应用聚合酶链反应方法检测宫颈癌患者的人乳头瘤病毒

目的探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）在宫颈癌的发生中的作用。方法采用聚合酶链反应（PCR）-核酸内切酶分型检测宫颈癌活检组织中HPV-DNA,对来源于子宫颈癌患者的石蜡包埋组织标本进行四种常见生殖道人乳头瘤病毒（HPV）（HPV6、11、16、18）的检测和分型。结果在宫颈癌活检组织中HPV-16,18型39.1%,与正常妇女宫颈组织阳性率均为2.2%比较,差异均具有统计学意义。尖锐湿疣主要是HPV-Ⅰ（6,11型）感染,阳性率为69.2%,HPV-Ⅱ仅占4.2%。结论宫颈癌主要与HPV16及18型感染有关。     

450例宫颈活检组织中人乳头瘤病毒的分布特征

[目的]了解阴道镜检查患者的宫颈活检组织中HPV的感染率和亚型分布。[方法]对宫颈脱落细胞学异常的患者450例进行阴道镜下定位活检。活检组织同时行HPV基因分型和病理诊断,HPV基因分型采用斑点杂交方法进行。[结果]在450例宫颈活检患者中,其HPV感染率为65.3%。在HPV-DNA阳性患者中,检出率最高的HPV-16占36.7%,依次HPV-58为22.1%、HPV-18为18.7%、HPV-52为16.0%。在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中HPV-DNA阳性率分别为55.6%、69%、82.7%和88.9%。在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ,CINⅢ组织中均检测到HPV-16、-58、-18和-52。[结论]本研究中的宫颈活检组织中不仅检测到HPV-16和-18,还检测到HPV-58和-52感染,后者的发现为开发宫颈癌多价复合型疫苗提供了事实依据。     

慢性宫颈炎活检组织中人巨细胞病毒(HCMV)DNA和C—MYC癌基因的检测及相关性研究

宫颈癌是妇科常见的恶性肿癌之一,而慢性宫颈炎是宫颈癌的高危因素。研究表明,人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染与宫颈癌的发生有关。并已从宫颈癌组织中鉴定出了C-myc癌基因。为了探讨HCMV感染与C-myc癌基因表达的关系,本文应用核酸杂交技术对87例慢性宫颈炎患者的宫颈活检组织进行了HCMVDNA序列和C-myc癌基因序列的检测。结果87例慢性宫颈炎患者宫颈活检组织中HCMV检出率为11％(10/87),C-myc癌基因的检出率为12％(11/87)。HCMV DNA序列阳性标本中同时C-myc癌基因阳性者有5例(5/10),77例HCMV DNA序列阳性患者中,有6例(6/77),C-myc癌基因阳性。结果提示,HCMV感染对C-myc癌基因表达可能起活化作用。     

宫颈癌患者盆腔淋巴结HPV-DNA检测的临床意义

目的 探讨宫颈癌患者盆腔淋巴结人类乳头瘤病毒(HPV)-DNA检测的临床意义。方法 采用GP-PCR方法扩增宫颈癌患者盆腔淋巴结组织HPV-DNAL1区基因序列,通过序列分析对HPV进行型别鉴定,分析淋巴结HPV阳性率与淋巴转移组织病理学结果之间的关系。结果 40例宫颈癌患者盆腔淋巴结HPV-DNA的检出率为40%;组织病理学发现淋巴转移的10例患者淋巴结HPV-DNA检测均为阳性;宫颈癌病灶中检测到HPV18型的患者盆腔淋巴结也都可检测到HPV18型。结论 盆腔淋巴结中检出HPV-DNA阳性早于组织病理学出现转移,因此检测盆腔淋巴结中HPV-DNA对早期的淋巴结转移具有提示作用,有助于发现组织病理学不易发现的淋巴结隐匿性转移,提示预后不良。宫颈检测到HPV18型的患者更易发生淋巴转移,是预后不良的一种高危类型。     

