高表达人源Her2乳腺癌小鼠模型的建立及鉴定

目的 构建并鉴定高表达人源Her2乳腺癌转基因小鼠模型.方法 构建pMD18T-MMTV-huHER2-EGFP转基因构件,通过原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源质粒pMD18T-MMTV-huHER2-EGFP注射入C57BL/6J小鼠受精卵中,胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内,获得子代小鼠.采用PCR鉴定子代小鼠尾部组织基因组DNA,用蛋白质免疫印迹法检测乳腺组织Her2蛋白的表达,通过组织病理学切片观察转基因小鼠乳腺组织的病理学变化.结果 经PCR方法检测得到转基因阳性小鼠.蛋白质免疫印迹结果显示,与野生型小鼠相比,F2代阳性小鼠的乳腺组织中Her2蛋白高表达.病理组织切片表明25周龄阳性小鼠的乳腺组织已经出现明显的癌变倾向.结论 高表达人源Her2乳腺癌小鼠模型成功建立并能稳定遗传,可自发形成乳腺癌,其生物学特性和病理学改变与人乳腺癌相近,可作为研究乳腺癌发生发展的动物模型.     

Bcl-2蛋白质在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的探讨膀胱癌组织中Bcl-2蛋白质表达及其临床意义。方法用免疫组化法,检测石蜡包埋膀胱癌组织(78例)和癌旁组织(20例)中Bcl-2蛋白质的表达,分析其表达水平与膀胱癌临床分期、病理分级及转移的关系。结果(1)Bcl-2蛋白质在膀胱癌组织中表达的阳性率为46.1%(36/78例),癌旁组织5%(1/20),膀胱癌阳性表达率高于癌旁组织(P<0.01);(2)Bcl-2蛋白质的高表达与膀胱癌的临床分期、病理分级和转移相关(P<0.05)。结论检测Bcl-2蛋白质在膀胱癌中的高表达状况,可为膀胱癌的诊断及预后判断提供实验依据。     

Bcl-2和Bax在小鼠海马发育中的表达变化

目的探讨Bcl-2和Bax在小鼠海马发育过程中的表达变化。方法利用免疫组织化学及图像分析技术对小鼠海马发育中Bcl-2和Bax蛋白进行分析。结果 Bcl-2免疫组化结果:胚龄(embryonic day,E)16 d CA1区有少量阳性细胞。E18 d,海马各区均可见阳性细胞,以锥体层居多。生后(postnatal day,P)1～21 d,海马各区阳性细胞先密集后稀疏,以P7 d最密集,CA3区最密集。P28 d后趋于稳定。锥体细胞层Bcl-2阳性表达细胞的平均光密度(AOD)值先增加后减小,P7 d为最大值(P<0.01),P28 d后趋于稳定(P>0.05)。Bax表达结果与Bcl-2结果相似。Bcl-2/Bax比值E18 d～P1 d逐渐降低(P<0.01),之后趋于稳定(P>0.05)。结论 Bcl-2和Bax在胚胎期和生后早期小鼠海马有高表达,其凋亡高峰是生后1 d。成年及老年后保持低水平。     

心肌梗死后小鼠心肌Bax和Bcl-2的表达

目的研究心肌梗死后小鼠心脏中Bax和Bcl-2的表达。方法雄性C57BL/6小鼠40只随机分为2组:对照组(10只)和实验组(30只),实验组结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,对照组仅在冠状动脉前降支处穿过缝线,不做结扎。术后4周对2组小鼠进行心肌取材,Western blot方法检测Bax和Bcl-2蛋白在心脏表达的差异。结果实验组小鼠术后4周存活率为53.3%(16/30),对照组为100%(10/10)。Bax和Bcl-2在对照组心肌均有表达,在实验组小鼠心脏远离梗死区(N)、心肌梗死周边区(B)、梗死区(I)的表达逐渐增加(P<0.05),且B区、I区Bax/Bcl-2比值高于N区及对照组(P<0.05)。结论 Bax和Bcl-2在心肌梗死后心脏中呈高表达,且Bax/Bcl-2比值在心肌梗死区及周边区显著增加,提示凋亡可能在心肌梗死后心脏重构中发挥重要作用。     

