年轻人冠状动脉壁平滑肌细胞的表型变化及其与巨噬细胞的关…

选用年轻人冠状动脉材料，免疫组织化学方法，观察了弥漫性内膜增，脂纹，动脉粥样硬化斑块中平滑肌细胞的免疫表型变化，并将这些变化同巨噬细胞进行了联系，结果表明，凡是巨噬细胞浸润之处，不管何种病变，该处的平滑肌细胞便失去了相应抗体的反应性，但仍能是叶细胞抗体所标记，提示平滑肌细胞已经发生表型转变，这一现象说明巨噬细胞在平滑肌细胞表型转变过程中起重要作用，有助于人们对动脉粥样硬化病变，冠脉成形术后再狭窄病     

糖基化终产物对血管平滑肌细胞表型转换作用与机制研究

目的探讨糖基化终产物(AGEs)对血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转换的作用与机制。方法采用木瓜蛋白酶法分离大鼠胸主动脉VSMCs进行培养传代,免疫组织化学方法鉴定收缩表型,即标记蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),取收缩表型的VSMCs进行AGEs孵育,应用免疫组织化学方法、RT-PCR方法和蛋白印迹法观察不同浓度梯度及时间梯度的AGEs对VSMCs表型变化的影响。以AGEs干预的VSMCs作为对照,分别设AGEs+TRAM34组、AGEs+3-MA组、AGEs+PD98059组、AGEs+SB203580组、AGEs+LY294002组。采用RT-PCR方法和蛋白印迹法测定K_(Ca)3.1 mRNA及蛋白表达、微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA及蛋白表达。结果选取第5代大鼠胸主动脉VSMCs作为本实验研究对象。其中,α-SMA mRNA及蛋白均随着AGEs孵育浓度的增加而下降,且任意浓度AGEs孵育后α-SMA随时间进展而下降。AGEs干预组12 h时的K_(Ca)3.1 mRNA、LC3 mRNA、K_(Ca)3.1蛋白、LC3蛋白表达均显著高于其他6组;24 h时,AGEs干预组K_(Ca)3.1 mRNA、LC3 mRNA、K_(Ca)3.1蛋白、LC3蛋白显著上升,其他6组K_(Ca)3.1 mRNA、LC3 mRN、K_(Ca)3.1蛋白、LC3蛋白则显著下降,且AGEs干预组24 h时的K_(Ca)3.1 mRNA、LC3 mRNA、K_(Ca)3.1蛋白、LC3蛋白表达均显著高于其他6组,组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AGEs可促进VSMCs表型由收缩型向合成型转换,但这一机制可被TRAM-34、自噬抑制剂3-MA、ERK1/2阻断剂PD98059、p38MAPK阻断剂SB203580和PI3K阻断剂LY294002所抑制。     

UV-C诱导体外血管平滑肌细胞凋亡模型的建立

应用UV-C垂直照射距离其10cm处的大鼠主动脉SMC,发现经照射后细胞可出现典型的凋亡形态学改变,如细胞变圆、染色质浓缩、细胞膜出泡、凋亡小体等;且提取细胞DNA,其琼脂糖凝胶电泳呈现梯状图谱,从形态学和生化指标方面证明了UV-C可诱导体外血管SMC凋亡。UV-C照射诱导体外SMC凋亡,可作为进一步深入研究SMC凋亡的内在调控机制的一个简便、稳定、可靠的模型。     

卵巢透明细胞癌形态学及免疫组织化学表达与预后关系的研究

 目的 探讨卵巢透明细胞癌病理形态学、p53、 Cyclin E、CD44V6与预后的关系.方法 收集解放军总医院1981-2002年间卵巢透明细胞癌手术切除病理标本28例,收集临床资料,判断临床分期;复习病理大体及镜下特点;对24例卵巢透明细胞癌患者行p53、Cyclin E 与CD44V6免疫组化染色;对全部28例卵巢透明细胞癌患者进行随访,随访时间为4～240个月.结果 临床资料显示患者5年生存率为49.24%.其中Ⅰ期、Ⅱ期患者预后明显好于Ⅲ期患者.大体检查显示肿瘤最大直径<12 cm的患者预后好于直径≥12 cm的患者.显微镜检查显示合并子宫内膜异位症的患者预后好于不合并子宫内膜异位症的患者.细胞类型以透明细胞为主者型9例中死亡2例;以鞋钉细胞为主和透明细胞与鞋钉细胞共存者15例中死亡10例,两组生存时间差异有统计学意义.p53的表达与卵巢透明细胞癌患者生存时间没有相关性.24例卵巢透明细胞癌CyclinE均为阳性,阳性表达强弱与预后无明显相关性.24例卵巢透明细胞癌中13例CD44V6阳性,CD44V6表达组预后明显比非表达组差.结论 肿瘤大、未合并子宫内膜异位、以鞋钉细胞为主预后较差;p53在卵巢透明细胞癌中表达率较低(25%),其表达与卵巢透明细胞癌患者生存时间没有相关性.cyclin E是卵巢透明细胞癌较理想的诊断标志物,在其病理诊断和鉴别诊断方面有较大价值.CD44V6在卵巢CCC中的表达与预后密切关系,可以作为预测肿瘤转移潜能、评估预后的指标.     

