大鼠皮肤创面愈合过程中IGF-1的定量学研究

目的:研究胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-1)对大鼠皮肤创面愈合过程的影响。方法:以大鼠为动物模型,在伤后1d、4d、7d、11d、14d、和17d取材,利用免疫组织化学和图像分析技术,研究皮肤创伤愈合过程中创面内源性IGF-1、增殖细胞核内抗原(PCNA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的动态变化,以及与创面愈合相关因素成纤维细胞之间的关系。结果:在皮肤创伤愈合过程中,内源性IGF-1表达量的变化与成纤维细胞活动、PCNA表达及Ⅰ型胶原的变化基本相符,与Ⅲ型胶原的变化关系不密切。结论:IGF-1与成纤维细胞增殖、活跃程度密切相关,是影响创面愈合的重要因子之一。     

放射线诱导Smad 7基因表达阻断放射性肺纤维化离体实验研究

目的研究含Egr-1基因启动子和Smad 7 cDNA的重组腺病毒在细胞水平表达Smad 7蛋白，是否具有阻断转化生长因子-β1(TGF-β1)信号传导通路从而阻断胶原合成的生物学活性。方法重组腺病毒感染成纤维细胞(3T6)，经深部X线照射后通过免疫细胞化学方法检测Smad 7蛋白在细胞内的表达定位。成纤维细胞再经TGF-β1刺激后通过^3H-胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)和^3H-脯氨酸(^3H-Pro)结合法检测比较实验组和对照组细胞增殖能力和胶原合成情况，采用液体闪烁计数法测定每分钟闪烁计数(cpm)值进行定量比较。结果细胞免疫化学结果显示Smad 7蛋白表达定位于细胞浆内。同位素^3H—Pro检测结果显示实验组cpm值为3287，对照组cpm值为5690，两者差异有统计学意义(P=0．026)。空白组cpm值为3625，与实验组无差别(P=0．741)，说明实验组成纤维细胞胶原合成量明显低于对照组，与基础水平相当。^3H—TdR检测结果显示各组间细胞增殖能力无明显差别(P=0．312)。结论通过重组腺病毒在成纤维细胞内表达的Smad7蛋白具有在细胞浆内阻断TGF-β1信号传导通路从而抑制胶原合成的生物学活性，其抑制胶原合成可能是在转录水平实现的。     

VES诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡及其与Fas及TGF-β1表达的相关性分析

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,以及Fas和TGF-β1表达的变化。方法：MTT法和Annexin V法分别用于检测不同浓度VES处理人乳腺癌MDA-MB-453细胞后生长情况和细胞凋亡情况,流式细胞术检测凋亡率;免疫组化比较凋亡前后Fas及TGF-β1表达变化。结果：不同浓度VES处理的细胞在不同时间均受到不同程度的抑制,随VES剂量的增加,抑制作用增强。其中20 mg/LVES处理组在24 h后受到明显抑制,第4天抑制率即接近100%;10 mg/L VES处理组7 d后细胞生长被抑制89.87%。经VES处理后,Fas及TGF-β1表达率差异有统计学意义,P〈0.001。结论：VES可诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,其机制可能与Fas和TGF-β1上调有关。     

VES诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡及其与Fas及TGF-β 1表达的相关性分析

目的:研究维生素E琥珀酸酯(VES)诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,以及Fas和TGF-β1表达的变化.方法:MTT法和Anhexin V法分别用于检测不同浓度VES处理人乳腺癌MDA-MB-453细胞后生长情况和细胞凋亡情况,流式细胞术检测凋亡率;免疫组化比较凋亡前后Fas及TGF-β1表达变化.结果:不同浓度VES处理的细胞在不同时阃均受到不同程度的抑制,随VES剂量的增加,抑制作用增强.其中20 mg/LVES处理组在24 h后受到明显抑制,第4天抑制率即接近100%;10 mg/L VES处理组7 d后细胞生长被抑制89.87%.经VES处理后,Fas及TGF-β1表达率差异有统计学意义,P<0.001.结论:VES可诱导 HER-2 高表这乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,其机制可能与Fas和TGF-β1上调有关.     

