HIV-1 Nef重组重叠肽诱导小鼠免疫保护作用研究

目的探讨HIV-1 Nef重组重叠肽诱导小鼠细胞免疫应答的效果。方法以HIV-1 LAI Nef重组重叠肽和相应蛋白免疫接种BALB/c和C57BL/10小鼠,每组5例,分离小鼠脾单个核细胞(spleen mononuclear cell,SMC),以ELISPOT和流式细胞术检测特异性细胞应答,以大剂量Nef重组痘苗病毒攻击试验检测重组重叠肽对免疫小鼠的保护作用。结果在C57BL/10小鼠中,佐剂组ELISPOT为阴性,重叠肽组和相应蛋白组LAI Nef特异性细胞免疫应答分别为(145.7±36.2)SFU/106SMC和(24.2±10.2)SFU/106SMC(P=0.001),在BALB/c小鼠中分别为(148.8±50.4)SFU/106SMC和(19.8±9.0)SFU/106SMC(P=0.004),而NL4-3 Nef特异性细胞免疫应答分别为(104.0±33.8)SFU/106SMC和(20.7±9.5)SFU/106SMC。重组重叠肽疫苗诱导的Nef特异性CD4+和CD8+细胞的百分比分别为1.53和0.80。在攻毒试验中,重叠肽组、蛋白组、佐剂组和空白对照组的生存率分别为80%、40%、20%和0%。结论重组重叠肽免疫小鼠可产生具有保护作用的较强的广谱特异性细胞免疫应答,对于不同株系的Nef具有交叉反应,重组重叠肽的免疫接种效果强于相应蛋白。     

评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB在肺外结核病诊断中的敏感性

目的 评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB检测在肺外结核病诊断中的敏感性.方法 对北京协和医院根据细菌学或/和组织学诊断的肺外结核患者31例,应用酶联免疫斑点技术检测6 kD早期分泌靶向抗原和10 kD培养滤过蛋白肽段库刺激后外周血中释放γ-干扰素的特异性T细胞.结果 31例肺外结核患者中29例T-SPOT.TB检测阳性,敏感性为93.5%(95%CI 84.8%～100%),6 kD早期分泌靶向抗原肽段库刺激后斑点形成细胞数中位数为196/106 PB-MCs(4分位间距72～532/106 PBMCs),10 kD培养滤过蛋白肽段库刺激后斑点形成细胞数中位数为276/106 PBMCs(4分位间距72～568/106 PBMCs),对两个肽段库总的斑点形成细胞中位数为612/106 PBMCs(4分位间距192～1152/106PBMCs).结论 T-SPOT.TB检测对肺外结核诊断具有较高的敏感性.     

原发性肝癌患者肿瘤转移与T细胞亚群及其细胞因子的相关性分析

目的 探讨原发性肝癌患者肿瘤转移与T细胞亚群及其细胞因子的相关性.方法 2014年1月至2016年1月前瞻性收集原发性肝癌患者97例,根据患者是否发生转移,将患者分为转移组和非转移组,其中转移组38例,非转移组59例.所有患者均取得手术标本,使用流式细胞仪测定肝癌组织、癌旁组织和外周血CD4+、CD8+T细胞比例,同时使用酶联免疫吸附试验测定外周血中白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)水平.结果 与非转移组相比,转移组患者肝癌组织中CD4+T细胞比例显著升高(P=0.002);CD8+T细胞显著降低(P=0.015).两组患者癌旁组织中CD4+T细胞比例差异无统计学意义P=0.328).转移组患者癌旁组织中CD8+T细胞比例显著高于非转移组(P=0.021).两组患者外周血中CD8+T细胞比例差异无统计学意义(P=0.362).转移组患者外周血CD4+T细胞比例显著低于非转移组(P=0.032).与非转移组比较,转移组患者外周血IL-6水平显著降低(P=0.012);IL-10水平显著升高(P=0.006);TNF-α水平显著降低(P=0.000);IFN-γ水平显著降低(P=0.035).结论 原发性肝癌患者肿瘤转移存在明显的T细胞亚群和细胞因子平衡失调.     

