三七及三七花总皂苷对斑马鱼模型促血管新生作用的研究

目的：观察三七及三七花总皂苷对斑马鱼模型促血管新生作用的影响。方法：选择正常健康转基因斑马鱼及内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（VRI）诱导血管损伤转基因斑马鱼两种模型,分别予25、50、100μg/ml的三七（根）总皂苷（PNS）和三七花总皂苷（SanqiF）干预处理,观察两者在不同浓度下对斑马鱼肠下静脉血管（SIVs）和节问血管（ISVs）生长的影响。结果：在正常健康转基因斑马鱼模型上,SanqiF比PNS拥有更为优势的促血管新生的效果,前者出现了明显的SIVs区域出芽现象,并呈浓度依赖性;在VRI损伤模型中,三七花总皂苷也展示了更为有效的保护和恢复ISVs和SIVs血管的效果。结论：在斑马鱼模型上,三七花总皂苷和三七（根）总皂苷均有促血管新生和保护血管的效果,三七花总皂苷效果更为明显。     

三七总皂苷对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞转化生长因子-β、血管内皮生长因子表达的影响

目的观察三七总皂苷对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞的凋亡和转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,以期揭示三七总皂苷发挥脑保护作用的分子机制。方法原代培养大鼠脑微血管内皮细胞,采用氧糖剥夺法制备拟缺血损伤模型,分为正常组、模型组、三七总皂苷组,流式细胞术检测细胞凋亡情况、酶联免疫吸附法检测细胞TGF-β1,VEGF-B水平、Western blotting法检测细胞TGF-β蛋白的表达水平。结果模型组细胞凋亡率与正常组相比显著性升高（P<0.01）;与模型组相比,三七总皂苷组细胞凋亡率明显下降（P<0.01）;与正常组相比,模型组细胞上清液中TGF-β1含量明显增多（P<0.05）;与正常组相比,模型组细胞上清液中VEGF-B含量显著性增多（P<0.01）;与模型组相比,三七总皂苷组中细胞上清液中VEGF-B含量明显增多（P>0.05）;正常组内皮细胞TGF-β表达量较少,造模后,TGF-β表达显著增加（P<0.05）,三七总皂苷能够下调TGF-β蛋白的表达。结论三七总皂苷可能通过抑制内皮细胞的凋亡,保持内皮细胞的完整性,上调VEGF表达,促进缺氧条件下血管的新生,这可能是三七总皂苷脑保护的机制之一。     

穿山龙总皂苷对CIA大鼠滑膜血管新生的作用

目的:探讨穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜血管新生及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的作用.方法:42只Wistar大鼠随机分为7组:正常对照组(A组)、CIA模型组(B组)、雷公藤组(C组)、穿山龙总皂苷高剂量组(D组)、穿山龙总皂苷中剂量组(E组)、穿山龙总皂苷低剂量组(F组)和薯蓣皂苷元组(G组),每组6只大鼠.B-G组大鼠均建立CIA大鼠模型,待模型成功建立后,C-G组大鼠分别给予相应的药物灌胃,连续21d.采用免疫组织化学染色法检测关节滑膜的微血管密度(MVD)和VEGF的表达.结果:CIA模型组大鼠滑膜MVD和VEGF的表达显著高于正常对照组(P＜0.01);C-G组大鼠滑膜MVD和VEGF的表达明显低于模型组(P＜0.01),且各治疗组间比较无显著差异(P＞0.05).结论:穿山龙总皂苷可能通过降低关节滑膜VEGF的表达发挥抑制滑膜血管新生的作用.     