急性放射性皮肤溃疡发生发展过程中TGF-β1及其受体TGF-βR1的表达水平:与单纯伤口愈合的定量对比研究

为研究TGF-β1及其受体TGF-βR1在急性放射性皮肤溃疡组织中的表达水平及对溃疡形成、发展、愈合的影响,我们采用雌性Wistar大鼠,以60Coγ射线局部照射法建立急性放射性皮肤溃疡动物模型,并以手术法建立单纯皮肤伤口动物模型,观察病变55天,采用免疫组化、原位杂交和图像分析等方法检测单纯伤口及皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平。研究发现,照后14天照射野内开始出现皮肤溃疡,之后逐渐扩大、融合、加深。皮肤受照射区多种细胞,特别是溃疡床表皮细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞中TGF-β1及TGF-βR1的转录和表达水平均较正常皮肤组织明显增强,与单纯伤口组比较,溃疡床的TGF-β1及TGF-βR1阳性细胞数量明显减少,阳性强度减弱不明显。表明放射性皮肤溃疡组织中TGF-β1及TGF-βR1的表达水平降低可能与溃疡发生、发展及难愈合的分子机制相关。     

转化生长因子-β、碱性成纤维生长因子和血小板衍生生长因子在骨折愈合中的表达

目的观察转化生长因子-β（TGV-β）、碱性成纤维生长因子（bFGF）和血小板衍生生长因子（PDGF）在骨折愈合中的表达和分布情况,进而探讨其作用机制。方法选用SD大鼠制作胫骨骨折愈合模型,伤后不同时期处死取材,分别进行组织学和TGF-β、bFGF和PDGF免疫组化染色观察。结果伤后3天开始形成原始骨痂。1周时肉芽组织中的间质细胞开始分化为软骨细胞,软骨形成后再进行软骨内化骨。4周时形成连接骨折端的桥接骨痂。伤后早期血肿中炎性细胞表达bFGF、PDGF。伤后1周骨膜增殖细胞、肉芽组织中的成纤维细胞、内皮细胞、骨端骨细胞以及原始骨痂成骨细胞表达TGF、bFGF和PDGF。伤后2周软骨细胞表达TGF-β、bFGF和PDGF。结论TGF、bFGF和PDGF有着各自的表达和分布特点,并共同调节骨原细胞的增殖和成骨细胞、软骨细胞的分化,最终完成骨折愈合。     

PMA诱导K562细胞向单核细胞分化机制探讨

目的：探讨佛波酯（phorbol-12-myristate-13-ace-tate,PMA）诱导K562细胞向单核/巨噬细胞分化的作用机制。方法：采用CCK8法检测0、6.25、12.5、25、50、100和200nmol/L PMA对K562细胞增殖的影响,应用Wright-Gimesa染色观察细胞形态学变化,采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达变化,采用RT-PCR分析TGF-β1及其下游基因SMAD3和SMAD4在基因水平的表达趋势,并采用蛋白质印迹法检测TGF-β1在蛋白水平的表达变化。结果：K562细胞经6.25nmol/L PMA处理后72h增殖抑制率为（22.03±2.7）%,12.5nmol/L为（31.04±4.3）%,25nmol/L为（35.03±3.5）%,50nmol/L为（47.01±4.1）%,100nmol/L为（55.06±5.2）%,200nmol/L为（76.72±5.4）%,差异有统计学意义,F=2.24,P〈0.05。PMA能抑制K562细胞的增殖并能促进其分化,作用效果随剂量的加大逐渐增强;细胞形态学上趋向于成熟分化;细胞表面分子CD11b和CD14的表达量升高。在mRNA水平,TGF-β/SMAD信号通路因子TGF-β1的表达量随时间的延长逐渐升高其下游因子SMAD3和SMAD4的表达也呈上升趋势;在蛋白水平,TGF-β1的表达亦呈上升趋势。结论：PMA可通过促进TGF-β/SMAD信号的传导诱导白血病细胞株K562细胞向单核/巨噬细胞分化。     

