^3H—SAM掺入法检测胃癌DNA甲基化水平

目的：探讨人胃癌ＤＮＡ甲基化情况及检测方法。方法：以甲基化酶温育与＾３Ｈ－ＳＡＭ掺入法检测２１例人胃癌癌旁和外周下沉区域的且ＤＮＡ甲基化水平，并与要同标本的ＨｐａⅡ／ＭｓｐⅠ酶解Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｏｌｔ分析癌基因甲基化的结果相比较。结果：发现前者检测癌细胞甲基化的敏感性高于后者；而对于癌前病变区，前者的阳性率又低于后者；两种方法都显示癌细胞总基因组ＤＮＡ甲基化和ｃ－ｍｙｃ，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ癌基因     

奥沙利铂和人参皂苷Rg3不同联合方式对人肝癌细胞株SMMC-7721作用的影响

目的 通过体外实验观察奥沙利铂和人参皂苷Rg3不同联合方式对人肝癌细胞株SMMC-7721作用的影响,并初步探讨其机制。方法 采用MTT法观察奥沙利铂、人参皂苷Rg3单药以及两药同时和序贯应用对SMMC-7721细胞增殖的作用;应用流式细胞术分析单药和两药不同序贯方式对细胞周期分布及凋亡的影响;Western blotting检测单药和两药不同序贯方式作用后SMMC-7721细胞cyclin D1蛋白的表达情况。结果 奥沙利铂、人参皂苷Rg3单药、两药同时及序贯给药对SMMC-7721细胞增殖均有明显的抑制作用。同时用药组的增殖抑制作用优于人参皂苷Rg3先用组（P＜0.05）,但与奥沙利铂先用组比较未见明显差异（P＞0.05）;奥沙利铂先用组的效果优于人参皂苷Rg3先用组（P＜0.05）。流式细胞术分析显示,奥沙利铂主要将细胞阻滞在S期、G₂／M期,人参皂苷Rg3主要将细胞阻滞在G₀／G₁期,同时用药组和奥沙利铂先用组的凋亡率相似（P＞0.05）,阻滞细胞于G₂／M期,且凋亡率均较先用人参皂苷Rg3组高（P＜0.05）。Western blotting显示,两药序贯及同时应用组cyclin D1蛋白表达明显低于单药组,奥沙利铂先用组与同时用药组相似,均低于人参皂苷Rg3先用组。结论 奥沙利铂、人参皂苷Rg3序贯及同时应用较单药更能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,先用奥沙利铂后序贯人参皂苷Rg3与两药同时应用的协同增效作用相似,均优于先用人参皂苷Rg3后序贯奥沙利铂,其机制可能与奥沙利铂先用组和同时用药组将细胞阻滞在S期、G₂／M期,增加促凋亡作用,同时下调cyclin D1蛋白的表达水平有关。     

硒酸钠对人前列腺癌细胞PC-3细胞株活力和增殖的影响

目的：研究硒酸钠(一种主要的无机含硒化合物)对人前列腺癌细胞系PC-3生长和增殖的影响。方法：用硒酸钠对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3进行药物处理，然后用MTT法测定细胞的活力，用^3H-TdR掺入法测定细胞的增殖情况。结果：24小时作用时，硒酸钠中剂量组A值显著低于对照组，高剂量组A值与对照组有极显著差异。48小时作用时，硒酸钠低剂量组A值显著低于对照组，中剂量和高剂量组A值与对照组有极显著差异；48小时的硒酸钠处理抑制PC-3细胞的增殖，中剂量组与对照组相比有显著差异，高剂量组与对照组有极显著差异。结论：硒酸钠可抑制PC-3细胞的活力，抑制细胞增殖，并且这两种作用都呈剂量依赖效应。     

平阳霉素（A5）与抗人食管癌非组蛋白抗体交联物对人食管癌Eca－109细胞株的体外抑制效应

我们以非组生白质（ＮＨＰ）抗体作为抗癌药物平阳霉素（Ａ５）的载体，制备ＮＨＰＩｇＧＡ５交联物。应用（１）细胞培养隔日计数示生长曲线；（２）以Ｆｅｕｌｇｅｎ法示细胞ＤＮＡ相对含量；（３）３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验、比较了ＮＨＰＩＧ－Ａ５、ＮＨＰＩｇＧ及Ａ５对人食管癌细胞株ＥＣａ１０９的体外抑制效应，四者比较，ＮＨＰＩｇＧ－Ａ５人食管癌Ｅｃａ－ｌ０９细胞株有较强的抑制效应。     

