纺锤体检查点蛋白Cenp-E过低表达与肝癌细胞染色体异常的关系

目的:探讨纺锤体检查点蛋白E(Cenp-E)基因在肝癌细胞中的定位和作用,为进一步阐明肝癌细胞染色体数目异常的机理奠定基础.方法:利用FQ-PCR检测Cenp-E基因在用Nocodazole(诺考达唑)同时处理HepG-2细胞和LO2细胞中mRNA的表达水平.用间接免疫荧光技术观察Cenp-E蛋白在用Nocodazol...     

BubR1基因表达对肝癌细胞对紫杉醇的敏感性的影响

目的:探讨BubR1基因在紫杉醇治疗肿瘤中的作用。方法:构建针对BUBR1基因的特异性短发夹RNA载体,导入人肝癌细胞株HepG-2,转染48 h后,运用实时荧光定量PCR、Western印迹法评价RNA干扰效果;BubR1表达下调的肝癌细胞及对照组细胞用不同浓度(1、3、10、30、100、300、1000和3000 nmol/L)的紫杉醇处理,MTT法检测细胞增殖情况。结果:shRNA-BubR1可有效抑制BubR1的mRNA、蛋白水平以及内源性表达。MTT结果显示,BubR1表达下调的细胞在不同浓度紫杉醇作用下的增殖抑制率与对照组相比明显增加(P<0.05),并呈现剂量依赖性。结论:下调BubR1的表达能增强肝癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

纺锤体检查点蛋白Cenp-E在肝癌组织的表达及临床意义

目的观察纺锤体检查点蛋白（Cenp-E）在肝癌组织和人类正常肝组织表达水平的差异,以探讨Cenp—E蛋白在肝癌细胞中的表达反临床意义。方法用荧光定量PCR和Westernblot分别检测Cenp．E基因和蛋白在肝癌组织和正常肝组织的表达水平。结果正常肝组织中Cenp-E基因mRNA水平（0．02378±0．00973）明显高于肝癌组织（0．01458±0．00873）;Cenp—E蛋白表达量在正常肝组织中（0．656±0．012）明显高于在肝癌组织中的表达（0．301±0．009）,且二者有显著性差异。结论Cenp—E低表达在肝癌的发生过程中起重要作用。     

卷曲螺旋结构域蛋白74B对纤毛生成和细胞周期调控作用研究

背景 卷曲螺旋结构域蛋白（CCDC）参与基因转录、细胞凋亡及细胞周期过程,并调控恶性肿瘤细胞的侵袭和转移等多种生物学行为,然而多数CCDC的生物学功能目前尚未明确。目的 探讨CCDC74B的细胞定位及对纤毛生成和细胞周期的影响。方法 2013年3-9月通过构建在人视网膜色素上皮（RPE1）中的Tet-On表达系统,实现CCDC74B在细胞内的蛋白表达,然后通过细胞免疫荧光染色观察CCDC74B的细胞定位,通过小干扰RNA（siRNA）转染敲除CCDC74B在RPE1细胞中的表达,分为对照组、siRNA#1组、siRNA#2组,采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测CCDC74B mRNA 表达水平;采用细胞免疫荧光染色及流式细胞术观察下调CCDC74B表达后纤毛生成情况和对细胞周期分布的影响。结果 在正常上皮细胞中,CCDC74B位于中心体,细胞免疫荧光染色示,下调CCDC74B表达后细胞初级纤毛生成。siRNA#1组及siRNA#2组转染后36 h及48 h纤毛生成率分别高于对照组（P＜0.05）。RT-PCR法结果显示,siRNA#1组及siRNA#2组均有效抑制了CCDC74B mRNA表达。细胞免疫荧光染色示,下调CCDC74B表达后cyclin A表达减少,提示存在细胞周期停滞;流式细胞术检测示,下调CCDC74B表达后G1期细胞比例增高,S期及G2/M期细胞比例减少。结论 中心体蛋白CCDC74B在细胞增殖过程中参与对纤毛生成和细胞周期的调控。     

