三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测用As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长及抑制率的影响;凋亡电泳检测电泳条带,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率变化。结果在0.1~50.0μmol/L的浓度范围内As2O3对BEL-7402、HepG2细胞的生长均有明显的抑制作用,且有时间和浓度的依赖性;凋亡电泳显示5μmol/L As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402凋亡率分别是46.7%和53.1%;流式细胞仪DNA组方图上可见细胞G1前期出现亚二倍峰。结论As2O3可抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的生长,且在一定的范围内,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性;As2O3对BEL-7402细胞株的生长抑制作用大于HepG2;As2O3抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长的作用与细胞凋亡有关。     

EGF-Linker-TCS融合蛋白诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的表达和纯化由人表皮生长因子、柔性肽和天花粉蛋白组成的融合蛋白(EGF-Linker-TCS),检测其对肿瘤细胞的杀伤能力并探讨其在肿瘤治疗中的可能作用。方法诱导、表达EGF-Linker-TCS嵌合毒素,使用HiTrap Chelating亲和层析纯化,采用生长曲线、结晶紫法、电镜和流式细胞仪等技术研究EGF-Linker-TCS对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果EGF-Linker-TCS纯度达到95%,细胞活性检测证明EGF-Linker-TCS能够明显抑制肝癌细胞的生长和集落形成,0.1μg/mlEGF-Linker-TCS和1μg/mlEGF-Linker-TCS作用于肝癌BEL-7402细胞,集落形成率分别为(15.17±1.19)%和(7.83±1.32)%,明显低于对照组(31.23±3.98)%(P<0.05)。EGF-Linker-TCS对BEL-7402细胞有较强的细胞毒作用,IC50为10.98μg/ml。结论EGF-Linker-TCS嵌合毒素对肝癌BEL-7402细胞有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值。     

抗坏血酸促进三氧化二砷诱导的肝癌细胞毒性及其相关机制研究

目的：探讨抗干血酸(AA)对三氧化二砷(AT)诱导人肝癌细胞凋亡的协同效应，为改善三氧化二砷临床治疗人肝癌细胞提供理论基础。方法：体外培养人肝癌细胞株BEL-7402，用MTT和免疫印迹的方法分别评价AT和(或)AA对其生长抑制和胞内两个信号分子的影响。结果：微摩尔剂量的AT能抑制人肝癌细胞BEL-7402的异常生长，通过caspase-3的激活诱导其凋亡，并激活了ERKs信号蛋白，其作用有明显的剂量依赖性。AA对BEL-7402无明显的作用，但能有效的通过caspase-3而不是ERKs的激活促进AT对肝癌细胞的凋亡效应。结论：ERKs和caspase-3信号蛋白可能分别参与了砷剂诱导的人肝癌细胞促分化和凋亡效应，AT和AA对肝癌细胞的作用有协同性，他们通过caaspase-3而不是ERKs的激活进一步抑制了肝癌的生长。诱导其凋亡。     

儿茶素单体EGCG与ECG体外抗人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的研究儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)抗人肝癌细胞BEL-7402的作用。方法形态学观察EGCG、ECG作用后BEL-7402细胞的生长;MTT法检测EGCG、ECG对BEL-7402细胞生长的抑制;流式细胞术(FCM)检测EGCG、ECG诱导BEL-7402细胞凋亡水平;RT-PCR检测增殖相关信号分子Gli2和凋亡受体Fas的表达水平。结果 EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长,并诱导细胞凋亡。EGCG对BEL-7402细胞的生长抑制和诱导凋亡作用均较ECG强。EGCG和ECG均能下调Gli2的表达,但对Fas表达无影响。结论EGCG抗人肝癌BEL-7402细胞作用较ECG强。     

