血清HBsAg阳性IgA肾病肾组织HBV抗原蛋白及血清和肾组织HBV-DNA检测分析

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染与IgA肾病发病的关系。方法32例肾活检冰冻切片组织HBsAg和HBcAg蛋白和42例HBsAg阳性的肾活检石蜡切片组织及其部分血清HBV-DNA的检测。结果HBsAg和HBcAg在IgA肾病肾活检组织的总阳性率为59．1％，在非IgA肾病中的总阳性率为63．6％，二者差异无统计学意义。42例肾活检组织中，仅发现有5例（11．9％）在肾活检组织中有HBV-DNA的存在。且5例均为大三阳患者，其病理诊断为系膜增生性肾小球肾炎2例，轻微肾小球病变1例，基底膜病变1例，IgA肾病仅1例。血清HBsAg阳性的患者，同时进行了42例肾活检组织的血清HBV-DNA检测，其中大三阳患者为12例，其血清HBV-DNA均为阳性，而这12例血清阳性的肾活检组织中仅有5例HBV-DNA为阳性，其余30例血清及肾活检组织中HBV-DNA为阴性。结论HBsAg和HBcAg蛋白在IgA肾病肾活检组织和非IgA肾病肾活检组织表达差异无统计学意义，表明HBV感染与IgA肾病并无直接关系。     

肾组织preS1/S2-Ag检测在乙型肝炎病毒相关性肾炎诊断中的作用

 目的：观察前S1/S2抗原（preS1/S2-Ag）及其它乙型肝炎病毒(HBV)抗原在HBV相关性肾小球肾炎（HBV-GN）患者肾组织中的表达,探讨它们在HBV-GN诊断中的应用价值。方法：回顾性收集2003年1月~2013年1月于中山大学附属第三医院肾内科住院的患者,并符合以下入组标准：血清学HBsAg阳性;有血尿、蛋白尿等临床表现;经肾组织活检病理诊断为肾小球肾炎病变;排除合并有系统性红斑狼疮、过敏性紫癜、糖尿病、丙肝等疾病。入组共49例。用免疫组织化学的方法对其肾组织石蜡切片进行preS1/S2-Ag、HBeAg、HBsAg和HBcAg检测。随机选取 5例HBsAg阴性的肾小球轻微病变患者,5例HBsAg阳性的非肾小球肾炎患者作对照。结果： 49例HBV感染合并肾小球肾炎患者中preS1/S2-Ag、HBeAg、HBsAg和HBcAg检出阳性率分别为32.7%（16例）、 388%（19例）、14.3%（7例）和46.9%（23例）,总阳性率为70.2%（36例）;preS1/S2-Ag主要表达在肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞和内皮细胞胞质内;其表达与肾组织HBcAg的表达呈正相关（r=0459, P<001）。5例HBsAg阴性的肾小球轻微病变患者,4种抗原均未检测到;5例HBsAg阳性的非肾小球肾炎患者有2例表达HBeAg,1例表达HBcAg,无1例表达preS1/S2-Ag及HBsAg。结论：HBV-GN患者肾组织中检测到preS1/S2-Ag; preS1/S2-Ag、HBeAg、HBsAg和HBcAg联合检测可提高HBV-GN的临床诊断率。     

HBV感染的CD68细胞在隐匿性HBV感染产妇胎盘中的分布及与宫内感染的关系

目的探讨HBV感染的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)在乙肝宫内传播中的作用及机理。方法12例血清HBV DNA(-)、PBMC HBV DNA(+)产妇分娩的新生儿血清HBV DNA(+)和/或PBMC HBV DNA(+)的胎盘作为实验组,10例乙肝标志物均为阴性产妇的胎盘作为对照。采用SP法在连续切片上检测HBsAg和HBcAg在胎盘CD68细胞及各类细胞中的表达。结果8例新生儿血清HBV DNA(-)、PBMCsHBV DNA(+)胎盘绒毛间质5例CD68细胞HBsAg阳性,6例CD68细胞HBcAg阳性;毛细血管内5例CD68细胞HBsAg阳性,8例CD68细胞HBcAg阳性;滋养层细胞和血管内皮细胞均未见HBsAg、HBcAg阳性信号;2例新生儿血清HBV DNA(+)、PBMCs HBV DNA(-)的胎盘滋养层细胞、绒毛间质、毛细血管内皮细胞均有HBsAg、HBcAg的表达,而绒毛毛细血管内CD68细胞未见表达。2例新生儿血清和PBMC HBV DNA均阳性的的胎盘滋养层细胞、绒毛间质、CD68细胞和毛细血管内CD68细胞均有HBsAg、HBcAg的表达,毛细血管内皮细胞无表达。10例乙肝标志物全阴性产妇胎盘中均无阳性信号。结论HBV感染的外周血单个核细胞可作为宫内传播的载体。     

