RAPD技术在肺癌患者假丝酵母菌临床分型中的应用

目的应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对肺癌患者感染白假丝酵母菌和热带假丝酵母菌进行基因分型,并分析不同基因型对不同抗真菌药物的耐药情况。方法采用经优化的随机扩增多态性DNA(RAPD)方法,对36株白假丝酵母菌和8株热带假丝酵母菌进行基因多态性分型,并对分型菌株进行药敏试验。结果 36株白假丝酵母菌可分为:13株为A型,10株为B型,7株为C型,6株为D型;8株热带假丝酵母菌可分为:5株为A型,2株为B型,1株为C型。药敏结果显示,白假丝酵母菌B型对6种抗真菌药物的敏感率明显高于A、C、D型;C型对6种抗真菌药物的耐药率明显高于A、B、D型。热带假丝酵母菌C型对6种抗真菌药物的敏感率为100%,热带假丝酵母菌A、B对伊曲康唑均出现了耐药,对其他5种抗真菌药物敏感。结论 RAPD技术用于念珠菌种内的分型具有较高的灵敏性与特异性,不同型别的白假丝酵母菌和热带假丝酵母菌耐药性可能与特定基因型有一定相关性。     

老年患者白假丝酵母菌基因分型与药敏试验分析

目的了解老年慢性阻塞性肺炎（COPD）患者白假丝酵母菌基因分型及药敏结果差异。方法对320株白假丝酵母菌进行25SrDNA基因分型,用ATB Fungus3进行药敏实验。结果320株白假丝酵母菌分成了A、B、C3型。A型对5-氟胞嘧啶耐药率高于B型和C型;C型对两性霉素全都敏感,敏感率高于A型和B型;C型对氟康唑、伊曲康唑的耐药率高于A型和B型;B型对伏立康唑耐药率高于A型和C型。结论白假丝酵母菌PCR分型法有较强的特异性,且快速简便;白假丝酵母菌基因型别对不同药物的敏感率有影响。     

185株白念珠菌25S rDNA基因型分布特点

目的：研究临床不同来源白念珠菌25S rDNA基因型分布特点,探讨白念珠菌不同基因型与感染部位或不同感染类型之间的联系.方法：特异性扩增不同来源的185株白念珠菌25S rDNA基因Ⅰ型内含子序列,再经过琼脂糖凝胶电泳方法对扩增条带进行基因分型,并对不同感染部位、不同感染类型的白色念珠菌的基因型进行比较.结果：185株白念珠菌中,A型122株（65.9％）、B型35株（18.9％）和C型28株（15.1％）,未发现D型与E型菌株;外阴阴道念珠菌病（VVC）来源与深部组织来源的白念珠菌25S rDNA基因型差异具有统计学意义（P=0.000）;深部组织来源菌株中,艾滋病相关性和非艾滋病相关性白念珠菌基因型差异无统计学意义（P=0.680）.结论：VVC来源和深部组织来源的白念珠菌25S rDNA基因型不同,而深部组织来源的艾滋病相关性和非艾滋病相关性白念珠菌25S rDNA基因型相同.     

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测 30株临床分离白色念珠菌对 5种抗真菌药物的敏感性 ,并用随机扩增DNA多态性 (RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药 ,且它们的RAPD带型有着高度相似性 ,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测30株临床分离白色念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性,并用随机扩增DNA多态性(RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药,且它们的RAPD带型有着高度相似性,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

口腔扁平苔藓患者白色念珠菌分离株的基因型分析

目的 研究健康人和口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者口腔白色念珠菌分离株的基因型分布特征．方法 应用随机扩增片段多态性分析法(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD),对来自于健康人(26株)、糜烂型OLP患者(62株)以及非糜烂型OLP患者(24株)共112株白色念珠菌菌株做基因型分型,比较OLP患者与健康对照组白色念珠菌分离株的基因型分布差异．结果 本研究采用的RAPD分析法可大致将所有白色念珠菌分离株分为A、B、C、D四种基因型;健康对照组、糜烂型OLP和非糜烂型OLP患者组的白色念珠菌分离株的基因型构成具有差异,其中,健康对照组以B、D型为主,糜烂型OLP患者组以A、C型为主,非糜烂型OLP患者组以A、D型为主。结论 某些具有特定基因型的白色念珠菌与OLP的发生发展可能相关。     