急性白血病P-gp和Bcl-2表达与临床意义

目的　探讨P gp和Bcl 2两种蛋白在急性白血病 (AL)临床耐药中的作用及相互作用。 方法　用流式细胞仪检测 97例AL骨髓细胞P gp和Bcl 2蛋白的表达率。 结果　急性髓细胞性白血病 (AML)难治与复发组P gp阳性率明显高于初治组。急性淋巴细胞性白血病 (ALL)初治组和难治与复发组Bcl 2阳性率有显著性差异。P gp和Bcl 2在M4 、M5表达率较高 ,而M3 表达率较低。P gp+ 组缓解率明显低于P gp-组缓解率 ;Bcl 2 + 组缓解率与Bcl 2 -组缓解率无显著差异 (P >0 .0 5 )。P gp+ 组和Bcl 2 + 组早期复发率明显高于P gp-组和Bcl 2 -组早期复发率。P gp+ /Bcl 2 + 组缓解率明显低于P gp-/Bcl 2 -组缓解率 ;P gp+ /Bcl 2 + 组早期复发率明显高于P gp-/Bcl 2 -组早期复发率。P gp和Bcl 2表达无相关性。 结论　P gp和Bcl 2高表达均预示AL预后不良。联合检测P gp和Bcl 2对评价AL预后具有较大的临床意义。     

葛根素对急性高眼压后大鼠视网膜Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察急性高眼压后大鼠视网膜Bcl-2和Bax蛋白表达变化及葛根素干预的影响。方法以免疫组化法检测急性高眼压后大鼠视网膜不同时间点Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 A组（对照组）视网膜神经节细胞层可见一定的Bcl-2和Bax蛋白表达量;B组（加压组）Bcl-2蛋白表达在2h开始升高,36h达高峰,72h时恢复正常,其中12h到48h各时间点与A组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,Bax蛋白的表达变化与Bcl-2相近,不同的是达高峰时间点在24h。C组（加压＋葛根素组）12h至48h与B组相应时间点比较,Bcl-2蛋白的表达上升,差异有统计学意义（P〈0.05）,Bax蛋白的表达下降,与B组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论急性高眼压后大鼠视网膜Bcl-2和Bax蛋白表达均升高,葛根素上调了Bcl-2蛋白表达,下调了Bax蛋白表达。     

TNNI2突变转基因小鼠模型的建立

目的建立TNNI2突变转基因小鼠模型。方法构建pEGFP-tnni2转基因构件,TNNI2基因的第175个氨基酸缺失,通过原核显微注射法。把线性化、纯化后的外源基因pEGFP-tnni2注射入BDF1小鼠受精卵中。胚胎移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠。用PCR和Southern方法检测子代鼠尾DNA鉴定基因型。通过RT-PCR方法检测tnni2基因表达。结果移植注射胚胎115枚给4只假孕小鼠共出生了23只后代鼠。经PCR和Southern方法检测得到4只阳性小鼠。对其子代进行RT-PCR检测,tnni2基因在肌肉、心脏内表达。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP-tnni2（TNNI2基因的第175个氨基酸缺失）在小鼠基因组中得到整合,建立了转pEGFP-tnni2的转基因小鼠模型。     

褪黑素对高脂饮食小鼠睾丸Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨高脂血症对小鼠睾丸Bcl-2和Bax表达的影响及褪黑素(MT)的干预机制。方法将12只载脂蛋白E(ApoE)基因敲除的C57BL/6J雄性小鼠随机均分成高脂血症组、MT处理组,另以6只野生型C57BL/6J雄性小鼠作为对照组。12周后摘除眼球取血,测量血清胆固醇(CHO)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c);免疫组化法检测Bcl-2和Bax在睾丸组织的表达。结果①高脂血症组血清CHO和LDL-c均明显高于对照组(P<0.01),高脂血症模型构建成功;与高脂血症组相比,MT处理组血清LDL-c明显降低(P<0.05),CHO无明显变化。②Bcl-2和Bax在3组小鼠睾丸组织中均有表达。与对照组相比,高脂血症组Bcl-2表达下调,Bax表达上调;与高脂血症组相比,MT处理组Bcl-2表达上调,Bax表达下调(P<0.01)。结论 Bcl-2和Bax参与高脂血症引起的睾丸细胞凋亡的调控。MT可以促进Bcl-2表达,抑制Bax表达,对高脂血症引起的睾丸损伤有一定的保护作用。     

海水浸泡对兔颅脑挫裂伤Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的：建立海水浸泡颅脑挫裂伤模型，观察海水浸泡对实验性脑挫裂伤后创伤性脑水肿的影响及凋亡相关基因Bel-2和Bax在蛋白表达水平变化。方法：采用立体定向自由落体伤模型进行海水浸泡30分钟作为实验组，对照组同样的方法致伤后不进行海水浸泡。观察创伤组织的病理改变，并通过免疫组化染色和计算机图像分析技术用半定量化的方法检测不同干预不同时程Bcl-2和Bax蛋白阳性反应强弱差异。结果：实验组和对照组均发生了创伤性脑水肿，但水肿高峰期出现时间不一致，严重程度也不一致。实验组Bcl-2蛋白阳性表达强度低于对照组，Bax蛋白则高于对照组，Bcl-2／Bax比值有降低趋势。结论：海水浸泡影响了创伤性脑水肿进程，并可能促进了挫裂伤周边缺血水肿区神经细胞凋亡的增加。     

