缺血再灌注损伤诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨大鼠心肌缺血再灌注后不同时相心肌细胞凋亡情况及其与缺血再灌注的关系，并进一步探讨心肌细胞凋亡在心肌缺血再灌注损伤中的可能作用。方法：64只SD大鼠随机分为5组：对照组（假手术45min、105min、165min、225min，各时间点n=8），心肌缺血45min组（I15min,n=8），心肌缺血45min后再灌注1h、2h、3h组（I／R1h、I／R2h、I／R3h，各时间点n=8），分别在各时点处死大鼠取材。应用DNA琼脂糖凝胶电泳分析与透射电镜的检测心肌细胞凋亡的改变。结果：DNA琼脂糖电泳分析显示，I／R2h组、I／R3h组出现凋亡特征性“梯状电泳带”而对照组、L45min组及I／R1h组均未见凋亡带谱。透射电镜检测显示，对照组、L45min组、I／R1h组均未见到凋亡的心肌细胞，I／R2h组、I／R3h组心肌细胞染色质凝聚、边集、核膜完整，显示出典型的凋亡特征。结论：心肌缺血再灌注可导致心肌细胞凋亡，心肌细胞凋亡因缺血再灌注不同时相而变化；心肌细胞凋亡在大鼠心肌缺血再灌注损伤的病理生理过程中起重要作用；大鼠心肌缺血后再灌注可促发或加速心肌细胞凋亡。     

结扎大鼠冠状动脉诱发心肌及背根神经节内P物质变化的研究

目的 观察结扎冠状动脉（冠脉）左前降支大鼠不同时间整体心肌（包括缺血区和非缺血区）及背根神经节（DRG）内P物质蛋白及其基因水平的变化，探讨神经源性机制在局部急性心肌缺血诱发整体心肌损伤中的作用及其机制。方法 健康成年雄性SD大鼠24只，采用随机数字表法分为4组（n=6）：假手术组（S组）以及扎闭冠脉（CAO）1、3和6h组。采用结扎左冠脉前降支的方法制备急性心肌缺血动物模型。各组在规定的时间点开胸快速取缺血区和非缺血区（缺血区对侧半球）心肌及DRG T1～5制作标本。采用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术观察各组动物缺血区和非缺血区心肌及DRG内P物质的蛋白和基因水平变化。结果 ①CAO后1、3和6h点大鼠缺血区和非缺血区心肌P物质蛋白及其mRNA水平均较S组显著升高（P均〈0．05），CAO 3h达峰值（P均〈0．05）；非缺血区CAO各组P物质蛋白及其mRNA水平低于相应组的缺血区心肌（P均〈0．05）。②CAO后1、3和6h点大鼠DRG内P物质mRNA的表达水平均较S组显著升高（P均〈0．05），在CAO 3h达高峰（P均〈0．05）。结论 结扎冠脉可诱发大鼠整体心肌组织（包括缺血区和非缺血区）P物质水平的增高，同时DRG内P物质mRNA的表达也显著增加，提示神经源性机制可能参与心肌缺血的病理学过程。     

大鼠心肌缺血再灌注中细胞凋亡及Bcl-2、C-myc的表达研究

目的观察心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡现象,研究Bcl-2、C-myc蛋白的表达情况。方法采用末端标记技术(TUNEL)标记凋亡细胞,免疫组织化学法检测Bcl-2、C-myc蛋白的表达。结果在持续缺血和缺血再灌注大鼠心肌中,TUNEL法检测到大量的阳性细胞。随着再灌注时间的延长,大鼠心肌细胞凋亡数逐渐增多。持续缺血4.5 h组的心肌细胞凋亡数明显高于缺血30min再灌注4 h组的凋亡心肌细胞数。免疫组织化学法检测发现,与假手术组比较,持续缺血4.5 h组和缺血30min再灌注4 h组Bcl-2、C-myc蛋白的表达都增加,缺血再灌注组中Bcl-2蛋白表达明显上调,C-myc蛋白表达明显下调。结论心肌缺血再灌注中存在细胞凋亡现象,且心肌细胞凋亡与Bcl-2、C-myc蛋白的表达密切相关。     

