蒙药材瑞香狼毒炮制前后的体外抑菌活性研究

瑞香狼毒（Stellera chamaejasme L．）又名断肠草、山萝卜、红狼毒等,蒙药名为达楞图如,为瑞香科狼毒属植物。瑞香狼毒性味苦平,有大毒,有逐水祛痰、破积杀虫之功效,临床上主要用于治疗乳腺炎、腮腺炎、脉痈、痘疹、疫热、炭疽、结喉等症,对于植物病原菌也有抑制作用。本文选用金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌为供试菌种,采用管碟法对瑞香狼毒不同溶剂提取组分及单体化合物的体外抑菌活性进行了研究。     

体外研究抗CD20单克隆抗体对骨髓瘤细胞的细胞毒性作用

目的:体外探讨上调多发性骨髓瘤(MM)细胞表面CD20抗原表达后,抗CD20单克隆抗体美罗华对骨髓瘤细胞的细胞毒性作用。方法:将浓度为(0-800)×10³U/L的重组人干扰素γ(hrγ-IFN),分别与10例初治(初治组)和10例复发难治(难治组)的MM患者瘤细胞共同培养,流式细胞仪测定培养前后瘤细胞表面CD20的表达;应用MTT比色法分析不同浓度美罗华对CD20抗原表达上调后瘤细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)和补体依赖性细胞毒作用(CDC)。结果:hrγ-IFN浓度分别≥5×10⁴U/L或≥1×10⁵U/L,可明显增加初治组或难治组瘤细胞表面CD20的表达,在用8×10⁵U/Lhrγ-IFN上调瘤细胞表面CD20抗原的表达后,12mg/L和16mg/L的美罗华分别能显著介导初治组和难治组效应细胞对MM瘤细胞的ADCC和激活CDC。结论:体外hrγ-IFN上调MM瘤细胞表面CD20的表达后、抗CD20单克隆抗体美罗华具有对瘤细胞的ADCC和CDC效应。     

CFSE和AnnexinV双标记技术检测细胞毒性T淋巴细胞的杀伤效应

目的 利用CFSE和AnnexinV对靶细胞进行染色,建立一种通过流式细胞仪技术检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤效应的新方法.方法 应用磁珠分 OT-Ⅰ T细胞受体(TCR)转基因小鼠CD8+CTL细胞和脾脏树突状细胞(sDC),将2种细胞和鸡卵蛋白(OVA)抗原肽共培养65 h后分析其细胞分裂增殖、IFN-γ和IL-4细胞内因子及穿孔素、颗粒酶等效应分子的表达特性,收获具备杀伤效应的CD8+CTL细胞.利用预先激活的小鼠CD8+CTL细胞作为效应细胞,CFSE标记的同系小鼠脾细胞作为靶细胞,体内体外2种条件下利用AnnexinV染色靶细胞检测特异性CTL杀伤效应,并与CFSEhigh和CFSElow标记靶细胞检测体内CTL杀伤效应的经典方法进行比较.结果 OT-Ⅰ初始CD8+CTL细胞体外活化培养后有4个分裂峰,54.1%的CTL细胞表达IFN-γ,0.78%的细胞表达IL-4,穿孔素、颗粒酶2种CTL效应分子均为阳性表达,CD8+CTL细胞已经具备CTL杀伤活性.体外实验结果显示OVA+靶细胞在共培养条件下,AnnexinV阳性细胞比例明显高于分离培养条件下[(62.4±3.5)%比(28.3±2.2)%,P＜0.01],OVA-的AnnexinV阳性靶细胞比例在不同培养条件下差异无统计学意义[(20.3±4.8)%比(17.3±2.9)%,P＞0.05].共培养条件下OVA+靶细胞其AnnexinV阳性细胞比例也明显高于OVA-靶细胞(P＜0.01),在分离培养条件下差异则无统计学意义(P＞0.05).活化的CD8+CTL细胞所介导的杀伤效应具有抗原依赖性和部分的细胞接触依赖性.体内CTL实验中,利用CFSE和AnnexinV双标记的方法检测出靶细胞的杀伤率高于未孵育OVA抗原肽的对照组靶细胞[(52.63±8.12)%比(13.84±4.37)%,P＜0.01].而同等条件下利用CFSEhigh和CFSElow双标记的方法检出靶细胞杀伤率为41%.结论 CFSE和AnnexinV双标记靶细胞的方法检测CTL杀伤效应与单纯的使用CFSEhigh和CFSElow标记靶细胞方法有很好的可比性,该策略为利用流式细胞仪技术检测细胞杀伤功能的方法学提供了新的选择.     