人乳头瘤病毒16/18、Bcl-2和Survivin在宫颈癌组织中的表达

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16/18、Bcl-2、Survivin在宫颈癌组织中的表达及意义。方法收集2010年4月至2012年7月湖北省肿瘤医院保存的宫颈癌组织标本80例、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织标本70例及正常宫颈组织标本32例,采用原位杂交法检测3种组织中HPV16/18和Survivin的表达,采用免疫组织化学方法检测Bcl-2表达,并分析其表达情况与宫颈癌临床病理特征的关系。结果 Survivin mRNA在宫颈正常组织、CIN及宫颈癌组织中的阳性表达率分别为6.25%、45.71%和77.50%,Bcl-2蛋白在宫颈正常组织、CIN及宫颈癌组织中的阳性表达率分别为3.13%、40.00%和71.25%,HPV16/18 DNA在宫颈正常组织、CIN及宫颈癌组织中的阳性表达率分别为3.13%、51.43%和83.75%,3种组织中Survivin mRNA、Bcl-2蛋白、HPV16/18 DNA阳性表达率比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Survivin mRNA、Bcl-2蛋白及HPV16/18 DNA在CIN组织中的表达与CIN分级有相关性,Survivin mRNA、Bcl-2蛋白及HPV16/18 DNA在CINⅢ级中的阳性表达率显著高于CINⅠ、Ⅱ级(P<0.01)。Bcl-2蛋白的表达与宫颈癌组织分化程度及淋巴结转移有相关性(P<0.01),但与宫颈癌组织类型、临床分期及肿瘤生长类型无显著相关性(P>0.05)。Survivin mRNA、HPV16/18 DNA表达与宫颈癌的组织分化程度、临床分期及淋巴结转移有相关性(P<0.01,P<0.05),但与宫颈癌的组织类型及肿瘤生长类型无相关性(P>0.05)。结论 HPV16/18、Bcl-2和Survivin的高表达可能与宫颈癌的发生发展有关,HPV16/18、Bcl-2和Survivin的检测有助于宫颈癌的早期诊断、手术疗效评价及预后判断。     

宫颈癌与癌前病变组织中HPV-16的整合感染状态

目的探讨宫颈癌及宫颈癌前病变中人类乳头瘤病毒16型（HPV-16）整合人宿主基因组的发生情况。方法选取252例宫
颈病变组织,其中宫颈癌48例,宫颈上皮内瘤样病变（CIN）204例,包括CINⅠ125例、CINⅡ46例、CINⅢ33例,另取因子宫肌
瘤行全子宫切除术的正常宫颈上皮20例为对照,采用重叠定量PCR检测HPV-16感染标本中病毒整合状态。结果宫颈癌中
HPV-16阳性感染31例,占宫颈癌患者总数的65.6%（31/ 48）,其中HPV-16整合感染18例,占HPV-16阳性宫颈癌患者的58.1%
（18/31）;在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中,HPV-16阳性感染率分别为19.2%（24/125）、34.8%（16/46）、42.4%（14/33）,整合感染率分别
为16.7%（4/24）、18.8%（3/16）、35.7%（5/14）;与不同级别CIN病变相比,宫颈癌患者的HPV-16整合感染率明显增加,差异具有
统计学意义。结论HPV-16整合感染状态与宫颈病变严重程度呈正相关,在HPV DNA检测基础上联合应用高危HPV感染状
态的检测有利于提高宫颈癌筛查的靶向性并早期预测宫颈病变的转归。
     

