外膜蛋白疫苗对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用

研究幽门螺杆菌(H.pylori)外膜蛋白(OMP)加大肠杆菌不耐热内毒素(LT)经口免疫对小鼠H.pylori感染的保护作用。探讨定量细菌培养在疫苗免疫效果评价中的应用。方法从H.pyloriNCTC11637菌株制备OMP和全菌超声粉碎抗原,LT作为粘膜免疫佐剂。通过灌胃分别以H.pylori全菌超声粉碎抗原1mg加LT10μg(A组)、H.pyloriOMP0.5mg加LT10μg(B组)和生理盐水(C组)免疫小鼠(n=30),每周1次,共4次。免疫完成后4周以H.pyloriSydneyStrain1菌株攻击小鼠1次(1×107CFU/只),攻击后4周处死小鼠,取胃分别作快速尿素酶试验、病理检查及定量细菌培养,观察H.pylori定植情况。结果C组小鼠Hpylori定植密度为2.40×107CFU/g胃组织,A组和B组小鼠分别为2.03×105CFU/g和6.76×105CFU/g胃组织,免疫组的定植密度明显降低。结论口服HpyloriOMP加LT对小鼠H.pylori感染具有一定免疫保护作用,但不能完全预防感染,需进一步筛选更为有效的抗原和佐剂。定量细菌培养可以更敏感、更客观地反映胃粘膜H.pylori定植量和评价疫苗免疫效果。     

幽门螺杆菌硫氧还蛋白的研究进展

幽门螺杆菌（Hp）感染是胃癌发生的主要原因之一。在欧美国家,Hp毒力因子细胞毒素相关基因A(CagA)和空泡毒素A(VacA)与Hp的致病性密切相关。然而在东亚国家,CagA的阳性率高达90%,并不能完全解释Hp致病性的差异,可能存在其他致病因子。本课题组的前期研究发现硫氧还蛋白1(Trx1)可能为高致病性Hp的毒力因子,并针对Hp Trx1在细胞学、动物学、人体组织学等方面进行了一系列研究。本文就Hp Trx1的研究进展作一综述。     

幽门螺杆菌毒力因子VacA和CagA的分子生物学

幽门螺杆菌毒力因子ＶａｃＡ和ＣａｇＡ的分子生物学王思平王孟薇解放军总医院西院消化科北京市１００８５３ＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｔｏｘｉｕｓ；ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ主题词螺杆菌，幽门；细菌毒素...     

幽门螺杆菌根除治疗失败后对策研究进展

幽门螺杆菌（H.pylori）是人类常见致病菌,与慢性胃炎、消化性溃疡、肠上皮化生、胃癌、胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤等的发生、发展密切相关.近年H.pylori根除治疗失败率逐渐上升,可能与抗生素耐药以及根除方案的药物组成、疗程和剂量欠合理等有关.对根除治疗失败者行补救治疗已成为H.pylori治疗研究领域的新热点.本文旨在从多个方面分析造成H.pylori根除治疗失败的原因,并有针对性地提出相应的处理策略和补救方法.     

幽门螺杆菌致病因子研究进展

本文从粘附、定植、毒力等三个方面简述了幽门螺杆菌的致病因子,对于理解幽门螺杆菌的致病性和致病机理具有重要意义。     

cagⅡ在胃十二指肠疾病患者幽门螺杆菌中的检出率及其与幽门螺杆菌相关性疾病的关系

目的:探讨cagⅡ在胃十二指肠疾病患者幽门螺杆菌(H.pylori)中的检出率及其与H.pylori相关性疾病的关系.方法:H.pylori菌株分离自107例胃十二指肠疾病患者,其中慢性胃炎67例,消化性溃疡34例,胃癌6例.采用聚合酶链反应(PCR)技术,对107株H.pylori菌株cagⅡ中的597 bp片段进行扩增.结果:107株H.pylori菌株的cagⅡ阳性检出率为69.2%(74/107),慢性胃炎(64.2%)、消化性溃疡(79.4%)和胃癌(4/6)组的检出率无显著差异(P＞0.05).结论:cagⅡ在不同胃十二指肠疾病患者感染的H.pylori中均有检出,其分布与不同H.pylori相关性疾病的关系并不十分密切,cag Ⅱ在H.pylori致病中的意义还有待进一步研究.     

