液相色谱-串联质谱法在药物代谢研究中应用最新进展

液相色谱-质谱联用技术因其具有高分离能力、高灵敏度、应用范围广和较强的专属性等特点,已成为一种重要的现代分离分析技术。串联质谱法比单极质谱具有更高的灵敏度和选择性,可以得到更多的结构信息。本文首先介绍了液相色谱-串联质谱法中串联质谱基本原理、常见质谱质量分析器及其特点、串联质谱的连接方式和数据采集方法等。然后将其在药物代谢研究中的主要应用作简要介绍,主要包括利用串联质谱测定药物的代谢动力学参数,利用几种串联质谱应用方式对药物代谢物的结构进行鉴定,概括了每种方式的优劣,总结了串联质谱在药物代谢物结构鉴定中的应用策略,并对其在药物代谢未来的应用进行了展望。     

液相色谱-串联质谱法同时测定对乙酰氨基酚及其相关代谢产物

摘 要 目的：建立一种检测小鼠血浆中对乙酰氨基酚（APAP）及其5个代谢产物的液相色谱 串联质谱（LC-MS/MS）方法,将之应用于对乙酰氨基酚的代谢研究。方法: 血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以对氨基苯甲酸（PABA）为内标,采用LC-MS/MS法,C18色谱柱,流动相为甲醇 5 mmol·L^-1乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）（55∶45）,流速为0.5 ml·min^-1,柱温为25℃,采用电喷雾离子化（ESI）,正离子多反应监测（MRM）检测方式进行定量分析：APAP,[M-H]^-,m/z 152.0→110.0;APAP cys,[M-H]^-,m/z 271.2→140.1;APAP glut,[M-H]^-,m/z 457.0→328.0;APAP NAC,[M-H]^-,m/z 313.4→208.0;APAP sulf,[M-H]^-,m/z 232.4→152.1;APAP-gluc,[M-H]^-,m/z 328.2→152.1;IS,[M-H]^-,m/z 138.2→120.0。结果: 在0.2~10 μg·mL^-1（APAP）、1.0~20 μg·mL^-1（APAP-gluc）、1.0~20 μg·mL^-1（APAP sulf）、1.0~20 μg·mL^-1（APAP glut）、0.4~15 μg·mL^-1（APAP NAC）和0.2~10 μg·mL^-1（APAP cys）范围内线性良好(r≥0.990 0)。各测定物的日内精确度均在85%~115%间,精密度均小于15%,加样回收率均在85%~115%之间,RSD均低于15%。结论:该方法快速、灵敏、准确,适用于小鼠血浆中对乙酰氨基酚及其5个代谢产物的定量测定。     

高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆紫檀芪浓度简

摘要 目的 建立高效液相色谱 串联质谱法（LC MS/MS）测定大鼠血浆紫檀芪浓度。方法血浆样品经乙醚液液萃取处理。分析柱为Thermo Hypsil Gold色谱柱（2.1 mm×50 mm,5.0 μm）,保护柱为Thermo C18 柱（4 mm×3.0 mm,10.0 μm）,以乙腈 水（含1 mmol•L－1 甲酸铵）为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL•min－1,进样量10 μL,内标为白藜芦醇,采用电喷雾离子源（ESI）,以多反应监测（MRM）模式检测。用于定量紫檀芪和内标的MRM扫描离子通道分别为m/z 255.1→240.2,227.1→143.0。每个样品的分析时间为5 min。结果紫檀芪和内标的保留时间分别为2.07,1.90 min。血浆中内源性物质对测定无干扰,紫檀芪的线性范围为1～100 ng•mL－1,日内、日间精密度（RSD）均＜15 %;血浆低、中、高3种浓度（3,50,80 ng•mL－1）紫檀芪苷的准确度分别为103.10%,98.12%和93.23%;血浆低、中、高3 种浓度（3,50,80 ng•mL－1）紫檀芪的萃取回收率分别为78.6%,80.3%和83.2%;检测方法不受基质效应影响。结论该方法灵敏、准确、快速,测定结果可靠,可用于紫檀芪的药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法分析抗肿瘤新药乙烷硒啉在大鼠体内的代谢产物

本研究对抗肿瘤新药1,2-[二(1,2-苯并异硒唑-3(2H)-酮)]乙烷(乙烷硒啉,BBSKE)在大鼠体内的代谢产物进行鉴定。在灌胃给予大鼠单剂量乙烷硒啉200mg·kg-1后,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MSn)对大鼠尿液、粪样、胆汁和血浆中的代谢产物进行检测,通过全扫描和选择离子扫描,以及根据多级质谱裂解规律对代谢物的结构进行分析。研究发现在大鼠尿样、粪样、胆汁和血浆中检测到3种Ⅰ相代谢产物和1种Ⅱ相代谢产物,其代谢途径分别为氧化、甲基化、硫甲基化和葡萄糖醛酸化反应,提示乙烷硒啉在大鼠体内的代谢方式可能是通过氧化、甲基化及葡萄糖醛酸化反应形成代谢产物。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的利培酮

利培酮为苯并异噁唑类化合物,通过阻断5-HT2受体和多巴胺D2受体发挥抗精神病作用.同其他抗精神病药物相比,利培酮所引起的椎体外系副作用更少,药效更为明显 .     

