大鼠脊髓厚石蜡切片的免疫组化染色及防脱片体会

运用光学体视框估计免疫组织化学染色阳性结构（粒子）的数量需要较厚的石蜡包埋切片;对于这样的切片,其染色深度和防脱片是制片、染色过程中需要特别注意的问题。本文介绍了我们运用大鼠脊髓厚石蜡切片的免疫组化染色与防脱片的经验体会。     

不同器官石蜡包埋切片的切片压缩对比研究

目的比较研究不同器官石蜡包埋切片的切片压缩。方法从一成年雄性SD大鼠的肺、心、肝、睾丸和脊髓腰膨大各切取3个长、宽、高均约为2 mm的组织块,石蜡包埋后从每个组织块切取5～40μm厚(切片机设定厚度)的切片各3张进行苏木精染色,然后利用体视学图像系统的指针测微计测量每张切片染色后的实际厚度,以后一厚度(实际厚度)与前一厚度(切片设定厚度)之比作为切片压缩系数。结果与结论不同器官的平均压缩系数分别为84.4%(肺)、81.4%(心脏)、80.6%(肝脏)、77.9%(睾丸)和72.2%(脊髓),不同器官间有显著性差异。     

石蜡包埋组织自动和手动切片对切片厚度的影响

目的观察手动与自动两种切片方法和组织种类对实测切片厚度的影响。方法选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝、胰腺、胃及肺4种组织,各组织单独包埋制成蜡块,预设电动切片机的切片厚度刻度值为3、5、7、10μm,分别作自动和手动两种方法切片,所获得的薄组织片经二次包埋、切片、HE染色,TIGER图像分析仪测量切片的实际厚度。结果组织切片实测厚度受自动和手动两种切片方法的影响,切片机的切片厚度预设值低估了石蜡包埋组织切片的真实厚度,自动和手动实测切片厚度分别比切片机预设切片厚度要厚29％～50％和48％～91％。结论自动切片与手动切片的切片厚度相差25％,二者相对误差为61％,自动切片获得的组织切片的厚度精度较高,优于手动切片。     

四种人肺癌细胞株的滴片与石蜡切片HE染色色度学定量分析

目的从色度学角度定量分析不同人肺癌细胞株A549、GLC-82、H358及H2009的相似性和差异性,比较滴片与细胞石蜡切片HE染色的色度学分析结果的异同。方法用计算机图像分析技术分别测试上述四种肺癌细胞滴片HE染色和A549、GLC-82和H358肺癌细胞石蜡切片HE染色的色度学参数,包括Rp、Gp、Bp、Rn、Gn、Bn、rp、rn、gp、gn、bp、bn。结果细胞滴片A549、GLC-82、H358和H2009细胞间色度学参数差异具有显著性(P<0.05),石蜡切片A549、GLC-82和H358细胞间色度学参数差异具有显著性(P<0.05);细胞滴片与石蜡切片HE染色的色度学参数差异具有显著性(P<0.05),滴片与石蜡切片上不同肺癌细胞同一色度学参数具有一致性(P=0.048),但一致性不明显(Kappa=0.313)。结论不同类型肺癌细胞株滴片与石蜡切片HE染色的色度学参数差异显著,可用于不同肺癌细胞株的甄别;滴片与石蜡切片色度学参数间差异有显著性,两者间的一致性不明显,应区别应用。     

勘误说明

本刊2015年第20卷第1期第52~57页发表的向宇等的论文《高温烤片对石蜡切片黏附、厚度与染色的影响》,因编辑排版原因致使图1、图2模糊不清,在此特勘误说明,并向该文作者表示歉意。     

提高免疫组化反应的抗原修复方法

目的　探讨免疫组织化学反应不同预处理方法对反应结果的影响。方法　对5 0例经10 %中性福尔马林液固定过的组织,经脱水、石蜡包埋,制成切片,分别采用3种不同方法作预处理后,进行免疫组织化学(S P法)染色。结果　石蜡组织切片免疫组化反应预处理,采用中温水浴抗原修复法,其阳性表达率为5 2 .6% ,脱片率为2 .0 % ;采用高压锅抗原修复法,其阳性表达率为47.4% ,脱片率为2 0 .0 % ;采用水沸抗原修复法,其阳性表达率为3 9.5 % ,脱片率为12 .0 %。结论　免疫组化反应采用中温水浴抗原修复法作预处理,石蜡组织切片阳性表达率较高压锅抗原修复法提高了5 .2 % ,P <0 .0 5 ,较水沸抗原修复法提高了13 .1% ,P <0 .0 5 ;采用中温水浴抗原修复法石蜡组织切片脱片率较高压锅抗原修复法降低了18.0 % ,P <0 .0 1,较水沸抗原修复法降低了10 .0 % ,P <0 .0 1。预处理采用中温水浴抗原修复法,即提高了免疫组织化学反应阳性表达率,又提高了制片质量,操作方法易于掌握,是1种理想的免疫组化反应预处理方法,值得推广。     

