培养角膜上皮和自体角膜缘移植治疗眼表损伤的比较

目的比较培养角膜上皮移植和自体角膜缘移植治疗严重眼表损伤的效果。方法对去除全角膜缘的新西兰大白兔行培养自体角膜上皮和自体角膜缘联合羊膜移植,观察术后角膜形态改变,并进行组织学和免疫细胞化学检测。结果培养角膜上皮移植后兔眼表面平整稳定,角膜中央无新生血管生长,自体角膜缘联合羊膜移植后兔眼表面不同程度结膜上皮化,两者治疗效果有显著性差异。结论培养角膜上皮移植能有效治疗以角膜缘干细胞受损为特征的严重眼表损伤。     

培养角膜上皮和自体角膜缘移植治疗眼表损伤的比较

目的比较培养角膜上皮移植和自体角膜缘移植治疗严重眼表损伤的效果.方法对去除全角膜缘的新西兰大白兔行培养自体角膜上皮和自体角膜缘联合羊膜移植,观察术后角膜形态改变,并进行组织学和免疫细胞化学检测.结果培养角膜上皮移植后兔眼表面平整稳定,角膜中央无新生血管生长,自体角膜缘联合羊膜移植后兔眼表面不同程度结膜上皮化,两者治疗效果有显著性差异.结论培养角膜上皮移植能有效治疗以角膜缘干细胞受损为特征的严重眼表损伤.     

培养的异体人角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病

目的探讨培养的异体人角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病的方法和疗效。方法采用消化培养法,对角膜移植术后剩余角膜缘组织进行体外培养,载体为冰冻保存人羊膜,培养的细胞形成单层后,移植到已去除病变组织的眼球表面,观察眼表结构的愈合情况。结果31例(34眼)眼表疾病患者进行了培养的异体人角膜缘干细胞移植,所有病例术后早期(2月内)均形成良好眼表,但随访3~41(平均15.4±11.6)个月后,有3例复发性翼状胬肉患者再次复发,1例急性眼碱烧伤于术后2月时发现角膜轻度血管化和结膜化,其他患者在随访期内均维持稳定的眼表情况,视力也有不同程度的提高。结论培养的异体角膜缘干细胞移植术是治疗因角膜缘干细胞缺乏或功能障碍引起的眼表疾病的有效方法。     

角膜缘干细胞移植的研究进展

1 以角膜缘干细胞缺陷为特征的眼表疾病及治疗 根据病因可将角膜缘干细胞缺陷为特征的眼表疾病分为两类：一类是角膜缘基质微环境异常导致的角膜缘干细胞缺陷，如无虹膜、神经麻痹性角膜炎、边缘性角膜溃疡以及翼状胬肉等；另一类也是最常见的为各种损伤造成的角膜缘干细胞破坏，如化学烧伤和热烧伤、紫外线和离子射线的放射性损伤、史一约综合症、良性黏膜类天疱疮、角膜缘多次手术或冷凝、配戴角膜接触镜、严重感染以及长期使用抗青光眼药物等。角膜缘干细胞的完全丧失会导致角膜结膜上皮化、新生血管长人、     

角膜缘干细胞在眼表疾病中的重建作用研究进展

正常角膜上皮的完整性依赖于基底层角膜缘干细胞的不断增殖，角膜缘干细胞的增殖和分化对角膜上皮的再生起着重要作用，如果角膜缘干细胞因各种原因严重缺乏和位置改变，会导致持续性角膜上皮糜烂、角膜上皮结膜化、角膜新生血管和假性胬肉形成等，角膜的完整性和透明性将受到破坏。本文对角膜缘干细胞的特点、临床意义、各种干细胞移植术、干细胞的体外培养移植术、羊膜制备、羊膜特点、羊膜移植及作为载体的移植和移植术后的并发症中的排斥反应等进行综述，以便对角膜缘干细胞进行更进一步的研究。     