汉滩病毒核蛋白诱导肾综合征出血热患者的T淋巴细胞反应

目的 测定汉滩病毒(HTNV)核蛋白(NP)C-端多肽诱导肾综合征出血热(HFRS)患者的特异性T淋巴细胞反应,为HFRS发病机制、疫苗研制及抗病毒免疫反应研究提供资料.方法 采用Ficoll密度梯度离心法,分离HFRS恢复期患者外周血单个核细胞(PBMC),用IFN-y酶联免疫斑点试验(ELIspot)测试13名患者对23条多肽的T淋巴细胞反应,筛选出反应较强的肽段.结果 5名患者有不同程度的肽特异性T细胞反应.No.70肽可诱导3号和10号患者分泌IFN-y,T细胞频率分别为51和55 SFC/106 PBMC,No.51肽可诱导4、7、12号患者分泌IFN-y,T细胞频率分别为90、65、95 SFC/106PBMC.结论 No.51肽和No.70肽可诱导较强的T淋巴细胞反应,可能是NP C端的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)袁位.     

反应停对慢性肝炎的治疗作用

目的观察反应停能否抑制慢性肝炎外周血单核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)肿瘤坏死因子α(TNFα)的产生,明确反应停对慢性肝炎的治疗作用.方法用淋巴细胞分离液从13例慢性肝炎患者的外周血中分离PBMCs进行体外培养,用酶联免疫吸附法、免疫组化法和半定量斑点杂交法,观察反应停对PBMCs肿瘤坏死因子和其它细胞因子的产生和基因表达的影响.结果反应停可抑制PBMCsTNFα和其它细胞因子的产生以及TNFαmRNA的表达(P＜0.05).结论反应停对慢性肝炎的治疗有重大的意义.     

结核患者抗原特异性CD8~+记忆T细胞的检测分析

目的研究活动期肺结核患者和潜伏感染者CD8+记忆T细胞的产生及分布特性。方法 24例活动性肺结核患者均为确诊的住院患者,22例潜伏感染者经ELISPOT检查确定。取外周血分离获取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),以结核分枝杆菌抗原ESAT-6刺激,通过CD8、CD107a、CCR7、CD45RA抗体共染色,采用流式细胞术分析。结果建立了基于CD107a为分子标识的结核抗原特异性CD8+T细胞检测方法。对24例活动性肺结核患者及22例潜伏感染者对比分析发现,与潜伏感染者相比,肺结核患者CD45RA阳性CD8+记忆T细胞TEMRA亚群比例显著增加[(59.94±3.87)%vs(46.65±2.88)%,P=0.020 3],CD8+效应记忆T细胞TEM亚群分布频率显著降低[(38.14±3.87)%vs(52.34±2.95)%,P=0.014 2]。结论肺结核患者与潜伏感染者抗原特异性CD8+记忆T淋巴细胞亚群的比例存在明显差异,可能与体内抗原刺激的程度及特异细胞免疫应答反应相关。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞肿瘤坏死因子检测