死亡结构域相关蛋白对卵巢癌细胞周期及化疗影响的研究

目的 探索在卵巢癌细胞中下调死亡结构域相关蛋白(Daxx)后对其细胞周期及化疗耐药的影响.方法 转染卵巢癌耐药细胞株C13k后分为阴性对照组(NC组)和下调Daxx组(siDaxx组).设立多柔比星药物浓度梯度0、0.15、0.30、0.60μmol/L,流式细胞仪检测上述两组细胞周期变化.Western blot从蛋白水平检测细胞周期及凋亡相关蛋白cyclinB1、cleaved-parp的表达变化.流式细胞仪检测上述两组细胞凋亡的变化.结果 在多柔比星0.30 μmol/L时,下调Daxx蛋白使细胞发生明显的G2/M期阻滞,与NC组比较,siDaxx组G2/M期细胞百分比明显增高(P＜0.05).下调Daxx蛋白使细胞对多柔比星化疗耐药.结论 Daxx对卵巢癌化疗的影响可能与Daxx对细胞周期的调控作用有关.     

纺锤体检查点蛋白BubR1在肝癌组织和肝癌细胞株HepG2中的表达

目的观察纺锤体检查点蛋白BubR1在人类肝癌组织、正常肝组织以及肝癌细胞系（HepG2）、正常肝细胞系（LO2）有丝分裂期表达水平的差异,以探讨BubR1蛋白在肝癌发生中的作用。方法用荧光定量PCR和Westernblot检测BubRl基因在肝癌组织、正常肝组织,以及在2种细胞中用Nocodazole处理前后的mRNA和蛋白的表达水平。结果BubR1基因在正常组织中的表达高于肝癌组织,在Nocodazole处理前2种细胞中表达无显著差异,在处理后2种细胞中表达均增高,但在L02细胞中上调水平大于HepG2细胞。结论BubR1基因低表达可能在肝癌的发生过程中起重要作用。     

Cenp-E表达下调与HepG-2细胞染色体数目异常的关系研究

目的在人肝癌细胞(HepG-2细胞)中研究纺锤体检查点蛋白E(Cenp-E)的定位和作用。方法用流式细胞术检测经诺考达唑处理后HepG-2细胞和正常肝细胞(LO2细胞)周期的变化,用染色体分析方法检测两种细胞染色体数量及核型,用实时荧光定量-聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测经诺考达唑处理后HepG-2细胞和LO2细胞中Cenp-E mRNA的表达水平,用间接免疫荧光技术观察两种细胞Cenp-E蛋白表达及定位,在LO2细胞中用RNA干扰(RNAi)技术进一步评价Cenp-E蛋白的功能。结果诺考达唑处理后,使两种细胞有丝分裂均停留在G2/M期;染色体分析结果显示HepG-2细胞中染色体数目异常细胞的比例高于LO2细胞(P<0.05);RFQ-PCR显示诺考达唑处理后LO2细胞Cenp-E mRNA高于HepG-2细胞(P<0.05);间接免疫荧光技术显示Cenp-E定位于细胞核,诺考达唑处理后LO2细胞Cenp-E蛋白表达高于HepG-2细胞(P<0.05);转染质粒后,LO2细胞中Cenp-E mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 Cenp-E过低表达可能是肝癌细胞染色体数目异常重要原因之一。     