环磷腺苷葡胺对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡和NF—kB表达的影响

目的观察环磷腺苷葡胺对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡及NF—kB表达的影响。方法30只SD大鼠随机等分为3组：对照组为假手术组仅进行开胸手术；缺血再灌注组心肌缺血30min，再灌注100min；环磷腺苷葡胺注射组在心肌缺血前静脉输注环磷腺苷葡胺2mg／kg。心肌细胞凋亡和NF-KB表达分别采用TUNEL法和免疫组织化学方法检测。结果环磷腺苷葡胺注射组大鼠心肌细胞凋亡指数及心肌组织中NF—kB表达明显低于缺血再灌注组（P〈0．01），但高于对照组（P〈0．01）。结论应用环磷腺苷葡胺注射液可明显降低缺血再灌注损伤大鼠的心肌细胞凋亡和NF-kB表达。     

顿抑心肌中腺嘌呤核苷酸转运体基因的动态表达

目的：通过观察大鼠心肌缺血再灌注模型中腺嘌呤核苷酸转运体（adenine nucleotide translocator，ANT）的动态表达情况，初步探讨顿抑心肌中ANT各单体的表达变化对心肌能量代谢的影响及其与心肌细胞凋亡的联系。 方法：实验于2003—11／2004-04在解放军南京军区南京总医院心脏内科实验室和动物实验中心完成。将60只雄性SD大鼠随机分为对照组（n=8）和手术组（n=52）。将手术组大鼠冠状动脉左前降支结扎闭塞20min，然后剪断结扎线再灌注。按缺血后再灌注4h、1,3，7d4个时相分4组进行观察（n=13）。用反转录-聚合酶链反应计算机凝胶成像分析系统测定心肌中ANT1，ANT2 mRNA相对含量。对照组大鼠不干预。 结果：60只大鼠进入结果分析。（DANT1 mRNA含量在缺血后再灌注4h达高峰（P〈0．05）。在再灌注1d开始降低，再灌注3d时明显下降（P〈0．05），逐渐恢复到对照水平（P〉0．05），再灌注7d的结果与再灌注3d相似。②ANT2mRNA含量在再灌注4h时无明显增加，在再灌注1d开始升高并达峰值（P〈0.01），从再灌注3d开始明显下降（P〈0．01），并恢复到对照水平（P〉0．05）。再灌注7d结果与再灌注3d相似。 结论：①顿抑心肌中ANT的含量增加，顿抑心肌中能量短缺的现象可在缺血后再灌注3d内得以纠正。②心肌缺血可以导致细胞凋亡，心肌细胞凋亡主要发生在缺血再灌注早期（24h内），而且在体内存在时间短暂（缺血后再灌注3d内恢复）。     

结扎大鼠冠状动脉对心肌和背根神经节内肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察结扎大鼠冠状动脉（冠脉）左前降支不同时间点整体心肌（缺血区和非缺血区心肌）和背根神经节（DRG）内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的蛋白及mRNA表达变化,探讨TNF-α在心肌缺血诱发机体神经源性反应机制中的作用及机制。方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为3组：对照组麻醉后直接取材;假手术组（Sham组）只开胸不结扎冠脉;冠脉结扎组（CAO组）单纯扎闭冠脉左前降支;Sham组和CAO组又分为0.5、1、3和6h4个时间点。采用免疫组化、酶联免疫吸附法（ELISA）及实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术观察各组动物心肌和DRG内TNF-α的蛋白及mRNA表达变化。结果1CAO后各时间点缺血区心肌和非缺血区心肌TNF-α蛋白及TNF-αmRNA表达水平均较对照组和Sham组显著升高（P〈0.05或P〈0.01）,在CAO1h达高峰,但与0.5h时比较差异无统计学意义（P均〉0.05）;且CAO组各时间点缺血区心肌TNF-α蛋白及TNF-αmRNA表达水平均较相应时间点非缺血区显著升高（P均〈0.05）。2CAO后各时间点大鼠DRG中TNF-α蛋白及TNF-αmRNA表达水平较对照组和Sham组均显著升高,在CAO0.5h达高峰（P〈0.05或P〈0.01）。结论急性心肌缺血可能诱发激活了机体神经源性反应机制,TNF-α在其中发挥了作用;神经源性机制可能参与了急性心肌缺血诱发的心肌损伤及其调制的病理学过程。     