目的通过检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞胞内肿瘤坏死因子生成量和血清HBV DNA含量,探讨慢性乙型肝炎慢性化进程中外周血细胞肿瘤坏死因子生成变化与血清HBV DNA含量关系.方法采用双色荧光分析方法和设门技术,运用流式细胞术分析正常对照人群(11例)、慢性活动性B型肝炎患者(14例)外周血单个核细胞(PBMCs)TNF-α表达率、细胞内TNF-α水平,定量PCR检测HBV DNA滴度、酶法测定患者血清ALT水平.结果 HBV组外周血PBMCs TNF-α阳性率显著高于对照组(P<0.01),胞内TNF-α量对照组和HBV组间无差别;实验组对照组淋巴细胞群TNF-α阳性细胞率统计学分析无显著差异,然而胞内TNF-α的量对照组明显高于HBV组(P<0.01);实验人群CD14+细胞占PBMC总量的2.06%～5.82%,两组间无显著差别;HBV组CD14/TNF-α+细胞率高于对照组(P<0.05),细胞内TNF-α水平与对照组间无差别(P>0.05).HBV患者乙型肝炎慢性轻度组、乙型肝炎慢性中度组和乙型肝炎原发性肝癌组观察的TNF-α相关指标中,CD14+/TNF-α+双阳性细胞占外周血CD14+细胞比率原发性肝癌、乙型肝炎慢性中度患者高于乙型肝炎慢性轻度组、对照组(P<0.01),乙型肝炎慢性轻度组与对照组间没差别.患者PBMCs、T细胞、单核细胞TNF-α阳性率,胞内TNF-α水平各项观测指标与血清HBV DNA拷贝数经统计分析均无相关性.结论随慢性肝炎乙型病情进展TNF-α生成细胞增高,以慢中型、原发性肝癌较高,慢肝轻度次之,TNF-α生成量与血清HBV DNA拷贝数无相关性.     

人类免疫缺陷病毒-1B和C亚型Nef蛋白特异性CD8+T细胞交叉应答反应的研究

目的：探讨中国人群人类免疫缺陷病毒-1B（HIV-1B亚型）Nef蛋白特异性CD8^＋T细胞应答在B、C亚型间的交叉反应性。方法：选取51例HIV-1B亚型感染者，采取外周血单个核细胞（PBMC），用合成的54个HIV-1B、C亚型Nef全基因序列肽库作为抗原，酶联免疫斑点吸附试验（ELISpot）方法检测HIV-1B亚型Nef蛋白特异性CD8^＋T细胞对B、C亚型抗原的应答反应。结果：在产生特异性应答效应的个体中，82．9％（29／35）感染个体同时识别B和C亚型肽段。感染个体在对两个亚型肽段的识别数量及应答强度上无显著差异（P=0．529和P=0．754）。HIV-1B亚型特异性CD8^＋T细胞能针对70．4％无论B还是C亚型的Nef肽段产生应答反应。被特异性CD8^＋T细胞同时识别的B、C亚型Nef肽段间氨基酸序列的同源性显著高于仅能被识别的B亚型或C亚型肽段的氨基酸序列（P=0．01）。结论：HIV-1B亚型Nef蛋白特异性CD8^＋T细胞应答在B、C亚型间具有良好的交叉反应性，能产生交叉反应的氨基酸序列具有较高的亚型间同源性。     

Th17/Treg在系统性红斑狼疮患者中的探讨

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞(Treg)及血浆中相关细胞因子白细胞介素(IL)-17、IL-6、IL-23的变化.方法 收集SLE患者70例和健康对照组30例,采用SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分方法将SLE患者分为活动组(≥5分,38例)和稳定组(0～4分,32例).采用流式细胞术(FCM)检测外周血Th17、Treg百分数,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆中IL-17、IL-6、IL-23水平.结果 SLE患者外周血Th17占CD4+T细胞比例高于对照组(P＜0.05),SLE活动组Th17占CD4+T细胞比例较SLE稳定组及对照组高(均P＜0.05);SLE患者外周血Treg占CD4+T细胞比例低于对照组(P＜0.05),SLE活动组Treg占CD4+T细胞比例较SLE稳定组及对照组低(均P＜0.05);SLE患者外周血Th 17/Treg高于对照组(P＜0.05),SLE活动组Th 17/Treg高于SLE稳定组及对照组(均P＜0.05).Th17、Th 17/Treg、IL-6与SLEDAI评分均呈正相关(r=0.923、0.567、0.397,均P＜0.05),Treg与SLEDAI评分均呈负相关(r=-0.458,均P＜0.05).结论 SLE患者中Th17细胞、调节性T细胞百分数存在异常,且与疾病活动性密切相,提示两种共同变化或失衡可能在SLE的发生、发展过程中起重要作用.     

