维生素C增加人宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用,流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长,将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用,细胞生长抑制率显著提高,凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

维生素C联合顺铂与单药顺铂对Hela细胞生长状况影响的比较

目的 探讨维生素C(VC)和顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞株的体外抑制作用.方法 将VC、DDP单独或联合应用于Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,并于用药后应用激光共聚焦显微镜观察细胞形态学变化.结果 不同浓度的顺铂对细胞生长均有抑制作用,随药物浓度的增加,抑制作用加强.VC和DDP联合应用后...     

PTEN影响宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性

目的:通过转染PTEN基因表达载体,提高宫颈癌Hela细胞中PTEN的表达水平,观察能否影响Hela细胞对顺铂的敏感性,并探讨其分子学机制.方法:将培养的宫颈癌Hela细胞分为空白对照(未转染质粒的Hela细胞)、质粒对照(转染空质粒的Hela细胞)和PTEN转染(转染PTEN表达载体的Hela细胞)3组.分别用RT-PCR和Western检测各组Hela细胞中PTEN的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测各组Hela细胞对顺铂的化学敏感性;RT-PCR检测各组Hela细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达水平.结果:PTEN转染组Hela细胞中PTEN的表达水平比另2组细胞显著增高(P＜0.01);经顺铂处理后,PTEN转染组Hela细胞生长抑制率比其它2组显著增高(P＜0.01),PTEN转染组Hela细胞中PI3K被显著抑制(P＜0.01).结论:PTEN能增强宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,它可能通过下调Hela细胞中PI3K而导致Hela细胞对顺铂耐药性下降.     

NS-398对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的 研究环氧合酶-2（COX-2）特异性抑制剂NS-398对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法 用含NS-398和顺铂的细胞培养液作用于Hela细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测作用后的Hela细胞对顺铂敏感性的变化;采用流式细胞仪分别检测经过NS-398和顺铂作用的细胞与顺铂联合单独作用的细胞的COX-2蛋白表达情况.结果 NS-398和顺铂联合作用后的Hela细胞COX-2表达量较顺铂单独作用后的减少,差异有统计学意义（P〈0.05）;在转染48h后,Hela细胞对顺铂的半数抑制量（IC50值）从（10.475±1.713）μg/ml提高到（0.194±0.021）μg/ml,Hela细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍.结论 NS-398能增加宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性.     

MiR-26b增强顺铂对宫颈癌细胞株Hela的杀伤活性

目的:研究microRNA-26b(miR-26b)是否能增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性及机制。方法:用荧光定量PCR方法检测人正常宫颈上皮细胞系CRL-2614及宫颈癌细胞系Hela、SiHa和C-33a miR-26b的表达水平。MTT法检测顺铂单独治疗及联合miR-26b治疗对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。利用生物信息学及western blot方法验证miR-26b是否调节Hela细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对miR-26b联合顺铂杀伤Hela细胞疗效的影响。结果:宫颈癌细胞系Hela(0.21±0.04)、SiHa(0.42±0.03)和C-33a(0.33±0.03)的miR-26b的相对表达水平显著低于正常宫颈上皮细胞系CRL-2614 (1.00±0.05)。miR-26b联合1mmol/L顺铂治疗组对Hela细胞的杀伤活性(细胞活力抑制率为52.6±6.9)显著高于1mmol/L顺铂单治疗组(细胞活力抑制率为6.7±3.5)。miR-26b转染后,Hela细胞Mcl-1的蛋白表达水平下降。miR-26b联合1mmol/L顺铂在Mcl-1表达载体转染后对Hela细胞的杀伤活性(细胞活力抑制率为19.6±6.7)显著低于未转染Mcl-1表达载体的miR-26b联合1mmol/L顺铂组(细胞活力抑制率为55.7±7.6)。结论:MiR-26b通过靶向于Mcl-1增强顺铂对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。     

