞增殖作用的影响,为提高造血干细胞体外扩增效率提供一种更为有效的方法,进而为造血干细胞移植提供一个新的途径。 方法:分别用不同剂量的X射线照射培养的胎鼠皮肤MSCs层,然后将骨髓细胞种植于该细胞层上,扩增后不同时间(0~12 d)进行骨髓CFU-GM集落培养,同时取经X射线照射的皮肤MSCs的上清液进行骨髓CFU-GM、CFU-E及BFU-E培养,观察射线对胎鼠皮肤MSCs造血支持作用的影响。 结果:6、8和10 Gy剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs与骨髓细胞共同作用7 d时,骨髓祖细胞集落显著增加,其中6 Gy组增加最为明显,CFU-GM是0 Gy组的2.17倍。6、8和10 Gy剂量X射线照射培养皮肤的上清液体外亦可刺激骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E的生长,与0 Gy组比较差异均有显著性(P<0.05)。其中6 Gy组增加最为明显,分别达0 Gy组的1.81倍、3.94倍和3.51倍,集落亦明显加大。 结论:一定剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs,其体外支持造血的作用增强,无论照射后的单纯MSCs细胞层还是上清液都可使骨髓细胞集落数增多。  相似文献   

19.
目的:探讨银杏叶提取物对兔外周血干细胞的动员作用。方法:30只2628周龄新西兰大白兔,体重为2.528周龄新西兰大白兔,体重为2.53.0kg,随机分三组:银杏叶提取物组(Egb)、G-CSF组、生理盐水组,给药方法为腹腔注射7d,1次/d;给药后23.0kg,随机分三组:银杏叶提取物组(Egb)、G-CSF组、生理盐水组,给药方法为腹腔注射7d,1次/d;给药后28d,采用外周血WBC和MNC计数、造血干细胞体外培养、免疫细胞化学等检测各组外周血WBC、MNC、CD34+细胞、CD49d阳性细胞、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E的产率及兔骨髓基质细胞中VCAM-1阳性细胞百分率。结果:Egb组给药第7天外周血WBC、MNC数量达到高峰,分别为给药前的3倍和3.5倍;Egb组CD49d阳性细胞、外周血CD34+及骨髓基质细胞的VCAM-1阳性细胞百分率分别为(9.37±3.01)%、(0.63±0.37)%和(48.13±9.84)%,均高于生理盐水组;其中CFU-GM、CFU-MK和CFU-E产率分别为(12.94±3.03)%、(11.49±2.93)%和(24.52±8.62)%,均高于生理盐水组。结论:银杏叶提取物(Egb)对兔骨髓造血细胞有一定的增生作用,同时对外周血干细胞有一定的动员作用,这可能与其上调兔骨髓基质细胞和外周血粘附分子的表达有关。  相似文献   

20.
目的 :探讨胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用。方法 :联合应用胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子如重组人干细胞因子 (rh SCF)、IL - 3、IL - 6、粒巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)、促红细胞生成素 (EPO)等先后对成人骨髓单个核细胞及 CD34 + 富集细胞培养 5 d至 2周。结果 :胎儿骨髓基质细胞与上述细胞因子具有良好的协同作用 ,CD34 +富集细胞以胎儿骨髓基质细胞 +SCF+IL- 3+IL- 6 +G- CSF+EPO培养 2周 ,可使细胞总数、粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)、早期红系造血祖细胞 (BFU- E)及 CD34 +细胞分别扩增 (119.6± 30 .9)倍、(5 4.6± 17.4)倍、(2 5 .2± 4.4)倍、(11.1± 4.2 )倍。结论 :胎儿骨髓基质细胞可协同上述外源性细胞因子支持成人骨髓造血祖细胞的有效扩增  相似文献   

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