白假丝酵母菌25SrDNA基因分型与粘附力的相关性

目的 调查白假丝酵母菌25SrDNA基因型分布,并分析白假丝酵母菌各基因型与粘附力之间的相关性.方法 收集76株白假丝酵母菌,转沙保罗氏培养液纯培养24 h,裂解法提取基因组DNA,用特异性引物扩增白假丝酵母菌25SrDNA基因,根据PCR产物电泳图谱进行基因分型;分别测定各基因型粘附力.结果 PCR产物电泳结果显示76例白假丝酵母菌可分为A、B、C 3种基因型(其中A型48例,B型8例,C 型20例).测序结果显示,B型和C型产物比A型产物多出1个379 bp的序列(Ⅰ类内含子).根据有无内含子将菌株分为无内含子组(A型)和有内含子组(B型+C型),无内含子组粘附力明显强于有内含子组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 白假丝酵母菌25SrDNA基因型与粘附力之间可能存在相关性,内含子的插入可能影响白假丝酵母菌的粘附力.     

123株白色念珠菌耐药基因CDR1和CDR2表达研究

目的了解白色念珠菌对常用抗真菌药物的耐药性及其耐药基因CDR1、CDR2的表达情况。方法常规方法分离123株临床菌株，科玛嘉念珠菌显色培养基作菌种鉴定，采用Roseo纸片扩散法进行药敏试验，所有耐药株与随机选择的同等数量的敏感株（对照株）用聚合酶链反应（PCR）扩增目标基因CDR1、CDR2，扩增产物经凝胶电泳后进行初步分析。结果123株白色念珠菌分布于呼吸道50．4％（62／123）、泌尿道28．5％（35／123）、生殖道14．6％（18／123）和其它6．5％（8／123）。通过药敏筛选，获得耐药菌株35株，其中有15株出现交叉耐药。受试菌对两性霉素、5-氟胞嘧啶、咪康唑、伊曲康唑和氟康唑的敏感率分别为99．2％、85．4％、87、0％、84．6％、和83．7％。35株耐药株和对照株均出现耐药基因CDR1、CDR2。结论白色念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性呈下降趋势，编码外排蛋白的耐药基因CDR1和CDR2可能同时存在于全部受试菌株内。     

恶性肿瘤患者深部感染白色念珠菌的基因分型

目的对引起恶性肿瘤患者深部真菌感染的白色念珠菌进行基因分型。方法研究对象90例,CHROMagarCandida鉴定培养基分离鉴定白色念珠菌,PCR方法鉴定并进行ABC基因分型。结果引起恶性肿瘤患者深部真菌感染的白色念珠菌基因型分别为A型(36/90,40%)、B型(32/90,35.6%)、C型(22/90,24.4%),取自同一病人身体不同部位和相同部位的标本均分离出不同基因型白色念珠菌。结论恶性肿瘤患者深部白色念珠菌感染由不同基因型的白色念珠菌株引起。     

ICU患者肺部感染病原性真菌的分布及白色念珠菌基因分型

目的 旨在了解梅州地区ICU患者侵袭性肺部真菌感染（IPFI）的物种分布、药物敏感及白色念珠菌RAPD-PCR指纹图谱特征和不同基因型菌株耐药性差异。方法 收集ICU中149例IPFI患者的呼吸道标本,采用法国梅里埃VITEK 2-Compact和API鉴定系统进行菌株鉴定和药敏试验,运用RAPD 技术对分离的62 株白色念珠菌进行分析。结果 该地区IPFI的物种以白色念珠菌占比最高为38.51%（62/161）,其次为热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和季也蒙念珠菌等非白念珠菌,非白念珠菌整体占比为48.45%（78/161）;它们对常用抗真菌药物具有较好的敏感性,但是出现了近平滑念珠菌对卡泊芬净的耐药菌株和光滑念珠菌对唑类药物敏感性相对较低的情况;白色念珠菌P2 随机引物扩增条带数量1~5条,条带大小在300 bp~1.8 kb ,以300 bp、400 bp 和600 bp 3 个主条带为主;利用聚类分析将这些菌株分为A~D 4个基因群, 其中A基因群11株,B基因群42株,C基因群7株和D基因群2株;不同基因型白色念珠菌对各药物敏感性的差异无统计学意义。结论 白色念珠菌、热带念珠菌和近平滑念珠菌等念珠菌属是广东梅州地区ICU患者 IPFI的最常见病原体,白色念珠菌存在丰富的基因多态性,RAPD 技术对于白色念珠菌的基因型鉴定具有重要意义。     