乙型肝炎病毒x蛋白对细胞周期的影响

目的　研究乙型肝炎病毒ｘ（ Ｈ Ｂｘ） 蛋白对细胞周期影响,探讨 Ｈ Ｂｘ 蛋白致细胞周期紊乱的分子机理。方法　构建 Ｈ Ｂｘ 基因真核表达载体ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４ Ｘ,电转染入 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞（ Ｘ 细胞） ,以ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４空载体为对照（ Ｘ０ 细胞） ,潮霉素选择培养,克隆扩增转染细胞,经无血清培养同步化后,流式细胞仪检测细胞周期变化;细胞组化和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测增殖细胞核抗原（ Ｐ Ｃ Ｎ Ａ） 和ｐ２１ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｗ Ａ Ｆ１ 表达变化。结果　流式细胞仪检测示对照 Ｘ０ 细胞７０ ％ 进入 Ｇ０ Ｇ１ 期,而转 Ｘ 细胞仅５６ ％ 进入 Ｇ０ Ｇ１ 期,与含血清培养的亲本细胞 Ｈｅｐ Ｇ２ 几乎相同。ｐ２１ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｗ Ａ Ｆ１ Ｄ 表达在 Ｘ０ 细胞阳性率为（８６ ±８） ％ , Ｘ 细胞为（１６ ±６） ％ 。 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达在 Ｘ０ 细胞阳性率为（９ ±５） ％ , Ｘ 细胞为（８６ ±３） ％ 。结论　 Ｈ Ｂｘ 有推进细胞周期作用,并使细胞生长对血清依赖减少。 Ｈ Ｂｘ 可抑制细胞周期抑制蛋白ｐ２１ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｗ Ａ Ｆ１ 表达,同时增强细胞 Ｄ Ｎ Ａ 合成。     

癌症高表达蛋白Hec 1与染色体不稳定性

癌症高表达蛋白Hec1是纺锤体检验点信号途径中的一个蛋白,在有丝分裂期位于着丝粒。Hec1-Nuf2复合物是招募纺锤体检验点复合物Mad1/Mad2的重要结构基础。Hec1蛋白可以与26S蛋白酶体亚基相互作用抑制其降解细胞周期素功能。Hec1是用酵母双杂交方法寻找与Rb相互作用蛋白时发现的,Rb可通过与Hec1相互作用调节Smc1与DNA的结合能力,从而参与M期调控。Hec1主要在G2/M期表达,激酶Nek2磷酸化Hec1是其发挥功能的关键。Hec1在一些肿瘤细胞中高表达并且在部分肿瘤组织中表现扩增。Hec1基因的功能异常会引起严重的染色体分离障碍,从而导致染色体不稳定,而染色体不稳定性与肿瘤的发生、发展密切相关。所以Hec1可能成为肿瘤基因治疗的一个新的靶点。     

大肠癌细胞周期状态与临床病理因素及细胞周期蛋白水平的相关性

目的研究大肠癌组织的细胞周期分布状态与临床病理因素的关系,以及和细胞周期调节蛋白的表达水平是否相关。方法应用流式细胞术检测45例大肠癌临床标本细胞周期中G0/G1、S、G2/M期所占的比例,并检测每例标本的细胞周期蛋白CyclinD1、CyclinE、CyclinA、CyclinB1的表达水平。结合临床病理因素进行统计分析。结果肿瘤细胞G0/G1、S、G2/M期所占的比例和患者性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期均无明显相关性,均P>0.05。G0/G1期的比例与CyclinD1、CyclinE,S期与CyclinE、CyclinA,G2/M期与CyclinA的表达水平均不相关,均P>0.05;但是G2/M期的比例与CyclinB1的表达水平正相关,r=0.335,P=0.035。结论大肠癌肿瘤细胞的周期分布和临床病理因素无关,肿瘤细胞周期蛋白的表达特点与体外培养的细胞系不同,表现得更加复杂多样。     

铁剥夺对K562细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:观察铁剥夺诱导K562细胞的凋亡及对细胞周期的影响.方法:实验组以不同浓度(25 μmol/L、50 μmol/L)的去铁胺处理K562细胞,25 μmol/L去铁胺加等浓度的三氯化铁作对抗组,设空白对照组,分别收集不同时间点(16 h、24 h、32 h、48 h、72 h)的细胞,用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)进行双标记,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化.用流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞周期特征.结果:K562细胞经25 μmol/L、50 μmol/L的去铁胺处理后发生了不同程度的凋亡,随着时间延长和剂量增加,细胞凋亡率增加(P＜0.05).细胞周期检测发现25 μmol/L、50 μmol/L的去铁胺处理K562细胞48 h和72 h后,G0/G1期细胞数较对照组升高,S期细胞数和细胞增殖指数均较对照组降低(P＜0.05.结论:铁剥夺可抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡,机制可能是通过剥夺细胞内铁阻止细胞进入S期.     