亚砷酸对人肝癌细胞凋亡及ERK-1蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸对人肝癌细胞BEL-7402凋亡及ERK-1蛋白表达的影响.方法通过体外细胞培养,用流式细胞术观察BEL-7402细胞周期及凋亡率变化;HE染色法、荧光显微镜观察细胞的凋亡形态变化;并用免疫组化法检测细胞ERK-1蛋白的表达.结果亚砷酸(1.0～8.0 μmol/L)能诱导BEL-7402细胞凋亡并阻滞细胞周期于S、G2/M期,呈剂量依赖性;亚砷酸(8.0 μmol/L)作用BEL-7402细胞48 h后, HE染色、荧光显微镜观察可见BEL-7402细胞呈现明显的凋亡形态改变;免疫组化法检测发现8.0 μmol/L的亚砷酸作用48 h 后BEL-7402细胞的ERK-1蛋白表达明显减弱. 结论亚砷酸体外有诱导人肝癌细胞凋亡及降低ERK-1蛋白表达的作用.     

蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用

[目的]观察蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用。[方法]肝癌细胞BEL-7402体外培养,采用MTT法检测蜂毒素对其增殖抑制作用,流式细胞术测定蜂毒素对细胞增殖核抗原表达和细胞周期的影响。[结果]蜂毒素体外能够抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖活性;并抑制细胞增殖核抗原的表达,呈剂量依赖性;干扰细胞周期,使S期细胞增加,G2/M期细胞减少。[结论]蜂毒素具有抑制BEL-7402肝癌细胞增殖的作用,机制可能与抑制细胞增殖核抗原表达和干扰细胞周期有关。     

羟基喜树碱诱导人肝癌BEL-7402凋亡的研究

目的 研究羟基喜树碱(HCPT)诱导人肝癌细胞凋亡的作用.方法 用HCPT以不同终浓度诱导BEL-7402人肝癌细胞,用MTT法观察其细胞毒性.分别以倒置显微镜、电镜、荧光显微镜观察其改变.结果 HCPT以剂量依赖的方式抑制BEL-7402细胞的生长.荧光显微镜和透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征的形态学改变.结论 羟基喜树碱既能抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖,又能诱导其凋亡显示出较强的细胞毒性.     

RNAi干扰Notch-1对人肝癌细胞BEL-7402 AFP表达及细胞增殖的影响

目的采用RNAi干扰细胞通讯因子Notch-1对肝癌细胞BEL-7402中AFP表达及细胞增殖的影响。方法通过siRNA抑制BEL-7402细胞中Notch-1的表达,采用qRT-PCR和Western blotting法,检测其对AFP表达的影响,采用MTI法测定细胞增殖情况。结果 siRNA抑制Notch-1达后,AFP mRNA及其蛋白水平显著下降,RNAi干扰组与对照组比较BEL-7402细胞生长明显受抑制(P<0.01)。结论 Notch-1 siRNA可以下调肝癌细胞BEL-7402中AFP mRNA及其蛋白的表达水平,抑制BEL-7402细胞的生长,提示Notch-1基因在肝癌细胞的发生、发展中具有重要作用,Notch-1可能是AFP过量表达肝癌的治疗靶点。     

端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用

目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

抗坏血酸对亚砷酸诱导肝癌细胞凋亡的协同效应

目的 探讨增强亚砷酸(AT)抑癌效应的有效途径。方法 体外培养肝癌细胞株BEL-7402，采用MTT和免疫印迹法，观察亚砷酸杀伤肝癌细胞诱导其凋亡及对凋亡蛋白caspase-3的作用和抗坏血酸(AA)对亚砷酸抑癌效应的影响。结果 AT作用肝癌细胞72h能明显抑制肝癌细胞的恶性生长，诱导胞内caspase-3激活；AA对肝癌细胞恶性生长无明显的抑制作用，但能显著地增强AT的杀伤效应，促进caspase-3激活诱导肝癌细胞凋亡。结论 抗坏血酸能有效提高亚砷酸的抑癌效应，其机制为增强AT诱导细胞凋亡作用。     