贵州地区149株临床白念珠菌对抗真菌药物的敏感性

目的：探讨贵州地区临床不同来源白念珠菌的25S rDNA基因分型与抗真菌药物敏感性的关系.方法：采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）制定的M27-A3方案中的酵母菌微量稀释法,检测贵州地区149株临床白念珠菌对常见抗真菌药物的敏感性.结果：149株白念珠菌均对两性霉素B敏感,对5-氟胞嘧啶、氟康唑的敏感率分别为96.64％和93.96％,而对伊曲康唑的敏感率较低为46.31％;外阴阴道念珠菌病（VVC）来源菌株对伊曲康唑敏感性低于深部组织感染菌株;各25S rDNA基因型别的白念珠菌对4种抗真菌药物的敏感性差异无统计学意义.结论：贵州地区白念菌株对伊曲康唑的敏感性较低,这些不敏感菌株多数来源于外阴阴道念珠菌病,贵州地区白念珠菌25S rDNA基因型别在4种抗真菌药中的耐药率无差别.     

外阴阴道念珠菌病的临床特征和抗真菌药物敏感性研究

目的探讨外阴阴道念珠菌病（VVC）的临床特征和抗真菌药物敏感性。方法对900例VVC患者采用Soble分类对临床特征进行评分,培养、分离菌株,并对不同菌株进行酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、两性霉素B体外药敏试验。结果单纯型VVC的临床特征平均分显著低于非白念珠菌VVC和RVVC（P〈0．05）;689例（76．56％）为白念珠菌,211例（23．44％）为非白念珠菌,两性霉素B的敏感性均为100％,白念珠菌对四种药物的敏感性间有显著性差异（χ2=9．57,P〈0．01）,非白念珠菌对四种药物的敏感性间有显著性差异（χ2=9．21,P〈0．01）。结论白念珠菌是VVC的主要致病菌,念珠菌对唑类药物敏感性有所差异,非白念珠菌的药物敏感性较白念珠菌低,白念珠菌的耐药性不常见。     

两株蜚蠊肠道内生放线菌抗真菌活性初步研究和分类鉴定

目的检测蜚蠊肠道内生放线菌WA2-4和WA2-5的抗真菌活性,并对菌株进行初步分类学鉴定。方法采用牛津杯法测定菌株WA2-4和WA2-5发酵液对白色念珠菌和红色毛癣菌等真菌生长的影响,扫描电子显微镜观察菌株发酵液对受试真菌形态的影响,利用16S rDNA测序、Blast比对和构建系统发育树等方法,结合菌株形态学特征对菌株WA2-4和WA2-5进行初步分类学鉴定。结果菌株WA2-4和WA2-5发酵液对白色念珠菌和红色毛癣菌的生长均有抑制作用;扫描电子显微镜结果显示菌株WA2-4和WA2-5发酵液破坏了白色念珠菌的细胞膜结构,使红色毛癣菌的菌丝断裂成碎片;初步分类学鉴定结果显示,菌株WA2-4和WA2-5分别为链霉菌属和戈登氏菌属,与其各自亲缘菌株的16S rDNA序列同源相似性分别为93.5%和92.3%,均低于98.2%,因此推断该两株菌株很有可能是新菌种。结论蜚蠊肠道WA2-4和WA2-5放线菌具有抗真菌活性。     