氧化苦参碱在犬体内的药动学

目的:建立beagle犬血浆中氧化苦参碱的LC-MS测定法,测定其灌胃后在beagle犬体内的药动学.方法:采用LichrospherC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温:25℃.流动相为10 mmol·L-1醋酸铵水溶液-甲醇(25:75),流速:1 mL·min-1;电喷雾离子化(ESI)方式,采用选择性离子检测法,检测离子为正离子,氧化苦参碱的离子为[m/z H] 265.1,内标非那雄胺的离子是[m/z H] 373.3.结果:氧化苦参碱在2～5000μg·L-1的范围内呈良好的线性关系(r=0.9990),最低检出限达0.6μg·L-1,日内和日间误差均小于4.2%,萃取回收率大于90%;氧化苦参碱的药-时数据符合二室模型,Cmax为(2 418.3±970.8)μg·L-1,tmax为(1.0±0.3)h,t1/2β为(5.5±1.6)h,AUC0→∝为(6117.4±1080.2)μg·L-1·h.结论:该法灵敏、简单,专属性强,可用于犬血浆中氧化苦参碱的测定.     

葡磷酰胺在大鼠体内的代谢研究

目的初步阐明葡磷酰胺在大鼠体内的代谢情况。方法大鼠静脉给予葡磷酰胺50 mg·kg^-1，采用液相色谱-质谱联用法对大鼠尿中的代谢产物进行分析。分别在正、负离子两种检测方式采用一级全扫描、产物离子扫描、中性丢失扫描、母离子扫描等多种扫描方式下对代谢物进行检测。结果在正离子检测方式下，除原形外共检测到两种代谢物，即异磷酰胺氮芥和异磷酰胺氮芥脱卤素后生成的单胺丙啶基衍生物；在负离子检测方式下，由于异磷酰胺氮芥等化合物无质谱响应而只检测到葡磷酰胺原形。稳定性实验证明在大鼠尿中所检测到的两种化合物为代谢产物而非降解产物。结论葡磷酰胺在大鼠尿样中主要以原形的形式存在，另外还检测到异磷酰胺氮芥和异磷酰胺氮芥的单胺丙啶基衍生物两种代谢产物。     

液相色谱-串联质谱法测定比格犬血浆中氢吗啡酮

目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法测定比格犬血浆中氢吗啡酮。方法比格犬血浆0.1 mL经β-葡糖苷酸酶孵化16 h后，采用液-液萃取法处理，以甲醇-水-甲酸(65∶35∶2〗1)为流动相，Zorbax SB C₈柱分离，采用大气压化学电离源，选择反应监测（SRM）。结果测定氢吗啡酮的线性范围为0.80-200.0 μg·L^-1，定量下限为0.80 μg·L^-1。日内、日间精密度（RSD）均小于6.0%，准确度（RE）在±1%以内。应用此法研究了6只比格犬单剂量po盐酸氢吗啡酮缓释片4 mg后的药代动力学特征。结论该法选择性强、灵敏度高，适用于氢吗啡酮缓释制剂的药代动力学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定柏子仁中黄曲霉毒素残留量

目的建立检测柏子仁中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2残留量的液相色谱-串联三重四极杆质谱法。方法将样品提取液经免疫亲和柱净化,甲醇洗脱,以甲醇/乙腈-0.1 mmol乙酸铵为流动相,经反相色谱柱Agilent Zorbax Extend-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),用电喷雾正离子二级离子监测扫描模式(MRM)检测。结果黄曲霉毒素G2和B2质量浓度在0.03～3.2 ng/mL范围内、黄曲霉毒素B1和G1在0.1～10 ng/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。检测限(LOD)为0.1 ng/mL,定量限(LOQ)为0.2 ng/mL。3个质量浓度(0.25,1.0,5.0 ng/mL)的加标平均回收率为84.1%～96.8%,RSD为7.7%～13.4%。结论所用方法专属性强、灵敏度高、简便快速、结果准确,可定性定量测定柏子仁中残留的黄曲霉毒素。     