肝癌患者血清中调节性T细胞表达变化及对预后的影响分析

目的:观察肝癌患者血清中调节性T细胞(Treg)的表达变化,分析其对肝癌患者预后的影响.方法:选取原发性肝癌患者50例作为研究组,选择同期50例健康献血者为对照组,采用流式细胞仪检测肝癌患者及健康者外周血调节性T细胞的表达水平,根据检测结果分析外周血中调节性T细胞的水平变化.结果:与对照组比较,研究组外周血中Treg表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与早期肝癌患者比较,晚期肝癌患者外周血中Treg表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与术前比较,肝癌患者术后2天外周血Treg表达水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与术后2天比较,术后2周和6周外周血Treg表达水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).采用Cox回归模型分析显示,外周血Treg/CD4+比值(P=0.041)、Treg水平(P=0.023)及癌细胞分化程度(P=0.012)是影响肝癌患者5年生存率的独立因素.结论:Treg表达与肿瘤免疫密切相关,可以作为评估肝癌患者机体免疫状态的重要指标,实时监测肝癌患者Treg表达水平有助于病情的判断和预后的评估,为临床治疗提供免疫学依据.     

HBV感染各阶段血清乙肝表面抗原与HBV DNA及年龄的相关性分析

目的:探析未接受抗病毒干预治疗的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者各阶段的血清乙肝表面抗原(HBsAg)定量值与HBV DNA及患者年龄的关系.方法:2015年3月~2016年12月在我院就诊但未接受抗病毒治疗的498例慢性HBV感染患者的临床资料.根据临床诊断结果,将入选者分成非活动性HBsAg携带组(145例)、慢性HBV携带组(57例)、乙型肝炎E抗原(HBeAg)(+)慢性乙型肝炎(CHB)组(151例)、HBeAg(-)CHB组(65例)、HBeAg(-)乙肝肝硬化(LC-B)组(43例)和HBeAg(+)LC-B组(37例)6组.对血清HBsAg定量与血清HBV DNA及患者年龄进行相关性分析.结果:各组间的HBsAg定量值有统计学差异,其中HBeAg(-)、(+)的CHB组间HBsAg水平差异显著.除外非活动性HBsAg携带的HBV感染者的HBV DNA与血清HBsAg定量值呈显著正相关性.HBV感染者的血清HBsAg定量值与其年龄间存在显著负相关性.年龄>40岁的非活动性HBsAg携带者血清HBsAg定量值明显低于同年龄段的HBeAg(-)CHB患者.结论:HBV感染各阶段的血清HBsAg水平各不相同,该水平与患者的年龄及HBV DNA关系密切,是区分年龄超过40岁的非活动性HBsAg携带者与HBeAg(-)CHB患者的一个重要预测指标.     