三七总皂苷对糖尿病大鼠血管内皮功能的影响

目的观察三七总皂苷对糖尿病大鼠血管内皮功能失调的干预作用。方法 40只雌性SD大鼠随机分为4组,每组10只:正常组、模型组、三七总皂苷低、高剂量组。采用链脲佐菌素（STZ）诱发大鼠糖尿病模型,观察三七总皂苷对糖尿病大鼠体质量、空腹血糖、血清一氧化氮（NO）、内皮素（ET）水平和胸主动脉舒张功能的影响。结果与模型组比较,三七总皂苷组大鼠体质量和血糖差异无统计学意义（P>0.05）,血清NO水平明显升高（P<0.05）,血清ET水平则明显下降（P<0.05或P<0.01）,胸主动脉对(10^-7～10^-5)mol/L累积剂量氯化乙酰胆碱（Ach）的舒张反应百分率明显提高（P<0.05或P<0.01）。结论三七总皂苷对糖尿病大鼠血管内皮功能具有保护作用。     

三七总皂苷对脑缺血大鼠神经血管单元的影响

目的观察三七总皂苷对脑缺血再灌注后大鼠神经血管单元(NVU)的影响,进一步探讨三七总皂苷在脑缺血中作用特点。方法 Wistar大鼠60只随机分为对照组(20只),假手术组(20只)和三七总皂苷组(20只),每个组又按再灌注后24h、7d分为2个亚组,每个亚组大鼠10只。制作右大脑中动脉阻断(MCAO)再灌注模型后,三七总皂苷组大鼠立即腹腔注射三七总皂苷,以后每日1次直至相应时间点,对照组在相同时间内腹腔注射同体积的生理盐水。采用Longa法进行神经功能缺损评分,免疫组织化学染色法检测层黏连蛋白(Laminin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核抗原(NeuN)蛋白表达。结果再灌注后24h,三七总皂苷组和对照组大鼠神经功能缺损均比术后2h加重,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。再灌注后7d,三七总皂苷组和对照组大鼠神经功能缺损评分均有改善,但三七总皂苷组大鼠神经功能缺损评分改善比对照组明显,差异有统计学意义(P<0.05)。再灌注后24h,三七总皂苷组和对照组均有NeuN、GFAP和Laminin蛋白表达,三七总皂苷组比对照组增多,但两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。再灌注后7d,对照组NeuN、GFAP和Laminin蛋白的表达增多,三七总皂苷组明显增多,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);假手术组NeuN、GFAP和Laminin蛋白表达无明显变化。结论三七总皂苷促进脑缺血后NVU组分神经元、胶质细胞和微血管的修复,在脑梗死中具有多靶点、多方位作用特点。     

三七总皂苷抗大鼠心肌肥大作用

目的研究三七总皂苷(PNS)对体外培养大鼠心肌细胞肥大及在体大鼠心肌肥大的影响。方法体外培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素(Ang)刺激制备心肌细胞肥大模型,分别采用Lowry法、3H-亮氨酸掺入法和激光共聚焦显微镜测定细胞内蛋白质的量、蛋白质合成速率和游离钙荧光强度。ip去甲肾上腺素法诱导大鼠心肌肥大,计算心脏指数和左心室指数。结果与模型组相比,0.05、0.10、0.15g/LPNS可显著降低细胞内蛋白质的量和3H-亮氨酸掺入量,减弱细胞内Ca2 荧光信号。25、50、75mg/kgPNS可显著降低心肌肥大大鼠左心室指数。结论PNS对Ang诱导的大鼠心肌细胞肥大和去甲肾上腺素诱导的在体大鼠心肌肥大均有明显的抑制作用。     

