骨髓间充质干细胞条件培养液对心脏成纤维细胞的影响

目的探讨体外2％氧条件下培养骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）培养液对成年大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成情况的影响。方法分离Wistar大鼠下肢骨获取MSCs进行培养，收集培养3、6、9、24h培养液，用其刺激成年Wistar大鼠的心肌成纤维细胞30h，采用MTT法和^3H-脯氨酸掺入法检测心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成情况。结果经3、6、9h的MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞^3H-脯氨酸掺入量与无血清对照组比较显著增加，分别增加23％（P〈0．01）、44％（P〈0．01）和31％（P〈0．01），而24h组与无血清对照组比较差异无显著性：MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞MTT结果与对照组比较差异无显著性。结论MSCs低氧条件培养液可以促进心肌成纤维细胞胶原合成，改善心功能。     

卡维地洛对高血压大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的抑制作用

目的 :探讨卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪对培养的 SHR和 Wistar大鼠心脏成纤维细胞 （ CFs）胶原合成的影响。方法 :采用胰酶消化法培养 CFs,用3 H-脯氨酸掺入法分别观察卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪干预下两组大鼠 CFs胶原合成的情况。结果 :1各种浓度的卡维地洛 （ 0 .0 1～ 10μmol/ L ）可以浓度依赖的方式抑制 CFs 3 H-脯氨酸掺入量 ,与 Wistar大鼠组相比 ,SHR组 CFs受抑制的效应更强。2同等浓度比索洛尔对两组大鼠 CFs3 H-脯氨酸掺入量表现出轻度抑制。 3同等浓度哌唑嗪对两组大鼠 CFs3 H-脯氨酸掺入量均无明显影响。结论 :卡维地洛呈浓度依赖性抑制 CFs合成胶原 ,其作用机制部分与阻滞β1 受体有关。     

比索洛尔对高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:探讨比索洛尔对培养的高血压大鼠（SHR）和W istar大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖及胶原合成的影响。方法:采用胰酶消化法培养CFs,采用3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定CFs的DNA合成功能,四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖,3H-脯氨酸（3H-Proline）掺入法测定胶原合成。结果:①基础状态下,SHR组CFs的3H-Proline掺入量3、H-TdR掺入量及MTT比色法A值均明显高于W istar组。②不同浓度比索洛尔对两组大鼠CFs3H-TdR掺入量及MTT比色法A值均无明显作用。③不同浓度比索洛尔以浓度依赖的方式抑制CFs3H-Proline掺入量,与W istar大鼠组相比,SHR组CFs受抑制的效应更强。结论:SHR的CFs细胞数目、DNA合成及胶原含量均存在异常,比索洛尔呈浓度依赖性抑制CFs的胶原合成,但对CFs增殖及DNA合成无明显作用。     

非诺贝特对糜酶诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的: 探讨过氧化物酶增殖物激活受体α(PPARα)激动剂非诺贝特对心脏肥大细胞糜酶诱导的心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法: 分离、培养新生SD大鼠心脏的成纤维细胞,采用MTT比色法(A490值)测定细胞数目。用流式细胞仪分析细胞周期。用3H-脯氨酸掺人法测定总胶原合成,实时定量PCR检测I型和Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果: MTT比色法的结果显示,与正常对照相比,糜酶作用后A490值升高为0.42±0.05,而给予不同浓度的非诺贝特后,A490值降低为0.35±0.06（50 mg/L）及0.28±0.05（100 mg/L）,明显低于单纯糜酶组(P<0.05)。3H-脯氨酸掺入法的结果显示,与正常对照组相比,糜酶作用24 h后,心脏成纤维细胞3H-脯氨酸掺入量升高为789±67;而给予糜酶+非诺贝特后,3H-脯氨酸掺入量明显低于单纯糜酶组(P<0.05)。PCR的结果显示,与正常对照组相比,糜酶作用24 h后,心脏成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的水平显著升高(P<0.05);而给予糜酶+非诺贝特后,两型胶原mRNA的表达明显低于单纯糜酶组(P<0.05)。流式细胞仪分析的结果显示,单纯糜酶处理后,S期细胞的百分率和细胞的增殖指数明显增加;而非诺贝特则能显著抑制这些改变。结论: PPARα激动剂非诺贝特能够抑制糜酶诱导的心肌纤维化,可能是今后逆转心肌纤维化的另一个有效途径。     

异鼠李素对AngⅡ诱导新生大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨异鼠李素(Isorhamnetin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(CFb)增殖和胶原合成的影响.方法建立AngⅡ诱导新生大鼠CFb纤维化模型,采用MTT比色法检测CFb增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测CFb胶原合成,分别观察不同浓度异鼠李素对CFb增殖和胶原合成的影响.结果在一定范围内,异鼠李素以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFb的增殖和胶原合成(P＜0.01).结论异鼠李素具有抑制CFb增殖和胶原合成的作用,对心肌纤维化具有一定的防治效应.     

抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞胶原合成与降解的调节作用

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖、胶原合成和降解代谢的调节作用。方法分离培养新生大鼠心脏成纤维细胞。采用^3H-TdR和。H-脯氨酸掺入法分别检测心脏成纤维细胞增殖与胶原蛋白合成。Western blot法检测心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达和基质金属蛋白酶（MMP）-1蛋白的表达。明胶酶谱法检测心脏成纤维细胞MMP-2和MMP-9活性的表达。结果PDGF促进心脏成纤维细胞增殖、胶原合成,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,以及MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达。AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成均有抑制作用。AcSDKP上调由PDGF介导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1的表达。结论AcSDKP抑制PDGF介导的心脏成纤维细胞增殖和胶原的合成,上调MMPs活性或表达,促进胶原的降解,这些可能与AcSDKP抗心脏纤维化作用相关。     

辛伐他汀对血管升压素诱导鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨辛伐他汀（S imvastatin,S im）对血管升压素（AVP）诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞（CF）增殖和胶原合成作用的影响,为防治高血压左室肥厚提供理论依据。方法以培养的新生SD大鼠CF为实验模型,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CF,运用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法分别观察不同浓度S im对AVP诱导CF增殖和胶原合成的作用及甲羟戊酸（m evalonate,MVA）干预的影响。结果①CF的3H-脯氨酸掺入率随着S im干预浓度的增加而降低,其中1μmol/L和10μmol/L S im组的3H-脯氨酸掺入率分别为（3.67±0.39）mBq/cell和（2.35±0.36）mBq/cell,明显低于对照组（5.01±0.58）mBq/cell（P<0.01）;②MTT比色法A490值随S im浓度的增加而降低,其中1μmol/L和10μmol/L S im组的A490值分别为0.221±0.038和0.163±0.021,均较对照组A490值（0.395±0.039）显著降低（P<0.01）;③10μmol/L S im+1 mmol/L MVA组的3H-脯氨酸掺入率和MTT比色法A490值分别为（5.38±0.72）mBq/cell和0.419±0.051,均显著高于同组10μmol/L S im（P<0.01）。结论S im抑制AVP诱导的CF增殖和胶原合成,其机制可能通过MVA代谢途径实现。     

血管紧张素转化酶反义cDNA对大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的抑制作用

为研究血管紧张素转化酶反义cDNA对心脏成纤维细胞胶原合成的影响 ,以脂质体为载体 ,用血管紧张素转化酶反义cDNA转染体外培养的自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞 ,测定3H 脯氨酸掺入率以评价对心脏成纤维细胞胶原合成的作用。用反转录聚合酶链反应检测反义基因的表达 ,及其对血管紧张素转化酶基因表达的影响 ,同时检测细胞血管紧张素转化酶活性的变化。血管紧张素转化酶反义cDNA能在心脏成纤维细胞中表达 ,在转染后第 4天达到表达高峰 ,至少持续 1周 ,能减少自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞的血管紧张素转化酶mRNA的表达 ,且减少程度与反义cDNA的表达水平呈正相关 ;转染能减少自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞的血管紧张素转化酶活性 (14 .2 3± 1.6 2比 2 6 .5 3± 2 .5 0u 10 5个细胞 ,P <0 .0 5 ) ,但对WistarKyoto大鼠细胞血管紧张素转化酶活性无明显影响 (P >0 .0 5 ) ;反义cDNA明显减少自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞3H 脯氨酸掺入率 (4 35 5 .7± 75 .9比 6 310 .3± 98.9cpm 10 5个细胞 ,P <0 .0 1) ,但对WistarKyoto大鼠心脏成纤维细胞3H 脯氨酸掺入率无明显影响 (P>0 .0 5 )。以脂质体为载体 ,血管紧张素转化酶反义核酸能抑制自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞过高的基础胶原合成活性。提示血管     

扶正化瘀方对大鼠肝星状细胞、肝细胞、成纤维细胞胶原合成的影响

以10％的扶正化瘀方药物血清作用于大鼠正常传代与纤维肝星状细胞、正常与纤维肝肝细胞、皮肤成纤维细胞，通过[3H-]－Propline掺入，观察药物血清对各组细胞胶原合成的影响，探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制。结果发现，药物血清组纤维肝星状细胞与肝细胞细胞内胶原合成与细胞外胶原分泌均明显少于对照组；正常传代星状细胞与肝细胞细胞外胶原分泌也明显减少；成纤维细胞胶原的合成与分泌、以及正常传代星状细胞细胞内胶原合成也有抑制趋势。提示扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制，可能主要是抑制了肝脏内胶原的合成。     