高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法研究大鼠尿内毛果芸香碱代谢产物

首次应用高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法鉴定了大鼠灌胃给予毛果芸香碱0.2mg后0-8小时内尿中的代谢物。4只大鼠给药毛果芸香碱盐酸盐,收集给药后尿液,固相萃取柱富集、然后应用高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法在线进行多反应监测,进而对尿中微量的代谢物进行了质谱解析。分别定性为毛果芸香碱的葡萄糖醛酸结合物、毛果芸香酸和毛果芸香酸的葡萄糖醛酸结合物。而且发现了各种代谢产物及原形药物在大鼠体内均有构型变化。     

丹酚酸B在大鼠体内的代谢产物及代谢途径研究

目的 建立大鼠血浆、胆汁、尿液与粪便中丹酚酸B代谢产物的测定方法,并考察其代谢途径。方法 取SD大鼠18只,平分为灌胃和静注2组,每组再分成3个小组,分别采集血浆、胆汁、尿液及粪便,每小组2只大鼠分别单剂量灌胃（500 mg·kg^-1）和尾静脉注射（16.5 mg·kg^-1）给予丹酚酸B,另一只分别灌胃水和尾静脉注射生理盐水作为空白对照。采用高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱（HPLC-Q-TOF-MS/MS）联用法测定血浆、胆汁、尿液与粪便中的丹酚酸B代谢产物,同时推断代谢途径。结果 根据一级质谱分子离子信息和二级质谱碎裂离子信息,在大鼠体内共发现8个丹酚酸B的代谢产物,其中胆汁、粪便中均含有这8个代谢产物,尿液中发现3个代谢产物,血浆中发现2个代谢产物。由丹酚酸B及其代谢产物结构推断丹酚酸B体内主要通过甲基化反应、酯键水解反应代谢。结论 建立的分析方法准确、灵敏、快速,符合生物样品分析要求,适用于大鼠血浆、胆汁、尿液与粪便中丹酚酸B代谢产物的分析,并分析鉴定了8个代谢产物。代谢实验结果表明,胆汁排泄是丹酚酸B最主要的排泄方式。     

巴东过路黄酚类化学成分研究

为了研究巴东过路黄的化学成分,采用硅胶、ODS、MCI以及Sephadex LH-20等柱色谱方法从巴东过路黄95%乙醇提取物中分离得到12个酚类成分,根据化合物的波谱数据分别鉴定为槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖-3’-O-α-L-鼠李糖苷(1)、杨梅苷(2)、槲皮苷(3)、芦丁(4)、2-hydroxynaringenin-4’-O-glucopyranoside(5)、柚皮素-7-O-葡萄糖苷(6)、芹糖甘草苷(7)、甘草查尔酮B(8)、tetrahydroxymethoxychalcone(9)、对羟基肉桂酸甲酯(10)、2,4,6-trihydroxyacetophenone 2-O-glucopyranoside(11)和vaccihein A(12)。化合物1为新化合物,化合物5、11、12为首次从珍珠菜属植物中分离得到,其余化合物为首次从该植物中分离得到。     

液相色谱-串联质谱法测定人毛发中的美沙酮

目的:建立人毛发中美沙酮的液相色谱-串联质谱检测方法。方法:人毛发经清洗研磨后,在pH 9.2的硼酸缓冲液中超声90 min,固相萃取法提取,用LC-MS/MS检测。结果:人毛发中美沙酮的检出限为0.01 ng.mg-1,线性范围为0.1-100 ng.mg-1(r=0.9988),回收率96.7%-118.6%,日内及日间精密度<10%。用此法测定人毛发阳性对照品,结果满意。结论:本方法灵敏度高,适用于人毛发中美沙酮的测定。     

高效液相色谱-串联质谱法测定血清中的雌激素

目的 建立同位素内标-高效液相色谱-串联质谱方法测定人血清中3种雌激素的含量。方法 采用高效液相色谱-串联质谱仪,色谱柱为Phenomenex Gemini^?3μm C₁₈ 110?(50 mm×3 mm),柱温40℃。流动相为0.1%氨水溶液:甲醇,流速为0.6 ml/min。在电喷雾负离子模式下,采用多反应监测模式对血清中雌激素含量进行定量。结果 3种雌激素在相应的浓度范围内相关系数r均大于0.997,加标回收率为91.76%～105.90%,精密度为0.25%～3.04%,无携带污染。结论 该方法准确、可靠、灵敏度好、专属性强,适用于血清中雌激素的检测。     

