促进抗原定点化学偶联的LTBC端修饰[英]

对许多侵袭粘膜表面的病原体而言,有效的疫苗必须能够诱导有效的粘膜免疫应答,为达到此目的,必须粘膜位置直接给药。然而,由于抗原吸收率过低等原因,许多经粘膜途径给予的抗原仅诱导低水平的免疫应答。为解决这一问题,可采用具有高度免疫原性的细菌肠毒素作为抗原载体。大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）可作为多种抗原的佐剂,但是LT全毒素的A亚单位具有毒性,因此仅能应用LT的B亚单位（LTB）作为抗原佐剂。然而对诱导有效的粘膜免疫而言,LTB是必须同抗原物理结合还是作为粘膜佐剂与抗原一同给予仍存在许多争议,本研究旨在回答这一问题。     

大肠杆菌LTB加痕量LT用作鼻腔接种流感疫苗的佐剂

本文讨论了大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)加痕量全毒素(LT)是否可作为鼻腔接种流感疫苗的有效佐剂.Balb/c小鼠鼻腔接种1.5μg流感血凝素(HA)灭活疫苗(以流感病毒明PR8株制备),分不加佐剂组、加2μg LTB组、加痕量LT组和同时加2μg LTB及痕量LT组(2～20ng),免疫后用ELISA方法检测小鼠的IgA和IgG抗体.结果发现,前三组诱导了临界水平的抗-HA IgG抗体应答,而最后一组诱导了较高水平的抗-HA IgG抗体应答.     

大肠杆菌不耐热肠毒素的粘膜免疫机理

大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴ）是由Ａ、Ｂ两种亚单位组成的ＡＢ５型蛋白，其中Ａ亚单位具有ＡＤＰ－核糖基化活性，Ｂ亚单位具有与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂结合的作用。它能引起人和猪等动物的腹泻。另外，它还是强有力的粘膜免疫原和粘膜免疫佐剂。了解其粘膜免疫机理，对于发展ＥＴＥＣ菌苗和粘膜免疫佐剂具有重要意义。本文分别从ＬＴ的粘膜免疫原性和佐剂效应两方面对其粘膜免疫机理作一讨论。     

大肠杆菌不耐热肠毒素点突变脱毒衍生物的粘膜免疫原性[英]

大肠杆菌不耐热肠毒素（LT-WT）是引起儿童感染与旅游者腹泻的主要因素之一。以往的研究证明,LT-WT具有很强的粘膜免疫原性,可诱生具有免疫保护作用的中和抗体,但由于毒素本身的毒性作用阻碍其成为一种有用的菌苗。为寻找一个既无毒性又具良好免疫原性的物质用以制备菌苗,作者对大肠杆菌LT-WT、LT的点突变脱毒衍生物K63（K63是LT第63位上的丝氨酸被替换为赖氨酸后形成的定点突变体,结构更稳定,抗胰酶作用更强）和重组LT B亚单位（rLT-B）3种抗原的免疫原性作了比较。作者将定量的3种抗原分别以鼻内（in）,口服     

用佐剂提高疫苗的效能

在目前研制和试验的新疫苗中,有些是由合成的、重组的或高度纯化的亚单位疫苗抗原组成的。亚单位疫苗仅含保护免疫所需的抗原,比全细胞来活疫苗或减毒活疫苗安全。然而,亚单位疫轩的纯化及减毒或来活疫苗相关的自身佐剂性免疫调节成分的缺乏常导致较弱的免疫原性。免疫佐剂能增强对疫苗的特异性免疫应答,用有效佐剂配制疫苗能提高亚单位抗原疫苗的效能。佐剂具有多种作用机理,应根据接种途径和所需对特定疫苗的免疫应答类型（抗体、细胞或粘膜免疫）选择应用。     

霍乱毒素B亚单位与流感疫苗鼻内合种可增强保护性抗体应答

最近,作者证明霍乱毒素B亚单位(CTB)用作流感病毒血凝素(HA)疫苗鼻内免疫的佐剂颇为理想.疫苗与CTB合用鼻内接种1次就可诱导抵御病毒攻击所需的高水平鼻内和血清抗病毒抗体.作者又探讨了流感病毒A/PR/8/34(PR-8)HA疫苗与CTB诱导保护性抗体水平所要的剂量、抗体应答持续时间、交叉保护性抗体程度以及CTB增加保护性抗体应答的机理.     