深低温保存角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病初步研究

目的:应用深低温保存的角膜缘干细胞同种异体移植治疗眼表疾病.方法:新鲜供体取穿透性移植片后剩下的角膜缘干细胞行程序降温,深低温保存,4例5眼临床眼表疾病应用深低温保存的角膜缘干细胞移植片行同种异体移植.结果:5眼角膜上皮修复且稳定,上皮平均愈合时间为7.6±5.7天,无感染、排斥等不良反应,除1眼视力无改变外,其余4眼视力均有不同程度提高.结论:深低温保存法能够将穿透性角膜移植剩下的角膜缘干细胞重新利用,为临床角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病提供了可利用的材料.     

羊膜联合角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病的临床研究

目的:探讨羊膜联合角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病的临床效果.方法:选择有手术指征的各种眼表疾病病例300例,均为单眼患病.随机分为治疗组(A组),对照组(B组),每组150例(150)眼.A组为治疗组,行羊膜联合角膜缘干细胞移植术,其中复发性翼状胬肉50例,单纯翼状胬肉50例,其他眼表疾病(包括眼化学伤、热烧伤、眼表肿瘤...     

角膜缘干细胞移植的现状及应用前景

角膜缘干细胞缺陷，可导致一系列眼表反应，角膜上皮反复缺损、糜烂、溃疡、新生血管长入及假性胬肉形成，最终导致失明。角膜缘干细胞移植的临床应用，为我们最终有效的治疗眼表疾病，恢复患者视功能，提供了一个新的治疗途径。现将角膜缘干细胞移植的现状及应用前景综述如下。     

自体角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病的临床分析

目的探讨自体角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病的效果。方法采用自体角膜缘干细胞移植治疗54例（60眼）眼表疾病,其中翼状胬肉48例（52眼）,酸碱烧伤假性胬肉4例（6眼）,角结膜肿瘤2例（2眼）。结果术后无一例眼发生感染,无一例角膜缘上皮脱落。随访观察6个月～1年,仅2眼术后复发。结论自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉,角结膜肿瘤等眼表疾病可有效防止胬肉或肿瘤的复发。     

角膜缘组织移植治疗眼表疾病的临床研究

眼表疾病(ocular surface disease,OSD)是指一类能损害眼表功能与结构的疾病,如眼化学烧伤,眼热烧伤,Ste-vens-Johnson 综合症,良性眼部类天疱疮,先天性无虹膜等。除先天性无虹膜属原发的角膜缘干细胞发育缺陷外,眼表疾病大多由于后天的原因使角膜缘的干细胞损伤所致。以往应用结膜移植技术治疗 OSD,但常因重新结膜化而失败。随着角膜缘干细胞理论的完善,新的治疗 OSD 的方法,即带有角膜缘组织的移植方法被逐渐采用。现将我院近年来应用带角膜缘组织移植治疗 OSD 的临床资料总结如下。1 资料与方法1.1 一般资料:选择本院1997～2001年间30例(32只眼)OSD 患者,男21例,女9例,年龄8～59岁。其中化学烧伤10例,热烧伤2例,复发性翼状胬肉18例。术后随访2.5～18个月。1.2 手术方法:(1)自体角膜缘结膜移植术:剪除病变组织,包括刮除累及角膜的病变组织,于对侧健眼上方切取1/3圆周宽度为3～5mm 的角膜缘结膜组织植片,复发性翼     

兔健眼角膜缘干细胞取材安全范围的实验研究

目的 确定自体角膜缘干细胞移植健眼取材的安全范围,为临床治疗提供实验依据.方法 兔眼角膜按30°、60°、90°等依次递增至210°分组切取角膜缘干细胞组织,术后不同时间点裂隙灯下动态观察每组角膜混浊、角膜上皮染色、新生血管3项临床指标,角膜上皮印迹细胞学检查及HE染色观察角膜上皮的细胞表型和病理学改变.结果 兔眼角膜缘切取范围大于150°时,出现角膜混浊,上皮持续缺损及新生血管长入,临床指标评分比较,差异有统计学意义(P＜0.01).印迹细胞学检查显示PAS阳性的结膜细胞.组织病理学可见角膜缘上皮细胞层次减少和新生血管.结论 自体角膜缘干细胞移植健眼的取材范围≤150°(相当于5个钟点位)是安全的.切取范围＞150°时角膜缘干细胞可能出现不可逆的失代偿.印迹细胞学检查是诊断角膜缘干细胞缺乏简单有效的方法.     