乳腺肿块印片细胞快速病理诊断的应用价值

目的:探讨乳腺肿块印片细胞在快速病理诊断中的应用价值.方法:将120例乳腺肿块切除标本进行细胞印片、HE染色、光镜观察并与快速石蜡切片进行对照.结果:细胞印片与快速石蜡切片定性完全一致115例,占95.83%,定性不完全一致5例,占4.17%,本组良性病变92例,恶性27例,潜在恶性1例.结论:该方法在乳腺肿块病理诊断中具有应用价值.     

乳腺肿块印片细胞快速病理诊断的应用价值

目的：探讨乳腺肿块印片细胞在快速病理诊断中的应用价值。方法：将120例乳腺肿块切除标本进行细胞印片、HE染色、光镜观察并与快速石蜡切片进行对照。结果：细胞印片与快速石蜡切片定性完全一致115例,占95.83%,定性不完全一致5例,占4.17%,本组良性病变92例,恶性27例,潜在恶性1例。结论：该方法在乳腺肿块病理诊断中具有应用价值。     

切片位置对兔睾丸组织体视学研究的影响

目的比较不同包埋介质内切片位置对成年新西兰大耳白兔睾丸组织体视学研究的影响。方法将成年雄性新西兰大耳白兔麻醉后,随机抽选一侧睾丸经Bouin液固定后从中央及两端（垂直于睾丸中心长轴）切取共三个平行组织薄片。将每个组织薄片平分为二,再随机将其中一块平分得到2个（1/4圆）组织块,分别随机采用羟乙基甲基丙烯酸树脂或石蜡包埋、切片和染色后,在低倍镜（10×）下分别对睾丸组织树脂切片（25μm）和石蜡切片（7μm）不同切片位置进行观察：紧贴白膜选择若干视野（所有视野间无任何重叠）,再向扇形切片中心连续选择3个视野,利用体视学方法估计各视野睾丸组织内生精小管的体积分数。结果石蜡切片较树脂切片估计的生精小管体积分数减少15.9%;树脂切片不同部位估计的生精小管体积分数无差异,而石蜡切片不同部位估计的结果存在差异：距离白膜愈远,体积分数愈小,近切片中心与近白膜相比显著减少了30.1%。结论石蜡包埋能引起睾丸组织不均匀皱缩,因此,当应用石蜡切片进行睾丸体积分数研究时,应考虑不均匀组织皱缩因素。     

细胞印片辅以快速石蜡切片在急诊病理中的应用

３６２例急诊病理采用细胞印片辅以快速石蜡切片的方法进行诊断。结果显示：两种方法结合进行的急诊病理诊断符合率为９６．４１％，恶性肿瘤诊断符合率９４．４８％，良性肿瘤符合率为９７．９９％。两者各有优势，细胞印片简便、迅速、印片范围广，３～５分钟既可诊断；快速石蜡切片分类较明确。两者相辅相成，比只用单一冰冻或快速石蜡切片诊断要全面而快速得多。     

组织切片对细胞核DNA含量检测的影响

目的探讨组织切片对图像分析仪测量细胞核DNA含量的影响。方法选取10只成年健康雄性小鼠,制备肝细胞涂片和肝组织切片,肝组织切片分成两部分,分别用于Feulgen染色和石蜡包埋,包埋后的组织采用垂直切片,图像分析仪测量切片实际厚度,依据切片机标识厚度和测量厚度分别分组,TIGER细胞图像分析仪分别测量肝细胞涂片和组织切片内肝细胞核的积分光密度(IOD)。结果肝细胞涂片内各DNA含量倍体肝细胞核IOD间的比值接近2和4,IOD之变异系数(CV值)<3.5,肝组织切片IOD间比值明显偏离2和4,IOD之CV值均>6;切片机标识厚度为4、6、8和10μm组织切片平均测量厚度分别为6.75、7.18、6.96和7.59μm,测量厚度最大值为9.25μm,最小值为4.62μm;依据切片机标识厚度分组中不同切片厚度相同DNA含量倍体肝细胞核的IOD值差异均无统计学意义;依据测量厚度重新分组后5、6微米组与7、8、9微米组IOD值间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论组织切片的实际厚度与切片机标识厚度间存在明显差异,本实验方法可较准确地判断组织切片厚度;厚组织切片测量结果优于薄组织切片,但与细胞涂片相比,厚组织切片仍难...     