顺铂对人宫颈癌Hela细胞超弱发光影响的观察

目的：探讨人宫颈癌Hela细胞株经顺铂（DDP）作用后其超弱发光与细胞增殖活性变化的关系．方法：选择DDP诱导人宫颈癌Hela细胞株,比较人宫颈癌Hela,Hela＋DDP细胞株形态变化．MTT比色法、流式细胞仪检测细胞生长周期变化及凋亡情况;用IFFM-D型流动式化学发光仪检测Hela,Hela＋DDP细胞的超弱发光强度变化．结果：DDP对Hela细胞有生长抑制作用,并呈时间和浓度依赖性,其48h的Ic5。值为3mg,／L,当DDP浓度在3mg／L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系（P〈0．01）．流式细胞仪结果表明,与Hela细胞相比较,Hela＋DDP细胞G2期细胞数增多,而G1,S期的细胞数明显减少（P〈0．01）;细胞凋亡率在24,48,72h分别为（11．4±5．8）％,（21．8±7．9）％,32．5±11．6）％．在1×10^-4mol／L鲁米诺及3mL／L双氧水（H2O2）条件下超弱发光强度随着时间的变化,Hela＋DDP细胞明显降低（P〈0．01）．结论：在DDP非毒性剂量作用后,Hela＋DDP细胞超弱发光强度降低,提示超弱发光检测可能作为筛选敏感化疗药物的一项指标．     

藏红花素对人宫颈癌Hela细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨藏红花素对人宫颈癌Hela细胞顺铂耐药性的影响.方法 将对数生长期耐顺铂人宫颈癌Hela/DDP细胞随机分为空白对照组、藏红花素组、顺铂组及联合组.藏红花素组细胞以含终质量浓度400 mg·L-1藏红花素的培养基培养,顺铂组细胞以含终质量浓度5 mg·L-1顺铂的培养基培养,联合组细胞以含终质量浓度400 m...     

维生素C对顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡的影响

目的探讨维生素C是否能影响顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法MTT法和流式细胞术检测细胞生长和凋亡的情况,TRAP-ELISA法测定端粒酶活性变化。结果DDP联合AA作用组比单独用DDP组细胞凋亡率明显增高,端粒酶活性明显降低。单独10μmol/LDDP处理组细胞生长未受到明显抑制,但联合AA后其生长受到抑制。结论AA能增强DDP诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,并增强DDP对细胞内端粒酶活性的抑制作用。     

MG132联合顺铂对人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤的影响

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂对人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤的影响。方法:建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,将荷瘤鼠分成4组,每组5只,分别给予腹腔注射。对照组:生理盐水0.2 ml,1次.d-1,共7 d。MG132组:5 mg.kg-1MG132,0.2 ml,1次.d-1,共7 d。顺铂组:3 mg.kg-1顺铂,0.2 ml,第3、5、7天,1次.d-1。MG132联合顺铂组:5 mg.kg-1MG132,0.2 ml,1次.d-1,共7 d;3 mg.kg-1顺铂,0.2 ml,第3、5、7天,1次.d-1。计算瘤体积,绘制瘤体生长曲线;称瘤重,计算抑瘤率及瘤体抑制率,比较各组荷瘤鼠瘤体积和瘤重的差异。结果:各组荷瘤鼠瘤体积两两比较差异均有统计学意义(P<0.001),MG132组、顺铂组以及MG132联合顺铂组的瘤体生长较对照组明显缓慢。荷瘤鼠瘤重各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.001),各干预组的荷瘤鼠瘤重比对照组明显减轻。MG132组、顺铂组、MG132联合顺铂组荷瘤鼠抑瘤率分别为15%、48%和81%;MG132组、顺铂组、MG132联合顺铂组荷瘤鼠瘤重抑制率分别为9%、43%和69%。结论:MG132能抑制裸鼠体内Hela细胞移植瘤的生长,并增强顺铂对裸鼠Hela细胞移植瘤生长的抑制作用。     