肺结核继发真菌感染患者分离真菌的基因检测与鉴定的研究

目的探讨肺结核继发真菌感染患者分离致病性真菌的基因鉴定及其类型。方法采集80例肺结核患者的下呼吸道分泌物标本,接种科玛嘉（Chrom）琼脂平板、置温箱内28℃培养48～72h。分离的真菌分别以常规真菌学方法、PCR扩增核糖体基因转录间隔区（ITS）序列和25SrDNAⅠ型内含子序列进行鉴定。结果分离的99株真菌含78株酵母菌（78.8%）和21株霉菌（21.2%）。78株酵母菌的ITS基因鉴定法与生物学鉴定法的符合率为83.3%;21株霉菌ITS基因鉴定法与生物学鉴定法符合率为71.4%。99株真菌的ITS基因鉴定法与生物学鉴定法总符合率为80.8%。49株白假丝酵母菌经25SrDNAⅠ型内含子基因鉴定分为3型,包括基因A型21株（40.8%）、基因B型14株（28.5%）以及基因C型15株（30.6%）,未发现基因D型与基因E型菌株。结论花都区肺结核患者病原性真菌感染常见为酵母菌,其中主要是白假丝酵母菌,基因型为A型。检测ITS序列和25SrDNAⅠ型内含子序列有助于真菌感染的快速基因诊断和提高菌种鉴定的准确率。     

2007—2009年医院内深部感染白色假丝酵母菌的分布及耐药性研究

目的 了解临床分离白色假丝酵母菌菌株分布及耐药现状,以指导临床合理用药.方法 回顾性分析2007-2009年临床分离假丝酵母菌的病例,采用科玛嘉（CHRO-Magar）和API 20C AUX试剂条进行鉴定、ATB Fungus2进行药物敏感试验.并用WHONET5.4软件进行数据分析.结果 653株白色假丝酵母菌不主要分离于下呼吸道感染的痰液429株（65.7%） ,其次为尿液112株（17.2%）.白色假丝酵母菌耐药性由低到高的药物依次为5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑,耐药性分别为0%、0%、4.6%、9.2%.值得注意的是两性霉素B剂量依赖敏感比率升高.结论 临床标本中假丝酵母菌感染仍以白色假丝酵母菌为主,临床选药应根据药敏结果.     

Protein found to promote DNA repair, prevent cancer

Background It is uncertain whether genotypes of Candida albicans （C. albicans） are associated with colonizing body locations or variant conditions of infection. The aim of this study was to investigate whether there are significant associations between strain genotypes and body sites of infection and to determine the potential pathogenesis of cutaneous candidiasis at multiple locations. Methods A total of 151 strains of C. albicans were isolated from 74 infant patients with cutaneous candidiasis and 61 female patients with vaginal candidiasis. Patients were grouped according to the body sites and underlying conditions of infection. Genotypes were identified by polymerase chain reaction （PCR） of the 25S rDNA and PCR-restriction fragment length polymorphism （RFLP） of ALT repeats digested with EcoRI and Clal. Results Ten genotypes were detected. There were significant differences in genotype frequencies between the two groups. However, we found no clear association between genotypes and the sites of cutaneous infection or the underlying conditions of vaginal candidiasis （VVC）. In addition, strains of C. albicans from multiple cutaneous locations of the same patient had identical genotypes. Conclusions Populations of C. albicans from patients with cutaneous and vaginal candidiasis were genetically different. However, the lack of genetic difference between strains from different body sites with cutaneous infections or from different underlying conditions for VVC suggests no evidence of genotype selection for different skin surfaces or patients with different underlying conditions for VVC.     

149株念株菌鉴定与药敏分析

[目的]了解念珠菌感染的种类及药敏状况.[方法]念珠菌鉴定用API20AUx板条药敏试验用,ATB-Fungus试剂盒和纸片扩散法.[结果]白色念珠菌分离率最高,其次是热带念珠菌,光滑念珠菌和克柔念珠菌(以下简称白念、热带、克柔、光滑).呼吸道感染以白念、热带为主;泌尿系感染则以光滑多见.白念、热带、克柔、光滑对氟康唑耐药率分别为4.8%、3.8%、50%和13.5%.它们对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、制霉菌素耐药均在8%以下,对咪唑类耐药8%～15%左右.[结论]正确鉴定念珠菌对临床选择抗真菌药是极为重要的,对其耐药监测可为临床真菌的防治提供依据.