不同人乳头状瘤病毒亚型负荷量与宫颈上皮内瘤变关系的初步研究

目的 探讨不同人乳头状瘤病毒(HPV)亚型负荷量与子宫颈上皮内瘤变(CIN)的关系.方法 分析2005年12月～2007年5月我院门诊因HPV检查阳性,行液基细胞学检查(LCT),阴道镜活检者156例.以第二代杂交捕获(HCⅡ)试验检测13种HPV-H,同时采用核酸分子快速杂交基因分型技术进行21种HPV-DNA亚型分析.结果 156例HPV亚型感染额度由高到低的前五位依次为HPV-16(31.43%)、58(17.14%)、18(7.62%)、33(5.71%)、31(4.49%),其余亚型所占比例均小于4.0%.HPV(16/58)的-DNA含量在子宫颈上皮内瘤变(CINⅠ～Ⅲ)明显高于子宫颈炎,差异有显著性(P＜0.05).HPV(16/58)的-DNA含量在不同级别的子宫颈上皮内瘤变(CINⅠ～Ⅲ)的HPV-DNA含量呈递增趋势,但差异无显著性(P＞0.05).结论 HPV-16、58、18、33与31型致癌性较强;HPV(162/58)的DNA含量随宫颈病变的严重程度而增加,可作为宫颈癌前病变及宫颈癌的筛查及病情追踪监测的一项客观指标.     

西安交通大学第一附属医院8581名妇女生殖道人乳头瘤病毒感染筛查

目的 调查陕西地区妇女生殖道人乳头瘤病毒(HPV)感染情况,了解本地区妇女生殖道HPV感染特征。方法 采用PCR+导流杂交技术检测2009年2月至2012年12月在西安交通大学第一附属医院妇科就诊的8581名陕西地区妇女生殖道HPV-DNA,必要时进行宫颈细胞学或组织学检查。结果 8581名陕西地区妇女中,生殖道HPV感染率为33.06%,高危型HPV(HR-HPV)感染率为30.08％,复合型别感染者占27.18%;最常见感染型别依次为HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-6和HPV-18。HPV感染存在年龄差异,感染高峰年龄为25岁以下和51岁以上。HR-HPV感染者中宫颈组织学正常、轻度上皮内瘤变(CINⅠ)、中度上皮内瘤变(CINⅡ)、重度上皮内瘤变(CINⅢ)和宫颈癌(CC)组中,感染率分别为88.72%、97.48%、97.35%、95.88%和99.23%;常见致癌型别依次为HPV-16、HPV-18、HPV-58、HPV-52和HPV-33。HPV-16、18和58共同引起94.62%的宫颈癌。结论 陕西地区妇女生殖道HPV感染比较普遍,最常见的感染型别是HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-6和HPV-18,常见致癌型别依次为HPV-16、HPV-18、HPV-58、HPV-52和HPV-33。HPV-16、18和58引起94.62%的宫颈癌。高危型HPV感染和宫颈病变显著相关,HR-HPV复合感染不是宫颈病变的危险因素。     

宫颈癌组织端粒酶表达与人乳头瘤病毒感染的相关性

目的 探讨宫颈癌组织中端粒酶活性表达与人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染的关系。方法 采用端粒重复序列扩增（telomere repeat amplification protocal，TRAP）-银染法对45例宫颈癌、30例慢性宫颈炎及20例正常宫颈组织的端粒酶活性进行检测。同时，采用多聚酶链反应（PCR）技术测定上述组织HPV、HPV-16型及HPV-18型的感染情况。结果 宫颈癌组织端粒酶阳性率、HPV和HPV-16检出率高于慢性宫颈炎和正常宫颈组织（P〈0．05）；宫颈癌组端粒酶表达与HPV感染（φ=0．44，P〈0．01）、HPV-16型感染（φ=0．36，P〈0．05）有关联性，与HPV-18型感染未发现关联性（P〉0．OS）。结论 端粒酶的表达、HPV感染包括HPV-16型感染与宫颈癌发生密切相关。     