莪术活血化瘀有效物质研究

通过体外血小板聚集、大鼠血瘀模型血液流变性及凝血试验。观察莪术不同提取物的活血化瘀作用。采用血小板聚集功能测定法、血液流变性测定法及小鼠抗凝法观察莪术不同组分活血化瘀作用。结果显示：莪术不同提取物均具一定的抗血小板聚集、抗凝血及调节血液流变性作用。其中以乙酸乙酯、氯仿提取物活性最强。莪术中姜黄素类成分为其活血化瘀主要活性成分。本实验为阐明莪术有效物质提供了科学依据。     

HPLC法同时测定如意金黄散中大黄素、姜黄素、小檗碱的含量

目的:通过梯度洗脱的方法,建立了如意金黄散中小檗碱、姜黄素、大黄素含量测定的高效液相色谱法。方法:采用Kromasil C18色谱柱,以乙腈-9.6%醋酸为流动相梯度洗脱,柱温25℃,检测波长422nm,流速:1.0mL.min-1。结果:在此条件下姜黄素类物能够得到很好的分离,小檗碱、姜黄素、大黄素的线性范围分别为2.55～51μg.mL-1(r=0.9999),4.135～82.7μg.mL-1(r=0.9997),0.6225～12.45μg.mL-1(r=0.9997)。平均回收率(n=6)分别为99.02%、98.04%、98.58%。结论:该方法简便,快速易行,能够更好的控制如意金黄散的质量。     

不同方法制备的PLGA-胶原复合支架对大鼠成肌细胞增殖活性的影响

目的比较不同方法制备的PLGA-胶原支架对大鼠成肌细胞增殖活性的影响,评价PLGA-胶原复合支架的生物安全性。方法分别采用静电纺丝法和粒子洗出法制备PLGA-胶原复合支架与大鼠成肌细胞复合培养后,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖情况。结果①两种方法制备的PLGA-胶原支架对大鼠成肌细胞的增殖活性均无不良影响。②MTT结果显示,电纺法制备的PLGA-胶原支架对复合培养细胞的增殖具有一定的促进作用。结论①PLGA-胶原复合支架材料具有良好的生物安全性。②相比于粒子洗出法,静电纺丝法制备的PLGA-胶原复合支架更能促进细胞的生长增殖。     

Raji细胞不同激活方法的比较

目的：比较不同的Raji细胞激活方法，以选择最佳EB病毒早期抗原激活途径。方法：采用正丁酸加巴豆油和5’碘脱氧尿嘧啶核苷两种不同的方法，分别对Raji细胞进行激活，通过免疫酶法检测．根据其阳性细胞表达及血清抗体几何平均滴度，比较两种方法的优劣。结果：正丁酸加巴豆油方法阳性细胞表达百分率及抗体几何平均滴度明显高于5’碘脱氧尿嘧啶核苷方法。结论：正丁酸加巴豆油方法优于5’碘脱氧尿嘧啶核苷方法，是目前Raji细胞激活较为理想的方法。     

衣原体MOMP蛋白生物多态性及细胞表位分析

目的：预测并分析比较衣原体MOMP蛋白的二级结构和B细胞表位。方法：以各株衣原体MOMP蛋白的氨基酸序列为基础,采用Gamier—Robson法、Chou—Fasman法和Karplus-Schulz法预测蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson—Wolf法预测蛋白的抗原表位;以ClustalX软件序列比对分析其多变区。结果：各株MOMP蛋白含多个抗原位点,各序列在第80—107、165—178、249—264、332—346位序列高度差异,并出现比对“空沟”。多个强表位位于序列保守区内。结论：MOMP蛋白有较强的免疫原性,预测的抗原位点为之后蛋白相互作用研究、单抗制备、亚单位疫苗设计提供了理论依据。     

大鼠星形胶质细胞的体外培养与鉴定

目的探讨大鼠星形胶质细胞的最优体外培养方法与培养条件。方法采用差异贴壁等手段进行组织原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SP-9001免疫组化试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果镜下培养细胞生长多呈多彤性、扁平状,胞体较大,胞突较多较长,细胞核呈圆形或卵圆形,常偏于胞体的一侧,免疫组化染色显示细胞浆为掠褐色,细胞核为蓝色,呈阳性表达,星形胶质细胞的纯度在95％以上。结论本法可获纯度高、结构和功能良好的大鼠星形胶质细胞,可作为体外的细胞模型为研究细胞因子对其功能的调控作用奠定实验基础。     

