塞来昔布对肺腺癌A549细胞MMP-2表达的影响

[目的]探讨塞来昔布对肺癌A549细胞MMP-2蛋白表达及分泌的影响。[方法]肺腺癌A549细胞分实验组和对照组,用ELISA法检测塞来昔布的不同浓度（10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）和20μmol/L的塞来昔布不同作用时间（6h、12h、24h）对A549细胞培养上清液中PGE2及MMP-2的浓度变化,同时用Westernblot法检测A549细胞MMP-2蛋白质表达情况。[结果]上述三种浓度塞来昔布处理A549细胞12h后上清液PGE2浓度（38.63±2.13,15.02±0.95,2.56±0.5pg/ml）,与对照组（45.56±0.93pg/ml）比较差异有显著性;MMP-2浓度（12.48±2.06,3.96±0.08,1.21±0.11pg/ml）,与对照组（25.38±1.034pg/ml）比较差异有显著性。20μmol/L的塞来昔布处理A549细胞经上述不同时间后上清液PGE2浓度（34.69±2.23,12.18±1.36,5.56±0.95pg/ml）,与对照组（45.56±0.93pg/ml）比较差异有显著性;MMP-2浓度（8.31±1.34,4.55±0.86,1.21±0.11pg/ml）与对照组（25.38±1.03pg/ml）比较差异有显著性。塞来昔布浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞培养上清液PGE2及MMP-2的浓度均逐渐降低,MMP-2蛋白质表达的条带逐渐减弱。[结论]塞来昔布能以浓度依赖性和时间依赖性方式抑制肺癌A549细胞PGE2、MMP-2的分泌,塞来昔布可能通过PGE2途径抑制肺癌A549细胞MMP-2表达从而抑制细胞侵袭能力。     

结肠癌中COX-2对VEGF-C表达的影响

目的:探讨COX-2和血管内皮生长因子C(VEGF-C)在人结肠癌组织中的表达及二者之间的关系.方法:首先选择56例结肠癌标本,应用免疫组织化学染色方法,检测COX-2和VEGF-C在人结肠癌组织中的表达,对两者之间的相关性进行统计学分析;其次以COX-2诱导剂PMA及特异抑制剂塞来昔布作为干预因素,检测单独PMA孵育和PMA+塞来昔布联合孵育后,结肠癌细胞HCT116中VEGF-C mRNA及蛋白表达的变化.结果:COX-2在结肠癌组织中的阳性表达率为78.6%,VEGF-C结肠癌组织中的阳性表达率为65.9%.COX-2阳性的结肠癌组织中VEGF-C的阳性率高于COX-2阴性组中VEGF-C阳性率(P＜0.05),而且COX-2表达与VEGF-C表达呈正相关.结肠癌细胞HCT116中当使用COX-2表达诱导剂PMA后,VEGF-C的表达也相应升高;而加入COX-2的特异抑制剂后,该效应也相应被削弱.结论:COX-2可通过诱导结肠癌组织中VEGF-C的表达促进结肠癌的淋巴结转移.     

选择性COX-2抑制剂塞来昔布对乳腺癌的放疗增敏作用及其机制研究

[目的]探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人乳腺癌细胞的放疗增敏作用及其可能的机制。[方法]取对数生长期MDA-MB-231细胞株,实验分为对照组、药物组、照射组及实验组（照射线＋塞来昔布）。流式细胞术（FCM）检测细胞周期变化和各组凋亡率;克隆形成实验检测放射增敏作用;Western blot法检测COX-2、VEGF、Bcl-2蛋白表达。[结果]不同浓度塞来昔布对MDA-MB-231细胞有明显抑制作用,且呈剂量依赖性（F=5.56,P=0.030）。FCM检测结果显示,随塞来昔布浓度增加,细胞周期明显变化（G0/G1期比例增高,S期比例降低）。实验组凋亡率较照射组明显高（31.20%±1.27%vs 17.99%±1.01%,t=2.43,P=0.025）。克隆形成实验显示,实验组与照射组相比较,反映放射敏感性指标的Dq、Do和SF2显著降低。塞来昔布能抑制COX-2、VEGF和Bcl-2蛋白表达（P〈0.05）。[结论]选择性COX-2抑制剂塞来昔布对人乳腺癌MDA-MB-231细胞有明显的放射增敏作用,其可能的机制是抑制COX-2表达、诱导细胞凋亡、调节细胞周期分布和抑制细胞血管生成因子生成。     

AMPK的激活调节COX-2对HT-29细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究AMPK的激活在结肠癌HT-29细胞中对COX-2表达的影响, 并探讨其对细胞增殖和凋亡的作用.方法:用Western Blot方法检测AMPK的激活对COX-2表达的影响,MTT法检测不同浓度、时间的AMPK激活荆AICAR和选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用下的细胞存活率, 流式细胞术检测细胞凋亡率,用MTT法检测二者联合对细胞增殖的影响.结果:AMPK被激活后COX-2蛋白表达减少,随着AICAR和塞来昔布作用浓度、时间增加,细胞存活率呈剂量和时间依赖性下降,塞来昔布组和AICAR组凋亡细胞增多,早期凋亡细胞及晚期凋亡细胞比例均高于对照组(P＜0.05),AICAR和塞采昔布联用后细胞的存活率为(23.0±0.82)%.均低于AICAR组(54.0±2.86)%和塞来昔布组(57.0±2.54)%.结论:AMPK激活可以抑制COX-2表达对人结肠癌HT-29细胞产生增殖抑制和凋亡诱导效应,AICAR和塞来昔布二者联用具有协同作用.     

塞来昔布对慢性粒细胞白血病原代细胞bcr-abl融合蛋白的影响

 目的　探讨塞来昔布对慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞bcr-abl融合基因的mRNA表达、p210蛋白表达和蛋白质酪氨酸激酶（PTK）活性的影响。方法　以不同浓度的塞来昔布（0、10、20、40、80、160 μmol／L）分别干预CML原代细胞36 h,进行荧光实时定量反转录聚合酶链反应（RQ-RT-PCR）、Western blotting和PTK活性检测。结果　80 ~ 160 μmol／L的塞来昔布下调bcr-abl的mRNA表达;随着塞来昔布浓度增加,p210蛋白表达逐步下调;40 μmol／L以上的塞来昔布能明显抑制PTK活性,但非浓度依耐性。结论　塞来昔布能不同程度地下调CML原代细胞bcr-abl的mRNA和蛋白表达,并抑制PTK活性。     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人鼻咽癌细胞株CNE-2是否具有抑制增殖、诱导凋亡的作用并初步探讨其作用机制。方法 用塞来昔布作用于体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞,采用四甲基偶氮陛蓝比色法（MTT）测定细胞增殖活力的改变;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot 检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示不同浓度塞来昔布（25～100μmol/L）均能抑制鼻咽癌CNE-2 细胞生长,呈浓度和时间依赖性。流式细胞术结果显示塞来昔布（25～75μmol/L）浓度范围内能诱导鼻咽癌CNE-2 细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性。Western blot 结果显示塞来昔布作用于鼻咽癌CNE-2 细胞后,Bcl -2 蛋白表达水平下调和Bax蛋白表达上调呈浓度依赖方式。结论 塞来昔布具有抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其机制可能与下调Bcl-2 蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

多西苯醌联合塞莱昔布对结肠癌细胞转移作用的研究

目的对比研究单独及联合应用参与花生四烯酸代谢的环氧合酶-2（COX-2）及5-脂氧合酶（5-LOX）抑制剂塞来昔布与多西苯醌（AA861）代谢途径对结肠癌细胞转移的抑制作用。方法体外分组培养具有高转移能力的人类结肠癌HT-29细胞,药物分别作用48h后,采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测AA861及塞来昔布对结肠癌细胞增殖的影响,Transwell法检测不同药物分组对结肠癌HT-29细胞迁移能力的影响,免疫荧光染色法检测细胞内细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白的变化,反转录-聚合酶链（RT-PCR）法检测细胞内ICAM-1及血管内皮生长因子（VEGF）基因表达变化。结果AA861与塞来昔布单独应用都能以时间浓度依赖性抑制结肠癌细胞增殖与迁移,其中AA861与塞莱昔布100μmol／L分别单独应用时对结肠癌细胞增殖的抑制率分别为43．2％、42．8％,两者100μmol／L联合应用时对结肠癌细胞增殖的抑制率为53．8％,与分别单独应用时比较差异有统计学意义（均P〈0．001）;AA861与塞莱昔布100μmol／L分别单独应用时对结肠癌细胞迁移的抑制率为32．0％、29．3％,两者100μmol／L联合应用时对结肠癌细胞增殖的抑制率为57．8％,与分别单独应用时比较差异有统计学意义（均P〈0．001）。免疫荧光染色及RT-PCR提示两种药物都能抑制结肠癌细胞内VEGF与ICAM-1蛋白及基因表达,小剂量联合应用都能抑制结肠癌细胞内VEGF与ICAM-1蛋白及基因表达,且两者联合应用比单独应用抑制作用强（P〈0．001）。结论小剂量塞来昔布及AA861联合应用能以协同作用抑制结肠癌细胞的增殖与迁移,其机制可能与抑制细胞内肿瘤转移相关因子VEGF及ICAM-1表达有关。     

环氧合酶-2抑制剂对白血病细胞HL-60的化疗增敏作用及机制

 目的　观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60的化疗增敏作用,并对其机制进行初步探讨。方法　MTT法评估塞来昔布、多柔比星及二者联合对HL-60细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的表达;Western blotting检测Survivin蛋白的表达。结果　多柔比星联合塞来昔布5和10 μmol／L对HL-60细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为0.25及0.16 μg／ml,明显低于多柔比星单用的IC50（0.48 μg／ml）;多柔比星0.10 μg／ml联合10 μmol／L塞来昔布下调Survivin基因mRNA及蛋白的表达;联合塞来昔布5和10 μmol／L的凋亡率[分别为（13.07±1.66）%及（22.36±1.84）%]较多柔比星0.10 μg／ml单用[（5.72±1.25）%]明显增加（P＜0.01）。结论　COX-2抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60具有明显的化疗增敏作用,其初步机制涉及下调Survivin的表达,增加细胞凋亡。     

塞来昔布对人肝癌细胞株增殖及凋亡的影响

[目的]探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对体外培养的肝癌细胞的抗增殖及诱导凋亡作用。[方法]培养肝癌细胞株hepG2,用不同浓度的塞来昔布进行干预,MTT法检测对细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡情况及对细胞周期的影响。[结果]与对照组相比,随着塞来昔布剂量和作用时间的增加,MTT显示细胞的吸光度值逐渐降低,塞来昔布作用24、36、48h,对hepG2细胞的中效抑制浓度(IC50)分别为94.2μmol/L、78.3μmol/L和55.7μmol/L,相关系数分别为0.97、0.94和0.99;随着塞来昔布浓度的增加和作用时间的延长,细胞的凋亡率升高;塞来昔布作用48h后,随着药物浓度的增加G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例下降。[结论]塞来昔布能抑制hepG2细胞增殖,促进细胞凋亡,并呈剂量和时间依赖性。     

塞来昔布抑制人肺腺癌细胞的增殖和表皮生长因子受体的表达*

目的:探讨不同浓度的环氧化酶-2 抑制剂塞来昔布（Celecoxib ）在不同时间点对肺腺癌A549 细胞株增殖和表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法:人肺腺癌A549 细胞株培养于含10% 胎牛血清RPMI1640培养基中。实验细胞分组如下:A组,正常对照;B 组,Celecoxib（12.5 μ mol/L）;C 组Celecoxib（25μ mol/L）;D 组Celecoxib（50μ mol/L）,E 组Celecoxib（75μ mol/L）,均以RPMI1640培养液配置。使用不同浓度塞来昔布（12.5、25、50和75μ mol/L）处理肺癌A549 细胞24、48、72h 后,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）测定细胞增殖抑制率;AnnexinⅤ/PI 染色法与Hoechst33258 染色法检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测药物作用周期;Real-time RT-PCR 法检测EGFR mRNA 的表达情况。结果:塞来昔布明显抑制了A549 细胞的生长,呈时间、剂量依赖性。塞来昔布组细胞凋亡率明显高于正常对照组（P<0.01）,且呈剂量依赖性,S 期细胞比例明显减少（P<0.01）,G0/G1 期细胞比例明显增加（P<0.01）,提示塞来昔布能将大多数A549 细胞阻滞于G0/G1 期。塞来昔布组细胞EGFR mRNA 表达明显减弱（P<0.05）,且呈浓度依赖性,各浓度间差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论:塞来昔布显著抑制A549 细胞生长,可能机制是通过促进凋亡、增强G0/G1 期阻滞、下调细胞中EGFR mRNA 的表达,从而为应用塞来昔布治疗肺腺癌,以及塞来昔布和表皮生长因子受体抑制剂联用提供了一定的实验依据。      

塞来昔布对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C及bcl-2 mRNA表达的影响

 目的探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-CmRNA及bcl-2mRNA表达的影响,研究COX-2抑制剂抗肿瘤的作用机制。方法将培养的PC-3细胞分为四组:试验组(分别以10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L不同浓度塞来昔布处理)和对照组,采用RT-PCR的方法检测四组中VEGF-C及bcl-2mRNA的表达。结果10μmol/L塞来昔布组VEGF-C/GAPDH值及bcl-2/GAPDH值与对照组相比差别均无统计学意义(P>0.05);20μmol/L及40μmol/L塞来昔布组VEGF-C/GAPDH值分别为0.370±0.063、0.263±0.062,bcl-2/GAPDH值分别为0.339±0.047、0.272±0.042,两组中上述两项指标均较对照组明显下降(P均<0.01)。结论塞来昔布可能通过对前列腺癌细胞株PC-3中VEGF-C及bcl-2mRNA表达的抑制发挥其抗肿瘤作用。     

塞来昔布对宫颈癌细胞的化疗增敏作用

目的探讨特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对顺铂诱导宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）,测定塞来昔布对顺铂诱导Hela细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Hela细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 5、10μmol/L的塞来昔布分别与顺铂联合应用,可增强顺铂对Hela细胞增殖抑制作用。塞来昔布（5μmol/L）能促进顺铂诱导Hela细胞的凋亡。塞来昔布作用于Hela细胞后,Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖关系。结论塞来昔布能促进顺铂对Hela细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,起化疗增敏作用,可能与其下调Bcl-2蛋白表达水平、上调Bax蛋白表达水平有关。     

Combination of atorvastatin and celecoxib synergistically induces cell cycle arrest and apoptosis in colon cancer cells

Previous studies in animal models have shown enhanced efficacy of a combined treatment of statins and Nonsteroidal anti-inflammatory drugs against colorectal cancer development. In our study, we investigated the combinational effects of atorvastatin and celecoxib in 2 human colon cancer cell lines HCT116 and HT29. Celecoxib moderately inhibited the growth of both cell lines with a similar IC(50) of 40-50 microM, whereas atorvastatin showed stronger growth inhibitory effect in HCT116 cells than in HT29 cells (IC(50) of 5-8 microM vs. 30-35 microM) after treatment for 48-72 hr. The combination of these 2 agents produced strong synergistic actions, as determined by isobologram analysis. Flow cytometry analysis indicated that the combination treatment for 24 hr caused extensive cell cycle arrest in G0/G1 phase; whereas at 48 hr or longer, apoptosis was induced significantly. The effects produced by the combination were much stronger than that by atorvastatin or celecoxib alone. Our results further demonstrated that the combinational effects of atorvastatin/celecoxib were associated with increased levels of p21(Cip1/Waf1), p27(Kip1), and phospho-JNK; decreased levels of phospho-AKT and hyper-phosphorylated Rb; and activation of caspase cascade. Atorvastatin/celecoxib combination also selectively modified membrane localization of small G-proteins, such as RhoA, RhoB and RhoC, which may contribute to the anti-cancer effects. Taken together, the results demonstrated a strong synergy between the actions of atorvastatin and celecoxib in growth inhibition and killing of human colon cancer cells. The present work suggests the possible therapeutic application of this combination and provides leads for mechanistic and biomarker investigations in clinical trials.     

塞来昔布逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药及其机制探讨

目的观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对肿瘤多药耐药（MDR）的逆转作用,并探讨其初步作用机制。方法在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr中,应用MTT方法检测塞来昔布对多柔比星（阿霉素,DOX）的耐药逆转倍数;RT-PCR及Western blot方法检测基因及蛋白的变化;流式细胞术（FCM）检测细胞膜P-gp的表达、功能、细胞周期和凋亡。结果塞来昔布作用24小时后,MCF-7/Adr细胞对DOX的敏感性明显增加,浓度为10μmol/L及20μmol/L时,耐药逆转倍数分别为1.82和3.80,呈现剂量依赖性。COX-2、mdr1、c-Jun、YB-1、survivin等在基因和蛋白水平明显下调（P〈0.01）,NF-κB无明显差异（P〉0.05）;20μmol/L作用24小时,P-gp的功能受抑制;G0＋G1期细胞增多,S期细胞减少（P〈0.05）,凋亡率明显增高（P〈0.05）。结论选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布可有效逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药,在一定的浓度范围内呈现剂量依赖性,初步机制可能涉及干预转录因子的表达而下调mdr1,阻滞细胞周期及增加细胞凋亡。     

塞来昔布对胃癌BGC823细胞的放射增敏作用

目的：探讨环氧化酶2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人胃癌BGC823细胞株的放射增敏作用及其机制。方法：MTT实验测定塞来昔布对胃癌BGC823细胞株的抑制率,计算半数抑制浓度（IC50）。克隆形成实验检测塞来昔布联合不同剂量X线照射后细胞的存活率,计算放射敏感性相关参数,评价增敏效果。流式细胞仪（FCM）分析细胞周期分布情况。结果：MTT实验显示塞来昔布对BGC823细胞作用24h、48h、72h的IC50分别是162.6μmol/L、95.4μmol/L、62.1μmol/L;克隆形成实验测得联合组的D0、Dq及SF2均明显低于单纯照射组（1.705VS 2.185,1.032VS 2.327,0.495 VS 0.745）,SER为1.3。流式细胞仪检测联合组G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。结论：塞来昔布能增强胃癌BGC823细胞的放射敏感性,其机制可能与减少肿瘤细胞亚致死性损伤修复和细胞周期再分布有关。     

塞来昔布对子宫内膜癌细胞增生和COX-2 mRNA表达的影响

 【目的 探讨塞来昔布对子宫内膜癌细胞HEC-1-B的作用及对COX-2 mRNA表达的影响。方法 采用细胞培养、MTT试验研究不同浓度的塞来昔布对人类子宫内膜癌细胞HEC-1-B生长的抑制作用，通过RT-PCR法检测塞来昔布作用后COX-2 mRNA表达的变化。结果 塞来昔布能够有效地抑制HEC-1-B细胞的生长，并呈一定的剂量和时间依赖关系，同时能够抑制其COX-2 mRNA表达，20 μmol／L和50 μmol／L塞来昔布对COX-2 mRNA表达的抑制率分别为25.92 ％和50.81％。结论 塞来昔布可能是通过降低COX-2 mRNA的表达而抑制子宫内膜癌细胞的生长。     

过氧化酶增殖因子活化受体对胃癌组织中血管内皮生长因子C的调节作用

目的：探讨过氧化酶增殖因子活化受体（peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ）和血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C）在胃癌组织中的表达及其相关性。研究PPARγ受体激动剂罗格列酮（rosiglitazone,ROS）对VEGF-C的调节作用。方法：选取经病理证实为胃癌的手术切除石蜡标本60例,同时选取相同病例的癌旁组织,癌旁正常组织作为对照,采用免疫组化法检测PPARγ和VEGF-C表达,分析其与临床病理特征的关系。采用免疫印迹法观察不同浓度的罗格列酮作用于MKN-45胃癌细胞48 h时VEGF-C蛋白表达的变化。结果：免疫组化提示PPARγ阳性率在胃癌中是68.33%,癌旁组织中是51.67%,癌旁正常组织中是20%,三者表达差异有统计学意义（P=0.00）;VEGF-C阳性率在胃癌中是63.33%,癌旁组织中是45%,癌旁正常组织中是23.33%,三者表达差异有统计学意义（P=0.00）;PPARγ的蛋白表达与VEGF-C表达为负相关（r=-0.897,P=0.000）;2者的表达均与胃癌淋巴结转移及TNM分期有关（均P〈0.05）。West-blot结果提示选择12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L四个浓度的ROS,VEGF-C/β-actin灰度比分别为：0.42,0.35,0.33,0.32,抑制率分别为：57.8%,64.6%,66.6%,68%,对VEGF-C蛋白表达差别具有统计学意义,（P=0.000）。随着PPARγ配体浓度的增加,对VEGF-C的抑制作用增强。β-actin表达在各组中无明显差异。结论：胃癌组织中PPARγ和VEGF-C呈高表达,联合检测这2个指标对评估胃癌浸润转移及判断病情、监测预后有重要意义。PPARγ可能通过抑制VEGF-C的表达而阻止胃癌的淋巴转移。