人乳头瘤病毒、超薄液基细胞学检测与宫颈病变的相关性研究

目的研究宫颈人乳头瘤病毒(HPV-DNA)感染现状及联合超薄液基细胞学(TCT)检测在宫颈病变筛查中的应用价值。方法选取2014年10月~2015年12月期间在我院接受宫颈癌筛查的患者2239例,行人乳头瘤病毒(HPV-DNA)检测,对HPV阳性者行超薄液基细胞学检测(TCT),对HPV、TCT均阳性者行阴道镜下病理活检,并以病理结果为诊断宫颈病变的金标准。结果 2239例妇女HPV检测阳性率为9.74%(218/2239),其中高危型HPV占8.98%(201/2239),低危型占0.76%(17/2239)。对HPV阳性患者行宫颈超薄液基细胞学(TCT)检测,HPV阳性者TCT检测阳性率为40.37%(88/218)。对HPV、TCT均阳性的患者行阴道镜下定位宫颈活组织检查,阳性率为72.72%(64/88)。结论不同年龄段HPV感染阳性率不同,HPV检测在宫颈病变筛查中的敏感性高,HPV联合TCT筛查明显提高了宫颈病变的阳性率,对降低宫颈癌的发生具有重要意义。     

食管癌组织中 HPV 原位杂交及 E_6、P~(21ras)和 P~(53)免疫组化的研究

采用分子原位杂交和ＳＰ法免疫组化技术对柳州地区４０例食管鳞状细胞癌和２０例食管粘膜慢性炎的材料进行地高辛标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ及ＨＰＶ１６、１８早期蛋白Ｅ６、Ｐ２１ｒａｓ和Ｐ５３癌基因产物检测，结果显示：食管癌中ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ及Ｅ６蛋白的阳性率分别为２５％（１０／４０）和６５％（２６／４０），与对照组对比差异均有高度显著性（Ｐ＜０．０１）。Ｅ６、和Ｐ５３蛋白呈双阳性者为５２．５０％（２１／４０），其中９０．４８％（１９／２１）阳性表达出现在同一区域同一癌细胞核内，似表达Ｅ６、可与Ｐ５３结合形成复合物，从而导致野生型Ｐ５３的降解或突变。本组鳞癌组织中Ｐ２１ｒａｓ与Ｐ５３、Ｐ５３与Ｅ６的阳性表达均具有显著相关性（Ｐ＜０．０５）。提示高危ＨＰＶ１６、１８感染与多癌基因协同在本地区食管癌病因学中起着十分重要的作用。     

P~(53)、C—myc、H—ras和HP基因检测在宫颈癌中的研究

本文收集的60例活检宫颈癌组织,对同一病例同时进行HPV、C-myc、H-ras和P~(53)对比研究发现85％的组织中感染HPV,尤其是HPV_(16)和HPV_(18)(78.43％与21.56％),表明HPV_(18)和HPV_(16)作为宫颈癌病因依据是充分的,但不是唯一因素。在癌基因研究中,C—myc扩增率比H—ras高(33％与6.6％),C—myc扩增在HPV感染阳性组织中占89.47％,而HPV_(16)占76.5％;HPV_(18)仅占11.8％,表明HPV DNA,尤其是HPV_(16)DNA对细胞基因的整合而激活C—myc原癌基因,起到了一定的协同致癌作用。C—myc及H—ras癌基因扩增和重排与P~(53)基因杂合性丢失似无关,而P~(53)基因杂合性丢失率在HPV感染阴性组织中比阳性组织高(89％与7.8％),提示P~(53)基因杂合性丢失与HPV感染无明显关。而未被HPV感染的宫颈癌组织中野生型P~(53)基因丢失可能是导致癌瘤的关键。     

宫颈疾患中人乳头瘤病毒核酸的检测

应用HPV_(16,18,11)三个DNA探针,通过斑点杂交技术,对80例宫颈疾患和6例其它组织进行了检测和分析,结果显示HPV_(16、18)和HPV_(11)DNA序列在宫颈癌、宫颈不典型增生和慢性宫颈炎中的检出率分别为44％(22/50),8％(4/50),4％(2/50);15％(2/13),15％(2/13),15％(2/13)和19％(3/16),0％(0/16),13％(2/16);其中有3例标术HPV_(16,18)呈弱交叉杂交。而1例子宫肌瘤、1例阴道癌、1例宫颈息肉、2例膀胱癌和2例正常子宫颈组织中均未测出HPV DNA序列。结果提示:某些HPV类型(特别是HPV_(16))可能与宫颈癌的发生有关。     