Bcl-2蛋白和Bax蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨Bcl-2蛋白和Bax蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测30例正常卵巢组织、30例良性上皮性卵巢肿瘤、56例上皮性卵巢癌组织中的Bcl-2蛋白及Bax蛋白的表达情况,分析其表达与不同临床病理特征的关系。结果 Bcl-2蛋白、Bax蛋白在上皮性卵巢癌中的表达率分别为58.93%和33.93%,二者在上皮性卵巢癌中的表达率明显高于在良性上皮性卵巢肿瘤及正常卵巢组织中的表达率（P〈0.05）;上皮性卵巢癌组织中Bcl-2蛋白的表达与年龄、组织学类型无关（P〉0.05）,而与手术-病理分期、有无腹水有关（P〈0.05）;上皮性卵巢癌中Bax蛋白的表达与年龄、组织学类型、手术-病理分期、有无腹水均无关（P〉0.05）。结论 Bcl-2蛋白和Bax蛋白在正常卵巢组织中无表达,而在卵巢癌组织中有较高水平表达,提示Bcl-2蛋白和Bax蛋白可能参与了卵巢癌的发生、发展过程。     

Livin蛋白和Bcl-2蛋白在结直肠癌中的表达

目的探讨Livin蛋白和Bcl-2蛋白在结直肠癌中的表达及二者的相关性。方法采用免疫组织化学法检测60例结直肠癌组织、15例腺瘤性息肉和15例癌旁正常组织中Livin和Bcl-2蛋白的表达情况。结果 Livin蛋白在肠癌组织中的表达明显高于腺瘤性息肉及癌旁正常组织中的表达,Bcl-2蛋白在肠癌组织中和腺瘤性息肉中高于癌旁正常组织中的表达,但在肠癌组织中和腺瘤性息肉中表达无统计学意义。Livin蛋白表达与肿瘤分期有关,Bcl-2蛋白表达与肿瘤分化程度有关,在结直肠癌中,Livin蛋白表达与Bcl-2蛋白无相关性。结论 Livin蛋白、Bcl-2蛋白在结直肠癌组织中表达上调,参与结直肠癌发生发展。     

LPS诱导小鼠脑星形胶质细胞激活及Bcl-2表达的变化

目的:探讨神经元和星形胶质细胞对外源性内毒素脂多糖(lipopolysacchride,LPS)刺激的反应,以及在对抗炎症反应时二者的相互关系.方法:成年C57BL/6J小鼠分成实验对照组和实验组,采用免疫组织化学和GFAP和Bcl-2免疫荧光双重标记技术,观察小鼠单次注射LPS入侧脑室后,GFAP和Bcl-2在脑内的分布、表达及时程变化,以及GFAP阳性星形胶质细胞与Bcl-2阳性神经元之间的关系.结果:PBS注射的对照组动物脑内GFAP阳性的星形胶质细胞主要分布于海马、梨状皮质、内嗅皮质、隔区、纹状体、杏仁核及主要的纤维束.LPS注射2 d后,GFAP阳性的星形胶质细胞明显被激活,尤其在脑室周围的脑实质,表现为细胞胞体相对增大,突起变粗.Bcl-2阳性神经元在注射后1 d出现表达,2 d明显增加,4 d为表达高峰.Bcl-2阳性神经元分布在第一、二运动皮质和躯体感觉皮质、隔、斜角带核、海马和中脑红核等.LPS注射4 d后,GFAP和Bcl-2免疫荧光双重标记染色切片显示:在脑内没有发现GFAP和Bcl-2双标细胞,但可见GFAP阳性星形胶质细胞和Bcl-2阳性神经元重叠.星形胶质细胞的突起可见于Bcl-2免疫荧光阳性神经元的鞘中.结论:LPS能诱导脑室周围的脑实质星形胶质细胞和神经元的激活,激活的星形胶质细胞和神经元可能参与脑内的免疫调节和保护性反应.星形胶质细胞的突起可见于Bcl-2免疫荧光阳性神经元的鞘中,表明两者之间关系密切.     

