高强度聚焦超声经线粒体途径诱导在体子宫肌瘤细胞发生凋亡的机制研究

目的:研究高强度聚焦超声(HIFU)治疗在体子宫肌瘤后肌瘤组织的细胞形态学、肌瘤细胞凋亡率及肌瘤组织中凋亡蛋白表达,从细胞凋亡角度探讨HIFU治疗在体子宫肌瘤有效性的机制。方法:取HIFU治疗后靶区的子宫肌瘤组织、靶区周边肌瘤组织和未治疗组的肌瘤组织标本。光镜下和电镜下观察3组标本的细胞形态学,Annexin V-FITC/PI流式细胞学检测细胞凋亡率,Western blot法检测3组肌瘤组织中Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达。结果:靶区组织出现凝固性坏死,靶区周边组织见明显凋亡征象,未治疗组未出现病理改变。靶区周边组肌瘤细胞的凋亡率较靶区组和未治疗增加,差异有统计学意义(P0.05)。靶区周边肌瘤组织中Bax和Caspase-3蛋白表达量较靶区组和未治疗组增加,差异有统计学意义(P0.05)。未治疗组肌瘤组织中Bcl-2蛋白表达量较靶区组和靶区周边组增加,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:HIFU消融在体子宫肌瘤后靶区组织出现了凝固性坏死,同时诱导靶区周边肌瘤细胞的凋亡,其机制可能是上调Bax和Caspase-3蛋白高表达,通过线粒体介导的内源性信号通路启动细胞的凋亡。     

子宫肌瘤及子宫平滑肌PA/PAI差异表达与腹腔镜子宫动脉阻断术治疗子宫肌瘤相关性的研究

目的:观察纤溶酶原激活因子及纤溶酶原激活物抑制因子(PA/PAI)在子宫肌瘤及子宫平滑肌组织及原代细胞中表达的差异,为腹腔镜子宫动脉阻断术治疗子宫肌瘤提供理论依据。方法:组织学:采用荧光定量PCR检测子宫肌瘤及子宫平滑肌组织中组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活因子(u-PA)以及纤溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)的表达;用免疫组织化学方法检测3种蛋白的表达;细胞学:选取8例子宫肌瘤患者,分别培养子宫肌瘤及子宫平滑肌细胞并传代,应用实时定量PCR及免疫细胞检测u-PA及PAI-1。结果:组织学:(1)肌瘤组织中u-PA mRNA相对表达为(1.34±2.18)%,显著低于平滑肌组织的(2.84±2.97)%,差异有统计学意义(P0.05);t-PAmRNA在肌瘤组织中表达为(1.46±1.64)%也低于平滑肌组织的(1.65±3.08)%,但差异无统计学意义(P0.05)。PAI-1 mRNA在肌瘤组织中的表达为(2.67±1.82)%,显著高于平滑肌组织的(1.27±1.99)%,差异有统计学意义(P0.05);(2)肌瘤组织u-PA蛋白表达显著低于平滑肌组织,差异有统计学意义(P0.05);肌瘤组织PAI-1蛋白表达显著高于平滑肌组织(P0.01);两种组织t-PA蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。细胞学:(1)肌瘤细胞中u-PA mRNA相对表达为0.123±0.189,显著低于平滑肌细胞的0.331±0.306,差异有统计学意义(P0.05);PAI-1 mRNA在肌瘤细胞的表达为0.091±0.036,显著高于平滑肌细胞的0.016±0.020,差异有统计学意义(P0.05);(2)肌瘤细胞u-PA蛋白表达8.805±1.645显著低于平滑肌细胞的22.173±4.381,差异有显著的统计学意义(P0.05);肌瘤细胞PAI-1蛋白表达44.765±1.090显著高于平滑肌细胞35.928±5.351(P0.05)。结论:PA/PAI系统在子宫肌瘤及平滑肌细胞中表达存在差异,并与组织中的差异基本一致,提示该系统差异表达机制可以为腹腔镜子宫动脉阻断术治疗子宫肌瘤提供理论依据。     

17β雌二醇对子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层交界区平滑肌细胞内游离Ca2+浓度的调节作用及机制研究