纳米银溶胶的体外细胞毒性评价及其机制研究

目的 对纳米银溶胶的体外细胞毒性进行评价,初步探讨纳米银对细胞的毒性作用机制.方法利用化学还原法制备纳米银溶胶,通过紫外-可见分光光度计和透射电镜对其物理特性进行检测;以小鼠纤维肉瘤细胞( L929)为研究对象,通过细胞形态观察、LIVE/DEAD染色分析和MTT检测来评价纳米银对细胞的毒性作用;在电子显微镜下观察纳米...     

壳聚糖基因纳米粒子的细胞摄入和体外毒性研究

用分子量为50kDa和400kDa的壳聚糖分别和[α-32P]dATP标记的质粒DNA,在不同的N/P比下,通过复凝聚方法形成基因纳米粒子。对形成的壳聚糖基因纳米粒子(Chitosan gene nanoparticle,CGN)进行表征,评价CGN体外细胞毒性,研究两种壳聚糖形成的基因纳米粒子被A10和K562细胞摄入的量和速度。结果表明:(1)随着壳聚糖分子量和N/P比的增大,形成的基因纳米粒子更易于进入细胞,同时显示纳米粒子的zeta电位与细胞摄入量之间存在关联性;(2)壳聚糖基因纳米粒子的毒性远远小于商品化的细胞转染试剂Lipofectamine2000。     

两种体外细胞毒性检测方法的比较研究

目的比较两种常用的细胞毒性检测方法在医疗器械生物学评价中的相关性.方法分别采用MTT比色法和细胞增殖度法,在37℃条件下,将五种医疗器械/生物材料的浸提液分别与小鼠成纤维细胞(L-929)接触2天和2,4,7天,比较材料对细胞的毒性影响.结果 5种不同的材料浸提液分别表现出不同程度的细胞毒性反应(0～2级).将MTT比色法与细胞增殖度法(2天)的实验数据进行相关性分析,显示两者之间具有良好的相关性(R=0.977).结论 MTT比色法由于其检测所需的细胞量相对较少,试验步骤相对简便、检测周期短,因此具有一定的优越性,是个值得推荐的细胞毒性检测方法.     

含活性炭纤维敷料类产品的体外细胞毒性研究

活性炭纤维因其高效吸附特性而广泛应用于医疗卫生领域。我们设计不同的浸提液制备方法,通过MTT法评价该浸提液对小鼠成纤维细胞L929活性及增殖的影响,以寻找适合评价含活性炭产品体外细胞毒性的浸提方法。结果显示,由于活性碳纤维的强吸附性,相对于传统的含血清细胞培养基直接作为浸提介质,采用无血清培养基浸提,试验前在浸提液中加入10%血清更适合评价含活性炭产品的体外细胞毒性。     

细胞凋亡、DNA损伤与镉的免疫毒性

重金属镉 (Cd)是一种常见的环境和工业污染物 ,美国的毒物管理委员会 (ATSDR)将其列为第六位危害人体健康的有毒物质 ,其毒作用广泛涉及肝、肾、肺、脑、骨骼、血液及免疫系统等。现将 Cd所致的细胞凋亡及 DNA损伤与其免疫毒性的关系作一综述。1　细胞凋亡的意义研究表明 ,外源化合物直接作用于免疫细胞和免疫器官 ,可引起细胞死亡 ,根据细胞死亡的形态和生物化学改变可分为坏死 (necrosis)和凋亡 (apoptosis)。细胞凋亡是一种受一系列基因调控的、自发性的细胞程序性死亡 (pro-gramed cell death,PCD) ,是机体的一种自我调节过程。晚…     

