眼眶肿瘤组织端粒酶活性表达及其临床意义

目的研究眼眶肿瘤组织中端粒酶活性的表达,为眼眶肿瘤的临床诊断开拓新思路。方法利用端粒重复序列扩增技术对83份眼眶恶性肿瘤组织、83份癌旁组织、165份眼眶良性肿瘤组织和6份正常眼眶组织端粒酶的活性进行检测。结果254例(337份)标本中,眼眶恶性肿瘤组织、癌旁组织、良性肿瘤组织的端粒酶活性阳性率分别为95.2(79/83)、3.6(3/83)、3.0(5/165);6份正常眼眶组织未检测到端粒酶活性的表达。眼眶恶性肿瘤组织与其他眼眶组织相比,端粒酶活性阳性率差异均有显著性统计学意义(P<0.0001)。结论眼眶病变组织端粒酶活性表达水平的检测对眼眶恶性肿瘤早期诊断具有应用价值。     

端粒酶在眼睑皮脂腺癌中表达的意义

目的　探讨端粒酶与端粒酶RNA(humantelomeraseRNA ,hTR)在睑板腺癌中的表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法　用端粒酶重复扩增技术法检测 12例冰冻保存睑板腺癌组织标本中端粒酶活性 ;用原位杂交法检测 5 5例睑板腺癌石蜡切片中hTR的表达 ,并用免疫组化EnVision法检测肿瘤增殖指数Ki 6 7的表达。结果　 12例睑板腺癌组织标本中 ,端粒酶活性程度不同 ;hTR在睑板腺癌细胞内表达 ,其阳性表达率为 85 5 % (47/5 5 ) ,而癌旁组织中hTR表达阴性 ;hTR的表达水平随睑板腺癌分化程度的降低而呈上升的趋势 (χ2 =17 6 2 1,P <0 0 0 1) ;hTR表达与睑板腺癌肿瘤增殖指数Ki 6 7表达及睑板腺癌复发无关。结论　hTR在睑板腺癌变过程中具有调节作用 ,hTR阳性表达可作为判断睑板腺癌恶性程度的标记物。     

侵袭性骨肿瘤端粒酶活性检测及其意义

目的 检测端粒酶在侵袭性骨肿瘤中的活性及评估其作为骨肿瘤恶性诊断的意义。方法 采用非放射性同位素ＴＲＡＰ－银染方法侵袭性骨肿瘤组织及骨源细胞素／株两方面进行端粒酶活性检测，并将此方法与ＴＲＡＰ－ＥＢ染色进行了比较。结果 ５３例侵袭性骨肿瘤组织端粒酶活性检出率８３．０％（４４／５３）；同时检测的１９例同一患者的肿瘤旁对照组织和１例骨的瘤样病变－动脉样骨衰肿均未检测到端粒酶活性；３例正常的骨膜培养细胞     

端粒酶反义寡核苷酸抑制视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的：使用脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸对闭端粒酶基因在视网膜色素上皮细胞的表达从而抑制视网膜色素上皮细胞的增殖,为增殖性玻璃体视网膜病变的治疗探索一条基因治疗途径。方法：使用端粒重复序列扩增法（Telomeric repeat amplification protocol,TRAP)定性,定量检测浓度为0umol/L,2umol/L,4umol/L,6umol/L,8umol/L脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸及浓度为4umol/L的正义寡核苷酸在视网膜色素上皮细胞粒酶活性表达。结果：TRAP结果显示随着端粒酶反义寡核苷酸浓度的增高,视网膜色素上皮细胞端粒酶活性逐渐降低,8umol/L几乎没有表达,正义寡核苷酸很少抑制视网膜色素上皮细胞端粒酶活性。结论： 质体介导的端粒酶反义寡核苷酸能抑制视网膜色素上皮细胞端粒酶的活性从而抑制视网膜色素上皮细胞的增殖。     

端粒酶在葡萄膜恶性黑色素瘤中的表达及意义

目的 检测端粒酶在人眼葡萄膜黑色素瘤中的表达,探讨其在葡萄膜黑色素瘤发病机制中的作用,为其临床治疗提供新的思路.方法 选取16例因患葡萄膜黑色素瘤而行眼球摘除术的患者,取其葡萄膜黑色素瘤组织,采用PCR-ELISA及PCR-PAGE检测其端粒酶的含量及表达.结果 16例患者中15例的端粒酶检测呈阳性表达,占93.8%.PCR-ELISA结果显示其活性绝大多数呈中度、高度表达,仅1例△A值＜0.15.电泳结果显示为多少不等的梯形条带,其中15例显示为4条以上.结论 葡萄膜黑色素瘤患者端粒酶活性明显增高,可能是肿瘤发生、发展的重要原因之一,抑制端粒酶活性有可能成为葡萄膜黑色素瘤的新型疗法之一.     