急性白血病体外药敏试验MTT法的初步探讨

为了探讨肿瘤细胞体外药敏试验ＭＴＴ法的实验条件，观察体外药敏结果和体内疗效的相关性，作者采用微量液体培养和微量比色法测定了２３例急性白血病患者对常用的６种抗癌药物的体外敏感性，确定了６种化疗药物的体外作用浓度。结果显示，体外药敏试验的结果和体内疗效总符合率为８２．６％，阳性符合率为８８．９％，阴性符合率为７１．４％。提示ＭＴＴ法是一种简便、快速、客观的肿瘤细胞药敏试验方法，对指导急性白血病个体化治疗有较高的实用价值。     

3H—TdR法检测LAK细胞活性的建立及人肺腺癌细胞株（GLC—82）对LAK细胞的…

用３Ｈ－ＴｄＲ释放法检测了个旧人肺腺癌细胞株（ＧＬＣ－８２），小鼠肥大细胞瘤（Ｐ８１５）及人红白血病细胞株（Ｋ５６２）对自然杀伤细胞（ＮＫ细胞），洒巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的敏感性。结果表明：用３Ｈ－ＴｄＲ释放法检测ＮＫ、ＬＡＫ细胞活性具有灵敏、准确、重复性好的优点，适用于国内一般实验室开展；ＧＬＣ－８２细胞对ＮＫ细胞不敏感，而对ＬＡＫ细胞敏感，提示人肺腺癌用ＬＡＫ细胞治疗可能有效，ＧＬ     

人γTNFβ对K562细胞株的杀伤效应及其电镜观察

本文用本实验室新分离的人γ干扰素／β肿瘤坏死因子(γTNFβ)杂合蛋白，对人髓性白血病细胞株K562(该细胞株对人TFNγ，TNFα和TNFβ均有一定抗性)进行了细胞毒效应的研究。实验用甲基纤维素半固体培养系统集落形成法(培养5天）和^3H-TdR掺入法进行，并以人IFNγ、TNFβ以及丝裂霉素C等单因子或双因子为对照比较研究。     

￣3H─TdR法检测LAK细胞活性的建立及人肺腺癌细胞株（GLC─82）对LAK细胞的敏感性

用３Ｈ－ＴｄＲ释放法检测了个旧人肺腺癌细胞株（ＧＬＣ─８２），小鼠肥大细胞瘤（Ｐ８１５）及人红白血病细胞株（Ｋ５６２）对自然杀伤细胞（ＮＫ细胞），淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的敏感性。结果表明：用３Ｈ─ＴｄＲ释放法检测ＮＫ、ＬＡＫ细胞活性具有灵敏、准确、重复性好的优点，适用于国内一般实验室开展；ＧＬＣ─８２细胞对ＮＫ细胞不敏感，而对ＬＡＫ细胞敏感，提示人肺腺癌用ＬＡＫ细胞治疗可能有效，ＧＬＣ─８２细胞可作为检测ＬＡＫ细胞活性的靶细胞。     

TECIA法体外药敏试验对骨与软组织肿瘤的检测结果

目的 探讨组织块培养-终点染色-计算机图像分析法(TECIA)药物敏感性试验在骨与软组织肿瘤个体化化疗中的应用价值.方法 采用TECIA法对70例骨与软组织肿瘤组织标本进行体外组织块培养,用常用化疗药物进行药物敏感性试验.结果 70例骨与软组织肿瘤中,阿霉素的抑制率最高,为47.70%;17例骨肉瘤中,表阿霉素抑制率最高,为53.79%;软组织肉瘤20例中,异环磷酰胺的抑制率最高,为53.48%;其他骨与软组织肿瘤33例,阿霉素的抑制率最高,为48.21%.结论 TECIA法药敏试验可能是实现骨与软组织肿瘤个体化化疗的有效方法.     

顺铂对肝癌细胞株SMMC-7721中SATB1表达的影响

目的:探讨肝癌细胞株SMMC-7721加入顺铂后细胞形态及特异AT序列结合蛋白1(special AT-rich sequence-bindingprotein 1,SATB1)表达的变化。方法:SMMC-7721细胞株中加入不同浓度(0、2.5、5和10μg/ml)顺铂培养24 h后,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,半定量逆转录RT-PCR法检测SATB1 mRNA的表达,Western blot检测SATB1蛋白的表达。结果:SMMC-7721细胞与不同浓度顺铂共培养24 h后,倒置显微镜下可见细胞形态明显改变,细胞数减少,损伤、死亡的细胞增多。SATB1mRNA及蛋白的表达均随着顺铂浓度的增加而减少,其中5和10μg/ml顺铂组与对照组间的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:顺铂可抑制SMMC-7721细胞增殖及SATB1的表达,从而达到抑制肝癌细胞生长的目的。     