心肌缺血再灌注交界区细胞凋亡促进因子、p53、bcl-2基因动态表达的临床意义

目的探讨缺血再灌注损伤诱导交界区心肌细胞凋亡与细胞凋亡促进因子(caspase-3)、p53、bcl-2基因动态表达的临床意义。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应技术、原位杂交技术、免疫组化技术等,观察家兔心肌缺血/再灌注模型缺血交界区caspase-3 mRNA、p53 mRNA、bcl-2 mRNA动态表达的内在联系。结果①caspase-3 mRNA与心肌细胞凋亡在缺血再灌注损伤4h后开始升高,12h达高峰,二者之间存在明显正相关性(r=0.9286,P<0.01)。②p53mRNA于缺血再灌注8h开始升高。bcl-2 mRNA在缺血再灌注8h时开始激活,并持续维持低水平状态。p53 mRNA和bcl-2mRNA二者的表达之间存在明显的负相关性(r=-0.9648,P<0.01)。结论caspase-3的激活进一步上调p53表达,二者促进心肌细胞凋亡,进而影响心肌功能。     

细胞凋亡的线粒体信号通路在大鼠缺血延迟预适应抗心肌细胞凋亡机制中的作用

目的：以细胞凋亡的线粒体途径为切入点,探讨心肌缺血延迟预适应抑制心缺血再灌注（MI/R）后细胞凋亡的可能机制.方法：SD大鼠分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、延迟缺血预处理组.缺血再灌注组采用经典大鼠冠脉结扎,缺血1h,再灌1h.延迟缺血预处理组采用缺血5min,再灌5min,反复循环3次,24h后缺血1h,再灌1h.流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,进行细胞色素C（CytC）和凋亡诱导因子（AIF）的Western blotting分析及Caspase-3活性测定,并利用免疫组织化学染色法检测大鼠心肌HSP70的表达.结果：与缺血再灌注组相比较,心肌缺血预处理24h后可以减少MI/R后心肌细胞凋亡率,抑制CytC和AIF自线粒体向胞浆的释放及caspase-3的活化,上调HSP70蛋白表达.结论：心肌缺血延迟预适应可以减少MI/R造成的细胞凋亡,机制与其诱导HSP70的生成,抑制细胞凋亡的线粒体信号转导途径有关.     

大鼠脑缺血再灌注后caspase-3表达及神经生长因子的保护作用

目的采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，观察再灌注不同时间点大鼠神经功能缺损情况及caspase-3表达情况，并探讨caspase-3表达的变化规律及神经生长因子（NGF）的脑保护作用，为临床应用神经生长因子（NGF）治疗缺血性脑血管疾病及防治提供理论依据。方法采用线栓法制备大鼠局灶缺血再灌注模型，肌肉注射NGF，应用免疫组化方法和HE染色检测脑部神经元caspase-3表达，并观察大鼠脑部变化。结果缺血再灌注组大鼠脑内caspase-3的表达量增多，于再灌注后6h即有所增加，并于24h达高峰，之后下降。与缺血再灌注组相比，缺血早期给予神经生长因子（NGF）（干预），可使脑内caspase-3的表达减少（P〈0．05）。结论NGF对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，可减轻脑组织的损伤程度，抑制caspase-3的表达，减少细胞凋亡。     

骨髓间充质干细胞预移植1周后构建心肌缺血再灌注损伤大鼠模型

背景：急性心肌梗死用溶栓或介入手段开通阻塞血管后,因心肌缺血再灌注损伤而很难达到满意的疗效。目的：观察骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌缺血再灌注损伤的修复作用。方法：取健康3周龄SD大鼠的骨髓细胞悬液,进行骨髓间充质干细胞体外扩增培养。受体SD大鼠接受骨髓间充质干细胞或无血清DMEM心肌注射1周后建立心肌缺血再灌注损伤模型,心肌缺血0.5h再灌注2h后测定血清乳酸脱氢酶水平、心肌组织总超氧化物歧化酶活力及丙二醛水平;采用缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡情况;免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达变化。结果与结论：分离培养的骨髓间充质干细胞增殖旺盛,纯度较高,且均质性和稳定性好;与缺血再灌注组相比,细胞移植组乳酸脱氢酶的漏出减少,总超氧化物歧化酶活性增加,丙二醛含量减少（P〈0.01）;细胞移植组心肌细胞凋亡指数显著低于缺血再灌注组（P〈0.01）;细胞移植组Bcl-2蛋白表达高于缺血再灌注组（P〈0.05）,Bax/Bcl-2比值低于缺血再灌注组（P〈0.05）。结果表明骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌缺血再灌注损伤的修复可起促进作用。     