抗生素诱变的球形幽门螺杆菌定居毒力的研究

目的揭示抗生素诱变的球形幽门螺杆菌（Ｈｐ）与定居有关毒力的变异情况。方法采用亚抑菌浓度抗生素作用,使５株Ｈｐ发生球形变异,检测球形Ｈｐ的尿素酶活性及其对Ｈｅｐ２细胞（喉癌上皮细胞）的粘附性,并用ＰＣＲ法检测其尿素酶Ａ,尿素酶Ｂ及粘附素基因。结果球形Ｈｐ尿素酶活性降低,对Ｈｅｐ２细胞的粘附性降低,电镜下可见球形Ｈｐ侵入细胞内。球形Ｈｐ的４１１ｂｐ尿素酶Ａ,１１５ｂｐ尿素酶Ｂ及３７５ｂｐ粘附素基因的ＰＣＲ均阳性。结论抗生素诱变的球形Ｈｐ与定居相关的毒力减弱,但其有关毒力基因片段未缺失。     

重视幽门螺杆菌毒力因子及其致恶变作用研究

经过多年的基础与临床研究，幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染与某些胃肠系疾病如慢性胃炎、消化性溃疡等的关系已获确认，从而分别就药物根除Ｈｐ治疗开展了大量研究，证实不同作用机制的多药联用有利于提高Ｈｐ根除率，其中有关研究证实单用奥美拉唑或兰索拉唑不能清除Ｈｐ。研究...     

幽门螺杆菌毒力致病因子研究进展

幽门螺杆菌( Helicobacter pylori, H pylori)感染是一种世界范围内常见的慢性感染, 可致多种疾病, 如: 慢性胃炎, 十二指肠溃疡, 胃黏膜相关的淋巴样组织淋巴瘤及胃腺癌. 不同疾病是由H pylori和宿主之间复杂的致病机制导致. 近年来, 学者们对H pylori毒力致病因子的研究取得了长足进展, 为揭开H pylori感染的致病机制奠定了基础. 本文就H pylori毒力致病因子CagA、VacA、BabA、SabA、OipA、DupA等的最新研究进展进行了综述.     

幽门螺杆菌27kDa外膜蛋白的基因克隆和特性鉴定

背景：幽门螺杆菌（H.pylori)是全球人群中感染范围最广的致病菌，现已被公认为慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病因子，并与胃腺癌和胃淋巴瘤的形成密切相关。而H.pylori疫苗可能成为控制这一全球范围感染的有效措施。其研制和开发已成为目前研究热点。目的：探索研制H.pylori疫苗的新途径，对H.pylori27kDa外膜蛋白（OMP27）进行基因克隆和特性鉴定。方法：培养和收集H.pylori菌株NCTC11637，采用酚；氯仿抽提和纯化基因组DNA。分别设计引物P1和P2，并以该基因组DNA为模板，以聚合酶链反应（PCR）方法扩增OMP27基因片段。构建pQE30-OMP27重组表达载体时，pQE30质粒载体和纯化的PCR产物均用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ双酶切，再用T4DNA连接酶将双酶切后的目的基因片段OMP27重组于pQE30的相应酶切位点之间，连接产物转化大肠杆菌XL1-Blue。挑选转化克隆，提取质粒，并进行KpnⅠ和HindⅢ双酶切和PCR方法鉴定，1%琼脂糖凝胶电泳观察酶切和PCR扩增结果，经测序分析确认后，筛选出插入目的基因的阳性克隆，命名为pQE30-OMP27，挑取单个含重组质粒pQE30-OMP27的工程菌（XL1-Blue)阳性克隆，进行培养和IPTG诱导表达后，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和Western blot进行蛋白表达和抗原性鉴定。结果：该目的基因的PCR产物全长723bp。编码241个氨基酸残基组成的多肽（约27kDa)。SDS-PAGE和Western blot检测表明，电泳图谱上显示出1条相对分子量约27kDa的新生蛋白带，占细菌总蛋白的5%，并能与H.pylori感染小鼠血清发生特异性反应，表明重组H.pyloriOMP27具有良好的抗原性。结论：H.pyloriOMP27有望成为新的H.pylori疫苗候选分子，并可作为抗原用于H.pylori感染患者血清膜蛋白抗体的检测。     