细胞印片与冷冻切片相结合在术中快速病理诊断中的应用

引言我院多年来将术中送检的组织同时进行细胞印片及冷冻切片,诊断准确,性能可靠。本文将两种方法进行对比分析,针对细胞印片诊断出现的误诊、漏诊病例,重点探讨细胞印片与冷冻切片诊断的互补作用。1材料与方法1.1材料收集商丘市第一人民医院病理科2002年5月～2005年7月全部术中快速病理诊断191例,其中恶性肿瘤76例,良性病变115例。1.2方法将新鲜标本用锐刀做多个切面,选取病变部位在载玻片上印数下,或用锐刀在标本上刮数次均匀涂抹于载玻片上,95%乙醇固定。每例先做细胞印片2～3张,同时组织块做冷冻切片,余下组织做石蜡切片,HE染色,光镜观察。2结果191例组织细胞印片诊断良性118例,恶性73例;冷冻切片诊断良性114例,恶性77例;常规石蜡切片最终诊断良性115例,恶性76例。其中乳腺肿瘤63例,卵巢肿瘤52例,子宫肿瘤26例,消化道肿瘤18例,甲状腺病变18例,淋巴结病变5例,骨肿瘤3例,肺癌3例,恶性胸膜间皮瘤、脑星形细胞瘤及腹膜后脂肪肉瘤各1例。在细胞印片诊断病例中有6例可疑病例(包括乳腺导管扩张症、乳腺增生病、乳腺癌、卵巢腺癌、甲状腺癌、腹膜后脂肪肉瘤各1例),其中4例经冷冻切片诊断,2例经石蜡切...     

胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法联合常规涂片法的临床研究

目的 评价胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法联合常规涂片法在恶性胸腹腔积液诊断中的价值.方法 应用胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法及常规涂片法分别检测150例胸腹腔积液标本.结果 150例胸腹腔积液中,经手术病理、纤维支气管镜、纵隔镜、胃镜、淋巴结穿刺活检及痰检等确诊为恶性肿瘤120例,常规涂片法检出75例,检出率为62.5%;胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法+免疫组织化学法检出101例,检出率为84.2%;两法联合检出113例,检出率为94.2%,检出率明显高于前两者的单独应用,差异有统计学意义(P<0.05),且无假阳性结果;同时利用免疫组织化学联合检测癌胚抗原(CEA)+细胞角蛋白(CK)+钙结合素(CAL)+波形蛋白(VIM),能够较好地鉴别腺癌细胞及间皮细胞.结论 两法联合并结合免疫组织化学能够提高恶性胸腹腔积液癌细胞的检出率.     

胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法联合常规涂片法的临床研究

目的 评价胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法联合常规涂片法在恶性胸腹腔积液诊断中的价值.方法 应用胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法及常规涂片法分别检测150例胸腹腔积液标本.结果 150例胸腹腔积液中,经手术病理、纤维支气管镜、纵隔镜、胃镜、淋巴结穿刺活检及痰检等确诊为恶性肿瘤120例,常规涂片法检出75例,检出率为62.5%;胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法+免疫组织化学法检出101例,检出率为84.2%;两法联合检出113例,检出率为94.2%,检出率明显高于前两者的单独应用,差异有统计学意义(P<0.05),且无假阳性结果;同时利用免疫组织化学联合检测癌胚抗原(CEA)+细胞角蛋白(CK)+钙结合素(CAL)+波形蛋白(VIM),能够较好地鉴别腺癌细胞及间皮细胞.结论 两法联合并结合免疫组织化学能够提高恶性胸腹腔积液癌细胞的检出率.     

原位杂交检测HPV DNA改良方法的介绍

目的建立稳定、可靠、简便的HPV原位杂交检测方法。方法采用北京中杉金桥生物技术公司的HPV定型(6／11、16／18、31／33)原位杂交试剂盒，利用病理科宫颈癌石蜡组织、妇科宫颈及外阴活检组织经10％甲醛固定，常规石蜡包埋后，用防脱片制成4μm石蜡切片，操作步骤基本按试剂盒说明进行(其中有些改动)。结果DNA阳性定位清晰准确，在上皮组织的挖空细胞核中，且背景透明干净。结论该法操作简便，直观准确，可稳定地用于临床HPV感染的检测，方便了患者，也为临床对症治疗提供了依据。     

胸腹水脱落细胞石蜡包埋技术与应用

 目的胸、腹水脱落细胞石蜡包埋技术与免疫细胞化学检测相结合对提高胸、腹水恶性肿瘤细胞的诊断和鉴别诊断。方法胸、腹水脱落细胞石蜡包埋技术对71例胸、腹水疑难病例进行Calretinin(Calr)、Mesothelial(MES)、CAM5.2、P63 、Cytokeratin(CK)免疫细胞化学检测。结果HE染色：良性胸、腹水切片中可见间皮细胞、组织细胞、淋巴细胞及纤维蛋白成分;恶性者可见异型细胞染色质粗、散在或成团分布。免疫细胞化学染色显示背景干净, 对比度好,阳性细胞数多, 阳性信号定位准确。     