缺血修饰清蛋白诊断心肌缺血截断值的建立及临床意义

目的 观察缺血修饰清蛋白(ischemia modified albumin,IMA)在心肌缺血早期中的改变,建立荆州地区IMA诊断心肌缺血的最佳截断值,探讨IMA诊断心肌缺血的临床意义.方法 采用清蛋白钴离子结合实验,对荆州地区健康人群血清样本106份;急性胸痛(心肌缺血)2 h以内入院,出院诊断为急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)的患者血清样本106份,进行IMA浓度检测,采用受试者工作特征 (ROC)曲线分析获得IMA值的最适截断值.结果 ACS患者于胸痛2 h IMA水平显著高于正常对照组(P<0.05),IMA浓度在诊断心肌缺血的最适截断值为72.7 U/ml.结论 诊断截断值的建立可提高对心肌缺血诊断的准确率,IMA是心肌缺血早期病变的敏感因子,心肌缺血患者早期检测其浓度具有较高的诊断价值.     

电针对心肌缺血再灌注损伤家兔心肌细胞凋亡的影响

目的:研究电针对心肌缺血再灌注损伤家兔心肌细胞凋亡的影响.方法:将结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min,成功制作为心肌缺血再灌注损伤模型的家兔24只,随机分为模型组、电针1及2组各8只.另仅开胸未结扎冠状动脉的8只为假手术组作为正常对照.电针1、2组术后30 min分别采用电针针刺内关穴与列缺穴60 min,仅1次,应用原位末端标记法观察4组家兔心肌细胞凋亡情况.结果:心肌凋亡细胞数量,模型组显著高于假手术组(P＜0.01),电针1组与电针2组、模型组比较显著降低(P＜0.05,P＜0.01),但仍高于假手术组(P＜0.01).结论:细胞凋亡参与心肌缺血再灌注损伤的病理过程,电针内关穴可以减少缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的数量,从而达到抗缺血再灌注损伤的作用.     

大鼠脑缺血模型的改进和脑缺血再灌流损伤诱发细胞凋亡的研究

目的改进动脉内置线阻断法建立的大鼠大脑中动脉（ＭＣＡ）局灶性脑缺血模型,并探讨脑缺血诱发细胞凋亡的时效和量效关系。方法以顶端细,后逐渐增粗的涂抹硅橡胶改进栓子,ＴＴＣ染色鉴定缺血效果;ＴＵＮＥＬ－ＡＰ法和ＨＥ染色观察凋亡发生和形态学改变。结果ＴＴＣ染色证实了大脑缺血灶的的稳定出现;用ＴＵＮＥＬ法发现,缺血３０ｍｉｎ再灌流６ｈ后,凋亡阳性细胞即明显增多,４８ｈ再灌流后阳性细胞数最多;缺血５ｍｉｎ再灌流４８ｈ缺血脑区的凋亡细胞主要位于纹状体,１５ｍｉｎ缺血组皮层也开始散见阳性细胞;随缺血时间延长,凋亡细胞主要出现在缺血区周边。结论脑缺血可选择性诱发神经细胞凋亡。     

Rapid expression of heat shock protein in the rabbit after brief cardiac ischemia.

The effect of brief myocardial ischemia on the expression of heat shock protein (HSP 70) was examined in an in vivo rabbit model of myocardial ischemia using Northern blotting. Functional studies were carried out in the open-chested anesthetized rabbit. The large marginal branch of the left circumflex was occluded four times for 5 min. Using piezoelectric crystals implanted midwall in the ischemic zone, end-diastolic length, end-systolic length, and percent segmental shortening were assessed. Expression of HSP 70 was measured by Northern blotting. A single 5-min coronary occlusion doubled the expression of HSP 70 whereas four cycles of 5 min of ischemia/5 min of reperfusion resulted in a threefold increase in HSP 70 mRNA (P less than 0.001). Measurements with the piezoelectric crystals showed mild myocardial dysfunction concomitant with the increase in HSP 70. This increase in HSP 70 mRNA after repetitive brief ischemia was transient, occurring as early as 1 h and returning to baseline by 24 h after ischemia. Western blot analysis with a monoclonal antibody to HSP 70 was used to compare sham and postischemic myocardial HSP 70 levels. Changes in the amount of HSP 70 were evident as early as 2 h and were even more striking at 24 h.     