HBsAg阳性产妇分娩婴儿乙肝免疫接种低和无应答的影响因素

目的 探讨可能导致HBsAg阳性产妇分娩的婴儿乙肝免疫接种后免疫低和无应答的因素.方法 回顾性分析2013-2014年在首都医科大学附属北京佑安医院收治的HBsAg阳性产妇分娩的832例新生儿的临床资料,新生儿出生后6h内及21d接种乙型肝炎免疫球蛋白200 IU,出生当天和出生后l、6个月注射乙型肝炎疫苗10μg.出生后6h内、7月龄抽取股静脉血,检查HBV标志物和HBV DNA定量.按照产妇孕期是否接受抗病毒治疗、母乳喂养、父亲HBsAg情况、母亲HBeAg情况分组,评估上述因素对婴儿乙肝免疫接种应答情况的影响. 结果 产妇孕期接受抗病毒治疗组的婴儿低和无应答率为8.6％(25/290),未行抗病毒治疗组的婴儿低和无应答率为7.0％(38/542),差异无统计学意义(x 2=0.60,P=0.44).母乳喂养组婴儿的低和无应答率为8.8％(18/204),人工喂养组低和无应答率为7.2％(45/628),差异无统计学意义(x 2=0.52,P=0.47).父亲HBsAg阳性组的婴儿低和无应答率为20.0％(5/25),父亲HBsAg阴性组的婴儿低和无应答率为7.2％(58/807),差异无统计学意义(x 2=3.00,P=0.08).母亲HBeAg阳性组的婴儿低和无应答率为9.9％(33/335),母亲HBeAg阴性的婴儿低和无应答率为6.0％(30/497),差异无统计学意义(x 2=3.55,P=0.06).结论 HBsAg阳性产妇分娩的婴儿中,母亲孕期采用抗病毒治疗、母乳喂养、父亲HBsAg阳性和母亲HBeAg阳性对婴儿乙肝免疫应答无明显影响.     

云南汉族人群Apo B位点扩增片段长度多态性分析

采用ＰＣＲ方法对云南汉族人群的ＡｐｏＢ位点进行了Ａｍｐ－ＦＬＰ分析，检出１２个等位基因，２６种基因型，扩增惩段工度分布于６００－１１００ｂｐ之间，等位基因频率范围为０．００３９－０．４６４８，杂合度为６６．４１％，ＤＰ为０．８６１０．研究结果表明，ＡｐｏＢ位点在云南汉族人群具有高度多成性分布，在法医学及其他学科领域里均具有较高的应用价值，此外 ，本研究建立的ＰＣＲ实验方法将有利于在基层部门推广应用     

风门穴与肺俞穴针刺安全深度及角度的应用解剖研究

采用钢针标定法和层次解剖法,在46具成年人尸体上,研究风门穴与肺俞穴的解剖结构和针刺深度及角度。结果显示:向下直刺的解剖结构依次是皮肤、浅筋膜、斜方肌、菱形肌、上后锯肌、竖脊肌、肋提肌、肋间内膜、胸内筋膜、肋胸膜,向下直刺的平均危险深度,风门穴为49.51 mm,肺俞穴为44.88 mm;向外下斜刺,当针体与矢状面夹角在20~25°时,危险深度最小;向内下斜刺,当针体与矢状面夹角大于20°时,比较安全。     

脂多糖和IL-2对乙型肝炎疫苗体外诱导B细胞应答研究

目的在乙型肝炎疫苗体外诱导B淋巴细胞产生HBs-Ab过程中，通过脂多糖和IL-2作为有效刺激物质，使用多秆组合方法进行观察比较，了解影响抗体产生的体外诱导因素。方法用乙型肝炎疫苗刺激组（A组）、乙型肝炎疫苗＋脂多糖刺激组（B组）、乙型肝炎疫苗＋脂多糖＋IL-2刺激组（C组）三组进行淋巴细胞培养和诱导，比较HBs-Ab产生情况，用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定HBs-Ab含量。结果在脂多糖和IL-2的刺激诱导下。能有效促进B淋巴细胞产生HBs-Ab。结论实验证明脂多糖是激活人血B淋巴细胞的有效丝裂原，IL-2可促使活化B细胞增生及产生抗体，脂多糖和IL-2联合作用，可增强乙型肝炎疫苗诱导体液免疫水平。     