体外血管平滑肌细胞培养方法的应用及改进

动脉粥样硬化(AS)的发生发展与动脉中膜SMC的大量聚集和异常增生密切相关。参照传统的主动脉SMC培养方法并加以改进,采取从内剥离中膜法和组织块反复接种法,培养的细胞呈现典型的“峰与谷”结构,免疫组织化学染色显示细胞内SM-Actin表达阳性。此培养方法可作为研究血管SMC生物学行为和AS内在机制的有效模型。     

反义c-fos核酸对自体移植静脉血管平滑肌细胞表型的影响

目的 观察反义c-fos核酸对自体移植血管平滑肌细胞表型的影响,从基因治疗角度来探讨血管移植后再狭窄的防治疗法。方法 选择20只Wistar大鼠,利用显微外科技术建立自体静脉腹主动脉移植模型,随机等分为实验组和对照组,实验组对移植静脉血管进行反义c-fos核酸溶液浸泡,并在吻合口周围涂布含反义c-fos核酸的凝胶,术后2周取出移植血管,利用电子显微镜观察平滑肌细胞增殖情况,利用免疫组织化学方法对移植血管进行c-fos、c-myc。、PCNA表达检测。结果 实验组肌内皮结构清晰,对照组模糊不清,实验组增殖型血管平滑肌细胞数和PCNA、c-fos、c-myc阳性表达状态低于对照组。结论 反义c-fos核酸可有效抑制移植静脉血管平滑肌细胞的增殖,具有预防移植静脉血管再狭窄的作用。     

长链非编码RNA punisher对血管平滑肌细胞

目的探究长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）punisher与动脉粥样硬化的关系及其对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法12只健康纯种雄性8周龄载脂蛋白E（apolipoprotein E,ApoE ）基因敲除小鼠（ApoE-/- 小鼠）,通过高脂饲喂制作动脉粥样硬化模型小鼠（模型组）;12只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;人体血管平滑肌细胞系根据转染情况分为小干扰-punisher组和阴性对照（negative control,NC）组。通过荧光定量聚合酶链反应测定模型组与对照组小鼠主动脉弓的punisher表达。通过合成punisher的小干扰RNA作为反向对照抑制punisher在人血管平滑肌细胞中的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应验证punisher表达情况;分别采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）、划痕实验及流式细胞术检测抑制punisher表达对人血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2（B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2）、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase3）、caspase8、p-p38、p53凋亡相关蛋白的表达。结果①血脂4项及血管苏木精-伊红染色证明造模成功。荧光定量聚合酶链反应显示,动脉粥样硬化模型组小鼠血管punisher表达高于对照组（P＜0.05）;②CCK-8检测显示小干扰-punisher组的光密度值在转染36h之后低于NC组（t36=2.683、P＜0.05,t48=2.554、P＜0.05）;划痕实验显示小干扰-punisher组细胞迁移低于NC组（t=3.136、P<0.05）;③流式细胞术显示,小干扰-punisher组中凋亡细胞数占比多于NC组（22.6%和11.7%,χ2=4.245、P＜0.05）;④蛋白印迹法显示小干扰-punisher组Bcl-2、caspase3-30×103、p53蛋白表达水平明显低于NC组（t分别为9.546、5.647、5.42,P＜0.05）,caspase3-17×103蛋白表达水平高于NC组（t=4.892、 P＜0.05）。结论沉默lncRNA punisher可以促进血管平滑肌细胞的凋亡并抑制其增殖。     

HBV慢性感染者胃粘膜病变与HBV关系的免疫组织化学研究

ＨＢＶ慢性感染者胃粘膜病变与ＨＢＶ关系的免疫组织化学研究２７１０００泰安解放军８８医院甘天福，张光曙，丁明权，邢同京，杨德利，蔡铭铭，訾安珍共键词肝炎，病毒性，乙型；肝炎病毒，乙型，核心抗原；免疫化学；胃粘膜中国图书资料分类号Ｒ４４６．６研究表明，Ｈ...     