葛根素通过TGF-β/Smads信号通路促进前列腺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨葛根素（puerarin）通过TGF-β/Smads信号通路促进前列腺癌细胞凋亡的机制。方法:将不同浓度葛根素（0、25、50、75和100 μmol/L）分别孵育前列腺癌PC3细胞,并采用台盼蓝染色(trypan blue）检测细胞增殖情况;流式细胞术方法检测不同剂量葛根素对细胞凋亡率的影响;使用RT-PCR和Western blot检测葛根素对TGF-β1和Smad3的影响;采用TGF-β1抑制剂P144抑制TGF-β1活性,使用Western blot验证P144对TGF-β1表达含量的影响并检测其对细胞凋亡蛋白Casepase3、Bcl-2表达水平的影响。结果:葛根素以时间和剂量依赖的方式抑制PC3细胞的生长（P<0.05）;25、50、75和100 μmol/L葛根素对细胞存活的抑制率分别为25.7%、28.9%、32.5%和56.3%;流式细胞术检测结果指出25、50、75和100 μmol/L葛根素对PC3细胞的凋亡率分别为(4.36±2.62)%、(9.86±3.64)%、(15.95±5.22)%、(19.65±7.34)%,随着剂量的增长,PC3细胞凋亡率逐渐上升（P<0.05）;RT-PCR和Western blot检测提示随着葛根素浓度的升高,TGF-β1、Smad3和Caspase3在mRNA和蛋白水平表达含量显著升高,而Bcl-2则显著降低（P<0.05）;与葛根素单独处理组相比,葛根素+P144共处理组细胞,TGF-β1、Smad3和Caspase3蛋白表达水平显著下降,Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。随后的流式细胞术检测结果指出,与葛根素单独处理组比,使用葛根素+P144共处理组细胞凋亡水平显著下降（P<0.05）。结论:葛根素可能通过激活TGF-β/Smad受体信号通路诱导Bcl-2下调和促进Caspase3的上调,从而诱导前列腺癌PC3细胞凋亡。     

p27Kip1在As2O3诱导白血病细胞凋亡中的作用机制

目的:研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)及转录生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人HL-60细胞增殖的影响,并探讨相关信号通路.方法:流式细胞术检测细胞周期及凋亡,RT-PCR检测p27Kip1、TGF-β1、Cyclin E和Bcl-2表达,免疫组织化学方法和Western blot方法检测p27Kip1、TGF-β1、Cyclin E和Bcl-2蛋白水平.结果:As2O3、TGF-β1单药或联合处理均可诱导细胞凋亡,以联合处理组凋亡最明显,并且As2O3单药组及联合处理组细胞周期阻滞于G1期.As2O3单药及联合处理组可见p27Kip1、内源性TGF-β1表达上调,Cyclin E和Bcl-2表达下调,外源性TGF-β1处理组可见p27Kip1 mRNA及蛋白表达上调,内源性TGF-β1 mRNA表达上调,内源性TGF-β1蛋白水平与对照组比较无明显变化,Cyclin E和Bcl-2表达下调,联合处理组p27Kip1及内源性TGF-β1表达上调及Cyclin E和Bcl-2表达下调程度强于单药处理组.结论:As2O3诱导细胞凋亡的机制可能是通过上调TGF-β1,从而上调p27Kip1,拮抗Cyclin E和Bcl-2的作用,抑制细胞增殖,使细胞周期阻滞于G1期,从而诱导细胞发生凋亡,外源性TGF-β1通过上调内源性TGF-β1,从而上调p27Kip1,增强As2O3诱导细胞凋亡的作用.     

TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡及TIEG1,Bcl-2/Bax的表达变化

目的:研究TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后TIEG1及Bcl-2/Bax的表达变化。方法:用不同浓度的TGF-β1处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率。用10.4 ng/ml TGF-β1处理HL-60细胞,以流式细胞仪检测细胞凋亡,以RT-PCR方法检测TIEG1、Bcl-2及Bax的表达。结果:TGF-β1对HL-60细胞具有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性。10.4 ng/ml TGF-β1增殖抑制作用较为明显。在细胞凋亡过程中,TIEG1、Bax表达呈升高趋势,而Bcl-2呈下降趋势。结论:TGF-β1可以抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。在TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡的过程中,TIEG1表达逐渐加强,与HL-60细胞凋亡呈负相关。Bcl-2/Bax与TGF-β1诱导HL-60细胞的凋亡相关,且与TIEG1的表达有相关性。     

RGC32与转化生长因子β1在肺腺癌细胞增殖过程中调控关系的研究

目的:探讨RGC32与转化生长因子β1(TGF-β1)在肺腺癌中表达的相关性,明确二者之间调控关系及其对肺腺癌细胞增殖的影响。方法:Real-time PCR检测52例肺腺癌及相应癌旁组织中RGC32与TGF-β1 的表达;应用TGF-β1 受体特异性抑制剂SB-431542处理A549细胞,检测处理后细胞中RGC32基因的表达,并用MTT法测定细胞增殖活力,双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果:RGC32和TGF-β1 在肺腺癌组织中表达均呈现显著增加,且二者呈正相关;SB-431542处理后,RGC32蛋白表达显著下调,A549细胞的凋亡增加,增殖活力降低。结论:RGC32和TGF-β1 在肺腺癌中均呈现表达上调,二者呈正相关。RGC32是TGF-β1 信号通路下游重要的调控基因,能够参与肺腺癌细胞增殖能力的调节。     