氯丙嗪单独及与顺铂联合应用对人宫颈癌Hela细胞生长的影响

目的:探讨氯丙嗪(CPZ)和顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞株的体外抑制作用。方法:将氯丙嗪、顺铂单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,并于用药后不同时间点观察细胞形态学变化。结果:不同浓度的氯丙嗪对细胞生长均有抑制作用,随药物浓度的增加,抑制作用加强。氯丙嗪和顺铂联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05)。二者均可诱导细胞凋亡,联用凋亡率明显增加,并出现G0/G1期细胞阻滞。结论:氯丙嗪可抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,且对顺铂有协同作用。     

内源性NO在人宫颈癌Hela细胞株合成对顺铂敏感性的影响

目的通过细胞因子γ-干扰素（INF-γ）诱导内源性一氧化氮（Nitric Oxide,NO）的产生,探讨其对人宫颈癌Hela细胞株顺铂（DDP）敏感性的影响。方法用NO测试盒检测一定浓度的INF-γ处理人宫颈癌Hela细胞在不同时间NO的产生量及一定作用时间下不同浓度的INF-γ处理Hela细胞NO的产生量;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测经一定浓度及一定时间INF-γ处理后的人宫颈癌Hela细胞在不同浓度顺铂作用后的生存率;分别加入一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase,NOS）的抑制剂NG-甲基-L-精氨酸（L-NMMA）及NO的合成原料L-精氨酸（L-arginine,L-Arg）再次以MTT法检测Hela细胞生存率的变化。结果体外培养的Hela细胞在经INF-γ作用后第8小时NO生成量达高峰,随后呈下降趋势,而不加INF-γ的空白对照组,Hela细胞NO的生成量无明显变化（P〈0.05）;Hela细胞NO的生成量与INF-γ的浓度之间有一定的依赖性。采取MTT法检测：经1nMINF-γ作用8 h的实验组Hela细胞与不加INF-γ的对照组相比,低浓度DDP作用时前者Hela细胞生存率显著下降（P〈0.05）,但随DDP浓度升高后两组的生存率无显著差异;经1nMINF-γ处理8 h的Hela细胞加入L-NMMA组Hela细胞在DDP作用后的生存率显著提高（P〈0.05）,而加入L-Arg组结果则与之相反。结论人宫颈癌Hela细胞在一定剂量、一定时间INF-γ的作用下,能够诱导iNOS产生内源性NO,且NO产生的量与INF-γ存在时间、剂量依赖关系;经INF-γ诱导产生的内源性NO可提高人宫颈癌Hela细胞株对DDP的敏感性。     

维生素C对顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡的影响

目的探讨维生素C是否能影响顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法MTT法和流式细胞术检测细胞生长和凋亡的情况,TRAP-ELISA法测定端粒酶活性变化。结果DDP联合AA作用组比单独用DDP组细胞凋亡率明显增高,端粒酶活性明显降低。单独10!mol/LDDP处理组细胞生长未受到明显抑制,但联合AA后其生长受到抑制。结论AA能增强DDP诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,并增强DDP对细胞内端粒酶活性的抑制作用。     

氯丙嗪对体外培养人宫颈癌Hela细胞株的生长抑制作用

目的：探讨氯丙嗪对人宫颈癌Hela细胞株的体外抑制作用。方法：采用MTT测定法，观察不同浓度氯丙嗪(0μmol／L，3．0μmol／L，6．0μmol／L，12．5μmol／L，25．0μmol／L，50．0μmol／L，100．0μmol／L)作用后体外培养的人宫颈癌Hela细胞的细胞增殖抑制率，并于用药后不同时间点观察细胞形态学变化。结果：不同浓度的氯丙嗪对Hela细胞生长均有抑制作用，随药物浓度的增加，抑制作用加强。氯丙嗪浓度为3．0μmol／L即呈现明显的生长抑制作用，抑制率为7．91％；浓度为100．0μmol／L时抑制率最高，达59．39％。用药4h后镜下即可见部分细胞贴壁性降低，肿胀呈球形，核膜溶解，不见核的轮廓；部分细胞裂解呈碎片状；用药8h后碎片明显增多。结论：氯丙嗪对人宫颈癌Hela细胞株具有体外生长抑制作用。     