细胞印片与快速石蜡切片病理诊断的应用分析

目前 ,术中快速病理诊断的方法主要有冷冻切片和快速石蜡切片 ,而细胞印片操作简便、快速 ,细胞结构显示较清晰 ,已初步应用于术中快速病理诊断中。我们将细胞印片法与快速石蜡切片法进行对照 ,对常见部位组织占位性病变进行术中快速病理诊断 ,以探讨细胞印片在术中快速诊断中的意义。1　材料与方法1.1　材料材料均来自河南大学第一附属医院 1996年 8月～ 2 0 0 2年3月收治的 ,经常规石蜡切片确诊 ,且术中细胞印片和快速石蜡切片资料完整的 2 83例病例。组织取材部位 :乳腺 91例 ,甲状腺 5 6例 ,子宫及卵巢 5 2例 ,淋巴结 47例 ,消化道 19例…     

胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法联合常规涂片法的临床研究

 目的　评价胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法联合常规涂片法在恶性胸腹腔积液诊断中的价值。方法　应用胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法及常规涂片法分别检测150例胸腹腔积液标本。结果　150例胸腹腔积液中,经手术病理、纤维支气管镜、纵隔镜、胃镜、淋巴结穿刺活检及痰检等确诊为恶性肿瘤120例,常规涂片法检出75例,检出率为62.5 %;胸腹腔积液沉淀物石蜡包埋切片法+免疫组织化学法检出101例,检出率为84.2 %;两法联合检出113例,检出率为94.2 %,检出率明显高于前两者的单独应用,差异有统计学意义（P＜0.05）,且无假阳性结果;同时利用免疫组织化学联合检测癌胚抗原（CEA）+细胞角蛋白（CK）+钙结合素（CAL）+波形蛋白（VIM）,能够较好地鉴别腺癌细胞及间皮细胞。结论　两法联合并结合免疫组织化学能够提高恶性胸腹腔积液癌细胞的检出率。     

术中组织印片法快速诊断212例分析

目的探讨组织印片在术中快速诊断的可行性。方法将术中送检的212例新鲜标本，即刻切开，在不同病变切面上用载玻片轻轻触印，制成印片，快速HE染色，光镜下观察，报告诊断结果。所剩组织均做石蜡切片诊断作对照。结果212例印片诊断与石蜡切片诊断比较，印片阳性(恶性肿瘤)57例(26．9％)；阴性(非肿瘤性)146例(68．9％)，印片诊断准确率95．8％(203／212)。石蜡切片诊断阳性64例(30．2％)，阴性148例(69．8％)，准确率100．0％(212／212)。用印片诊断阳性57例与石蜡切片诊断作类型比较，有38例完全相符，诊断符合率66．7％(38／57)。7例误诊，误诊率仅为3．3％(7／212)。3例定性准确但分类不符合，9例病变交界难定。结论组织印片诊断不同于一般涂片单纯细胞学诊断，而是细胞学与组织学相互结合观察的结果，有时可进行组织类型的诊断。在冷冻切片与快速石蜡切片同时作快速印片，可有效纠正部分误诊。     

A549细胞光镜及电镜制样收缩系数测试

目的测试A549细胞经过光镜及电镜制样处理后的收缩系数,为定量研究A549细胞及其超微结构奠定基础。方法对A549细胞分别进行涂片HE染色、涂片巴氏染色、石蜡包埋3μm切片HE染色及透射电镜制样半薄（3μm）切片HE染色处理。通过光学显微镜获取细胞图像,用Image-Pro Plus图像分析软件测试细胞的平均直径,然后以A549培养之等渗重悬细胞之平均直径为基准计算细胞的收缩系数。结果A549培养之等渗重悬细胞的平均直径为14.93μm。经涂片HE染色、涂片巴氏染色、石蜡切片HE染色和透射电镜制样半薄（3μm）切片HE染色处理后的A549细胞的平均直径分别9.88μm、9.98μm、10.29μm和10.59μm。以等渗重悬细胞之平均直径为基准,经涂片HE染色、涂片巴氏染色、石蜡切片HE染色和透射电镜半薄切片HE染色之细胞的收缩系数分别为0.66、0.67、0.69和0.71。结论经涂片HE染色、涂片巴氏染色、石蜡切片HE染色和透射电镜制样半薄切片HE染色处理后,A549细胞收缩明显,直径约收缩了1/3。因此,在实际测试中,欲知细胞收缩前之结构大小,须据细胞收缩程度进行必要的校正。