不同分离方法对骨髓基质干细胞成软骨分化的影响

目的探讨分离骨髓基质干细胞（BMSCs）的两种基本方法-贴壁分离法和密度梯度离心法对BMSCs成软骨分化能力的影响。方法抽取兔双侧股骨骨髓，等分，一份（A组）用贴壁分离法，另一份（B组）用密度梯度离心法分离BMSCs，倒置显微镜观察BMSCs的生长情况，选择两组同代的BMSCs，用TGF-β1诱导其向软骨方向分化。诱导后的细胞用免疫组化检测Ⅱ型胶原表达情况，用原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达情况，最后计算两种检测方法的细胞阳性率。结果A、B两组细胞经TGF—β1诱导后，Ⅱ型胶原免疫组化阳性率分别为76．1％和77．7％，Ⅱ型胶原mRNA原位杂交阳性率分别为70．3％和71．0％。结论贴壁分离法和密度梯度离心两种分离方法对BMSCs的生长和成软骨分化无显著差别。     

DDX5对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨DDX5在类风湿关节炎滑膜中的表达,及其对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及凋亡的影响。方法应用RT-qPCR检测类风湿关节炎滑膜组织中DDX5的表达;取行关节置换的类风湿关节炎患者滑膜细胞原代培养,转染siDDX5 72 h后,CCK8检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果DDX5 mRNA表达,类风湿关节炎组(1.61±0.63)高于对照组(1.00±0.00),(P0.05,t=4.56)差异有统计学意义;成纤维细胞增殖活性:转染72 h后,转染siDDX5组(0.81±0.02)低于转染siCtrl组(0.89±0.009),(P0.01,t=5.5),差异有统计学意义;细胞凋亡:转染72 h后,转染siDDX5组(21.7±2.12)高于转染siCtrl组(13.4±1.44),(P0.05,t=5.35),差异有统计学意义。结论 DDX5可能通过促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖,抑制凋亡,参与滑膜增生。     

外源性转化生长因子-β 1调控MG-63细胞生长的研究

目的观察外源性转化生长因子-β1(TGF-β1)对人骨肉瘤细胞系MG-63的生长、细胞周期及内源性TGF-β1表达的影响.方法将体外培养的MG-63细胞分成为5组,分别与0、0.1 1.0 2.0 5.0ng/ml的TGF-β1共同孵育24h,MTT法测量MG-63细胞增殖情况,TGF、DNA双参数分析法和激光共聚焦显微镜定量技术分析2.0ng/ml TGF-β1对细胞的周期分布以及内源性TGF-β1表达的影响.结果随TGF-β1浓度的增高,MG-63细胞增殖逐步受到抑制(1、5组OD值分别为0.75±0.01和0.40±0.03,P＜0.01).2mg/ml外源性TGF-β1处理后,G0/G1期细胞比例从55.65%上升到73.19%,细胞增殖指数(PI)从45.35降至25.76%.各细胞周期的细胞TGF-β1表达均有增强,以G0/G1期最为明显,增长率达48.13%.结论外源性TGF-β1能够以剂量依赖性方式诱发MG-63细胞Gl期阻滞,对细胞的生长有一定抑制作用.同时大剂量TGF-β1可诱发MG-63细胞的内源性TGF-β 1表达,这种诱发作用具有细胞周期特异性.     