小鼠鼻腔免疫以大肠杆菌不耐热肠毒素非毒性突变体为佐剂的肺炎球菌多糖结合菌苗能抵抗侵袭性肺炎球菌感染

宿主抵御肺炎球菌感染很大程度上依赖由荚膜多糖特异性 Ig G抗体和补体参与的调理吞噬作用。用有效佐剂进行粘膜免疫除能诱导全身免疫应答外 ,还能诱生粘膜 Ig A抗体。大肠杆菌不耐热肠毒素 (LT)是一种研究较透彻的粘膜佐剂 ,作者以非毒性 LT突变体 LT- K6 3或 LT- R72 (两者的残留毒性很小 )为佐剂 ,用 1或 3型肺炎球菌荚膜多糖结合菌苗 (PNC)鼻腔 (in)免疫小鼠 ,研究其免疫原性。同时 ,以有毒力的同型肺炎球菌攻击来评估菌苗所产生的保护作用。　　作者将 6～ 8周远交系雌性 NMRI小鼠分成数组 (每组 8～ 1 0只 ) ,分别 in免疫或…     

小鼠对破伤风类毒素与重组霍乱毒素B亚单位鼻腔接种的免疫应答[英]

为将破伤风类毒素 (TT）的免疫接种方法由肌肉或皮下注射改为鼻内接种,作者检测了小鼠对铝吸附ΤΤ（aΤΤ）和未吸附TT（nTT）与重组霍乱毒素B亚单位（rCTB）鼻内接种的全身和粘膜免疫应答。作者选用7周龄雌性BALB/c小鼠为研究对象,一组小鼠分别鼻内接种加或不加rCTB的aTT,另一组小鼠则接受加或不加rCTB的nTT。研究显示,不管rCTB是否存在,鼻内接种0.SLf aTT均能诱导高水平的TT特异性血清IgG和中等水平的TT特异     

经皮免疫作为抗原及佐剂的细菌ADP核糖基化外毒素的效力

经皮接种疫苗是近年发展起来的一条新的免疫途径,具有能够诱导抗体应答而又不引起全身或局部毒性反应的优点。人们已将霍乱毒素（ＣＴ）作为佐剂与其他抗原一同接种,本文报告了以ＣＴ作为佐剂而诱生的对加强免疫的再次抗体应答、对同时接种抗原的粘膜抗体应答以及全身性保护作用的结果。 作者采用６～８周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,背部剃毛,４８小时后麻醉小鼠,将１００ｕｌ的ＣＴ、霍乱毒素Ｂ亚单位（ＣＴＢ）、ＣＴＡ、绿脓杆菌外毒素Ａ（ＥＴＡ）、白喉类毒素（ＤＴ）、破伤风毒素Ｃ片段（ｔｅｔＣ）、大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴ）等免…     

霍乱毒素的粘膜免疫佐剂效应机理

堆乱毒素（ＣＴ）具有较强的粘膜免疫原性和粘膜免疫佐剂应用，与不相关的可溶性蛋白抗原同时口服机免疫机体，能消除机体对这些共免疫蛋白的耐受性，能诱导机体产生针对ＣＴ和共免疫蛋白的长期免疫记忆。ＣＴ是目前研究得最深入的粘膜免疫佐剂，但其粘膜免疫佐剂效应机理尚未完全弄清。研究证实ＣＴ的作用包括：促进抗原递呈细胞的抗原递呈作用；选择性的诱导抗原特异性ＴＨ２细胞应答；促进抗原对Ｔ细胞的初激作用；抑制ＣＤ８＋Ｄ     

用佐剂提高疫苗的效能

在目前研制和试验的新疫苗中,有些是由合成的、重组的或高度纯化的亚单位疫苗抗原组成的.亚单位疫苗仅含保护性免疫所需的抗原,比全细胞灭活疫苗或减毒活疫苗安全.然而,亚单位疫苗的纯化及与减毒或灭活疫苗相关的自身佐剂性免疫调节成分的缺乏常导致较弱的免疫原性.免疫佐剂能增强对疫苗的特异性免疫应答,用有效佐剂配制疫苗能提高亚单位抗原疫苗的效能.佐剂具有多种作用机理,应根据接种途径和所需对特定疫苗的免疫应答类型(抗体、细胞或粘膜免疫)抗择应用.       

幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白分子内佐剂融合疫苗的构建、纯化及活性研究

目的构建幽门螺杆菌（HP）中性粒细胞激活蛋白基因（napA）与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（heat-labile enterotoxin B subunit，LTB）的分子内佐剂融合蛋白疫苗，并通过口服免疫小鼠研究其抗原性，为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构建携带naDA—LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b—napA—LTB，转化E、coli BL21（DE3），进行原核表达，重组表达蛋白采用亲和层析柱Chelating Sepharose进行纯化，Tris—Tricine电泳和Western blot鉴定，GM1-EUSA检测rNAP-LTB与神经节苷脂的结合。口服免疫BALB／c小鼠，检测重组融合蛋白的抗原性。结果重叠延伸PCR扩增出了约760bp的napA—LTB融合基因，其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致。重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达，表达量约占细菌总蛋白的30％，Tris—Tricine初步测定目的蛋白的相对分子质量（Mr）约29000，纯化后纯度大于90％。Western blot检测其具有良好的抗原性。该重组蛋白保持了与GM1神经节苷脂结合的生物学活性。动物实验表明，分子内佐剂疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG，IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显著高于无佐剂单一亚单位疫苗。结论所获得的重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性，为进一步的疫苗研究奠定了基础。     

豚鼠鼻内接种重组HSV-2 gD2蛋白可降低HSV-2生殖道攻击后的疾病严重性和死亡率

本文报道了以遗传学方法脱毒的大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴＫ６３）作佐剂的重组２型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－２）糖蛋白ｇＤ２疫苗,鼻内（ＩＮ）接种豚鼠后诱导的抗体应答和对ＨＳＶ－２阴道内攻击的防御作用。在２５０μｌ含ＬＴＫ６３５０μｇ的ＰＢＳ中分别加入ｇＤ２２５和１００μｇ,ＩＮ接种豚鼠,对照组仅接种１００ｕｇｇＤＺ,并与肌肉（ＩＭ）接种２５μｇｇＤ２加ＭＦ５９乳剂的疫苗进行比较。末次免疫后２周,麻醉动物取粘膜标本（鼻洗液、唾液和阴道洗液）和血清,用急骤化学发光ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ和ＩｇＡ抗体,结果表明…     

流感病毒体是RSV-F抗原的有效递送系统

亚单位疫苗难以诱生粘膜免疫 ,需要研究开发新的抗原递送系统。为此 ,作者设计了一个配方 ,将呼吸道合胞病毒 ( RSV) F蛋白包埋在流感病毒体 (血凝素成分 )中 ,简称RSV- F/IRIV,并与粘膜佐剂大肠杆菌不耐热毒素 ( HLT)的自然无毒性变异体结合 ,鼻内免疫小鼠。　　试验分三组 ,A组接种 RSV- F/IRIV+HLT,B组接种 RSV- F + HLT,C组接种IRIV+ HL T作为阴性对照。　　 EL ISA和中和试验检测 RSV- F特异性抗体显示 ,A组 Ig G水平较 B组高但无显著差异。Ig G亚型分析两组特异性 Ig G1应答明显而 Ig G2 a应答均很弱。A组…     

对雌性动物生殖道免疫接种DNA疫苗

雌性动物下生殖道是粘膜免疫系统的一个部分,这里有丰富的树突状细胞（DC）、CD8~+T淋巴细胞和分泌IgA的浆细胞。但在雌性动物动情期内,阴道粘膜内抗原递呈细胞（APC）的活性、DC数量以及上皮对蛋白的通透性都有不同程度变化,因此需要强佐剂,大剂量多针次免疫,才能诱导生殖道产生强抗体应答。本文作者将巨细胞病毒启动子控制下的编码人生长激素（HGH）的质粒（pCMV/HGH）转染阴道粘膜组织,以期刺激生殖道局部抗体应答。     