三七总皂苷对大鼠肝移植排斥反应的影响及相关机制

目的探讨三七总皂苷（PNS）对Kupffer细胞（KCs）功能状态、肝移植术后免疫环境的影响,及其相关机制。方法分离大鼠KCs,吞墨台盼蓝鉴定KCs活性,细胞实验分LPS（-）组、LPS（+）+ PNS（0 μmol）组、LPS（+）+ PNS（10 μmol）组,、LPS（+）+PNS（20 μmol）组,Western blot、ELISA检测各组细胞及上清液炎症因子和氧化应激产物的表达,免疫荧光检测KCs CD206的表达,Western blot 检测NF-κB和Keap1-Nrf2-ARE通路蛋白表达。建立大鼠移植模型,分为SHAM组、LT（PBS处理）组和PNS（200 mg/kg）组,术后检测各组肝功能、炎症因子、肝组织病例、凋亡情况,并观察大鼠生存时间。结果随着PNS浓度的增加,KCs分泌促炎因子和氧化应激产物MDA水平逐渐降低,明显低于PNS（0 μmol）组,而抗炎因子IL-10以及抗氧化应激产物SOD水平逐渐升高,明显高于PNS（0 μmol）组,且差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫荧光示PNS提高了KCs表型CD206的表达。同时,PNS减少了KCs IRAK4、p-IKKα、p-IκBα、p-p65、Keap1蛋白表达,而Nrf2、ARE蛋白表达水平逐渐升高,且与低PNS浓度组比具有统计学上的差异（P<0.05）。与LT组比,PNS组的大鼠肝移植后肝功能明显改善,促炎因子表达水平降低,肝细胞凋亡减少,肝组织急性排斥病理改变减轻,大鼠生存时间明显增高（P<0.05）。另外,大鼠注射GdCl3封闭KCs功能发现,PNS组出现严重的急性排斥反应,与LT组比较无统计学上差异（P>0.05）。结论PNS能够通过抑制NF-κB和Keap1-Nrf2-ARE通路减少活化KCs的炎症和氧化应激反应,促进KCs向免疫耐受的M2型极化,提高大鼠移植术后的生存时间。     

三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖及JNK磷酸化的影响

  【目的】 研究发现,三七总皂苷(TPNS) 具有抑制和促进细胞增殖的双向调节作用,但是具体的作用机制尚不明确&#65377;本研究旨在观察TPNS对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及经由何种信号通路介导&#65377;【方法】 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和蛋白印迹(Western blot)法观察了体外培养的大鼠VSMC在不同浓度及一定浓度不同作用时间TPNS作用下,VSMC增殖活性的变化及c*9鄄Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化的变化;并用DAPI染细胞核,观察TPNS作用后核形态的变化&#65377; 【结果】 MTT法观察到:TPNS的浓度为0.5 g/L,1.0 g/L,1.5 g/L时,无论是处于静息状态或50 mL/L血清刺激下,VSMC的代谢活性均增高;TPNS的浓度为3.0 g/L时,静息培养的VSMC的代谢活性没有明显的变化,而50 mL/L血清刺激的VSMC的代谢活性仍增高;TPNS的浓度为6.0 g/L,12.0 g/L时,静息培养或50 mL/L血清刺激下的VSMC的代谢活性均降低,并随着浓度的增大,代谢活性降低越明显&#65377;同时,Western blot 结果显示:TPNS能快速的激活JNK1/2,并呈时间和浓度依赖性&#65377;当TPNS的浓度为0.5 g/L时,即可引起JNK的磷酸化,并随着浓度的增大,磷酸化作用增强;当TPNS的浓度为1.5 g/L时,作用5 min,JNK呈现最大程度的激活,随后逐渐减弱&#65377; DAPI染核观察到,6.0 g/L TPNS作用48 h后,VSMC出现了核固缩&#65380;核碎片等细胞凋亡的特征&#65377;【结论】 较低浓度的TPNS可促进血管平滑肌细胞的增殖,而较高浓度的TPNS可抑制其增殖,JNK1/2磷酸化可能是引起细胞增殖受到抑制的机制之一&#65377;     

美托洛尔对大鼠缺血心肌血管新生及血管内皮生长因子表达的影响

目的: 观察美托洛尔对大鼠缺血心肌血管新生和缺血心肌血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法: 运用大鼠心肌缺血模型,随机分为给药组和模型组,并记录心率.用免疫组织化学方法检测缺血心肌中内皮细胞数、毛细血管密度、VEGF蛋白质的表达,用RT-PCR方法检测VEGF mRNA的表达.结果: (1)与模型组比较,给药组大鼠缺血心肌毛细血管密度和内皮细胞数均明显增加(P＜0.01),其心率明显降低(P＜0.01);(2)与模型组比较,给药组大鼠缺血心肌VEGF蛋白质及mRNA的表达均明显增加(P＜0.01).结论: (1)美托洛尔能促进大鼠缺血心肌的血管新生;(2)美托洛尔减慢心肌缺血大鼠的心率和上调VEGF的表达可能是其促大鼠缺血心肌血管新生的机制之一.     