顺铂、5-氟尿嘧啶对人宫颈肿瘤细胞(Hela细胞)的相互作用

目的：观察顺铂、5-氟尿嘧啶及甲氨喋呤在体外对人宫颈肿瘤细胞(Hela细胞)的作用。并观察顺铂、5-氟尿嘧啶配伍对Hela细胞的相互作用。方法：采用MTT例定法观察顺铂、5-氟尿嘧啶及甲氨喋呤单用及合用对Hela细胞的影响,流式细胞仪观察凋亡及细胞周期的变化。并利用中效原理判定顺铂和5-氟尿嘧啶合用的效果。结果：顺铂和5-氟尿嘧啶单独应用时随着药物剂量增加,其抑制作用也增加,两药大剂量(大于中效剂量)合用时可产生拮抗作用(CI＞1),小剂量(小于中效剂量)合用时可产生协同作用(CI＜1)。甲氨喋呤在本实验条件下未见明显抑瘤作用。结论：顺铂和5-氟尿嘧啶合用小剂量产生协同作用,大剂量产生拮抗作用。     

影响人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用

探讨叉头盒蛋白M1（FOXM1）对人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性的作用。方法 将含有正义FOXM1 互补的脱氧核糖核酸（cDNA）的真核表达载体、空质粒的真核表达载体采用脂质体转染法转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为过表达组、过表达对照组;另构建干扰FOXM1基因表达的重组载体、空载载体,利用脂质体介导将其转染至人宫颈癌细胞株Hela/DDP,分别记为沉默组、沉默对照组;并设置空白组、抑制剂组。上述每组5个复孔,均加入顺铂,抑制剂组另加入硫链丝菌肽,培养48 h。实时逆转录荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测各组FOXM1 信使核糖核酸（mRNA）及蛋白表达;倒置显微镜观察细胞形态学改变;噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞仪双染法检测各组细胞凋亡率;RT-qPCR、Western Blot检测各组细胞周期蛋白B1（Cyclin B1）、细胞分裂周期因子25B（CDC25B）、存活蛋白（Survivin）、p21 mRNA及蛋白表达。结果 与空白组比较,沉默组和抑制剂组FOXM1、Cyclin B1、CDC25B、Survivin mRNA及蛋白表达均下降（P＜0.05）,过表达组上述指标均升高（P＜0.05）;与空白组比较,沉默组和抑制剂组增殖抑制率、凋亡率、p21 mRNA及蛋白表达均升高（P＜0.05）,过表达组上述指标均下降（P＜0.05）;空白组、沉默对照组、过表达对照组细胞连接紧密、形态均匀、轮廓清楚,过表达组细胞连接致密,沉默组和抑制剂组细胞减少,轮廓不清、形态不均、大小不一,且可见细胞皱缩及细胞碎片。结论 FOXM1表达下调可增加人宫颈癌细胞株Hela/DDP顺铂化疗敏感性,FOXM1表达上调则可降低其化疗敏感性,推测与正反馈调节Cyclin B1、CDC25B、Survivin表达,负反馈调节p21表达有关。     

环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的研究COX-2反义寡核苷酸(AS-ODNs)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法体外设计、合成针对COX-2的反义寡核苷酸,并转染宫颈癌Hela细胞,应用细胞蛋白印记法(West-blot)测定转染COX-2反义寡核苷酸后Hela细胞COX-2基因蛋白的表达变化,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测(MTT)COX-2反义寡核苷酸转染后Hela细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染针对COX-2的反义寡核苷酸后,在24、48和72h,Hela细胞COX-2蛋白的表达水平下降;在转染48h后,Hela细胞对顺铂的半数抑制量从(10.475±1.713)μg/ml提高到(0.194±0.021)μg/ml,Hela细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍。结论COX-2反义寡核苷酸能增加宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性。     