肝硬变组织内HBV DNA和HBsAg与肝细胞不典型增生关系的研究

应用原位杂交与免疫组化PAP法相结合的双标记技术,对51例肝硬变和9例癌周肝硬变组织内乙肝病毒DNA(HBV DNA)和HBSAg与肝细胞不典型增生(LCD)的关系进行了探讨。结果显示,60例肝硬变组织中,16例具有LCD和44例无LCD的肝硬变组织内HBV DNA的阳性检出率分别为75.0%和40.9%,HBV DNA和HBsAg双标阳性的检出率分别为75.0%和36.4%,均以具有LCD的肝硬变组织为高(P<0.05)。结果说明,HBV的感染以及HBV DNA在肝硬变组织内的持续存在、活跃复制和表达与肝硬变组织发生LCD和癌变关系密切。     

膜性肾病伴乙肝病毒感染的病理学改变

目的探讨肾穿刺确诊膜性肾病(membranous nephropathy,MN)合并HBV感染的病理特点及肾组织HBV抗原检测的意义。方法回顾性分析147例MN患者的临床和肾脏病理资料,根据HBV血清学结果分为A组(HBV抗原阳性)、B组(仅HBV抗体阳性)、C组(HBV阴性的原发MN),比较其肾脏病理、临床表现及实验室检测结果。肾组织HBsAg/HBcAg检测采用EnVision方法。结果 A组肾小球基膜假双轨、肾小球节段硬化、节段内皮细胞肿胀增生、内皮下和系膜区电子致密物及IgM、C4、C1q沉积的比率显著高于C组。A组的发病年龄较低,肝功能异常和低补体血症发生率明显高于B、C两组(P0.05)。A组肾组织HBsAg和(或)HBcAg阳性患者在病理及临床表现方面与阴性患者比较无明显差异(P0.05)。结论不同于原发性MN,伴HBV感染的MN常伴肾小球节段硬化、内皮细胞肿胀增生、假双轨和多种免疫球蛋白及补体多部位沉积。免疫组化未发现肾组织HBsAg和(或)HBcAg沉积不能完全排除MN与HBV感染不相关,还需结合光镜、荧光和电镜的改变综合判断。     

慢性活动性肝炎HBV DNA原位分子杂交研究

对50例慢性活动性乙型肝炎肝组织进行了原位杂交及免疫组化研究；部分作了上述两法的双标记。发现HBV DNA阳性物质在肝细胞内的分布方式可分为全浆型、膜下型、核型和膜间型4种。后者提示HBV DNA有可能通过肝细胞膜直接传播至邻近的肝细胞。双标记显示，大多数HBV DNA强阳性肝细胞并不同时含有HBcAg或HBsAg；反之亦然。此外，少数病例见胆小管上皮和窦内皮细胞胞浆内亦呈HBV DNA阳性。     

血清HBV标志物阴性肾炎肾组织中HBV-DNA的原位杂交检测

目的 对血清HBV标志物阴性肾炎患者肾组织进行HBV—DNA的检测，为临床诊疗提供理论依据。方法 应用原位杂交（ISH）技术检测37份血清HBVAg阴性和18份血清HBVAg阳性的肾炎患者肾活检石蜡包埋组织切片中的HBV—DNA。结果 在血清HBVAg阳性的18例标本中HBV-DNA的检出率为88．9％（16／18），血清HBVAg阴性37例中检测出HBV—DNA5例（13．5％）。原位杂交显示两组检出的HBV-DNA均以肾小管上皮细胞质分布为主，与组织中HBVAg阳性颗粒的分布基本一致。结论 血清HBVAg阴性的HBV相关性肾炎临床上并非少见，应给予足够的关注。HBV—DNA在肾组织中的检出，表明HBV在HBV相关性肾炎的发病机理中有着重要作用。     