比索洛尔和卡维地洛对大鼠缺血心肌血管新生的影响

目的:观察比索洛尔和卡维地洛是否具有促大鼠缺血心肌血管新生的作用.方法:运用大鼠心肌缺血模型,分别给予比索洛尔和卡维地洛灌胃并记录心率.用免疫组织化学方法检测大鼠缺血心肌中毛细血管密度(CD)和内皮细胞(EC)的表达.结果:与模型组比较,比索洛尔组大鼠缺血心肌CD和EC数均明显增加(P＜0.01),其心率明显降低(P＜0.01);与模型组比较,卡维地洛组大鼠缺血心肌CD、EC数以及心率均无显著性差异.结论:比索洛尔能促进大鼠缺血心肌的血管新生其减慢心率可能是比索洛尔促进大鼠缺血心肌血管新生的机制之一.     

血管新生相关因子mRNA在前列腺增生大鼠组织中的表达

目的探讨血管生长相关因子与大鼠良性前列腺增生（BPH）的相关性。方法将成年SD大鼠随机分为正常组、BPH模型组，每组10只，采用去势后皮下注射丙酸睾酮法建立大鼠BPH模型，30d后观察2组大鼠血管内皮生长因子（vEGF）、表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）和转化生长因子（TGF-β1）mRNA表达情况。结果大鼠前列腺指数BPH模型组显著大于正常组（P〈0.05）；光镜显示BPH模型组前列腺上皮细胞增生明显，与正常组比较，vEGF、EGF、bFGF的mRNA表达显著增多，TGF-β1，表达显著减少（P〈0.05）。结论vEGF、EGF、bFGF在大鼠的BPH组织中表达上调和TGF-β1表达下调，它们可能通过影响前列腺组织中血管内皮细胞增殖，参与BPH的发生发展过程，并促进其血管新生。     

STZ诱导糖尿病大鼠心肌VEGF表达及血管密度变化对缺血再灌注损伤的影响

[目的]测定不同周期STZ诱导的糖尿病对心肌缺血，再灌注（I／R）损伤的影响及其与心肌VEGF表达及冠脉血管密度变化的关系。[方法]阻断和开放左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌I／R模型。分别用，TTC染色、免疫印迹分析及Morphometric分析方法，测定大鼠心肌I／R后梗死面积、VEGF表达及冠脉血管密度。[结果]STZ处理后2周，糖尿病组（2WD）心肌梗死面积比相应周期对照组（2WC）明显缩小；STZ处理后16周（16WD），梗死面积比相应对照组（16WC）增加；Morphometric分析显示，心脏的冠脉血管密度在2WD组比2WC组显著增加（28％），而16WD组比16WC组明显减少（33％）；血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达在2WD组比2WC组显著增加（30％），但在16WD组大鼠VEGF表达比16WC组明显减少。[结论]STZ诱导糖尿病早期、晚期对心肌I／R损伤呈现相反的作用。这可能是由于早、晚期糖尿病相反的心肌VEGF表达及冠脉血管密度改变而引起的。     

STZ诱导糖尿病大鼠心肌VEGF表达及血管密度变化对缺血再灌注损伤的影响

 [目的]测定不同周期STZ诱导的糖尿病对心肌缺血，再灌注（I／R）损伤的影响及其与心肌VEGF表达及冠脉血管密度变化的关系。[方法]阻断和开放左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌I／R模型。分别用，TTC染色、免疫印迹分析及Morphometric分析方法，测定大鼠心肌I／R后梗死面积、VEGF表达及冠脉血管密度。[结果]STZ处理后2周，糖尿病组（2WD）心肌梗死面积比相应周期对照组（2WC）明显缩小；STZ处理后16周（16WD），梗死面积比相应对照组（16WC）增加；Morphometric分析显示，心脏的冠脉血管密度在2WD组比2WC组显著增加（28％），而16WD组比16WC组明显减少（33％）；血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达在2WD组比2WC组显著增加（30％），但在16WD组大鼠VEGF表达比16WC组明显减少。[结论]STZ诱导糖尿病早期、晚期对心肌I／R损伤呈现相反的作用。这可能是由于早、晚期糖尿病相反的心肌VEGF表达及冠脉血管密度改变而引起的。     