去甲斑蝥素处理肝癌细胞SMMC-7721蛋白质组的双向电泳分析

目的分析去甲斑蝥素（NCTD）作用于肝癌细胞SMMC-7721前后蛋白质组表达的差异。方法采用四氮唑蓝还原法（MTT）测定细胞生长抑制率。20μg/ml的NCTD作用于肝癌细胞SMMC-772124h,分别收集处理组与对照组细胞,裂解并提取细胞内总蛋白;双向凝胶电泳（2-DE）分离蛋白质,凝胶银染,ImageMaster2D Platinum软件分析2-DE图谱,寻找差异表达蛋白点。结果NCTD能诱导肝癌细胞SMMC-7721的凋亡,具有时间和剂量依赖性,与对照组比较,处理组2-DE图谱中有5个蛋白点表达上调,6个蛋白点表达下调。结论抗癌药NCTD能诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡并引起细胞内蛋白质组表达的改变。     

SMMC-7721细胞线粒体DNA D—loop区点突变的研究

目的：分析人肝癌细胞株SMMC-7721细胞线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）D—loop区点突变的情况。方法：应用改良-步法提取mtDNA，PCR扩增D—loop区，产物经筛选后测序。结果：在SMMC-7721细胞mtDNAD—loop区发现三处新的点突变位点，分别是16166nt（A→G）、16278nt（C→T）和16362nt（T→C）。结论：SMMC-7721细胞mtDNAD—loop区新发现的点突变可能与肿瘤的发生发展有关。     

Apoptosis in Human Hepatoma Cell Line SMMC-7721 Induced by Water-soluble Macromolecular Components of Artemisia capillaris Thunberg

The aim of this study was to investigate the effect of water-soluble macromolecular components of Artemisia capillaris Thunberg (ACT) on human hepatoma cell line SMMC-7721 (SMMC-7721). The morphological changes of SMMC-7721 were observed under a light microscope and an electron microscope. Inhibition of proliferation was measured with a colorimetric MTT assay. It was discovered that ACT extract-treated cells exhibit morphological changes typical of apoptosis, including condensed chromatin and a reduction in volume. ACT extract at 25–200 μg/ml dosedependently inhibited the proliferation of SMMC-7721. The 50% effective dose, evaluated on day 3 of exposure to the extract, was 64.52±3.53 μg/ml. Upon gel electrophoresis, the fragmented DNA showed a characteristic ladder pattern. Cell cycle analyses revealed that ACT induced cell cycle arrest at the G₀/G₁ phase.     

Hsa-miR-4282对肝癌细胞系SMMC-7721生长的影响

目的  探讨Hsa-miR-4282在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达及其对细胞生长的影响。方法 采用实时荧光定量PCR法检测Hsa-miR-4282在人正常肝上皮细胞系HL-7702和人肝癌细胞系MHCC97-H、SMMC-7721，以及 20例肝癌组织及其相应癌旁组织中的表达。采用瞬时转染法将Hsa-miR-4282 mimics（上调组）和Hsa-miR-4282 inhibitor（下调组）分别转染肝癌SMMC-7721细胞，上调组和下调组分别设置相应阴性对照组。转染后采用MTT法检测细胞增殖能力，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果 Hsa-miR-4282在肝癌组织、肝癌细胞MHCC97-H及肝癌细胞SMMC-7721中的表达均低于癌旁组织及正常肝细胞HL-7702（P＜0.05）。MTT实验结果显示，Hsa-miR-4282上调后肝癌SMMC-7721细胞的OD值低于其阴性对照组，而下调后OD值高于其阴性对照组 （P＜0.05）。平板克隆形成实验显示，下调组的细胞克隆数高于其阴性对照组［（240±7） 个 vs （191±10） 个，P=0.005）］，而上调组细胞克隆数低于基阴性对照组［（146±10） 个 vs （193±12） 个，P=0.013）］。流式细胞仪检测结果显示，Hsa-miR-4282上调组细胞凋亡率较其阴性对照组升高［（23.89±1.89）% vs（16.6±1.14）%，P=0.009）］，下调组细胞凋亡率较期阴性对照组降低［（14.98±0.46）% vs （17.79±0.73）%，P=0.010］。结论 Hsa-miR-4282上调可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖，促进细胞凋亡，可能与肝癌的发病机制有关。     