510nm激光诱导血管平滑肌细胞凋亡的初步研究

为了探讨用激光防治血管成形术后再狭窄的可能性，以５１０ｎｍ激光照射体外培养的血管平滑肌细胞，以ＤＮＡ片断末端标记法观察细胞凋亡现象。结果显示，５０和７５Ｊ／ｃｍ２照射后４小时ＳＭＣ出现凋亡现象，２４小时凋亡最为显著，凋亡率分别为９．４％和６．１％。表明激光直接照射能引起平滑肌细胞凋亡。这可能有益于减轻血管内膜的增厚程度     

直流电场影响血管平滑肌细胞迁移和增殖的研究

目的：探讨生物电场（EF）对大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）迁移和增殖的影响。方法：体外培养大鼠主动脉VSMC，EF干预72h，显微成像及图象分析技术检测VSMC迁移情况，免疫细胞化学染色方法观察VSMC增殖核抗原表达情况，观察细胞增殖改变。结果：在含有10％胎牛血清（FBS）的培养基中，在150mV／mm EF作用下，VSMC向阴极迁移明显，向阳极迁移受抑制。150mV／mm、250mV／mm EF干预下，细胞增殖核抗原较无EF干预培养VSMC无明显改变。结论：EF诱导VSMC定向迁移，对VSMC增殖没有明显影响。     

常氧与缺氧状态下脑啡肽和吗啡对兔肺动脉平滑肌增殖的调控作用

探讨常氧与缺氧状态下脑啡肽对兔肺动脉平滑肌增殖的调控作用及机制,为解决经皮腔内冠脉成形术支架后冠脉再狭窄问题提供新的理论依据。无菌取出新西兰白兔动脉段,在常氧和缺氧条件下胺照Ｒｏｓｓ贴片培养平滑肌,和相差显微镜,透射电镜和（－肌动蛋白体鉴定平滑肌细胞,四唑盐比色法及３－ＨｄＲ参人实验检测平滑肌的生长状况。     

高脂血性冠状动脉内皮损伤海拔差异的超微结构研究

不同海拔血脂的动态观察和高脂血性冠脉内皮损伤海拔差异的超凝结构研究提示：血脂的海拔性变化可能是冠脉粥样硬化超微结构损伤随海拔升高而减轻的主要机理。     

氧化低密度脂蛋白及辛伐他汀对平滑肌细胞信号通路蛋白激酶活性和胞浆内游离钙的影响

分别应用γ-^32P-ATP磷酸转移法和Fluo－3／Am荧光负载、流式细胞术检测氧化修饰LDL（oxLDL）及辛伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞（AS MC）蛋白激酶C（PKC）和胞浆内游离钙（[Ca^2 ]i)水平的变化。结果表明,oxLDL呈剂量依赖方式促进ASMCPKC活性增加,14min时达峰值,然后缓慢下降,30min仍维持较主水平。胞浆内[(Ca^2 ]i升高分两个时相,即快速相和持续相。移去细胞外液钙,oxLDL仍引起快速相,但持续相消失,而辛伐他汀能明显抑制oxLDL引起的ASMCPKC活性增加,并显著降低持续相胞浆内钙水平,但对快速相无影响。提示oxLDL能引起ASMC内信号通路PKC及[(Ca^2 ]i的动态变化,二者密切相关。oxLDL刺激ASMC[Ca^2 ]升高的快速相是由胞浆钙池释放引起,持续相升高是由胞外钙内流引起。辛伐他汀抑制ASMCPKC活性可能是通过胞内[Ca^2 ]i变化起作用。     

脂多糖对复合培养的肺微血管内皮细胞和肺动脉平滑肌细胞生长周期的影响

以脂多糖（LPS）处理复合培养的大鼠肺微血管内皮细胞（LMVEC）和肺动脉平滑肌细胞（PASMC），利用流式细胞仪检测LMVEC和PASMC细胞周期的变化。结果发现，单独培养和复合培养时，LPS均能使G1期细胞减少，S G2/M期细胞增多；LPS处理16h后，复合培养组LMVEC和PASMC较单独培养组G1期细胞增多，S G2/M细胞数减少；LPS可使单独培养的LMVEC S期细胞增多。说明LPS可促进LMVEC和PASMC分裂、增殖，二者复合培养可减轻LPS引起的LMVEC和PASMC增殖作用；LMVEC和PASMC在细胞增殖方面存在着复杂的调节关系。     