25 Hz和50 Hz电刺激对大鼠缺血心肌毛细血管新生的影响

目的: 观察10 Hz,15 Hz,25 Hz,50 Hz频率的阈下电刺激对缺血心肌血管新生的影响,寻找产生缺血心肌血管新生的有效阈下电刺激频率.方法: 将30只心肌缺血模型大鼠随机分为阈下电刺激频率10 Hz,15 Hz,25 Hz,50 Hz组与对照组,用免疫组织化学法检测缺血心肌中毛细血管内皮细胞数、毛细血管密度.结果: (1)与对照组比较,25 Hz组、50 Hz组大鼠缺血心肌中毛细血管内皮细胞数、毛细血管密度显著增加(P＜0.01);(2) 与对照组比较,10 Hz组、15 Hz组大鼠缺血心肌中毛细血管内皮细胞数、毛细血管密度差异无显著性.结论: 25 Hz,50 Hz频率的阈下电刺激可促进大鼠缺血心肌中毛细血管的新生.     

Effects of ElectrOacupuncture on Expressions of Angiogenesis Factors and Anti-angiogenesis Factors in Brain of Expximental Cerebral Ischemic Rats after Reperfusion

Objective:To explore the mechanism of electroacupuneture(EA)in improving ischemic stroke.Methods:The Wistar rat model of focal cerebral ischemia-reperfusion was prepared by the thread embolism method.The rats were randomly divided into a normal group,a model group,and an EA group.EA Was given at bilateral"Hegu"(LI 4)in rats of the EA group.Expression of the vascular endothelial growth factor(VEGF)mRNA was detected with hytbridization in situ,and expressions of the angiogenin-1(Ang-1)and endostatin proteins were detected with the immunohistochemical method.Results:As compared with the normal group,the expressions of VEGF mRNA,Ang-1 protein and endostatin protein significantly increased in the model group(all P＜0.05);and when compared with the model group,the EA group showed even more significant increase in expressions of the VEGF mRNA and Ang-1 protein(both P＜0.05),but with an obvious decline in the increase of expression of endosmtin protein(P＜0.05).Conclusions:EA Can promote angiogenesis in brain of experimental cerebral ischemic rats after reperfusion probably through up-regulating the expression of angiogenesis factors and down-regulating the expression of anti-angiogenesis factors.     

造血生长因子对缺血心肌的保护作用

造血生长因子是促进骨髓造血细胞分化增殖和定向成熟的一类细胞因子的总称。研究发现以促红细胞生成素、血小板生长素、粒细胞集落刺激因子和血管内皮生长因子为代表的造血生长因子,除了传统地作用于造血细胞外,还具有保护心肌的作用,它们能对抗细胞凋亡,促进血管生长和动员干细胞修复损伤组织,从而缩小梗死面积,减轻心室重构,改善心功能。     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠心肌间质的保护作用

目的：探讨缺血后处理对缺血再灌注大鼠心肌间质的保护作用及与心功能的关系。方法：24只SD大鼠随机分为3组,假手术组（SC组）、缺血再灌注组（I/R组）和缺血后处理组（IPTC组）。观察各组心肌羟脯氨酸含量和胶原纤维含量,记录左室血流动力学变化、测定血浆中MDA和SOD浓度改变及观察心肌超微结构变化。结果：IPTC组心肌羟脯氨酸含量、胶原纤维含量、左室舒缩功能明显高于I/R组,心脏超微结构损伤明显减轻。同时,血浆SOD活力增强而MDA含量降低。结论：IPTC对I/R大鼠心肌间质有明显的保护作用,且与心功能的保护相关。其机制可能是通过清除体内自由基、增强机体的抗氧化能力、减少心肌胶原的降解,维持左室结构而起到改善心功能的作用。