细胞毒性T细胞淋巴瘤134例临床病理学特点及预后

目的:探讨细胞毒性T细胞淋巴瘤（cytotoxic T-cell lymphoma,CTL）临床病理学特点及预后。方法:回顾性收集2008至2020年首都医科大学附属北京友谊医院、解放军联勤保障部队第九八九医院（原第一五二中心医院）和河北医科大学第四医院共计134例CTL患者的临床病理资料,检测肿瘤细胞的免疫表型、EB...     

抗原特异性细胞毒性T细胞体外扩增方法的研究近展

抗原特异性细胞毒性T细胞(cytoxicTlymphocytes,CTLs)在细胞免疫应答中起着重要的效应功能,从而在抗肿瘤和抗感染免疫中发挥着重要作用。由于受到各种因素的限制和影响,抗原特异性CTLs无法在体内有效地诱导和扩增,因此,通过体外诱导和扩增CTLs后再将此CTLs回输到体内是一个比较理想的方法,且具有重要的应用价值,如何高效激活和扩增抗原特异性CTLs是此法能否成功应用的关键。     

瑞香狼毒甲醇提取物抗瘤机理研究

目的 研究瑞香狼毒甲醇提取物的抗瘤机理。方法 用不同剂量的瑞香狼毒甲醇提取物(简称醇提物)，观察其体内对荷瘤鼠和所荷肿瘤生长的作用；MTT法研究其体内对荷瘤鼠脾细胞转化及NK活性，体外对正常鼠脾细胞生长、转化和NK活性以及对3株肿瘤细胞增殖的影响；流式细胞术和透射电镜检测其体外对K562的细胞周期和凋亡及p53、bcl-2和c-myc基因表达的影响；台盼蓝拒染法检测其体外对K562增殖曲线的影响。结果 体内，每天5μg/kg醇提物可抑制肿瘤生长，提高荷瘤鼠免疫功能。体外，0．1～l0μg/ml醇提物可刺激脾细胞增殖和协同最适量和亚适量ConA刺激脾细胞转化，0．1～10μg/ml醇提物可提高脾细胞NK杀伤活性，0．1～l0μg/ml醇提物对K562、S180和YAC-1的增殖均有抑制作用，K562最为敏感。0．5μg/ml醇提物作用的K562，处于G0/G1期的细胞和凋亡细胞显著增加，p53基因表达显著增加，bcl-2和c-myc基因表达显著下降。K562在0．5μg/ml醇提物作用24h后洗去或不洗去培养9d，细胞虽仍存活，但密度却不增加。结论 醇提物在一定剂量范围内可抑制肿瘤细胞生长，提高荷瘤鼠免疫功能。抗瘤机理与其可刺激脾细胞增殖，协同ConA刺激脾细胞转化和提高脾细胞NK杀伤活性及阻滞肿瘤细胞周期，抑制其分裂增殖，促进其凋亡有关。     

Cell-mediated allograft responses in vitro. VI. Studies on macrophage-mediated cytotoxicity.

Normal murine peritoneal macrophages were rendered cytotoxic against 51Cr-labelled allogeneic and syngeneic target cells by incubation with supernatant of selected cell cultures.'Active' culture supernatant was produced both by specifically sensitized cytotoxic T lymphocytes as well as by mitogen-stimulated T cells, but not by mitogen-stimulated B cells. The in vitro induced macrophage-mediated cytotoxicity was found to be non-specific in the sense that 51Cr-labelled target cells of different H-2 haplotype were lysed equally well.     