家蝇细胞培养方法的探讨

目的探讨家蝇细胞培养的方法。方法分别取家蝇初孵幼虫、无菌家蝇卵初孵幼虫以及家蝇卵(胚胎)进行细胞培养,采用不同方法传代,观察细胞生长。结果取家蝇初孵幼虫进行培养,易出现霉菌污染,培养不能成功;用无菌的家蝇卵初孵幼虫进行培养,细胞生长较慢;用家蝇卵(胚胎)进行细胞培养,细胞生长快。直接吹打法传代,细胞不能生长;机械刮取法细胞能生长,但细胞容易丢失;胰酶消化法传代,细胞能迅速生长。结论取家蝇卵(胚胎)进行细胞培养,并用胰酶消化法传代是最佳的方法。     

人巨细胞病毒对细胞周期调控靶点-p53的影响

目的:了解HCMV对细胞周期调控靶点p53的影响。方法:建立体外HCMV感染HEL模型，用倒置显微镜观察不同时间下各组HEL的病变效应和用S—P免组化法检测p53蛋白的表达并以FQ—PCR法检测HEL细胞内HCMVDNA拷贝数。结果:(1)HCMV感染使HEL细胞发生病变，细胞内HCMVDNA拷贝数随时间的延长逐渐增加。(2)S—P免疫组化结果提示HCMV感染使HEL细胞p53蛋白的水平升高。结论:HCMV的感染改变了细胞内p53的水平，可能影响其在细胞周期中的正常功能，营造可能有利于病毒复制的环境。     

脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较

目的 :比较程控降温和 - 70℃冰箱直接保存脐血造血细胞对细胞活性的影响及免疫磁珠分离法对细胞生物学活性的影响。方法 :用密度梯度离心法分离出脐血中单个核细胞后 ,采用联合冷冻保护剂经程控降温后存放于液氮和直接存放于 - 70℃冰箱两种方法冷冻保存一个月 ,从细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率等方面比较这两种冷冻方法的优劣。另外 ,用免疫磁珠分离法正性分选脐带血中CD34+细胞 ,流式细胞仪计数分选前后的CD34+细胞的纯度及回收率 ,并分别进行分选前后的细胞培养。结果 :细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率在冷冻的两组间差异不显著。用免疫磁珠分选后CD34+细胞纯度达 88.3% ,回收率为 4 6 .2 % ,分选后的CD34+细胞比分选后CD34 细胞的细胞活力及集落形成能力明显要高。结论 :两种方法均可对脐血造血细胞进行保存。免疫磁珠分选法能够提供高纯度的造血干细胞 ,其分选过程不会影响细胞的活力及集落形成能力 ,为CD34+细胞分选和移植的临床应用提供实验依据     

脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较

目的：比较程控降温和－70℃冰箱直接保存脐血造血细胞对细胞活性的影响及免疫磁珠分离法对细胞生物学活性的影响。方法：用密度梯度离心法分离出脐血中单个核细胞后，采用联合冷冻保护剂经程控降温后存放于液氮和直接存放于－70℃冰箱两种方法冷冻保存一个月，从细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率等方面比较这两种冷冻方法的优劣。另外，用免疫磁珠分离法正性分选脐带血中CD34＋细胞，流式细胞仪计数分选前后的CD34细胞的纯度及回收率，并分别进行分选前后的细胞培养。结果：细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率在冷冻的两组间差异不显著。用免疫磁珠分选后CD34＋细胞纯度达88.3%，回收率为46.2%，分选后的CD34＋细胞比分选后CD34－细胞的细胞活力及集落形成能力明显要高。结论：两种方法均可对脐血造血细胞进行保存。免疫磁珠分选法能够提供高纯度的造血干细胞，其分选过程不会影响细胞的活力及集落形成能力，为CD34＋细胞分选和移植的临床应用提供实验依据。