乙型肝炎病毒2型的研究

１９８７年Ｃｏｕｒｓａｇｅｔ等首次报道发现有ＨＢＶ感染者血清中测不到抗－ＨＢｃ，并将其血清中的这种病毒命名为乙型肝炎病毒２（ＨＢＶ－２）型，随后，各国均有报道。我们对２．７万例ＨＢｓＡｇ阳性的原始检测记录进行回顾性调查，具有上述血清学特征者占４％，并对收集到的２５例血清样品进行了严格鉴定，结果显示其中绝大多数（８０％，２０／２５）仍为ＨＢＶ感染，２０％（５／２５）各项乙型肝炎指标全阴性，其中有７例为抗－ＨＢｃ阴性，但它们的核心基因，经Ｈ８Ｖ－ＤＮＡ－ＰＣＲ扩增仍为阳性。本研究未发现有与ＨＢＶ不同的毒株。     

淮安市淮安区新生儿乙肝疫苗计划免疫策略实施效果的监测评价

目的 :评价近期淮安市淮安区新生儿乙肝疫苗计划免疫策略实施效果及其影响因素。方法 :采用血清流行病学调查方法,调查7~12月龄幼儿的乙肝疫苗接种史,检测HBs Ag、抗-HBs和抗-HBs。对新生儿的乙肝疫苗免疫效果及其影响因素进行分析评价。结果:共对2 320名幼儿开展了调查。乙肝疫苗计划免疫及时接种率高达99.6%,均全程接种了疫苗。监测对象的HBs Ag阳性率0.13%,核心抗体阳性率为2.1%,估计乙肝疫苗保护率在93.4%,母婴阻断成功率为91.6%,幼儿HBs Ag阳性的原因为母婴阻断失败,所有母婴阻断失败幼儿的母亲为HBe Ag阳性感染者。接种5 g苗的幼儿抗体低、无应答率为26.3%,高于计划免疫中接种10 g疫苗的地区。出生低体重幼儿的低、无应答率高于出生正常体重幼儿。结论 :目前乙肝疫苗计划免疫的规范接种率高,幼儿HBV慢性感染率低,幼儿的慢性HBV感染主要归因于母婴阻断失败。应提高乙肝疫苗计免免疫中的接种剂量。     

植物血凝素和聚肌胞治疗流行性乙型脑炎30例疗效观察

作者于1998年使用植物血凝素(PHA)和聚肌胞(Poly I:C),治疗乙型脑炎30例,取得满意疗效。治疗组治愈率为96.7％,对照组为72.2%,两组间差异具有显著性P<0.01。     

安体维康联合拉米夫定治疗乙肝病毒感染的临床研究

目的探讨安体维康和拉米夫定联用治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的临床疗效。方法选择慢性HBV感染患者105例。其中46例慢性HBV携带者，随机分为治疗组25例。对照组21例；59例慢性乙型肝炎，随机分为治疗组32例，对照组27例。治疗组均给予安体维康和拉米夫定口服，对照组给予灵芝气血宝口服。两组肝功能异常者均加用凯西菜、肝力宝等进行保肝治疗。结果口服拉米夫定和安体维康3个月时，血清中HBeAg和HBVDNA转阴率，慢性HBV携带者分别为24％和76％，与对照组相比差异显著(P＜0．05)；慢性乙型肝炎分别为46．88％和81．25％，与对照组相比差异显著(P＜0．05)。结论安体维康和拉米夫定联用能明显提高瑚BeAg和船HBVDNA的转阴率．疗效明显。     

PCR与ELISA在检测乙型肝炎病毒标志物中的应用比较

目的：观察ＰＣＲ与ＥＬＩＳＡ法在检测乙肝病毒标志物中的差异。方法：用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ法对８０３例疑似乙肝者做了ＨＢＶＤＮＡ和乙肝五项指标检查，并进行比较。结果：在ＨＢｓＡｇ（＋）的７３６例中ＨＢＶＤＮＡ阳性率５８．７７％。ＨＢｅＡｇ（＋）的３５３例中ＨＢＤＮＡ阳性率为９６．３％。ＨＢｅＡｇ（－）的４０８例中ＨＢＶＤＮＡ阳性率为２３．０％。ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ均（－）的２５例中ＨＢＶＤＮＡ阳性率