194例慢性乙型肝炎病理及其与血清HBV DNA、HBeAg、ALT关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎病理及其与血清HBV DNA、HBeAg、ALT关系。方法对194例慢乙肝患者进行肝组织病理、HBV免疫组化检查,并检测肝功能、血清HBVM和HBV DNA。结果血清HBeAg阳性组的肝组织G2、G3~4、S2、S3~4发生率与阴性组比较差异有统计学意义,肝组织S0组与S1~4组比较差异有统计学意义,肝组织G0~1组与G2~4组、HBcAg阳性组与阴性组的HBV DNA含量比较差异亦有统计学意义,肝组织HBsAg表达为" "者与" ~ "者血清HBV DNA含量比较差异无统计学意义,肝组织达S1或(和)G2以上者血清ALT水平分别为:<40U/L组占28.57%,40~80U/L组占53.33%,81~400U/L占80.15%,>400U/L组占77.88%。结论血清HBV DNA与肝组织HBcAg表达有一致性,与肝内HBsAg无关,HBV DNA含量低可能是肝组织炎症活动度和纤维化程度高,ASC和轻度肝损害者应争取肝活检,以及时判断肝组织病理程度和治疗时机。     

孕妇HBV-DNA载量与胎儿宫内感染的关系

目的探讨孕妇血清中乙型肝炎病毒血清学标志物(HBVM)和DNA(HBVDNA)与胎儿宫内乙型肝炎病毒感染的关系。方法通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对60例乙肝表面抗原(HBsAg)阳性孕妇的母血及产后新生儿外周血的乙型肝炎血清标志物和DNA进行检测。结果 60例HBsAg阳性孕妇血清中HBeAg和HBV DNA的检出率分别为25%(15/60),35%(21/60)。所生新生儿外周血中HBsAg,HBeAg和HBV DNA的检出率为13.3%、18.3%、3.3%。其中HBeAg和HBV-DNA阳性孕妇所生新生儿外周血HBsAg分别为40%和38%,显著高于HBeAg和HBV-DNA阴性者的4.4%和0(P0.01)。新生儿外周血中HBsAg阳性率随孕妇HBV DNA含量增加而增加。结论孕妇血清中HBeAg和HBV DNA阳性是胎儿宫内感染HBV的高危因素,胎儿宫内感染率随母血中HBV DNA含量增加而增加。     

HBV DNA及HBV抗原在血清HBV标志物阴性肝炎肝组织中表达的研究

目的 研究HBV DNA及HBV抗原在血清HBV标志阴性的肝炎肝组织中的表达。方法 对45例HBV血清标志阴性阴性肝炎患者，进行肝组织HBV DNA的原位杂交及免疫组织化学染色检测。结果 原位杂交表明，HBV DNA阳性者7例，（阳性率15．56％），阳性信号主要存在于肝细胞的胞核中，少数位于胞浆内；免疫组化染色表明，HBsAg及HBcAg均呈阴性。结论 血清HBV标志阴性的肝炎肝组织中可检出HBV DNA，有利于提高对HBV感染的诊断。     

肝硬变内HBV DNA及其五种抗原的表达及意义

取２２５例人肝硬变活检组织石蜡切片，检测了ＨＢＶＤＮＡ及其５种抗原。分别用免疫组化ＡＢＣ法检测ＨＢｘＡｇ、ｐｒｅ－Ｓ＿１和ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原；用ＰＡＰ法检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ；用原位杂交方法检测ＨＢＶＤＮＡ；用免疫组化、原位杂交双标记方法检测ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｘＡｇ或ＨＢｃＡｇ。结果显示，阳性检出率ＨＢｓＡｇ为７０．０％（１２８／１８３例），ｐｒｅ－Ｓ＿１抗原为６４．４％（８５／１３２例）、ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原为６１．４％（８１／１３２例），ＨＢｘＡｇ为７５．３％（１１３／１５０例），ＨＢｃＡｇ为２２．４％（３９／１７４例），ＨＢＶＤＮＡ为６２．４％（５８／９３例）。双标阳性检出率ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ为３７．３％（１９／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｘ－Ａｇ为８６．３％（４４／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｃＡｇ为３９．２％（２０／５１例）。ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶ５种抗原阳性病例中８０％以上均伴有肝细胞不典型增生。这一结果表明，在我国肝硬变的发生发展与ＨＢＶ慢性感染有密切的关系。     