Helicobacter pylori virulence genes

Helicobacter pylori(H.pylori)is one of the most important human pathogens,infecting approximately half of the global population.Despite its high prevalence,only a subset of H.pylori infected individuals develop serious gastroduodenal pathology.The pathogenesis of H.pylori infection and disease outcome is thus thought to be mediated by an intricate interplay between host,environmental and bacterial virulence factors.H.pylori has adapted to the harsh milieu of the human stomach through possession of various virulence genes that enable survival of the bacteria in the acidic environment,movement towards the gastric epithelium,and attachment to gastric epithelial cells.These virulence factors enable successful colonization of the gastric mucosa and sustain persistent H.pylori infection,causing chronic inflammation and tissue damage,which may eventually lead to the development of peptic ulcers and gastric cancer.Numerous studies have focused on the prevalence and role of putative H.pylori virulence genes in disease pathogenesis.While several virulence factors with various functions have been identified,disease associations appear to be less evident,especially among different study populations.This review presents key findings on the most important H.pylori virulence genes,including several bacterial adhesins and toxins,in children and adults,and focuses on their prevalence,clinical significance and potential relationships.     

幽门螺杆菌OipA、HopX、HopW基因的检测及序列分析

目的:检测幽门螺杆菌(H pylori)标准菌株NCTC11637及临床菌株外膜蛋白的三种基因(OipA、HopX、HopW及比较NCTC11637中三种基因与国际标准菌株(26695和J99)的同源性,为Hpylori疫苗的筛选提供实验依据.方法:运用PCR方法检测标准菌株NCTC 11637及27例临床菌株中的三种基因,并对其进行测序.运用GenBank比较与国际标准菌株(26695和J99)的同源性.结果:在标准菌株NCTC11637中检测到三种基因.在27例临床菌株中,有10例检测到OipA基因.在23例中检测到HopX基因,在27例中均检测到HopW基因.NCTC11637中OipA基因与26695和J99的核苷酸序列同源性分别为95.38%、94.60%,均低于两株国际标准菌株的同源性95.50%.HopX基因的同源性分别为94.90%和95.15%,同样低于两株国际标准菌株的同源性96.49%.HopW基因与26695和J99的同源性分别为97.38%、94.90%,两株标准菌株的同源性为95.20%.结论:在标准菌株NCTC11637和临床菌株中检测到三种基因.H pylori HopW基因核苷酸序列具有一定的保守性.     

人胃上皮细胞中幽门螺杆菌CagA相关未知磷酸化蛋白和磷酸化位点分析

背景：细胞毒素相关基因A蛋白（CagA）是Ⅰ型幽门螺杆菌（H.pylori）的主要毒力因子。H.pylori胃癌、胃炎相关株和CagA缺失（△CagA）株的蛋白质组学研究尚未发现CagA相关生物标记蛋白。目的：分析H.pyloriCagA阳性株和△CagA株作用后人胃上皮细胞中差异表达的未知磷酸化蛋白和磷酸化位点,为研究CagA的致病机制提供线索。方法：以金属离子亲和吸附富集技术富集经H.pylori标准株和△CagA株作用4h的人胃腺癌细胞株AGS的磷酸化蛋白,双向电泳（2-DE）分离蛋白,飞行时间质谱（TOF-MS）技术鉴定差异蛋白点。结果：H.pylori标准株作用后,AGS细胞FAM50A蛋白276位丝氨酸发生磷酸化,PQBP1蛋白227～251序列中有磷酸化位点。与H.pylori标准株相比,△CagA株作用于AGS细胞可引起至少13种未知磷酸化蛋白的变化,其质谱图中均出现中性丢失峰,其中2种表达量增加,4种表达量降低,6种消失,1种新发生磷酸化。结论：CagA阳性H.pylori感染可致AGS细胞FAM50A和PQBP1蛋白发生磷酸化。所发现的13种未知磷酸化蛋白为揭示CagA的致病机制提供了线索。     