Prednisolone suppresses NK cell cytotoxicity in vitro in women with a history of infertility and elevated NK cell cytotoxicity

PROBLEM: To evaluate the effect of prednisolone on NK cell cytotoxicity in vitro environment and also to compare the effect of prednisolone versus immunoglobulin-G (IVIG) on NK cell cytotoxicity using in vitro co-culture with K562 cells. METHOD OF STUDY: The following is a prospective observational study, between August 2006 and February 2007, was carried out on blood samples from 110 patients with a history of recurrent miscarriage or recurrent failed implantation. Peripheral blood mononuclear cells containing NK cells were isolated and co-cultured with target cell K562 in three different effector-to-target (E:T) ratios of 50:1, 25:1 and 12.5:1. Prednisolone or IVIG was then added to the tube with E:T ratio of 50:1 to assess suppressive effect. The percentage killing was recorded and statistical analysis performed using Student's t-test. RESULTS: In the experiments with an E:T ratio of 50:1 without prednisolone or IVIG in the co-culture, the mean target cell killing percentage was 26.4%. In cultures using the same E:T ratio, this killing percentage was significantly reduced in the presence of IVIG (9.9%) or prednisolone (13.6%), (P<0.001 in both analyses). On comparing the reduction in killing percentage of target cells by prednisolone versus IVIG, a slightly lower reduction in the prednisolone co-culture was noted but this was not statistically significant (P>0.05). CONCLUSION: The results of this study show that prednisolone is able to suppress the cytolytic activity of the NK cell. Prednisolone and IVIG are almost equally effective in suppressing in vitro NK cell cytolytic activity.     

Evaluation method for the cytotoxicity of cigarette smoke by in vitro whole smoke exposure

An in vitro whole smoke (WS) exposure method was established to evaluate the toxicological effects of fresh cigarette smoke using the VITROCELL^® system associated with the neutral red uptake (NRU) cytotoxicity assay. The VITROCELL^® system is a newly representative culture and exposure system for in vitro studies of gases or complex mixtures. The impacts of two factors on cytotoxicity measurements of cigarette smoke were investigated using this WS exposure system. The factors include synthetic air exposure and optimal time to perform the NRU assay after smoke exposure. Results showed that synthetic air exposure used in the system did not significantly alter cell survival; 24 h after smoke exposure appeared to be an optimal time-point to assess the cytotoxicity of cigarette smoke. A clear dose–response relationship between smoke exposure and cell viability was demonstrated using this system, and the evaluation method was sensitive to distinguish the differences in smoke-induced cytotoxic effects from different cigarettes. In addition, we tried converting the values of EC₅₀ from WS exposure testing into the values in unit used in total particulate matter (TPM) testing for a purpose of comparison, and the data indicate that the cytotoxicity of smoke measured by WS exposure is greater than that measured by TPM exposure.     

A flow cytometry-based assay for quantitative analysis of cellular proliferation and cytotoxicity in vitro

A novel method based on flow cytometry (FCM), which can count the number of detected cells, has been developed for the evaluation of cellular proliferation and cytotoxicity in vitro. It provides a tool that directly counts cell number without being influenced by the metabolic state of the cells, discriminates target cells from effector cells in cell-mediated cytotoxicity assay, and with less treatment step and free radioactivity. In this paper, we have prepared the PG cells (a highly metastatic human lung cancer cell line) and peripheral blood lymphocytes (PBL) with various concentrations and ratios of concentration to validate the method. The results were compared with MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) 2,5-diphenyl tetrazolium bromide) assay and the regression analysis results showed that this method worked very well. We have also used this method to evaluate mitogen-induced proliferation and cytotoxicity. The results indicated that this method might yield high sensitivity and reliability.     