顺铂诱导survivin表达改变与宫颈癌细胞化疗敏感性的关系

目的探讨survivin基因在顺铂(DDP)诱导的宫颈癌细胞凋亡中的作用.方法用宫颈癌Hela细胞株进行培养传代,MTT试验检测DDP不同药物浓度对宫颈癌细胞生长的抑制作用.分别在加药前、加药后24、48、72 h和96 h采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)检测survivin mRNA和蛋白的表达.同时利用流式细胞术定量检测细胞周期和细胞凋亡.结果 DDP对宫颈癌细胞生长均有明显的抑制作用,并有浓度和时间的依赖性.随浓度增加,宫颈癌细胞凋亡率表现先上升,后下降;随时间延长,在高浓度DDP组凋亡率明显增加,在低浓度DDP组凋亡率增加不明显.0.1 mg/L和1 mg/L DDP处理宫颈癌细胞,survivin mRNA和蛋白表达随作用时间的延长而增加.结论小剂量顺铂处理宫颈癌细胞,survivin mRNA和蛋白表达随作用时间的延长而增加,这可能是宫颈癌细胞对化疗药物产生耐药性的重要因素之一.     

胰岛素对人宫颈癌Hela细胞化疗敏感性的影响

目的探讨胰岛素能否增强人宫颈癌Hela细胞对顺铂（DDP）的化疗敏感性及其相关机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞株,MTr法检测5U／L胰岛素作用3、6、9、12、15、18、21h后,联合DDP（7．26mg／L）对人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪检测对照组、DDP组、胰岛素组及联合组（胰岛素化疗前作用6h）的细胞周期时相变化情况。结果DDP组、胰岛素化疗前作用不同时间组与对照组相比,Hela细胞的增殖抑制率明显上升（P〈0．01）;且胰岛素于化疗前提前作用3、6、9、12、15h后加入DDP,宫颈癌Hela细胞的增殖抑制率明显高于DDP组（P〈0．01）。流式分析显示DDP组及胰岛素组的S期细胞比例较对照组高（P均〈0．01）,联合组s期细胞比例较DDP组高（P〈0．01）。结论胰岛素具有较显著的DDP化疗增敏作用,胰岛素作用时机选择是胰岛素对宫颈癌细胞化疗增敏作用的关键。     

低频超声联合微泡增强宫颈癌Hela细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的 研究低频率、低声压超声激励微泡增强顺铂对宫颈癌Hela细胞的杀伤作用.方法 实验分为对照组(C组),顺铂组(P组),顺铂联合超声组(PU组),超声微泡组(UM组),超声微泡联合顺铂组(PUM组).采用频率1MHz、声压400 kPa的非聚焦超声联合脂质微泡及顺铂,按照分组处理对数期生长的宫颈癌Hela细胞.Hoechst33342染色后通过荧光显微镜观察并计算各组细胞的凋亡率;采用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测处理后各组细胞的增殖活性;对各组细胞行Annexin V-FITC/PI双染色后,运用流式细胞仪检测各组处理后24 h细胞凋亡情况.结果 测定Hela细胞对顺铂的敏感性,顺铂的IC50为4.882 μg/mL.通过流式细胞仪检测到超声微泡顺铂组(PUM)的细胞凋亡率为58.1％,较顺铂联合超声组(PU)增高40％,明显高于其余各组,组间差异有统计学意义(P＜0.05);CCK-8检测结果显示PUM组较其余各组细胞生长明显受到抑制;Hoechst33342染色后,PUM组典型凋亡细胞明显多于其余各组.结论 低频率低声压超声联合微泡可以增强顺铂对宫颈癌Hela细胞的杀伤作用,明显抑制Hela细胞生长,促进其凋亡.     

红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela体外增殖的影响

目的:探讨红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外增殖的影响。方法:采用MTT法测定了不同浓度的红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化。结果:红花注射液浓度越高对Hela细胞抑制作用越好,作用时间越长抑制效果越强,量效关系和时效关系良好;形态学观察到细胞凋亡。结论:红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖有较强的抑制作用。