微重力对成骨细胞的周期及分化过程的影响

航天飞行时,微重力环境可导致较为严重的骨质丢失。失重性骨质丢失的发生机制主要是骨形成受到抑制。成骨细胞作为骨形成的主要功能细胞,它的细胞周期和细胞分化在微重力条件下也发生了显著变化。本文就微重力对成骨细胞的周期及分化过程的影响进行综述。     

苦参碱与8种抗肿瘤药联合对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响

目的探讨8种常用抗肿瘤药物长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、5一氟尿嘧啶、环磷酰胺、阿糖胞酐,三尖杉酯与苦参碱联合对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响。方法以喉癌KBV200耐药细胞株为研究对象,通过流式细胞仪（FCM）检测8种抗肿瘤药物分别联合苦参碱对KBV200细胞株细胞周期的影响。结果苦参碱加顺铂组使KBV200耐药细胞株G0～G1期细胞下降,G2～M期细胞升高;苦参碱加阿糖胞酐组使KBV200耐药细胞株G0～G1期细胞升高,G2～M期细胞下降;苦参碱加5-Fu组对KBV200耐药细胞株的凋亡作用加强;苦参碱与长春新碱、阿霉素、三尖杉酯、环磷酰胺、平阳霉素联合个组中,对KBV200耐药细胞株细胞周期及凋亡均无明显变化。结论苦参碱分别与顺铂和阿糖胞酐联合作用后,均可影响KBV200耐药细胞株的细胞周期。     

钩吻提取液对Hela细胞生长增殖和细胞周期的影响

目的 探讨钩吻(Gelsemium elegang Benth)提取液对Hela细胞生长增殖以及细胞周期的影响。方法 采用XTT法分析细胞增殖，Timelapse显微镜形态观察，流式细胞仪检测凋亡和细胞增殖状态，综合评价钩吻提取液抗Hela细胞生长和增殖的作用。结果 钩吻B组分具有明显的抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡。且存在明显的剂量和时间-效应关系。经钩吻B处理的Hela细胞周期发生明显变化，G0／G1期细胞比例降低，S期细胞比例增加，而G2/M期细胞比例变化不明显。结论 钩吻B组分可抑制Hela细胞增殖、诱导凋亡，具有明显的抗肿瘤细胞的作用；钩吻B组分主要阻止细胞由G1期向S期转化，并在此阶段诱发凋亡。     

TNP-470对大鼠血管平滑肌细胞生长的抑制作用及细胞周期的影响

目的研究TNP-470对血管平滑肌细胞生长的影响。方法采用MTT法检测TNP-470对体外培养的SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测TNP-470对细胞周期分布及其相关蛋白CDK4、CyclinD1和p27表达的影响。结果TNP-470对血管平滑肌细胞生长具有抑制作用,IC50约为23.3μg/L。TNP-470处理组细胞S期比率[(15.43±5.16)%]和G2/M期比率[(9.49±2.70)%]明显低于对照组[(22.29±6.80)%、(16.51±8.61)%,P<0.05,P<0.05];而G0/G1期则相反,G0/G1期比率[(75.14±6.62)%]显著高于对照组[(60.38±7.23)%,P<0.001];处理组PI(23.76±7.92)明显小于对照组(39.62±7.23,P<0.001)。TNP-470处理组CyclinD1蛋白(27.93±4.22)和CDK4蛋白(51.80±6.65)表达明显低于对照组(32.13±3.28、59.65±7.34,P<0.05、P<0.05);但p27蛋白(51.27±3.75)表达较对照组(39.62±7.23)显著增多(P<0.001)。结论TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制血管平滑肌细胞的生长,该抑制作用与TNP-470影响VSMCs中CyclinD1、CDK4和p27蛋白的表达有关。     