兔角膜上皮细胞培养后增殖能力的观察

目的:了解培养的兔角膜缘上皮细胞在原代及第2代细胞汇合时的增殖能力。方法:选健康新西兰白兔7只,显微镜下手术切取左眼上方少量角膜缘组织,采用组织块法分别进行培养,在原代上皮细胞汇合传代时(6鄄8d)和第2代细胞汇合时(10鄄12d),用流式细胞仪(FCM)检测样本的细胞周期和凋亡细胞。结果:培养的原代及第2代上皮细胞汇合时平均的增殖指数(PI)为19.1%和9.8%,凋亡细胞比例分别为0.57%和0.37%,处于增殖期细胞的比例在减少,而凋亡细胞的比例一直较低。结论:组织块法适合兔角膜缘上皮细胞培养,并且原代培养的兔角膜缘上皮细胞比第2代细胞具有更强的增殖能力,更适合进行细胞移植。     

SCF和IL—3对脐血造血细胞长期液体培养的影响

考察了干细胞因子（ＳＣＦ）和白介素３（ＩＬ－３）的不同浓度（５～１００ｍｇ／Ｌ）组合对不同接种密度（分别为３×１０５、６×１０５、１０×１０５ｃｅｌｓ／ｍＬ）的脐血（ＣＢ）细胞扩增和分化的影响。在５种组合下,ＣＦＵ－ＧＭ的扩增倍数都是在ＣＢ单个核细胞培养１２ｄ后达到最高（（１６．４３±２．０８）～（３７．０２±４．６９）,平均为（２５．７５±３．２６））,各组合之间相差较小;而细胞总数的扩增倍数在培养２４ｄ后达到最高（（１４．３８±２．７２）～（３５５．２６±３５．５３）倍,平均为（１０３．４５±３８．７５））,各组合之间相差很大。结果表明,在静态细胞培养过程中细胞密度较高,不利于ＣＦＵ－ＧＭ和总细胞的扩增,如保持在较低细胞密度有利于总细胞数的扩增;细胞因子的浓度对ＣＦＵ－ＧＭ的峰值影响不大,但低浓度能使总细胞数的扩增明显减少。     

兔角膜缘干细胞的体外原代培养和生物学鉴定

目的 建立兔角膜缘干细胞体外培养方法,观察其生物学特性。方法 用含20％胎牛血清1640培养液对兔角膜缘干细胞进行体外培养,倒置显微镜观察培养细胞体外生长的形态,电镜观察培养细胞的超微结构并进行免疫细胞化学和间接免疫荧光鉴定。结果 植块48～72h细胞开始贴壁生长,7～10d形成良好的单层,细胞呈圆形、卵圆形或多边形,类似角膜上皮细胞;电镜下,可见细胞表面有许多微绒毛,细胞间有桥粒连接,胞质丰富,胞质细胞器较多,含有线粒体等结构;免疫细胞化学和间接免疫荧光染色显示,培养第8天少量细胞角蛋白K3(AE5)免疫反应呈阳性,细胞质被染色,培养第14天和第21天,较多细胞．AE5免疫反应阳性。结论 含20％胎牛血清1640培养液能作为角膜缘干细胞培养的基础液。应用组织培养方法获得的原代培养细胞具有与正常角膜缘干细胞相一致的生物学特性。     