鼻内免疫麻疹病毒合成肽诱导的全身性免疫应答

诱导强的粘膜和全身性免疫力对于抵抗以呼吸道途径侵入体内的传染因子最为重要。一些动物和人体研究表明,通过鼻内免疫,可提供对一些病毒和细菌性粘膜病原体的免疫力。鼻内免疫的优点是能刺激粘膜和全身性免疫力,简便、安全,可用于大规模人群免疫;此外,共同粘膜免疫系统的存在使在一处粘膜诱生的保护免疫应答可在其他粘膜处表现出来。 作者用含麻疹病毒融合蛋白中2个T细胞表位拷贝和1个B细胞表位拷贝的嵌合肽（TTB）鼻内接种小鼠（不用佐剂）,结果     

天然和重组霍乱毒素B亚单位作为鼻内接种刺激因子的比较

霍乱毒素(CT)与抗原同时口服或鼻内接种时可增强抗原特异性粘膜免疫应答。因此,CT及其B亚单位(CTB)作为粘膜疫苗的潜在佐剂具有重要意义。CT全毒素的毒性限制了它的使用。因此,CTB作为粘膜疫苗的成分显得更有前景。作者比较了鼻内接种卵白蛋白(OVA)与天然CTB或重组CTB(rCTB)的混合物或共价结合物的效果。     

猴免疫缺陷病毒样颗粒鼻内免疫诱导全身及粘膜免疫应答

作者利用 Sf9昆虫细胞同时表达了猴免疫缺陷病毒 ( SIV)的核心蛋白 ( Gag)和包膜蛋白 ( Env) ,并形成了病毒样颗粒 ( VLP) ,采用连续蔗糖梯度离心法纯化出 SIV VLP。为研究 SIV VL P通过粘膜免疫途径能否诱导全身及粘膜免疫应答 ,作者选用 2 0 μg和2 0 0 μg两种免疫剂量、分别通过鼻内 ( i.n.)滴入和腹腔 ( i.p.)注射两种途径免疫BALB/c小鼠。 i.n.途径又分为用和不用佐剂组 ,佐剂为霍乱毒素 ( CT,每只小鼠每次免疫 1 0 μg)。采集各组小鼠的血液、唾液、阴道冲洗液 ,用 EL ISA法测定各类标本中特异性抗体水平。 SIV VLP2…     

联合接种流感疫苗和霍乱毒素B亚单位对流感病毒感染的防御作用

霍乱毒素B亚单位(CTB)是一种无毒性的霍乱毒素成分.CTB不仅是有效的肠道免疫原,也是一种肠粘膜佐剂.鼻内联合接种单剂流感病毒与CTB可诱导鼻分泌物中高水平IgA和血清中血凝抑制(HI)抗体.本文作者先给Balb/c小鼠鼻内联合接种甲型流感病毒HA疫苗和CTB,4周后再单独接种甲型流感病毒HA疫苗,观察接种后的免疫应答.小鼠接种两剂较高剂量(1.5μg)的A/PR/8/34(PR-8,H1N1)HA疫苗(第1剂与CTB联合接种)后,鼻洗液中的抗病毒IgA抗体和血清中的HI抗体应答都比第1次接种     

LTK63粘膜佐剂与脱乙酰壳多糖释放系统联用能提高鼻腔免疫疫苗的免疫原性[英]／Baudner BC，Giuliani MM，Verhoef JC，et al／／Vaccine

大肠杆菌肠毒素(LT)是一种潜在的粘膜佐剂，经定位诱变可获得无毒性突变体LTK63。表面带正电的脱乙酰壳多糖微粒可以吸附带负电的LTK63和无毒性白喉毒素突变体CRM197。意大利Chiron分公司Baudner评价了C群脑膜炎球菌结合疫苗(CRM-MenC)鼻内免疫小鼠时，脱乙酰壳多糖微粒和粘膜佐剂LTK63对免疫应答的影响。