奥沙利铂对肝癌细胞HepG2细胞周期的影响

目的:探讨奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人肝癌细胞株HepG2周期的影响及其相关机制,为其应用于原发性肝细胞癌临床治疗提供理论依据。方法:MTT方法检测L-OHP对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测L-OHP诱导HepG2细胞周期阻滞的作用;RTPCR和Western blot方法观察L-OHP对细胞周期调节因子CyclinD1、CDK2、CDK4及p16、p21、p53表达的影响。结果:MTT结果显示L-OHP对HepG2细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。L-OHP能够诱导HepG2细胞周期阻滞于S期,并可下调CDK4和CyclinD1蛋白的表达,上调p21,p53蛋白的表达,CDK2和p16表达无明显变化。结论:L-OHP可能通过影响CDK4、CyclinD1及p21的活性使HepG2细胞阻滞在S期,从而抑制肝癌细胞HepG2的增殖。     

5-氟尿嘧啶对Jurkat和EL-4细胞周期解偶联的影响

目的：研究5-氟尿嘧啶（5-FU）不同剂量和给药后不同时间Jurkat和EL-4细胞周期解偶联的变化规律。方法：采用不同剂量（0、0.001、0.010、0.100和1.000 mg•L^-1）5-FU处理Jurkat和EL-4细胞,给药0、4、8、16、24和48 h后分别收集细胞,应用碘化丙啶（PI）荧光标记及流式细胞术（FCM）检测分析细胞倍体变化的剂量-效应和时间-效应规 律。结果：不同剂量5-FU给药后16 h,Jurkat细胞八倍体细胞百分率在0.001、0.010、0.100和 1.000 mg•L^-1各个剂量组均显著低于0 mg•L^-1组（P<0.01） ,无剂量依赖性;EL-4细胞八倍体细胞百分率在0.010 和 0.100 mg•L^-1组显著高于0 mg•L^-1组（P<0.05）。0.100 mg•L^-15-FU 给药后,Jurkat细胞八倍体细胞百分率在8、16和24 h显著低于相应对照组（P<0.01）,48 h显著高于相应对照组（P<0.01）;EL-4细胞八倍体细胞百分率在4、8和16 h显著高于相应对照组（P<0.05）,48 h显著低于相应对照组（P<0.01）。结论：5-FU可以诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联,而不能诱导Jurkat细胞发生细胞周期解偶联。     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及凋亡的影响

目的 研究甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 MTT法测定甜菜碱对HepG2的细胞毒作用;PI染色,流式细胞术观察甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.结果 甜菜碱对HepG2细胞的IC50为0.5mol/L;甜菜碱使HepG2细胞G2/M期比例下降;甜菜碱作用于HepG2细胞24h后,3个不同剂量组(0.1、0.2、0.4mol/L)诱导细胞凋亡率分别为(7.5±0.9)%、(11.5±1.1)%、(33.9±1.2)%,48h后凋亡率为(13.4±1.9)%、(20.9±1.4)%、(67.8±1.8)%.结论 甜菜碱可抑制人肝癌细胞HepG2的生长,阻滞细胞进入G2/M期进而诱导细胞凋亡.     

Effect of Trichosanthin on Cell Cycle and Apoptosis of Murine Melanoma Cells

Aplantprotein,calledTrichosanthin(TCS),extractedfromtherootsofTrichosantheskirilowiigrowinginChina.Trichosanthinhasattractedtheattentionofmanyinvestigatorswithitsactivityonfouraspects:theinfluenceonimmunesystem,theinductionoflaborandtheinhibitionofHIVreplicationaswellasthesuppressionoftumorgrowth('--').Inordertoestimatetheprospectoftrichosanthinontumortherapy,theeffectoftrichosanthinonmurinemelanomacellswasstudiedandcomparedamongthedifferentcomPOnentsoftrichosanthinextractedbyourlaboratory…