目的：探讨17β雌二醇（17β-E2）对子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层交界区（EMI）平滑肌细胞内游离Ca2+浓度（[Ca2+]i）的调节作用及可能机制。方法选择2011年9月至2012年12月在首都医科大学附属北京妇产医院妇科微创中心因子宫腺肌病行子宫全切除术的患者28例为腺肌病组,选择同期因子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ行子宫全切除术者31例为对照组,对两组患者的EMI平滑肌细胞进行分离及原代培养。应用Ca2+荧光探针Fluo-4/AM负载平滑肌细胞,采用细胞外钙阻断实验、细胞内钙释放阻断实验、细胞膜钙通道阻断实验、细胞膜钙激活钾通道阻断实验阻断引起[Ca2+]i变化的各个环节,利用激光共聚焦显微镜观察17β-E2诱导后的两组患者EMI平滑肌细胞内[Ca2+]i的变化,其变化程度以ΔF[Ca2+]i表示。结果（1）在常规有Ca2+培养基中,17β-E2诱导后腺肌病组和对照组EMI平滑肌细胞内Ca2+荧光强度均明显高于其17β-E2诱导前,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为384±26,对照组ΔF[Ca2+]i为235±20,两组比较,差异有统计学意义（P=0.001）;细胞外钙阻断实验显示,细胞外无Ca2+时,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为207±17,对照组ΔF[Ca2+]i为221±19,两组比较,差异无统计学意义（P=0.731）。腺肌病组ΔF[Ca2+]i在细胞外有Ca2+时明显高于无Ca2+时,差异有统计学意义（P=0.000）;而对照组两者比较,差异无统计学意义（P=0.060）。（2）细胞内钙释放阻断实验显示,阻断肌质网钙库上三磷酸肌醇（IP3）敏感的钙释放通道、肌质网利阿诺定（Ryanodine）受体（RyR）钙释放通道、肌质网钙泵释放后,腺肌病组和对照组ΔF[Ca2+]i分别与其阻断前相比均明显降低（P<0.05）,且腺肌病组ΔF[Ca2+]i均明显高于对照组（P<0.05）。（3）细胞膜钙通道阻断实验显示,阻断L-型钙通道后,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为211±19,对照组为203±16,两组比较,差异无统计学意义（P=0.064）;腺肌病组ΔF[Ca2+]i明显低于其阻断前（ΔF[Ca2+]i为384±28;P=0.001）;而对照组与其处理前（ΔF[Ca2+]i为234±22）比较,差异则无统计学意义（P=0.141）。（4）细胞膜钙激活钾通道阻断实验显示,阻断细胞膜钙激活钾通道后,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为357±24,对照组为209±19,两组比较,差异有统计学意义（P=0.000）;腺肌病组和对照组ΔF[Ca2+]i分别与其处理前（腺肌病组ΔF[Ca2+]i为363±21,对照组为237±20）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论17β-E2通过内源性钙库释放Ca2+和细胞膜L-型钙通道介导的Ca2+内流导致子宫腺肌病患者EMI平滑肌细胞内游离[Ca2+]i异常增高,[Ca2+]i调节异常导致的子宫收缩功能障碍可能参与子宫腺肌病的发生、发展。     

孕激素受体和线粒体porin蛋白在子宫肌瘤组织中的表达

目的：检测新型孕激素受体M（PR-M）、PR-A、PR-B和线粒体porin蛋白在子宫肌瘤组织及肌瘤旁正常子宫平滑肌组织中的表达,并探讨3种孕激素受体与porin表达的相关性。方法：采用RT-PCR、Western blot法检测PR.M、PR_A、PR.B和porin在20例子宫肌瘤组织和肌瘤旁正常子宫平滑肌组织中的表达。结果：子宫肌瘤组织中PR-M、PR-A、PR-B和porin的表达水平均显著高于正常子宫平滑肌组织（P〈0.001）。子宫肌瘤组织中PR-M与porin表达呈正相关（mRNA：r=0.562,P=0.010;蛋白：r=0.467,P=0.038）,PR-A、PR-B与porin表达无关（P〉0.05）。正常子宫平滑肌组织中PR.M、PR.A、PR-B与porin均无相关性（P〉0.05）。结论：子宫肌瘤的发生和发展可能与核外PR.M的作用有关,孕激素可能通过基因组和非基因组两种途径参与子宫肌瘤的形成和生长。     