非小细胞肺癌中人乳头瘤病毒感染与细胞增殖及凋亡的关系

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）16、18型感染与原发性非小细胞肺癌（NSCLC）组织中细胞增殖及凋亡的关系及其意义。方法应用PCR、TUNEL和免疫组化SP法分别检测76例NSCLC及13例肺良性病变中HPV16、18型DNA、细胞凋亡和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，并分别计算增殖指数（MI）和凋亡指数（AI）。结果NSCLC中HPV16、18型总阳性率为40．8％（31／76），而肺良性病变组阳性率为7．7％（1／13），差异有显著性意义（P〈0．05）。HPV感染在不同组织学类型及有无淋巴结转移间差异无显著性意义，而在不同组织分化程度间差异有显著性意义（P〈0．05）。NSCLC中HPV阳性组与阴性组之间MI及AI差异均有显著性意义（均P〈0．05）。结论HPV16、18型感染在NSCLC发生中可能有病因学意义，其致癌机制之一可能通过减少癌变细胞凋亡和促进细胞异常增殖而导致细胞癌变。     

九江地区9328例宫颈液基细胞学检查结果分析

目的了解九江地区妇女宫颈癌及癌前病变的状况,探讨液基薄层细胞涂片（liquid-based cytology test,LBC）检查及阴道分泌物人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）16,18的感染状态检查对早期宫颈癌及癌前病变诊断的临床意义。方法对九江学院附属医院妇科门诊就诊者9 328例进行LBC检查,对其中1 211例患者进行阴道分泌物HPV16,18 DNA检查并对阴道镜宫颈活检病理结果进行研究。结果 LBC阳性病例1 008例中有890例进行了活检,另有接触性阴道出血或不规则阴道流血而LBC阴性病例70例进行了阴道镜下活检,共计960例病理检查结果：正常或慢性炎症807例（84.06%）,宫颈上皮内瘤变（cervical intra-epithelial neoplasia,CIN）I级61例（6.35%）,CINⅡ级22例（2.29%）,CINⅢ级25例（2.60%）,宫颈癌45例（4.69%）。9 328例患者中,宫颈癌、CINⅢ、CINⅡ、CIN I检出率分别为0.48%、0.27%、0.24%、0.65%。1 211例患者行阴道分泌物HPV16,18 DNA检查,HPV16,18阳性214例（17.67%）。结论 LBC检查是一种相对准确、可靠的宫颈病变筛查方法,但是仍然有一定的漏检率。如果能结合HPV16,18的检查,可以减少假阴性率,减少漏诊。     

P16INK4A在宫颈癌及癌前病变脱落细胞中表达的临床意义及其与HPV16、18型的关系

目的:观察p16INK4A能否作为宫颈癌、宫颈癌前病变标志物及其与HPV16、18型的关系.方法:采用免疫组织化学S-P方法,检测p16INK4A在宫颈脱落细胞中表达.同时,采用FQ-PCR技术检测HPV16、18型DNA.结果:9例宫颈鳞状细胞癌P16INK4A表达均为阳性;45例LSIL,44例P16INK4A表达为阳性,仅1例为阴性;38例的HSIL均为阳性;30例中ASC有10例阳性,20例正常宫颈及40例慢性宫颈炎,P16INK4A染色均为阴性.HPV16、18型DNA阳性率分别为8/9、31.1%、68.4%、33.3%.40例慢性宫颈炎HPV16、18型DNA阳性1例,正常宫颈细胞未检测出HPV16、18型DNA.结论:HPV16、18型DNA阳性率及阳性标本拷贝数愈高,P16INK4A表达的强度愈强.p16INK4A有望成为宫颈癌前病变诊断标志物.     