幽门螺杆菌外膜蛋白质组二维凝胶电脉和图像分析

幽门螺杆菌(H．pylori)对胃黏膜的致病免疫机制十分复杂．人们迫切需要了解不同H．pylori蛋白分子对机体的作用．目前有关H．pylori外膜蛋白质的研究尚不多。目的：建立针对H．pylori外膜蛋白质组学研究的二维凝胶电泳(2-DE)及其相关技术体系．比较不同胃病相关Hpylori菌株外膜蛋白质组2-DE图谱的差异，为研究H．pylori外膜蛋白质的免疫蛋白质组学提供技术基础。方法：分别选用分离自2例不同胃病患者胃黏膜的H．pylori菌株(H．pylori 185和H．pylori 161)．采用2-DE分离此两种H．pylori菌株的外膜蛋白质．通过图像分析软件进行蛋白斑点检测和匹配分析。结果：对H．pylori外膜蛋白质重复进行2-DE和图像分析．发现蛋白斑点匹配率约为98％．绝大部分蛋白能较好地重叠，重复性好，分辨率较高。Mpylori 185菌株和H．pylori 161菌株分别有蛋白斑点116个(主蛋白斑点39个)和129个(主蛋白斑点48个)，两者有35个相同的主蛋白斑点，但其蛋白含量略有差异。结论：不同胃病相关H．pylori的菌株外膜蛋白质存在许多共同的蛋白斑点．且各有特异的蛋白斑点，有些蛋白含量略有差异。2-DE分离H．pylori外膜蛋白质是研究H．pylori外膜蛋白质组学的重要途径之一。对不同胃病相关Mpylori菌株的外膜蛋白质进行分析．可为临床诊治H．pylori相关疾病提供理论基础。     

幽门螺杆菌iceA1基因地域分布特征

iceA基因是近年来发现的一种幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)毒力相关基因.H.pylori与胃黏膜上皮接触后可引起iceA1基因表达上调,该基因与nlaIIIR基因(位于乳糖奈瑟氏菌)具有相似性,其编码的蛋白质产物具有NlaIIIR样限制性核酸内切酶活性.研究表明,iceA1阳性...     

幽门螺杆菌根除方案和影响因素

随着抗菌药物耐药性的不断上升,经典三联疗法对幽门螺杆菌（Hp）的根除率明显降低。近年出现的新治疗策略可替代三联疗法作为一线疗法,包括序贯疗法、含铋剂的四联疗法、伴同疗法、混合疗法等,以左氧氟沙星、利福布丁和呋喃唑酮为基础的疗法可作为补救治疗。此外,中药和益生菌亦可作为补充治疗。考虑到Hp的耐药性、CYP2C19基因表型、吸烟等诸多因素对根除效果的影响,临床医师应根据具体情况选择合理的治疗方案。本文就近年Hp根除治疗方案和影响因素作一综述。     

功能性消化不良中的幽门螺杆菌感染与精神心理因素

功能性消化不良(FD)是一类胃肠运动和内脏感觉异常性疾病,目前倾向于认为其是多因素所致的综合征。幽门螺杆菌感染可导致FD的形成;FD患者不同的表现可引起不同程度的精神心理改变,而精神心理疾病亦可引起FD。本文就FD中幽门螺杆菌感染与精神心理因素的研究进展作一综述。