Regulation of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in ischemic and reperfused canine myocardium.

Previous studies in vitro have shown an important role for intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in adherence interactions of canine neutrophils with canine jugular vein endothelial cells and in cytotoxicity of canine neutrophils for adult cardiac myocytes. To evaluate the regulation of ICAM-1 in myocardial inflammation and its role in the pathogenesis of myocardial ischemia and reperfusion, a series of in vivo and ex vivo studies were performed in canine animals. Systemic administration of LPS elicited ICAM-1 mRNA in several tissues, including myocardium, which demonstrated increasing ICAM-1 staining on intercalated discs of cardiac myocytes. In ischemia and reperfusion protocols: (a) ICAM-1 mRNA was found in ischemic segments within 1 h of reperfusion and in both ischemic and normally perfused segments by 24 h of reperfusion; (b) expression of ICAM-1 was detected in cardiac myocytes in the ischemic region by 6 h of reperfusion; increased expression was seen thereafter as a function of time; (c) post-ischemic (but not preischemic) cardiac lymph collected at intervals from 1 to 24 h after reperfusion elicited ICAM-1 mRNA, ICAM-1 expression, and ICAM-1-dependent neutrophil adhesion in canine jugular vein endothelial cells and in cardiac myocytes with peak cytokine activity seen by 1 h; (d) extravascular localization of neutrophils was detected in ischemic areas only, and was associated with endothelium bearing high levels of ICAM-1 within 1 h of reperfusion; infiltration increased thereafter in association with increasing levels of ICAM-1 mRNA in myocardial segments and increasing levels of ICAM-1 expression on cardiac myocytes. These findings provide the first direct evidence for inflammatory regulation of ICAM-1 in ischemic and reperfused canine myocardium. They support the hypothesis that ICAM-1 participates in neutrophil-mediated myocardial damage.     

组织多普勒成像在急性心肌缺血心功能异常中的实验研究

目的 运用组织多普勒成像（TDI）技术对急性心肌缺血区域和二尖瓣环侧壁处的运动速度、移动振幅进行检测,探讨TDI在急性心肌缺血、心肌梗死中的应用价值。方法 10只开胸猪结扎左冠状动脉前降支（LAD）,通过TDI技术速度模式检测缺血区域和心尖四腔观二尖瓣环侧壁处的色泽变化及收缩、舒张期运动速度（VS,VE,VA）、移动振幅（CD,MDe,MDa）、等容收缩期时间,并与基础状态对照分析。结果 LAD结扎后,缺血区域和二尖瓣环处色泽暗淡,局部心肌色彩缺失,结扎15s时收缩期、舒张早期运动速度、移动振幅显著降低,等容收缩期时间延长。结论 TDI技术能准确反映血梗死区域运动异常,精确测定局部收缩、舒张期运动速度、移动振幅,尤其二尖瓣环处的运动能反映整体心肌的运动,为临床早期评价局部心肌缺血及心功能异常提供了一种无创性的检查手段。     

In vivo imaging of myocardial cell death using a peptide probe and assessment of long-term heart function

During acute myocardial infarction (AMI), both apoptosis and necrosis of myocardial cells could occur and lead to left ventricular (LV) functional decline. Here we determined whether in vivo imaging signals of myocardial cell death by ApoPep-1 (CQRPPR), a peptide probe that binds to apoptotic and necrotic cells through histone H1, at an early stage after AMI showed correlation with the long-term heart function. AMI was induced using a rat model of ischemia and reperfusion (I/R) injury. Fluorescence-labeled ApoPep-1 was administered by intravenous injection into rats 2 h after reperfusion. Ex vivo imaging of hearts isolated 2 h after peptide injection showed higher levels of near-infrared fluorescence (NIRF) signals at hearts of I/R rats than those of sham-operated rats. The fluorescent peptide was rapidly cleared from the blood and did not bind to red and white blood cells. Localization of fluorescent ApoPep-1 at the area of cell death was demonstrated by co-staining of myocardial tissue with TUNEL. The intensity of in vivo NIRF imaging signals by homing of ApoPep-1 to injured myocardium of I/R rats obtained 2 h after peptide injection (equivalent to 4 h after injury) showed strong and moderate correlation with the change in the LV ejection fractions (r² = 0.82) and the size of the fibrotic area (r² = 0.64), respectively, observed at four weeks after injury. These results suggest that ApoPep-1-mediated in vivo imaging signals of myocardial cell death, including both apoptosis and necrosis, at an early stage of AMI could be a potential biomarker for assessment of long-term outcome of heart function.     

银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨银杏叶提取物 (GBE)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :制造大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。 40只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组 (A组 )、缺血组 (B组 )、小剂量GBE组 (C组 )、大剂量GBE组 (D组 )。C、D 2组于术前 3 0min及术后 1h分别给予银杏叶提取物 2 0mg/kg、40mg/kg腹腔内注射。应用TTC染色及HE染色观察梗死体积及缺血坏死程度 ,应用TUNEL法检测凋亡细胞数。结果 :①C、D 2组梗死体积明显小于B组 (P <0 .0 1) ,D组小于C组 (P <0 .0 5)。②C、D 2组凋亡细胞数明显少于B组 (P <0 .0 1) ,D组少于C组 (P <0 .0 5)。结论 :银杏叶提取物可减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和梗死体积 ,疗效与剂量有关     

左旋四氢巴马汀在大鼠全脑缺血再灌注时对脑组织钙含量及脑细胞凋亡的影响

目的　通过观察脑缺血再灌注时脑组织钙含量及脑细胞凋亡的变化 ,探讨左旋四氢巴马汀在全脑缺血再灌注损伤时的作用机制。方法　本实验在建立大鼠急性全脑缺血再灌注损伤模型的基础上 ,用原子分光光度仪检测脑组织钙含量 ,用流式细胞仪检测脑细胞凋亡。结果　脑缺血再灌注 12h钙含量较假手术组增高 (P <0 0 1) ,脑细胞凋亡数亦增加(P <0 0 1) ;2 4h钙含量进一步增高 (P <0 0 1) ,凋亡细胞数亦进一步增加 (P <0 0 1) ;左旋四氢巴马汀在脑缺血再灌注 12h和 2 4h均能抑制脑组织钙含量的增高 (P <0 0 1)并减少脑细胞凋亡数 (P <0 0 1)。各组脑组织钙含量与脑细胞凋亡数呈正相关 (P <0 0 5 )。结论　左旋四氢巴马汀可减少脑细胞凋亡 ,其机制与抑制缺血再灌注后脑组织钙聚集有关。     

脑缺血再灌注大鼠神经细胞DNA损伤与凋亡的时空关系分析

目的　探讨局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞DNA损伤与凋亡的时空分布演变过程及两者间的联系。方法　共选取 72只成年Wistar大鼠 ,将其随机分为正常组、假手术组、缺血 3 0min组及缺血 2h组 ;后 2组大鼠又根据再灌注时间 (再灌注 1,6,12 ,2 4及 48h)不同 ,各细分为 5个亚组。制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型 (MCAO R) ,应用免疫组化法观察脑缺血组织在不同缺血再灌注时间下 ,其P5 3表达在空间及程度上的改变 ,并结合TUNEL技术观察P5 3表达与细胞凋亡的时空关系。结果　脑缺血再灌注可诱导细胞凋亡及P5 3蛋白表达增强 ,并随着缺血或再灌注时间的延长 ,凋亡细胞数量与P5 3表达均逐渐增加 ,但P5 3蛋白的表达始终早于凋亡细胞的出现 ,且P5 3阳性细胞数量始终多于凋亡细胞数量 (P <0 .0 5 ) ,其分布范围也较凋亡细胞更广。结论　神经细胞缺血可引起DNA损伤 ,DNA损伤后可诱导DNA修复 ,如修复失败则启动细胞凋亡程序。