HPV16、18E6基因在喉癌组织中的表达

目的 检测HPV16、18E6基因在喉癌中的表达，探讨其在喉癌发病过程中的作用。方法 应用RT－PCR、琼脂糖凝胶电泳方法检测30例声带息肉组织及48例喉癌组织。结果 30例声带息肉组织中6．67％（2／30）有HPV16、18E6基因表达，48例喉癌组织中87．5％（42／48）扩增HPV16E6基因，79．17％（38／48）有HPV18E6基因表达。HPV16、18E6基因与喉癌的临床分型、病理分化程度、临床分期无明显关系（P＞0．05），与淋巴结转移有关（P＜0．05）。结论 HPV16、18E6基因与喉癌的发生密切相关，是喉癌恶性转化的关键，预示着喉癌有较强的增殖能力及转移能力。     

HPV E6/E7 mRNA与YAP在宫颈癌中的表达与相关性研究

目的:研究宫颈病变中HPV E6/E7 mRNA与Yes相关蛋白（YAP）的表达情况及临床意义,探讨两者之间的相关性。方法: 应用支链DNA（b-DNA）技术检测36例正常宫颈组织（正常组）、45例宫颈上皮内瘤变(CIN) Ⅱ-Ⅲ级（CIN组）、43例宫颈癌（宫颈癌组）的宫颈脱落细胞标本中HPV E6/E7 mRNA的表达情况,免疫组化方法（IHC）检测上述各组患者宫颈组织石蜡包埋标本中YAP的表达情况。结果:HPV E6/E7 mRNA及YAP阳性表达率在正常组分别为16.67%、11.11%,在CIN组分别为82.22%、84.44%,在宫颈癌组分别为88.37%、90.70%,3组HPV E6/E7 mRNA及YAP阳性表达率均逐渐升高,且差异均具有统计学意义（P<0.05）。YAP在宫颈癌有淋巴结转移组中的表达明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）,而与宫颈癌的临床分期、组织学分级及组织学类型无关（P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA与YAP的表达呈正相关（r=0.383,P<0.05）。结论:HPV E6/E7 mRNA与YAP的检出率随病理级别的升高呈增强趋势,且两者具有相关性。因此,HPV E6/E7 mRNA与YAP的联合检查,可以提高宫颈病变的诊断率并能够预测癌前病变的进展。     

C-myc和hMLH1蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中的表达及临床意义

目的检测新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌中C-myc和hMLH1蛋白表达,并探讨其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测C-myc与hMLH1在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌组织中的表达水平,并探讨宫颈癌组织中C-myc和hMLH1蛋白表达与各临床病理特征的关系。结果 C-myc在慢性宫颈炎、CIN、宫颈癌中的阳性表达率分别为26.7%(8/30)、50.0%(30/60)和69.2%(36/52),差异有统计学意义(P<0.05)。hMLH1在慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌组织中的阳性表达率依次为66.7%(20/30)、56.7%(34/60)和30.7%(16/52)差异有统计学意义(P<0.05)。在宫颈癌组织中,C-myc蛋白与肿瘤分化程度、临床分期以及有无淋巴结转移相关;hMLH1蛋白表达下调与宫颈癌分化程度及是否有淋巴结转移密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 C-myc和hM-LH1蛋白与宫颈癌的发生、发展可能相关,二者联合检测可能为宫颈癌的早期诊断和治疗提供新的方向。     

用~(32)P标记的人乳头瘤病毒DNA检测宫颈病变组织DNA中病毒序列

使用Southern blot杂交方法对33例宫颈病变标本进行了检测,发现在26例宫颈癌中,6例存在HPV16DNA同源序列,占23％。HPV18同源序列占7.6％(2/26)。HPVX1同源序列为11.5％(3/26)。HPV16相关序列为27％(7/26)。而在4例慢性宫颈炎中仅有1例含HPV16相关序列,1例尖锐湿疣中含HPV16相关序列。