hTERT在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的探讨端粒酶逆转录酶（hTERT）在年龄相关性白内障患者晶状体上皮细胞（LEc）中的表达及在白内障形成中的作用。方法应用免疫组织化学及核酸原位杂交技术检测hTERT在100例年龄相关性白内障患者和30例正常LEC中的表达，并进行比较。结果年龄相关性白内障LEC中hTERT的阳性表达率明显增高（P〈0．05），染色强度以中等以上强度为主，与正常晶状体组相比，差异具有显著统计学意义（P〈0．01）。三种不同类型的年龄相关性白内障LEC中hTERT的阳性表达率及染色强度均无显著统计学差异（P〉0．05）。结论年龄相关性自内障LEC中端粒酶的激活可能是对紫外线辐射及氧化应激诱发的DNA损伤、端粒缩短的一种防御反应。但当损伤积累到一定程度时，端粒酶的激活也不足以阻止端粒缩短，LEC即发生衰老或凋亡，形成白内障。     

人RPE细胞端粒酶及hTERT基因的表达及意义

目的探讨人RPE细胞中端粒酶及hTERT基因的表达、关系及意义.方法应用原位分子杂交技术及端粒重复序列扩增方法(TRAP)检测人RPE细胞中hTERT和端粒酶活性的表达.结果原位杂交结果显示端粒酶hTERT基因在人RPE细胞中低水平表达;端粒酶活性定量检测结果显示,端粒酶活性在人RPE细胞中呈弱表达.结论人RPE细胞hTERT基因的表达水平与端粒酶活性表达一致,表明hTERT基因为端粒酶活性的限制性组份.     

眼睑板腺癌中端粒酶的表达及意义

目的:检测端粒酶在人眼睑板腺癌(meibomian gland carci-noma,MGCA)中的表达,探讨其在睑板腺癌发病机制中的作用,为其临床治疗提供新的思路。方法:选取18例睑板腺癌患者切除后的手术标本,采用PCR-ELISA法及PCR-PAGE法检测其端粒酶的含量及表达。结果:所选18例患者中端粒酶检测呈阳性表达16例(89%)。ELISA结果显示其中阳性病例中绝大多数呈中、高度表达,仅1例△A值<0.4,为低度表达。电泳结果显示为多少不等的梯形条带,其中16例显示为4条以上。结论:睑板腺癌患者端粒酶活性明显增高,可能是肿瘤发生、发展的重要原因之一,抑制端粒酶活性有可能成为睑板腺癌的新型疗法之一。     

喉癌中人类端粒酶逆转录酶的表达

目的探讨人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transeriptase,HTRT)在喉癌中的表达及其在肿瘤中的可能作用.方法运用免疫组化链菌素-生物素标记法(Lablled streptavidin-biotin,LSAB)检测60例喉癌和20例喉正常黏膜中HTRT的表达.结果60例喉癌中HTRT阳性表达率为78.3%,20例癌旁组织中HTRT阳性表达率为15%,20例喉正常黏膜中全部为阴性.喉癌中HTRT阳性表达率明显高于喉正常黏膜,差异有显著性.HTRT表达与肿瘤分化程度,临床分型及淋巴结转移不相关.结论HTRT表达在喉癌发生中起一定作用,可作为判断肿瘤生物行为的一个有用指标.     

兔角膜缘上皮细胞端粒酶表达的实验研究

目的探讨将角膜上皮各区域表层和基底层细胞端粒酶作为角膜缘干细胞标志物的可能性。方法采用端粒重复序列扩增(TRAP)方法分别对8只新西兰大白兔(8只眼)角膜缘和中央透明角膜上皮细胞端粒酶活性进行定性分析,并利用生物发光技术对角膜缘和中央透明角膜上皮细胞端粒酶活性进行定量分析。其中4只兔(4只眼)结膜下注射5氟尿嘧啶(5-Fu)20mg,4只兔(4只眼)未注射任何药物。结果8只兔眼透明角膜上皮细胞平均生物发光值为34912,端粒酶表达均为阴性;角膜缘上皮细胞平均生物发光值为165575,端粒酶表达均为阳性,二者比较差异有统计学意义(P=0．001)。5-Fu注射组角膜缘上皮细胞平均生物发光值为185396,未注射5-Fu组角膜缘上皮细胞平均生物发光值为145754,二者比较差异有统计学意义(P=0．02)。阳性对照组生物发光值为210832,阴性对照组生物发光值为34793。结论角膜缘上皮细胞端粒酶表达阳性而透明角膜上皮细胞表达阴性,表明角膜缘存在具有极强增殖能力的干细胞,端粒酶可能成为角膜干细胞的标志物。     

基因表达调控物对HXO-Rb44细胞瘤株端粒酶活性的影响

目的　通过检测基因表达调控物全反式维甲酸对HXO Rb4 4 细胞端粒酶活性及细胞周期变化的影响 ,探讨治疗视网膜母细胞瘤的新途径。方法　将视网膜母细胞瘤株HXO Rb4 4 分为对照组及实验组 ,分别进行体外培养 2 4、48、72h后 ,以PCR ELISA方法检测其端粒酶活性及用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果　实验组与对照组的端粒酶活性有显著差异 (P <0 .0 1) ,实验组的端粒酶活性与药物作用时间之间 ,呈显著负相关 (r =-0 7756,F =3 3 2 16,P <0 .0 1)。实验组细胞周期发生变动 ,即G1期比率上升 ,S期比率下降。结论　基因表达调控物全反式维甲酸可减弱HXO Rb4 4 细胞端粒酶活性 ,影响其周期变化 ,抑制其增殖     