高灵敏度液相色谱-串联质谱法测定人血浆中普拉克索

目的:建立灵敏、易操作的液相色谱(串联质谱法测定人血浆中普拉克索,并应用于临床药动学研究。方法:血浆样品经乙醚-二氯甲烷(3:2,v/v)液-液萃取后,以乙腈-10 mmol.L-1醋酸铵-甲酸(60:40:0.1,v/v/v)为流动相,Venusil ASB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)进行分离,采用电喷雾电离源,以选择反应监测(SRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z212→m/z(111+126+153)(普拉克索)和m/z243→m/z210(石杉碱甲,内标)。结果:测定血浆中普拉克索的线性范围为5.92～740 pg.mL-1,定量下限为5.92 pg.mL-1,日内、日间精密度(RSD)均小于9.7%,准确度(RE)在-2.5%～0.6%之间。本法被成功应用于健康受试者单剂量口服0.125 mg和0.25 mg盐酸普拉克索片的药动学研究。结论:本方法同时选择3个主要碎片离子作为普拉克索定量产物离子,明显改进了分析方法的灵敏度,适用于人血浆样品中普拉克索的测定。     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中霉酚酸浓度

目的:建立测定人血浆中霉酚酸浓度的液相色谱-串联质谱法。方法:以托吡酯为内标,待测血浆用甲基叔丁基醚萃取后,采用ZORBAX SB-C18色谱柱(50 mm×4.6 mm,5μm),以0.01 mol.L-1醋酸铵溶液-甲醇梯度洗脱以多反应离子监测,扫描模式进行HPLC-MS/MS分析。结果:血浆中无干扰测定的内源性物质;霉酚酸在19.91~14 934 ng.mL-1范围内与内标物峰面积之比线性关系良好,定量下限为19.91 ng.mL-1。提取回收率为77.8%~83.6%。结论:该方法简便、准确、灵敏度高、专属性强,适用于人血浆中霉酚酸的测定。     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的缬沙坦

目的:建立灵敏、快速的高效液相色谱-串联质谱测定人血浆中缬沙坦浓度的方法,并用于人体药代动力学研究。方法:200μL的血浆样品经乙醚提取处理后,以乙腈-水-甲酸(70∶30∶0.2)为流动相,Diamonsil-C18柱分离,通过电喷雾离子源四极杆串联质谱,以多反应监测(MRM)的方式进行检测,选择监测离子反应为m/z436.3→291.2(缬沙坦)和423.1→207.1(氯沙坦)。结果:缬沙坦在2.120~5 300 ng.mL-1浓度范围内线性关系良好,定量限为2.120 ng.mL-1,日内、日间精密度(RSD)均≤9.0%,准确度在0.9%以内,缬沙坦和内标氯沙坦的回收率分别为83.1%和79.4%。结论:该法选择性强、灵敏度高,适用于缬沙坦的临床药动力学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中氧化苦参碱和苦参碱的浓度

目的:建立LC-MS/MS法测定人血浆中氧化苦参碱和苦参碱浓度的方法。方法:待测血浆样品经二氯甲烷萃取后,用LC-MS/MS法进行检测,以西咪替丁为内标。色谱柱为ZORBAX-NH2,流动相为10mmo·lL-1醋酸铵溶液(含0.2%甲酸)-甲醇(25∶75),流速为1.0 mL·m in-1;质谱采用电喷雾离子化(ESI)方式和多反应离子监测(MRM)模式进行正离子检测。结果:本方法氧化苦参碱的线性范围为4.99~998.0ng·mL-1,最低定量浓度4.99 ng·mL-1;苦参碱线性范围为9.71~4 855.0 n·gmL-1,最低定量浓度9.71ng·mL-1。准确度、精密度(日内、日间)、提取回收率、基质效应以及稳定性(室温、冻存)均符合有关要求。结论:该方法简便、准确,灵敏度高,专属性强,适用于人血浆中氧化苦参碱和苦参碱浓度的测定。     

液相色谱-电喷雾串联质谱法测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的:建立液相色谱-电喷雾串联质谱联用测定人血浆中辛伐他汀浓度的方法。方法:色谱条件为 Discovery ODS C_(18)(2.1 mm×100 mm,3μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(65:35,v/v);柱温30℃;流速0.2 mL·min~(-1);进样量5μL。质谱条件为电喷雾电离源(ESI),选择性检测定量离子为 m/z 441.3/325.0(辛伐他汀)和 m/z 427.2/325.0(洛伐他汀,内标)带正电荷的离子峰。样品用乙酸乙酯提取。结果:血浆中辛伐他汀浓度在0.20～20.0 ng·mL~(-1)内呈良好线性关系,r=0.9996。提取回收率为90.0%～92.4%(RSD 6.0%～14.9%),方法回收率在85%～115%之内,日内和日间精密度试验的RSD 均<15%,最低检测浓度为0.2 ng·mL~(-1)。结论:该测定方法经全面考察符合血浆样品的测定要求,可以应用于辛伐他汀的人体药动学研究和生物等效性评价。