间隙连接基因connexin43及其蛋白、雌、孕激素受体在子宫平滑肌瘤中的表达

研究细胞间隙连接基因connexin (cx) 43及其蛋白、雌激素受体(ER)、孕激素受体 (PR)在子宫平滑肌瘤中的表达 ,从转录及翻译水平探讨cx4 3基因及其蛋白、ER、PR在子宫平滑肌瘤发生中的关系。方法 :应用核酸原位杂交技术和SP免疫组织化学法 ,研究 37份子宫平滑肌瘤、2 0份正常子宫平滑肌组织中cx4 3mRNA及其蛋白、ER、PR的表达规律。结果 :子宫平滑肌瘤中cx4 3mRNA及其蛋白的表达明显高于子宫平滑肌组织中的水平 (P <0 0 5)。ER、PR在子宫肌瘤中的表达与在子宫平滑肌组织中的表达差异有显著性 (P <0 0 5)。结论 :cx4 3mRNA及其蛋白在子宫平滑肌瘤中的过度表达 ,提示对ER、PR有较强的反应性 ,对子宫平滑肌瘤分子机制和早期标志的研究有重要意义。     

新生早产大鼠高氧暴露肺组织细胞色素C变化及其与肺细胞凋亡的关系

目的研究新生早产大鼠吸入高浓度氧(以下简称高氧)后肺组织细胞内细胞色素C(cytochrome C,Cytc)表达及分布的变化及其与肺细胞凋亡的关系,探讨Cytc变化在高氧肺损伤中的作用。方法将新生早产SD大鼠随机分为高氧组和空气组,高氧组暴露于浓度为85%左右的氧气中建立高氧肺损伤模型。在生后1、4、7、10、14d各组取材,分别用RT-PCR技术检测肺组织Cytc和caspase-9 mRNA表达,用免疫组化法检测Cytc蛋白分布,脱氧核糖核酸转移酶介导的X-dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotid transferase-mediated X-dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测肺细胞凋亡情况。结果生后第4天高氧组肺组织CytcmRNA水平为0.5739±0.0228,第7天为1.1000±0.1050,均高于空气组(分别为0.4001±0.0383和0.6330±0.0740)(P均<0.05);高氧组肺组织caspase-9 mRNA第4天为1.2975±0.0729,第7天为1.2012±0.0615,也分别高于空气组(分别为0.8428±0.0272和0.8086±0.0167)(P<0.05)。生后各时间点肺组织Cytc免疫组化平均灰度值和肺组织细胞凋亡阳性率均高于空气组(P均<0.01)。结论高氧暴露可致新生早产大鼠肺组织Cytc mRNA表达增加和Cytc分布变化,可能通过激活caspase-9进而导致肺细胞凋亡,从而导致高氧肺损伤。     

DR5、FADD在子宫肌瘤组织中的表达水平及意义

目的:探讨死亡受体5(DR5)、凋亡促进蛋白(FADD)在子宫肌瘤组织中的表达情况及临床意义。方法:选取2017年3月-2018年5月在本院进行子宫肌瘤切除术的72例患者作为研究对象,将手术切除的子宫肌瘤组织为肌瘤组织组,距离肿瘤边缘5 cm以外的瘤旁组织为瘤旁组织组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测DR5和FADD的表达量;免疫组织化学法检测DR5和FADD的表达情况;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)统计细胞凋亡的情况,并分析DR5和FADD与细胞凋亡及两者的相关性。结果:肌瘤组织组DR5 m RNA、蛋白阳性表达率均高于瘤旁组织组(P<0.05),FADD mRNA、蛋白阳性表达率均低于瘤旁组织组(P<0.05);肌瘤组织组凋亡指数(AI)低于瘤旁组织组,增殖指数(PI)高于瘤旁组织组(P<0.05);在子宫肌瘤组织中,DR5的表达与AI呈负相关(P<0.05),与PI呈正相关(P<0.05),FADD的表达与AI呈正相关(P<0.05),与PI呈负相关(P<0.05);DR5与FADD呈负相关(P<0.05)。结论:在子宫肌瘤组织中,DR5高表达,FADD低表达,且两者均与AI、PI相关性明显,可能共同参与子宫肌瘤的发生发展。     