TGF-β1、Smad4蛋白和TβRⅡ在胆囊癌发生与发展中的作用

目的：通过检测原发性胆囊癌细胞中TGF-β1、Smad4蛋白和TβRⅡ在不同时期的表达,探讨它们之间的相互关系及其在胆囊癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化SP法检测30例胆囊癌、11例胆囊腺瘤及30例胆囊炎中TGF-β1、Smad4蛋白和TβRⅡ的表达情况,并分析它们与胆囊癌临床病理之间的关系。结果：30例胆囊癌中TGF-β1、Smad4蛋白和TβRⅡ的阳性率分别为73.3%、20.0%和16.7%,胆囊腺瘤中阳性率分别为90.9%、63.7%、54.5%,在胆囊炎中阳性率分别为96.7%、93.3%、90.0%。TGF-β1在胆囊癌中表达低于胆囊炎（P〈0.05）;Smad4蛋白、TβRⅡ在胆囊癌中表达均低于胆囊炎和胆囊腺瘤（P〈0.05）。Ⅰ-Ⅱ期胆囊癌TGF-β1阳性率低于Ⅲ-Ⅴ期（P〈0.05）,而Smad4蛋白、TβRⅡ阳性率明显高于Ⅲ-Ⅴ期（P〈0.05）。TGF-β1在有转移的胆囊癌组织中表达率为94.1%,明显高于无转移者（P〈0.05）。结论：TGF-β1的表达降低可能与胆囊细胞的恶性转化和生长失控有关;TGF-β1高表达不能抑制肿瘤细胞增殖,可能与Smad4及TβRⅡ的低表达有关,且TGF-β1高表达与胆囊癌的发展及浸润、转移有关。     

应用基因表达谱芯片筛选高能X射线诱导HFL-1细胞胶原相关基因

目的 探讨高能X射线对人胚肺成纤维细胞(HFL-1)细胞胶原表达产生影响,并筛选胶原相关基因,为临床放射性肺纤维化的治疗提供理论依据。方法 将体外培养的HFL-1细胞随机分为对照组和放射组,放射组细胞予6 MV X射线5 Gy单次照射。照射后24 h以消化法检测两组细胞羟脯氨酸(HYP)表达情况,RT-PCR及蛋白印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达情况,采用基因芯片技术分析基因表达谱改变情况。结果 照射后24 h放射组细胞HYP表达显著高于对照组(1.834μg/ml∶4.912 μg/ml,P=0.000)。放射组照射后24 h Ⅰ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达均明显高于对照组(18.535∶186.779,P=0.000;4.337∶24.425,P=0.000)。两组细胞差异表达的基因为1879个,其中放射组上调基因771个、下调基因为1108个。参与纤维化的基因上调5倍以上的有TGF-β₁、TGF-β₃、MMP28、MMP26、MMP27和SMAD6。     

长链非编码RNA LIMT调控TGF-β信号通路对肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:检测lncRNA LIMT在肺癌组织中的表达水平,探讨lncRNA LIMT表达对肺癌细胞增殖及凋亡的影响及其可能的分子作用机制。方法:利用荧光定量PCR（RT-qPCR）检测lncRNA LIMT在肺癌组织中的表达水平;在肺癌细胞A549中转染lncRNA LIMT过表达质粒pEGFP-C1-LIMT及敲减lncRNA LIMT的特异性siRNA-LIMT及其相关对照,RT-qPCR验证其转染效率;利用CCK-8法、流式细胞术检测转染lncRNA LIMT过表达质粒及siRNA-LIMT后肺癌细胞的增殖及凋亡能力变化;利用Western blotting检测TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β1蛋白及Smad4蛋白的表达水平。结果:RT-qPCR结果显示:肺癌组织中lncRNA LIMT的表达水平显著低于配对癌旁组织（P＜0.05）;细胞转染实验结果显示:转染pEGFP-C1-LIMT后A549细胞中lncRNA LIMT的表达水平显著高于转染空载质粒（P＜0.001）,转染siRNA-LIMT后A549细胞中lncRNA LIMT的表达水平显著低于转染对照siRNA-NC（P＜0.01）;CCK-8和流式细胞术实验结果显示:过表达lncRNA LIMT显著抑制了肺癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡（P＜0.01）,敲减lncRNA LIMT显著促进了细胞增殖、抑制细胞凋亡（P＜0.01）;Western blotting结果显示:lncRNA LIMT过表达的肺癌细胞中TGF-β1蛋白表达水平显著降低,Samd4蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,敲减lncRNA LIMT的肺癌细胞中TGF-β1蛋白表达显著升高,Samd4蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论:lncRNA LIMT在肺癌组织中表达下调,过表达lncRNA LIMT抑制肺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,敲减lncRNA LIMT促进肺癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,可能通过对TGF-β信号通路的调控来实现。     