肾小球肾炎肾组织中HBV感染的标志

为了解肾组织中ＨＢＶＤＮＡ与ＨＢＶ抗原存在的关系，探讨肾组织中ＨＢＶ抗原的来源及其与病理变化的关系，我们检测２４６例肾炎肾组织中三种ＨＢＶ抗原。发现除肾小球沉积外，肾小管常有阳性表达。肾小管ＨＢｃＡｇ阳性率达２１．５４％，高于肾小球（１０．９８％）。有１８例肾组织经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交检测ＨＢＶＤＮＡ，１５例阳性者中１４例肾组织ＨＢＶ抗原同时阳性，１２例血清感染标志亦阳性。结果提示某些肾炎可能与肾组织感染ＨＢＶ相关，肾组织中出现的ＨＢＶ抗原抗体免疫复合物除来自血循环外，有肾源性──原位形成的可能。     

早孕妇女绒毛细胞HBV感染与母婴传播关系的研究

目的探讨在携带乙型肝炎病毒的早孕孕妇中,绒毛细胞感染乙型肝炎病毒的发生情况,以及与母婴传播的关系。方法选择自愿在我院门诊行人工流产的孕妇50例,孕妇血清乙型肝炎病毒携带者为实验组（20例）,孕妇血清乙型肝炎感染标志物均阴性为对照组（30例）。分别用ELISA法检测外周血血清HBV表面标志物、荧光定量PCR法检测HBV—DNA,用免疫组织化学链霉亲和素-生物素过氧化物酶复合物（SABC）法检测孕妇的绒毛细胞。结果实验组HBV—DNA阳性16例,阴性4例。HbsAg和HbcAg均阳性5例,HbsAg和HbeAg均阳性4例,绒毛细胞出现HBV的阳性染色;对照组HBV—DNA均阴性,HbsAg和HbcAg均阴性,绒毛细胞未出现HBV的阳性染色。结论在早孕人工流产术的乙型肝炎病毒携带孕妇中,乙型肝炎病毒可感染绒毛细胞。     

HBV感染与IgA肾病肾小管-间质病变的关系

目的 探讨ＩｇＡ肾病ＨＢＶ感染与肾小管间质病变的关系。方法 利用原位分子杂交（ＧＨＢＶ ＤＮＡ）、免疫组化（ＨＢＡｇ、ＣＤ３、ＣＤ８）以及ＨＢＶ ＤＮＡ－ＨＢＡｇ和ＨＢＡｇ－ＣＤ４３双标记技术,对９１例ＩｇＡ肾病肾穿刺标本进行研究。结果 肾组织内ＨＢＡｇ阳性率为６９．２％。ＨＢＶ ＤＮＡ原位杂交阳性率为４２．９％。ＨＢＶ ＤＮＡ阳性的病例,双重标记染色发现ＨＢＶ ＤＮＡ阳性肾小管上皮细胞可表达ＨＢ     

HBV体外感染卵巢颗粒细胞

目的建立HBV体外感染颗粒细胞模型,研究HBV在颗粒细胞中的复制情况,为深入研究HBV经卵细胞母婴垂直传播提供研究平台。方法原代颗粒细胞体外培养后用HBV阳性血清感染。收集培养上清,在不同时点检测HBsAg、HBeAg定量,实时定量PCR检测HBVDNA。免疫组化检测培养细胞中的HBsAg和HBcAg。巢式PCR检测细胞中的HBVDNA及HBV-mRNA。原位杂交检测细胞内的HBVDNA。结果成功建立了HBV体外感染颗粒细胞模型,在培养上清中可以持续96h检测到HBsAg和HBV DNA,在细胞内检测到HBsAg和HBcAg的阳性信号,PCR扩增显示细胞内有HBVD-NA及HBV-mRNA的存在,原位杂交证实细胞内HBVDNA阳性。结论 HBV能够在体外感染颗粒细胞,并在其内复制,该结果为深入研究HBV经卵细胞传播机制提供了很好的研究平台。     

HBV serum and renal biopsy markers are associated with the clinicopathological characteristics of HBV-associated nephropathy