DR5、FADD在子宫肌瘤组织中的表达水平及意义

目的:探讨死亡受体5(DR5)、凋亡促进蛋白(FADD)在子宫肌瘤组织中的表达情况及临床意义。方法:选取2017年3月-2018年5月在本院进行子宫肌瘤切除术的72例患者作为研究对象,将手术切除的子宫肌瘤组织为肌瘤组织组,距离肿瘤边缘5 cm以外的瘤旁组织为瘤旁组织组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测DR5和FADD的表达量;免疫组织化学法检测DR5和FADD的表达情况;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)统计细胞凋亡的情况,并分析DR5和FADD与细胞凋亡及两者的相关性。结果:肌瘤组织组DR5 m RNA、蛋白阳性表达率均高于瘤旁组织组(P<0.05),FADD mRNA、蛋白阳性表达率均低于瘤旁组织组(P<0.05);肌瘤组织组凋亡指数(AI)低于瘤旁组织组,增殖指数(PI)高于瘤旁组织组(P<0.05);在子宫肌瘤组织中,DR5的表达与AI呈负相关(P<0.05),与PI呈正相关(P<0.05),FADD的表达与AI呈正相关(P<0.05),与PI呈负相关(P<0.05);DR5与FADD呈负相关(P<0.05)。结论:在子宫肌瘤组织中,DR5高表达,FADD低表达,且两者均与AI、PI相关性明显,可能共同参与子宫肌瘤的发生发展。     

原纤维蛋白-1 mRNA和蛋白在子宫肌瘤组织中的表达

目的：探讨原纤维蛋白-1(fibrillin-1,FBN-1)mRNA和蛋白在子宫肌瘤组织中的表达及其与月经周期的关系。方法：50份子宫肌瘤及同源正常子宫平滑肌组织标本在术中被采集。根据月经周期及子宫内膜组织病理学检查分为增生期、分泌期及萎缩期。采用实时荧光定量PCR、Western blot分析及免疫组织化学方法检测FBN-1 mRNA和蛋白的表达。结果：免疫组织化学染色显示FBN-1在子宫肌瘤及正常子宫平滑肌组织的细胞外基质中均有较丰富的表达。FBN-1 mRNA和蛋白在增生期和分泌期中的子宫肌瘤组织中的表达均明显高于同源正常子宫平滑肌组织(P＜0．01,P＜0．05；P＜0．01,P＜0．05),而在绝经期中的子宫平滑肌瘤及正常子宫平滑肌组织的表达无明显差异。结论：FBN-1可能与子宫肌瘤的发生机制有关,并可能受激素调节的影响。     

脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响及其信号的传导。方法:免疫细胞化学方法及RT-PCR法检测子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白及mRNA的表达,不同浓度脂联素(2.5,5,10,20μg/ml)作用子宫内膜癌细胞30min,Western blot检测AMPK磷酸化程度,不同浓度脂联素作用细胞48h及AMPK抑制剂(复合物C)预处理后脂联素再作用48h后,MTT试验及流式细胞仪检测不同处理组细胞的增殖及凋亡。结果:子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白呈棕黄色颗粒状表达,并可见AdipoR1/R2基因表达。除2.5μg/ml浓度外,其余浓度组脂联素均显著诱导AMPK磷酸化,不同浓度组AMPK活化差异有统计学意义(F=27.985,P0.01),脂联素以浓度依赖模式诱导子宫内膜癌细胞AMPK活化。脂联素以浓度依赖模式显著抑制子宫内膜癌细胞增殖(F=13.322,P0.01),诱导子宫内膜癌细胞凋亡(F=46.826,P0.01),复合物C可以阻断脂联素诱导的细胞增殖抑制及凋亡。结论:脂联素可能通过影响AMPK信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡。