益母草水苏碱抑制去甲肾上腺素诱导心肌细胞胚胎基因再表达的作用

目的观察益母草水苏碱（stachydrine,Sta）对去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）诱导的新生大鼠心肌细胞胚胎基因再表达的抑制作用。方法采用II型胶原酶分离新生大鼠心肌细胞,随机分为空白对照组、NE组、卡维地洛组（Car组）及益母草水苏碱组（sta组）各组分别予相应的干预措施。采用荧光标记F-actin染色法测定心肌细胞表面积,Protein／DNA比值代表细胞蛋白合成,并以荧光定量PCR检测胚胎基因α—MHC、β-MHCmRNA表达情况。结果与空白对照组比较,NE组心肌细胞表面积、Protein／DNA比值以及3-MHCmRNA表达差异有统计学意义（P〈0．05）。与NE组比较,sta组及卡维地洛组心肌细胞表面积、Protein／DNA及β—MHCmRNA表达差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Sta能够显著抑制NE诱导的心肌细胞肥大。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响

目的:探讨益母草水苏碱(stachydrine,Sta)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响。方法:采用不同浓度的益母草水苏碱(10-4,10-5,10-6mol·L-1)对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。结果:益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein/DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取和SERCA活性。结论:益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率和SERCA活性也明显提高。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取能力的影响

目的：探讨益母草水苏碱（stachydrine,Sta）对去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取能力的影响。方法：采用不同浓度的益母草水苏碱（10-4、10-5、10-6mol/L）对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。结果：益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein/DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能。结论：益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率也明显提高。     

益母草水苏碱对大鼠心肌细胞肥大的肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响

目的 :探讨益母草水苏碱(stachydrine,Sta)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响。 方法 :采用不同浓度的益母草水苏碱(10^-4,10^-5,10^-6mol/L)对NE诱导的心肌肥大模型组进行干预,通过大鼠心肌肌浆网的蛋白水平和钙摄取能力来反映益母草水苏碱对NE诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的影响。 结果: 益母草水苏碱能够明显减少心肌细胞蛋白含量,降低Protein／DNA比值;益母草水苏碱可剂量依赖地提高NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取和SERCA活性。 结论: 益母草水苏碱对NE诱导的心肌肥大细胞的肌浆网钙摄取功能有一定的程度的提高,与剂量有一定的依赖关系,随着益母草水苏碱的浓度的提高,肌浆网的钙摄取速率和SERCA活性也明显提高。     

益母草生物碱对去甲肾上腺素诱导心肌细胞肥大效应的抑制作用

目的 探讨益母草生物碱(Alkaloid of Leonurus,AFL)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)诱导的新生大鼠心肌细胞肥大的作用.方法 改良Simpson法培养新生大鼠心肌细胞,随机分为生理盐水对照组、NE组及AFL高中低剂量(0.05,0.1,0.5g/L)组.用NE诱导制作心肌肥大模型并给予相应的药物干预.采用伊红染色法测定心肌细胞表面积,BCA法测细胞蛋白含量,HOE 33258荧光法测定细胞DNA含量,观察不同浓度AFL对肥大心肌细胞的影响.结果 模型组细胞表面积、蛋白质含量及Protein/DNA比值与对照组相比明显增加(P＜0.05);AFL中、高剂量组与模型组比较,细胞表面积、蛋白质含量及Protein/DNA比值均显著减少(P＜0.05);低剂量AFL对细胞表面积、蛋白质含量及Protein/DNA比值无明显影响(P＞0.05).结论:AFL可浓度依赖性地拮抗NE诱导的大鼠心肌细胞的肥大反应.     

益母草水苏碱对肥大心肌细胞活性氧信号的影响

目的:观察益母草水苏碱对心肌细胞肥大的作用,探讨其对活性氧(ROS)及其下游NF-κB信号的影响。方法:原代培养乳鼠的心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ建立细胞肥大模型,观察10-7～10-4mol/L浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响(测定细胞体表面积及Protein/DNA比值),同时利用流式细胞仪检测ROS阳性细胞比例,West-ern Blot法测定细胞浆内p-IκBα(ser32)及核内NF-κB(p65)蛋白表达。结果:一定浓度的益母草水苏碱可以降低肥大心肌细胞的体表面积、Protein/DNA比值以及ROS阳性细胞比例(P0.05);益母草水苏碱干预降低了肥大心肌细胞浆内p-IκBα(ser32)及核内NF-κB(p65)蛋白的表达水平(P0.05)。结论:对ROS及其下游NF-κB信号的抑制可能涉及益母草水苏碱对抗心肌细胞肥大的作用机制。     

活性氧参与益母草水苏碱抗AngⅡ诱导心肌细胞肥大的影响

目的利用新生大鼠心肌细胞,观察益母草水苏碱对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大和活性氧（ROS）含量的影响。方法培养新生大鼠心肌细胞,利用AngⅡ诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度的益母草水苏碱对细胞肥大的影响（细胞数目、蛋白以及DNA含量）,同时用H2DCFDA荧光探针标记、流式细胞仪检测ROS含量。结果①AngⅡ（10^-6mol／L）使心肌细胞蛋白含量明显增高（P〈0．05）,对细胞数目和DNA含量无影响（P〉0．05）;②10^-7mol／L～10^-4mol／L浓度的益母草水苏碱呈剂量依赖性关系对抗AngⅡ导致的蛋白含量的增高（P〈0．05）;③AngⅡ可诱导心肌细胞内ROS含量增加,加入益母草水苏碱抑制了AngⅡ的这一作用。结论益母草水苏碱可抑制AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大,抑制ROS含量增加可能是其作用机制之一。     

鹿角方阻断PI3K/AKT信号通路对AngⅡ诱导心肌细胞肥大的保护作用

目的:研究鹿角方对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的保护作用,并从PI3K/AKT信号通路的角度探讨其可能机制。方法:培养原代乳鼠心肌细胞,将其随机分为正常对照组、AngⅡ模型组、鹿角方+AngⅡ组、LY294002(PI3K通路阻断剂)+AngⅡ组、鹿角方+LY294002+AngⅡ组。通过图像分析系统测量心肌细胞表面积;RT-PCR检测ANP、BNP mRNA表达;Wertern Blot检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT(Ser473)和GSK3β蛋白表达。结果:与正常对照组比较,AngⅡ模型组心肌细胞表面积、ANP和BNP mRNA表达以及p-PI3K和p-AKT(Ser473)蛋白表达显著增加(P<0.01);而鹿角方可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,使模型细胞表面积显著减小(P<0.01),ANP、BNP mRNA表达以及p-PI3K和p-AKT(Ser473)蛋白表达显著降低(P<0.01),且抑制效果与LY294002相当,而鹿角方对GSK3β蛋白表达无显著影响。结论:鹿角方可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其机制与阻断PI3K/AKT信号通路有关。     

丹酚酸B对异丙肾上腺素所致乳鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的 探讨丹酚酸B对异丙肾上腺素诱发的原代乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及其机制.方法 用异丙肾上腺素诱导制备原代乳鼠心肌细胞肥大模型.MTT法检测丹酚酸B对乳鼠心肌细胞活力的影响;RT-PCR技术检测心肌肥厚指标心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)基因表达;分光光度法检测心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的量;Western blotting法测定心肌肥厚信号转导通路JAK、STAT蛋白的表达.结果 不同浓度的丹酚酸B对乳鼠心肌细胞的活力无明显影响.与模型组比较,丹酚酸B浓度为10、20 μmol/L时明显下调ANP、BNP基因表达(P＜0.05、0.01);显著增强SOD活性和降低MDA的量(P＜0.05、0.01);显著下调JAK1与STAT3蛋白的表达(P＜0.05、0.01).结论 丹酚酸B能有效抑制异丙肾上腺素诱发的原代乳鼠心肌细胞肥大,其机制可能与抗氧化应激以及抑制JAK1/STAT3信号通路有关.     

人参皂苷Rg1对异丙肾上腺素致乳鼠心肌细胞肥大及过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对异丙肾上腺素致乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用及过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)的影响。方法:原代培养SD乳鼠心肌细胞,用异丙肾上腺素(10μmol/L)诱导心肌细胞肥大,观察核因子-кB(NF-кB)特异性抑制剂BAY11-7082(5μmol/L)及不同浓度人参皂苷Rg1(12.5、25、50μmol/L)对肥大心肌细胞的影响。消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法检测细胞中蛋白的量;RT-PCR法检测心肌细胞心房钠尿肽(ANP)mRNA的表达;Western blotting法检测心肌细胞p65、PGC-1α蛋白的表达;酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测细胞外液中三磷酸腺苷(ATP)、单磷酸腺苷(AMP)及游离脂肪酸(FFA)的含量。结果:与正常对照组相比,模型组心肌细胞体积明显增大,总蛋白的量增加,ANP mRNA、p65蛋白表达上调,PGC-1α蛋白表达下调,心肌细胞中FFA含量及ATP/AMP比值减少。人参皂苷Rg1(25、50μmol/L)、BAY11-7082(5μmol/L)均能有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,使心肌细胞体积减小,总蛋白的量降低,ANP mRNA、p65蛋白表达下调,PGC-1α蛋白表达上调,且上述作用呈一定的剂量相关性。结论:人参皂苷Rg1对异丙肾上腺素诱导乳鼠心肌细胞肥大有保护作用,改善肥大心肌细胞的能量代谢表达水平,其机制可能与抑制NF-кB/PGC-1α信号通路有关。     

三七总皂苷抗心肌肥大的作用与其影响神经体液因素的关系

目的:通过研究三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠整体和离体模型心肌肥大的影响,探讨PNS对心肌肥大的作用机制。方法:用腹主动脉缩窄法建立大鼠整体心肌肥大模型,PNS腹腔注射给药,持续3周后,测大鼠收缩压(SBP)、全心重量/体重(HW/BW)、左室重量指数(LVI)、左室心肌纤维直径(MD);用去甲肾上腺素(NE)诱导培养的新生大鼠心肌细胞制作离体心肌肥大模型,给PNS72h后,测定细胞表面积和蛋白质含量。结果:PNS浓度依赖性地抑制腹主动脉缩窄大鼠HW/BW,LVI,MD的增加,但不能显著降低大鼠SBP;0.1-0.5g·L^-1PNS可显著抑制NE诱导的心肌细胞表面积和蛋白质含量的增加,P<0.01。结论:PNS能抑制大鼠整体和离体2种模型心肌肥大,其作用机制不是通过降低压力负荷.而是与拮抗神经体液因素NE的作用有关。     

康心汤对异丙肾上腺素诱导实验性心肌肥厚大鼠维生素D代谢的调节作用

目的:观察康心汤对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚模型血清25羟维生素D3[25 (OH) D3]的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为5组:对照组,模型组,康心汤10,5,2.5g.kg-1组.异丙肾上腺素2.4 mg·kg-1皮下注射,连续7d,建立心肌肥厚模型,药物干预6周后酶联免疫法(ELISA)检测血清25 (OH) D3,心房利钠肽(ANP),肾素(Renin),大鼠心肌标本HE染色观察组织病理改变.结果:与对照组比较,模组型血清25(0H)D3降低,ANP,Renin升高(P＜0.05).心肌HE染色见心肌排列紊乱,纤维化增生.与模型组比较,康心汤10 g·kg-1干预后,血清25(OH)D3升高,伴随ANP,Renin降低(P＜0.05),心肌纤维化程度减轻.结论:康心汤对25 (OH) D3的调节作用参与逆转异丙肾上腺素致大鼠的心肌肥厚.     

丹参酮ⅡA对大鼠肥厚心肌NO产生及eNOS基因表达的影响

目的：研究丹参酮Ⅱ_A(TSN)对腹主动脉缩窄大鼠肥厚心肌一氧化氮合酶及蛋白激酶C的影响，探讨丹参酮Ⅱ_A逆转高血压左心室肥厚的分子生物学机制。方法：SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型，术后4周将手术大鼠随机分为手术组、TSN低、高剂量组(10，20 mg·kg^-1·d^-1，腹腔注射)、缬沙坦组(10 mg·kg^-1·d^-1，灌胃)，每组8只；另有8只作为假手术组。用药8周后检测各组尾动脉压，取左心室组织检测左心室质量指数(LVMI)、心肌纤维直径(MFD)；硝酸还原法测定心肌组织NO的含量，逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blotting)分别检测eNOS的基因表达水平和蛋白激酶C(PKC)的活性。结果：①TSN低、高剂量组的血压仍显著高于假手术组和缬沙坦组(P<0.01)。②TSN低、高剂量组和缬沙坦组的LVMI，MFD虽然高于假手术组(P<0.05)，却显著低于手术组(P<0.01)。③ TSN低、高剂量组和缬沙坦组的NO含量以及eNOS蛋白、mRNA表达水平明显高于手术组(P<0.01)，TSN两组的eNOS上调超过缬沙坦组(P<0.05)。④ 手术组的PKC蛋白水平显著升高(P<0.01)，TSN低、高剂量组PKC水平明显低于缬沙坦组(P<0.05)。结论：丹参酮Ⅱ_A对心肌肥厚的逆转作用是非血压依从性的，丹参酮Ⅱ_A通过抑制PKC蛋白的表达、促进心肌局部NO的产生及eNOS基因表达，起到阻止、逆转高血压心肌肥厚的发展。     

三七总皂苷对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚的保护作用

目的:研究三七总皂苷(PNS)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)所致大鼠心肌肥厚的保护作用.方法:5mg/kg·d连续7d建立大鼠心肌肥厚模型.造模第二天开始ip PNS 25和50 mg/kg·d连续14d,测定全心重量指数(HW/BW)、左心室重量指数(LVW/BW即LVI);采用试剂盒用分光光度法检测左心室心肌组织中羟脯氨酸(Hyp)和一氧化氮(NO)含量,及Na ,K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活性;用放免分析法检测左心室心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量.结果:ISO模型组大鼠的HW/BW、LVI明显升高;左心室Hyp、AngⅡ含量增高,NO水平下降,Na ,K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活性降低.PNS能明显提高心肌组织NO水平及Na ,K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活性,降低胶原的含量,抑制AngⅡ产生,使HW/BW及LVI下降,抑制心肌肥厚.结论:PNS对ISO所致大鼠心肌肥厚具有保护作用.     

提高新生大鼠原代心肌细胞纯度方法的探讨

目的:探讨提高新生大鼠原代心肌细胞纯度的方法。方法:应用0.08%心肌细胞消化液重复消化出生第1-3天乳鼠的心肌组织多次;收集的细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基中和。用差速贴壁分离法分离后,加入红细胞裂解液,以除去红细胞,加入溴脱氧尿嘧啶(Brdu)纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育2天,无血清同步化1天。结果:分离1只乳鼠获得的心肌细胞产量约为1.2×106个,有活力心肌细胞占90%以上,心肌细胞纯度>90%,3-4天后心肌细胞融合成片,并出现自发性节律性搏动。结论:该方法在保证心肌细胞产量和心肌细胞活性的同时,能大幅度提高心肌细胞纯度。     

芍药苷对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥大的抑制作用及其机制研究

目的:探讨芍药苷(PEF)对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌肥大的抑制作用及其潜在的机制。方法:雄性SD大鼠40只,随机分成5组,每组8只,正常组,模型组,PEF低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg-1),除正常组外,大鼠每天ih给予ISO(5 mg·kg-1,连续10 d)以诱导心肌肥大模型,ih ISO的同时ig给予PEF。给药结束后,分离心脏,测量全心重与体重以及左心室重与体重的比值;HE染色观察心肌细胞大小的改变;RT-q PCR检测肥大标志物心钠素(ANP)和脑钠素(BNP)以及心肌营养素-1(CT-1)的mRNA表达;Western blot和DCFH-DA荧光法分别检测心肌组织中CT-1蛋白的表达和活性氧(ROS)的水平。结果:与正常组比较,模型组全心重与体重、左心室重与体重的比值以及心肌细胞横截面积和ANP,BNP mRNA表达明显增加,同时心肌组织中CT-1 mRNA和蛋白表达以及ROS的水平也明显升高(P0.01);与模型组比较,PEF明显降低全心重与体重、左心室重与体重的比值以及心肌细胞横截面积和ANP,BNP mRNA表达,心肌组织中CT-1 mRNA和蛋白表达以及ROS的水平也明显降低。结论:PEF可抑制ISO诱导的心肌肥大,其机制可能与减少ROS的产生进而下调CT-1的表达有关。