肝细胞生长因子对心肌细胞及血管平滑肌细胞、血管内皮细胞生长因子分泌的作用

观察肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的牛冠状动脉血管内皮细胞 (BCAEC)、牛冠状动脉血管平滑肌细胞 (BCASMC)和小鼠心肌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌的影响。BCAEC对照组与HGF组 12hVEGF浓度分别为 10 5 1± 2 90和 9 31± 2 78pg/ml;BCASMC对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 3 35倍和 3 93倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 0 6倍和 2 4 2倍 ;心肌细胞对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 5 4 3倍和 4 0 9倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 74倍和 2 0 6倍。提示BCAEC、BCASMC及小鼠心肌细胞均具有自分泌VEGF的作用 ,HGF促进BCASMC和心肌细胞VEGF的分泌 ,对BCAEC无影响     

肥大细胞在颈动脉粥样硬化斑块中的分布

为研究肥大细胞在颈动脉粥样硬化斑块中的分布 ,将 32例颈动脉粥样硬化切除标本及 10例尸检正常颈动脉标本分别行HE、甲苯胺蓝、抗肥大细胞tryptase及chymase单克隆抗体免疫组化染色、抗T淋巴细胞CD3及抗巨噬细胞CD6 8单克隆抗体免疫组化染色。结果显示 ,在正常内膜、斑块帽区、核区、肩区肥大细胞密度 (细胞数/mm2 )分别为 (1 3±2 3)、(2 3± 2 6 )、(2 2± 3 7)、(6 3± 4 0 ) ,chy mase阳性细胞与tryptase阳性细胞的比值分别为 0 36、0 5 1、0 4 7、0 39。斑块肩区肥大细胞密度及脱颗粒细胞比例明显高于其它部位。肥大细胞与T细胞及巨噬细胞的比例在斑块肩区最高 ,分别为 0 2 5和 0 14。光镜下观察肥大细胞亦多见于斑块血栓、钙化及新生血管周围。本实验表明 ,肥大细胞参与颈动脉硬化斑块的形成 ,并通过活化脱颗粒影响斑块的稳定性。     

Calponin对培养的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

Ｃａｌｐｏｎｉｎ是一种抗细胞增殖基因，在多种病理情况下表达失调。用脂质体＋载体质粒ｐＣＡＧＧＳ作介导向培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞内导入人重组Ｃａｌｐｏｎｉｎ（ｈＣＮ），目的基因可在该细胞组织内表达，并持续较长时间（４周以上）。ＭＴＴ法的检测结果表明，导入ｈＣＮ基因能明显抑制ＳＨＲ平滑肌细胞的增殖。这种作用对血管成形术后再狭窄的防治和高血压时血管壁肥厚的逆转具有潜在的实用价值。     

烧伤后大鼠不同类型骨骼肌蛋白降解率的变化规律及其与糖皮质激素间的关系

为了解烧伤后不同类型骨骼肌蛋白降解率和血浆中糖皮质激素含量的变化 ,比较不同类型骨骼肌对烧伤刺激的反应 ,分析烧伤后骨骼肌萎缩的调节因子 ,应用 30 %Ⅲ度烫伤大鼠模型 ,借助骨骼肌充分氧供离体孵育系统 ,采用氨基酸全谱分析仪测定大鼠伤后不同时间点伸趾长肌和比目鱼肌蛋白降解率 ,用放射免疫分析测定大鼠血浆中糖皮质激素含量。结果发现 :烧伤后大鼠伸趾长肌总蛋白降解率和肌纤维蛋白降解率均明显增加 ,以烧伤后 12h和 2 4h为著 ,其中肌纤维蛋白降解率增幅明显 ;比目鱼肌总蛋白降解率和肌纤维蛋白降解率烧伤后均无显著变化 ;烧伤后不同时间点血浆糖皮质激素含量较正常对照组均显著增加 (P <0 0 1) ;伸趾长肌蛋白降解率与血浆糖皮质激素增加密切相关。说明烧伤后骨骼肌萎缩主要是由于肌纤维蛋白大量降解所致 ,快白肌比慢红肌对烧伤刺激敏感 ;糖皮质激素可能是导致骨骼肌蛋白降解增强的重要调节因子。     

藏药复方对犬实验性心肌缺血时心肌氧代谢的影响

本研究选用健康杂种犬35只,随机分为正常组(n=15),缺血组(n=15),给药组(n=15),在左冠状动脉前降支第2～3分支间结扎冠脉,造成心肌缺血模型,观察藏药复方对实验性心肌缺血时心肌氧代谢的影响,结果表明:心肌缺血后冠脉流量下降,心肌氧耗有所减少,给药后冠脉流量有所增加,并在使心脏泵血功能增加的同时,心肌氧耗反而呈下降趋势,提示心肌利用氧的效率得到了一定的提高。