PD-L1及TGF-β在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨在非小细胞肺癌(NSCLC)中PD-L1及TGF-β表达水平,及其与NSCLC临床病理参数和术后无病生存期(DFS)的关系.方法 收集81例NSCLC标本,采用免疫组化方法检测术后肿瘤组织中PD-L1、PD-1、Foxp3+和TGF-β蛋白的表达水平.结果 81例患者中PD-L1阳性表达为46例(56.8%),阴性表达35例(43.2%).TGF-β阳性36例(44.4%),阴性45例(55.6%).PD-1阳性33例(40.7%),阴性48例(59.3%);Foxp3+阳性44例(54.3%),阴性37例(45.7%).NSCLC中PD-L1蛋白表达与各临床病理参数无明显相关性.单因素分析发现T分期、TGF-β表达、PD-L1表达影响.SCLC术后DFS,具有统计学差异(P<0.05),多因素分析发现T分期、TGF-β表达、PD-L1表达是影响NSCLC术后DFS的独立因素(P<0.05).PD-L1阳性表达组术后DFS为(21.000±1.429)个月,阴性表达组为(14.500±1.615)个月,两组有统计学差异(χ2=6.930,P=0.008).TGF-β阳性组PFS为(14.500±0.813)个月,阴性组为(21.000±1.639)个月,两组有统计学差异(χ2=8.71,P=0.003).结论 非小细胞肺癌中PD-L1及TGF-β蛋白是预测NSCLC术后DFS的重要指标,且PD-L1表达越高预示术后DFS越长,而TGF-β则表达越高,预示术后DFS越短.     

辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响

目的观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响。方法以MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞增殖、细胞周期相和细胞凋亡、CDK2和CDK4 mRNA表达、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达的影响。结果4、8、16μmol/LOP作用MCF-7乳腺癌细胞72h时,细胞增殖率分别为107.31%、168.06%、62.00%,G0/G1期细胞分别为(52.46±6.67)%、(50.19±7.39)%、(67.31±5.47)%,对照组(55.27±7.53)%,细胞凋亡率分别为(4.84±1.12)%、(6.48±1.36)%、(19.26±3.57)%,对照组(5.56±1.125)%,16μmol/LOP减少了细胞中CDK2、CDK4、Cyclin D1 mRNA及Cyclin D1的表达。结论4、8μmol/LOP促进MCF-7乳腺癌细胞增殖,16μmol/LOP则抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,这可能与OP影响细胞中CDK2、CDK4、Cyc-lin D1 mRNA及Cyclin D1表达有关。     

CTEN通过TGF-β1促进非小细胞肺癌细胞紫杉醇耐药的作用及机制研究

目的:探讨CTEN通过TGF-β1促进非小细胞肺癌（NSCLC）细胞紫杉醇耐药的作用和分子机制。方法:采用逐步增加剂量间歇作用的方法诱导非小细胞肺癌紫杉醇耐药细胞系并命名为A549/R,采用定量PCR和Western blotting检测耐药细胞和亲本细胞中CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白的表达,应用Lipofectamine 2000分别将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN及其对照质粒pcmv转染至非小细胞肺癌A549细胞,分别为高表达组和对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的变化;MTT法检测A549细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000分别将CTEN干扰质粒siCTEN及其对照siNC转染至紫杉醇耐药细胞系A549/R细胞,分别为干扰组和对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的变化;MTT法检测A549/R细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000分别将TGF-β1干扰质粒siTGF-β1及其对照质粒siNC转染至非小细胞肺癌A549细胞,分别为干扰组和对照组,分别检测两组细胞中TGF-β1 mRNA及蛋白水平的表达情况,然后再分别用Lipofectamine 2000将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN转染入两组细胞,MTT法检测A549细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。结果:成功构建在5 μg/mL紫杉醇中稳定生长的非小细胞肺癌耐药细胞系A549/R。定量PCR和Western blotting显示,CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白在紫杉醇耐药细胞系A549/R中的表达明显高于在其亲本细胞系A549中的表达;与对照组相比,高表达CTEN组的A549细胞中TGF-β1表达上升,细胞对紫杉醇的敏感性降低,细胞增殖增强;与对照组相比,低表达CTEN组的A549/R细胞中TGF-β1表达降低,细胞对紫杉醇的敏感性升高,细胞增殖减弱;在A549细胞中低表达TGF-β1后再过表达CTEN,其促进紫杉醇耐药及细胞增殖的作用也明显减弱。结论:CTEN具有促进非小细胞肺癌A549的紫杉醇耐药,促进细胞增殖的作用,其发生机制可能与上调TGF-β1的表达有关。