异硫氰酸苯己酯调控肝癌细胞株SMMC-7721组蛋白乙酰化及诱导细胞凋亡

目的 研究异硫氰酸苯己酯(PHI)对肝癌SMMC-7721细胞组蛋白乙酰化调控及凋亡的影响.方法 采用台盼蓝拒染直接计数法观察PHI对SMMC-7721细胞增殖的影响,采用原位末端标记(TUNEL)法检测PHI对SMMC-7721细胞凋亡的影响,采用Western blot法检测PHI对SMMC-7721细胞组蛋白乙酰化及凋亡相关蛋白表达的影响.结果 PHI可抑制SMMC-7721细胞的增殖,与0 μmol/L作用组比较,5、10、20、40和80 μmol/L的PHI对SMMC-7721细胞均有不同程度的增殖抑制作用.PHI可诱导SMMC-7721细胞产生凋亡,PHI作用于SMMC-7721细胞7 h后,10、20和40 μmol/LPHI组的细胞凋亡率分别为6.9%±2.4%、17.5%±4.2%和54.5%±5.4%,明显高于0 μmol/L PHI组(4.5%±2.3%,P＜0.05).PHI作用于SMMC-7721细胞3 h时,与0 μmol/L PHI组比较,10、20和40 μmol/L PHI组中Bcl-2、Procaspse-9和Procaspse-3的表达下降,caspase-9和caspase-3的表达上升,而Procaspase-8的表达未见明显变化;作用7 h时,这种变化趋势更加明显.PHI作用于SMMC-7721细胞3 h时,与0 μmol/L PHI组比较,10、20和40 μmol/L PHI组中组蛋白H3的乙酰化分别增加了1.87倍、2.43倍和3.67倍,组蛋白H4的乙酰化分别增加了1.29倍、1.45倍和2.25倍;作用7 h时,这种变化趋势更加明显.结论 PHI是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,可调控组蛋白的乙酰化水平,影响其表观遗传学,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡.     

AZT对肝癌细胞端粒酶活性及相关蛋白表达的影响

背景与目的：端粒酶抑制剂抑制端粒酶活性的机制十分复杂,可能涉及多个蛋白的共同作用。本研究通过3’-叠氮脱氧胸苷（3’-azido-deoxythymidine,AZT）作用于人肝癌细胞SMMC-7721。比较AZT作用后癌细胞端粒酶活性及相关蛋白的变化,探讨AZT抑制端粒酶活性的可能机制。方法：利用噻唑蓝[3（4,5-demethyhhiazole-2-y1）-2,5-diphenyl tetrazolium-bromide,MTT]实验确定AZT作用的最佳作用时间和浓度;实时荧光定量端粒重复序列扩增法（real-time fluorescent quantitative TRAP assay,FQ-TRAP法）检测AZT作用后,SMMC-7721细胞端粒酶活性变化;用缺口末端标记技术（terminal deoxyribonucleotidyl transferse（TdT）-mediated biotin-16-dUTP nick-end labelling,TUNEL）法和流式细胞术检测AZT作用后．SMMC-7721细胞凋亡情况;单细胞激光拉曼光谱技术和蛋白质芯片-飞行时间质谱仪,检测AZT作用后特异蛋白质的变化。结果：AZT抑制癌细胞生长的最佳作用时间为48h,最佳作用浓度为20mmol／L;FQ-TRAP法检测发现,AZT作用后肝癌细胞端粒酶活性与对照组相比受到明显抑制（P=0．0001）;TUNEL法观察到AZT诱导肝癌细胞凋亡形态学改变．流式细胞术检测AZT诱导肝癌细胞凋亡率为13．5％：单细胞激光拉曼光谱技术观察到,AZT作用后有7个与蛋白代谢相关的特征峰变化;蛋白质芯片．飞行时间质谱仪检测发现,AZT作用后有24个蛋白分子在癌细胞中高表达,8个蛋白分子在癌细胞中低表达,32个差异蛋白均属于小分子蛋白。结论：AZT可抑制SMMC-7721细胞端粒酶活性,诱导凋亡与相关特异小分子蛋白有关。     

^3H—TdR放射自显影在人肝癌SMMC7721细胞药物敏感性试验中的应用

用＾３Ｈ－ｄＲ掺入放射自显影法测定人肝癌ＳＭＭＣ７７２１细胞对抗癌药ＤＤＰ、ＡＤＭ、５－ＦＵ的浓度依赖性，三者均有良好的线性关系。ｒ〉ｒ．０５，ＩＣ５０分别为２．５４、１．２３、６９．７（μｇ／ｍｌ），而集落培养法，除ＤＤＰｒ〉ｒ．０５外，ＡＤＭ、５－ＦＵ均相差不显著。从实验结果看，＾３Ｈ－ＴｄＲ放射自显影法的敏感性和重复性均优于集落培养法。     

无血清培养基中急性非淋巴细胞性白血病细胞的药物敏感试验

在无血清培养基中,41例急性非淋巴细胞性白血病病人中有39例的骨髓单个核细胞生长了白血病集落,有35例病人测定了体外CFU-L对化疗药物的敏感性。结果发现,只有用Ara-C、Ara-C DNR(AD)、VCR Pred(VP)和H VCR Ara-C Pred(HOAP)测试的病例,其体外白血病细胞杀死率和临床化疗结果间存在明显的一致性。作者认为,在CFU-L药物敏感试验中,无血清培养系统可避免血清中未知物质的干扰。