Bcl-2蛋白与Bak蛋白肽片段复合物的三维结构模建与分析

目的:探讨抗肿瘤药物新靶点Bcl-2蛋白与底物蛋白的相互作用.方法:以同源模建的方法构建Bcl-2蛋白与底物Bak蛋白的肽片段的复合物的三维结构,并对此结构模型的合理性进行验证.比较复合物结构模型中Bcl-2的活性腔与自由状态结构的差异,分析它与底物肽相互作用的重要位点和残基,并计算它与两类抑制剂的分子对接.结果:构建的Bcl-2复合物结构模型合理,通过比较发现模建的结构模型中活性腔特别是α3前后的部位与自由状态有较大的结构变化,蛋白活性腔侧部的一些酸性碱性极性残基及底部的一些疏水残基对于结合底物蛋白并发挥功能非常关键,这些结果与生物学残基突变实验数据得到了较好的相互验证.结论:本研究构建了合理的Bcl-2蛋白与底物Bak蛋白肽片段的复合物的三维结构.     

Bcl-2和Bax蛋白在糖尿病大鼠耳蜗中的表达

目的：探讨糖尿病耳聋大鼠的耳蜗病变与凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的相关性。方法： 35只大鼠随机分为糖尿病组和对照组。糖尿病组（25只）采用STZ腹腔一次性注射制备，对照组(10只)注射等量生理盐水。在成模后3个月时采用免疫组织化学方法，对大鼠耳蜗组织进行Bcl-2和Bax的表达检测。结果：糖尿病大鼠耳蜗结构未见异常的形态学改变。对照组大鼠耳蜗内、外毛细胞及血管纹、螺旋神经元均有少量的Bcl-2表达，糖尿病组仅血管纹组织表达的Bcl-2明显高于正常组，毛细胞和螺旋神经元的表达与正常对照组比较差异无显著性（P>0.05）。计算机定量分析显示，糖尿病组和对照组耳蜗血管纹的Bcl-2表达灰度值分别为135.32±21.69和45.32±9.08,两组比较差异有显著性 (P<0.01)。糖尿病组与对照组大鼠耳蜗组织均不表达Bax蛋白。结论：糖尿病大鼠血管纹组织表达过量的Bcl-2蛋白可能是糖尿病耳蜗早期病变的影响因素之一。     

低剂量电离辐射对小鼠免疫器官Bcl-2蛋白表达的影响

目的 :研究低剂量电离辐射对小鼠胸腺、脾和肠系膜淋巴结 Bcl- 2蛋白表达的影响 ,以揭示辐射诱导细胞凋亡 J型曲线的分子机理。方法 :采用免疫组织化学及图像分析定量方法。结果 :假照组各免疫器官存在 Bcl- 2蛋白的基础表达 ;而照射组随着照射后时间的推移 ,Bcl- 2蛋白表达逐渐增高 ,2 4 h达峰值 ,且差异显著 ;72 h回复至假照水平。结论 :上述结果为揭示低剂量辐射免疫兴奋效应和辐射诱导细胞凋亡 J型曲线的分子机理提供了有意义的数据     

滤泡性淋巴瘤中Bcl-2蛋白的表达与意义

目的 探讨Bcl-2蛋白在滤泡性淋巴瘤与淋巴滤泡反应性增生的鉴别诊断中的意义。方法 应用免疫组化SP法对24例滤泡性淋巴瘤和10例淋巴滤泡反应性增生进行了检测。结果 24例滤泡性淋巴瘤中，20例Bcl-2阳性，4例Bcl-2阴性，阳性率为83％；10例淋巴滤泡反应性增生中，7例Bcl-2阴性，3例Bcl-2弱阳性，阳性率为30％。x^2检验两者差异有显著性（P〈0．01）。结论 Bcl-2蛋白对滤泡性淋巴瘤与淋巴滤泡反应性增生的鉴别诊断具有重要价值。     

急性白血病Bcl-2, P-糖蛋白的表达及意义

0 引言 多药耐药基因(MDR1)及其编码产物P-糖蛋白(P-gp)是产生MDR主要机制，其过度表达与急性白血病(AL)预后密切相关[1]．抗凋亡基因bcl-2的高表达与mdr1基因一样可导致白血病细胞MDR[2,3]．     

凋亡相关基因FasL和Bcl-2在小鼠肝癌中的表达

ＨＣａ－Ｆ和ＨＣａ－Ｐ是同源且转移能力不同的肝癌细胞系,Ｐ为低转移（转移率〈３０％）,Ｆ为高转移（转移率〉８０％）。经Ｓｐ法免疫组化染色发现：ＦａｓＬ在Ｆ原发瘤中的表达显著强于Ｐ原发瘤（Ｐ〈０．０１）,Ｂｃｌ－２在两者均为强阳性,无显著性差别,提示ＦａｓＬ可能赋予Ｆ细胞杀伤免疫细胞的能力并与其较强的转移力相关。