不明原因自然流产与蜕膜NK细胞表面活化性受体表达的相关性研究

探讨不明原因自然流产患者蜕膜NK细胞杀伤活性与其细胞表面活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D表达的相关性。选取21例早孕不明原因自然流产患者为病例组,25例正常早孕人流妇女为对照组,收集两组的蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞,MACS磁珠分选CD3-CD56+NK细胞。以K562细胞为靶细胞,用细胞染色及流式细胞技术检测两组蜕膜NK细胞杀伤活性,用流式细胞技术检测两组蜕膜CD56brightCD16-NK和CD56dimCD16+NK细胞上活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D的表达,并与NK细胞杀伤活性进行相关性分析。结果:(1)早孕蜕膜NK细胞具有杀伤活性;(2)病例组蜕膜NK细胞的杀伤活性较正常对照组显著增强(P=0.014);(3)病例组蜕膜CD56brightCD16-NK细胞中NKp44的表达比正常对照组显著升高(P=0.021);病例组蜕膜CD56dimCD16+NK细胞中NKp46和NKp44的表达比正常对照组显著升高(分别P=0.026,P=0.041);其余活化性受体的表达两组未见明显差异;(4)蜕膜NK细胞杀伤功能与蜕膜CD56brightCD16-NK细胞中NKp44的表达呈显著正相关(r=0.677,P<0.05),和蜕膜CD56dimCD16+NK细胞中NKp46的表达呈显著正相关(r=0.634,P<0.05)。蜕膜NK细胞活化性受体NKp46和NKp44表达增加,从而使蜕膜NK细胞的杀伤功能增强可能在不明原因自然流产的发病中起重要作用。     

聚乙二醇改性去细胞猪主动脉瓣膜构建复合支架及其体外细胞毒性试验

目的 对去细胞猪主动脉瓣膜进行聚乙二醇(PEG)化改性,并评价改性后复合支架的细胞毒性.方法 合成功能基团为丙烯酰基的枝化状聚乙二醇衍生物,在去细胞猪主动脉瓣膜引入巯基,通过迈克尔加成反应完成PEG对去细胞猪主动脉瓣膜的交联,并作PEG改性前后瓣膜的生物力学测定.制作去细胞瓣膜的浸提液,浸提液分为单纯去细胞瓣膜组、PEG改性去细胞瓣膜组和阴性对照组(培养液),采用CCK-8法检测复合支架的浸提液对人脐静脉内皮细胞增殖率的影响,评价其细胞毒性.结果 PEG改性去细胞瓣膜反应条件温和,改性效果确切.复合瓣膜支架的抗拉强度明显高于去细胞瓣膜[(7.53±0.29)MPa比(5.65±0.24)MPa,P＜0.05],但与天然瓣膜[(7.68±0.20)MPa]差异无统计学意义(P＞0.05).复合支架和去细胞瓣膜毒性评级均0级,与阴性对照组差异无统计学意义(P＞0.05).人脐静脉内皮细胞经各浸提液的培养液培养后形态良好,增殖旺盛.结论 PEG改性能明显改善去细胞猪主动脉瓣膜的力学性能,且改性后的复合支架无细胞毒性,为进一步研究提供依据.     

单链双特异性抗体(BHL-I)介导的细胞毒作用及其可能机制研究

目的：观察单链双特异性抗体（BHL-I）介导的PBL对靶细胞SKOV3的杀伤作用，并研究其细胞毒作用的可能机制。方法：MTT法检测在不同效靶比、不同作用时间、不同靶细胞（SKOV3、BEL-7402）、不同BHL-I浓度等条件下，BHL-I介导PBL对靶细胞的杀伤作用；RT-PCR检测杀伤过程中PBL的穿孔素（Perforin）、颗粒酶（GranzymeB）mRNA的表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ含量变化。结果：BHL-I介导的PBL对SKOV3细胞毒作用明显高于对BEL-7402的，并且在效靶比10∶1、作用36小时、BHL-I浓度为25μg/ml时，PBL对靶细胞SKOV3的细胞毒作用最为显著；在IL-2存在下，BHL-I可引起Perforin、GranzymeB mRNA较高表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ含量升高，当作用时间为72小时时，这些细胞因子的表达有所下降。结论：BHL-I能介导PBL对表达有相应靶抗原的SKOV3细胞具有高效杀伤作用，其细胞毒作用可能与效应细胞表达Perforin、GranzymeB、TNF-α、IFN-γ等有关。