去上皮羊膜上培养兔角膜缘干细胞的实验研究

目的探讨去上皮羊膜上培养兔角膜缘干细胞的可行性。方法取小块兔角膜缘组织,采用组织块 细胞悬液共培养,待细胞长至对数生长期,分别传代于去上皮羊膜和完整羊膜,甲基偶氮蓝比色(MTT)法对比两组细胞增殖率,并行AE_5免疫鉴定。结果原代细胞接种7d左右,生长至对数生长期,细胞融合成单层。去上皮羊膜组细胞传代培养效果明显优于完整羊膜组。AE_5单克隆抗体染色强阳性。结论去上皮羊膜上培养出的兔角膜缘组织既有角膜上皮特性,又具有强的增殖潜力。     

脐血单个核细胞的搅拌悬浮培养

研究了悬浮培养中接种密度、换液和优化培养中所用细胞因子组合对造血细胞扩增的影响。结果表明,较高的接种密度(1.0×106cells/mL)比低接种密度(0.5×106cells/mL)更有利于总细胞、粒巨噬集落形成单位(CFU-GM)和巨核细胞集落形成单位(CFU-Mk)的扩增。换液能及时补充葡萄糖和移出培养中产生的乳酸,从而不对细胞生长造成影响,而且可以成功地控制pH不超出造血细胞正常生长所需pH范围。在SCF、IL-3和IL-6组合基础上添加Flt-3配体(FL)和促血小板生成素(TPO)能比原来的SCF、IL-3和IL-6组合更能促进总细胞、CFU-GM和CFU-Mk的扩增。     

人骨髓间充质干细胞对脐血干细胞体外扩增支持作用的研究

目的：探讨以人骨髓间充质干细胞(bone nlarrow-mesenchymal stem cells，BM-MSC)为基质的无血清培养方法，体外扩增脐血造血干细胞(cord blood stem cells，CBSC)，研究BM—MSC支持造血的功能，以能最终用于临床。方法：用含血小板生成素(TPO)、干细胞因子(SCF)、fit3／flk2配体(FL)和粒细胞-集落刺激因子(G—CSF)的无血清培养液，比较有或无MSC条件下，体外扩增脐血CD34^ 细胞两周后检测总细胞TC、CD34^ 细胞、集落形成单位(CFU)和长期培养-起始细胞(LTC—IC)增加倍数。结果：在TPO、FL、SCF、和G-CSF的作用下，经两周体外扩增后有MSC组的TC、CD34^ 细胞、CFU—GM、CFU—C和LTC—IC数较起始分别增加了427、39、125、104和16倍。单纯用上述4种细胞因子的无MSC组，TC、CD34^ 细胞、CFU—GM、CFU—C数分别增加了62、11、25、24倍，但LTC-IC只有扩增前的0．8倍。结论：以人BM—MSC为基质的无血清体外培养体系可以更有效扩增CBSC，有潜在的临床应用价值。     

Effect of Angiotensin Ⅱ on Cord Blood CD34+ Cells Expansion in vitro

In order to investigate the influence of angiotensin Ⅱ on hematopoietic system, CD34+cells in cord blood were purified, and the effects of angiotensin Ⅱ in combination with various cytokines on their growth and differentiation were studied by cell culture in vitro. It was found that angiotensin Ⅱ in suspending medium could stimulate both BFU-E and CFU-GM expansion. The number of BFU-E and CFU-GM was increased with the increases of angiotensin Ⅱ concentrations during a certain range. In addition, the expansion fold of CFU-GM was increased from 2.3±0.8 times to 7.8±2.3 times when angiotensin Ⅱ was added in the presence of SCF+G-CSF+GM-CSF+IL-3 cytokines mixture. Similarly, the expansion fold of BFU-E was increased from 3.1 ±1.8 times to 9.2±2.3 times with angiotensin Ⅱ in the presence of SCF+EPO+TPO+IL-3. In the semi-solid medium, angiotensin Ⅱ could stimulate CFU-GM expansion but had no effect on the growth of BFU-E. In conclusion, angiotensin Ⅱ had some stimulating effects on cord blood hematopoietic progenitors expansion in vitro in the presence of other cytokines.