端粒酶RNA及其催化亚单位基因hTRT在睑板腺癌中的表达

目的 探讨端粒酶RNA(hTR)及端粒酶催化亚单位基因hTRT在睑板腺癌中的表达意义。 方法 用原位杂交法检测hTR及hTRT在55例睑板腺癌、12例霰粒肿、4例睑板腺腺瘤中的表达;用EnVision法对Ki-67进行免疫组织化学染色,其结果用计算机图像自动分析系统进行量化,把积分光密度值作为肿瘤增殖指数;用SAS统计软件包对影响睑板腺癌的危险因素(性别、年龄、病程长短、肿瘤大小、肿瘤分化程度等)进行分析,结合增殖指数,hTR、hTRT表达的半定量结果对影响睑板腺癌预后因素进行综合评估。 结果 hTR在睑板腺癌中的阳性表达率为84.45％,hTRT的阳性表达为51.8％,hTR及hTRT在睑板腺癌中的表达明显高于癌旁组织、霰粒肿、睑板腺腺瘤(P<0.01)。hTR与睑板腺癌的分化有关(r=0.455,P相似文献   

端粒、端粒酶与眼部疾病

端粒是真核细胞线性染色体末端的一种特殊结构，与细胞的衰老及恶性肿瘤的发生密切相关。随着细胞的不断分裂，端粒不断缩短而趋于死亡。但端粒酶的存在却可以维持细胞端粒的长度，使细胞可以逃避凋亡而具有“不死性”。研究表明，端粒酶的活性对眼部组织的增生、细胞的衰老以及眼部肿瘤的发生具有重要的作用。我们就端粒、端粒酶的研究现状及其与眼科疾病的关系和应用进展作一综述。     

The effects of oxidative stress on telomerase activity and other stress-related proteins in lens epithelial cells

Telomerase is a ribonucleoprotein complex responsible for maintaining the ends of chromosomes and for repair of DNA strand breaks. While telomerase activity is generally found in cells that have unlimited proliferative potential such as neoplastic cells, germline cells and some stem cells, lens epithelial cells (though not highly proliferative) have telomerase activity. Our previous studies indicated that lens epithelial cells express high levels of telomerase despite their low proliferative potential, thus we hypothesized that telomerase expression protects lens epithelial cells from oxidative stress. We also determined levels of the stress proteins gadd45 and p16 and the stress and proliferation-related protein, proliferating cell nuclear antigen (PCNA). In acute studies, lenses were exposed to TBHP for 0-120 min. In recovery studies, lenses were exposed to TBHP for 1 hr, then allowed to recover for up to 18 hr. In acute studies, telomerase activity was increased, p16 initially decreased then normalized, PCNA levels did not change significantly even in the overnight recovery groups, and gadd45 was decreased in some TBHP exposed groups. In recovery studies, telomerase activity was increased in all groups, gadd45 decreased then became elevated, and p16 levels were decreased at later recovery times. PCNA levels remained constant during the studies, indicating that there was no change in proliferation. These studies showed that elevated telomerase activity did not correlate with increased proliferation in lens epithelial cells; instead, increased telomerase activity was associated with increased levels of the stress-related protein gadd45 only in the later recovery times. These findings support the hypothesis that telomerase plays a protective rather than a proliferative role in lens epithelial cells.     

紫外线对人晶状体上皮细胞端粒酶活性和氧化损伤蛋白表达水平的影响

目的　探讨在紫外线诱导的人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中端粒酶活性和氧化损伤蛋白的变化和作用。方法　采用照射剂量为0 0(对照组)及0 .5、1. 5、2 .5、3 .5、5 .0、7 .5、10 0mJ/cm2 (实验1~7组)的紫外线照射人晶状体上皮细胞,采用端粒酶重复序列扩增酶联免疫吸附测定法检测端粒酶活性,采用免疫印迹法检测p53、DNA损伤诱导生长停顿基因(GADD45)、增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期依赖激酶抑制剂p16的蛋白表达水平。结果　对照组和实验1~7组的端粒酶活性呈上调趋势, 8组比较差异有统计学意义(F=45. 65,P<0 .01 );对照组和实验1 ~7组的p53、GADD45、PCNA、p16的蛋白表达水平均呈上升趋势, 8组比较差异均有统计学意义(F=13 .015 52, 41 241 .40, 25. 084 19, 44 331 .72;P<0. 01)。结论　在紫外线诱导的人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中,端粒酶活性上调,氧化损伤蛋白的表达水平上升。端粒酶活性的上调既加强了保护细胞的作用,又增强了增殖作用;氧化损伤蛋白表达水平的提高在紫外线诱导的人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中发挥关键作用;端粒酶活性上调与氧化损伤蛋白表达水平提高有关。