Background: Accumulated evidence has shown that hepatitis B virus infection is associated with numerous types of nephropathy but it remains to clarify the different role of HBV markers, either in serum or deposit in kidney, in the pathogenesis of HBV-associated nephropathy. In this study, we investigated the relationship between HBV markers and HBV-associated nephropathy by using multi-linear regression in Chinese patients with HBV-associated membranous nephropathy (MN). Methods: A total of 196 cases of HBV-associated MN, which were diagnosed based on renal biopsy, were collected during the period of January 2000 to December 2009 from our hospital. Serum and renal biopsy HBV markers included HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe, and anti-HBC. HBV-associated nephropathy was characterized by a panel of clinical manifestations and pathological parameters, which included proteinuria, hematuria, serum creatinine, hypertension, and renal damage in glomeruli, tubules, interstitium, and blood vessels. Multilinear regression was used to analyze the relationship between the HBV markers in serum and renal biopsy and the clinicopathological characteristics of HBV-associated nephropathy. Results: After analysis of the clinical and pathological data in 196 cases of HBV-associated membranous nephropathy, this study revealed that glomerular lesion was marginally associated with serum HBsAg (P = 0.0528), Anti-HBs (P = 0.0978), but significantly associated with the presence of IgA (P = 0.0242), IgG (P < 0.0001) and C3 (P = 0.0064) in renal biopsy. There was no significant association between glomerular lesion and HBV markers in kidney. The presence of crescent and renal tube impairment was not related to HBV markers. The renal fibrosis was significantly related to gender (P = 0.023), age (P = 0.0211), HBsAg (P = 0.0001) and HBcAg (P = 0.0083) and C3 (P = 0.0299) in renal biopsy. Notably, the renal blood vessel impairment was significantly related to systolic Blood Pressure (SBP) (P < 0.0001), diastolic blood pressure (DBP) (P = 0.0002), serum HBsAg (P = 0.0428), serum HBeAg (P = 0.0766), FRA (P = 0.0002), and HBsAg (P = 0.0241) and HBcAg (P = 0.0599) in renal tissues. Also, the renal interstitial infiltration was related to patient age (P = 0.015, SBP (P < 0.0001), DBP (P = 0.0001), C3 (P = 0.0028), FRA (P = 0.0165), HBsAg (P = 0.0016) and HBcAg (P = 0.0203) in kidney biopsy. These results suggest that the major pathological changes in kidneys in HBV patients are related to one or more HBV markers, such as HBsAg, HBeAg, or anti-HBs antibody. Besides, most of the pathological changes in kidneys are related to C3 and FRA in kidney tissues. The clinical markers of nephropathy, such as proteinuria, hematuria and creatine serum levels, were also evaluated for their relationship with HBV markers in serum and kidney tissues. We found proteinuria was marginally related to HBV DNA (P = 0.0537), significantly related to IgA (0.0223). Hematouria was significantly related to IgA (P = 0.0434), IgG (P < 0.0001), and C1q (P = 0.0282). The serum creatine level was related to patient gender (P = 0.0077), SBP (P < 0.0001), DBP (0.0049), IgG (P-0.0006), and C3 (P = 0.0113). These clinical manifestations were not related to HBV markers in either serum or kidney. These results indicate that some of clinical manifestations of nephropathy are related to HBV markers, but the relationship is limited.     

乙型肝炎病毒感染在肾小球肾炎发病中的作用

为探讨ＨＢＶ感染于肾小球肾炎发病机制中的作用，收集５０例血清ＨＢＶ感染标志阳性或／和肾组织免疫组化证实ＨＢＡｇ阳性肾炎患者的肾穿刺组织，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和原位分子杂交观察ＨＢＶＤＮＡ的存在状态和定位。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交阳性率为７３．９％，其中８２％属整合型；原位杂交显示肾小管和肾小球ＨＢＶＤＮＡ的阳性率分别为７２％和５６．５％。其结果提示肾组织本身感染ＨＢＶ，因而考虑沉积于肾小球上的ＨＢＡｇ除源于血循环（肝原）外，尚有原位合成的可能；认为ＨＢＶ相关性肾炎的发病除ＨＢＶ抗原、抗体在肾小球沉积导致的体液免疫损伤机制外，应考虑因肾组织感染ＨＢＶ而导致的细胞免疫机制参与作用。