辛伐他汀对鼠血管成纤维细胞胶原合成的影响及甲羟戊酸的干预作用

目的探讨辛伐他汀(Sim)对鼠血管成纤维细胞(VFs)胶原合成的影响及甲羟戊酸(MVA)的干预效应,为防治动脉粥样硬化(AS)提供理论依据.方法采用胰酶消化、组织块贴壁法培养Wistar大鼠VFs,以3H-脯氨酸掺入法测定胶原合成,观察不同浓度Sim分别作用不同时间对VFs胶原合成作用的影响以及MVA干预作用.结果(1)在10-7～10-4mol/L Sim作用下,VFs3H-脯氨酸掺入率随着Sim干预浓度的增加而降低;(2)随着Sim(10-5mol/L)作用时间的延长,VFs的3H-脯氨酸掺入率呈递减趋势,VFs胶原合成功能与时间呈明显的负相关(r=-0.952,P＜0.01).(3)MVA 10-6～10-3mol/L与10-5mol/L Sim共作用,VFs的3H-脯氨酸掺入率随着MVA干预浓度的增高逐渐增加;(4)随着MVA作用时间的延长(6～48 h),VFs的3H-脯氨酸掺入率亦逐渐增加,VFs胶原合成功能与MVA作用时间呈显著的正相关(r=0.931,P＜0.01).结论 Sim呈浓度时间依赖性抑制VFs3H-脯氨酸掺入率的作用可被MVA所拮抗,提示Sim减弱VFs胶原合成与MVA代谢途径密切相关.     

低密度脂蛋白对大鼠肝贮脂细胞的调控作用

目的研究低密底脂蛋白（ＬＤＬ）对大鼠肝贮脂细胞（ＦＳＣ）的调控作用。方法采用放射配体结合法检测肝ＦＳＣ是否存在ＬＤＬ受体。通过噻唑蓝（ＭＴＴ）法、透明质酸（ＨＡ）放射免疫分析法及３Ｈ－脯氨酸掺入法测定ＬＤＬ对ＦＳＣ增殖、ＨＡ及胶原合成的影响。结果大鼠肝脏ＦＳＣ上存在特异性的、高度亲和性的及可饱和性的ＬＤＬ结合位点：ＬＤＬ能促进ＦＳＣ增殖、ＨＡ及胶原合成。结论ＬＤＬ参与ＦＳＣ增殖、转化和基质合成，并可能通过受体介导影响ＦＳＣ功能。     

三氟拉嗪对贮脂细胞增殖及胶原合成的影晌

目的:探讨三氟拉嗪抗肝纤维化作用的机制。方法:采用链酶蛋白酶、胶原酶及密度梯度离心,分离大鼠肝脏贮脂细胞,用MTT方法及~3H-脯氨酸掺入方法,观察了三氟拉嗪对贮脂细胞增殖的调控。结果:低浓度三氟拉嗪的抑制作用不明显(P>0.05),当药物浓度上升为10～20μmol/L~(-1)时,抑制作用增强,呈明显药物浓度依赖关系。结论:三氟拉嗪可通过抑制贮脂细胞的增殖及胶原合成,而达到抗肝纤维化的作用。     

脂蛋白、钙拮抗剂对大鼠贮脂细胞的影响

目的观察脂蛋白、钙拮抗剂对大鼠贮脂细胞增殖、透明质酸及胶原合成的影响．方法通过ＭＴＴ法,透明质酸放射免疫分析法及３Ｈ脯氨酸掺入法测定了低密度脂蛋白（ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＤＬ）、钙拮抗剂尼卡地平（Ｎｉｃａｒｄｉｐｉｎｅ,Ｎｉｃ）和维拉帕米（Ｖｅｒａｐａｍｉｌ,Ｖｅｒ）及其联合应用对大鼠贮脂细胞（ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌ,Ｆｓｃ）增殖、透明质酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ,ＨＡ）及胶原合成的影响．结果ＬＤＬ能促进ＦＳＣ增殖、ＨＡ及胶原合成,同时Ｎｉｃ及Ｖｅｒ对ＬＤＬ刺激引起的ＦＳＣ增殖、胶原合成有明显的抑制作用,但对ＨＡ的抑制作用不明显．结论ＬＤＬ参与ＦＳＣ的增殖及细胞外基质的合成,Ｎｉｃ及Ｖｅｒ则有对抗ＬＤＬ的作用     

氧化苦参碱与国产α1 b-和α 2b-干扰素对大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的抑制作用

目的研究氧化苦参碱与国产α 1b-和α 2b-干扰素对大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的影响,为应用氧化苦参碱防治肝纤维化提供理论依据.方法分离、培养大鼠肝星状细胞,采用MTT法和3H-脯氨酸掺人法分别测定细胞增殖和胶原合成.结果氧化苦参碱在55ug～500ug/mL,两种α-干扰素在500U-10 000U/mL浓度范围内能呈剂量依赖性抑制星状细胞的增殖和胶原合成,提高药物浓度则形成作用平台.结论氧化苦参碱与α-干扰素在体外均具有抑制大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的作用,这对防治肝纤维化可能有一定的临床应用价值.     

17β-雌二醇抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管外膜成纤维细胞增殖

目的探讨17β-雌二醇(E2)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的血管外膜成纤维细胞(VAF)增殖的影响。方法将培养的血管外膜成纤维细胞分4组:对照组,单纯bFGF组,单纯E2组,bFGF+E2组。用3H-Tdr掺入反映细胞DNA合成3、H-Proline掺入反映细胞的胶原合成状况;用Western Breeze检测血管外膜成纤维细胞中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)的蛋白表达及活性。结果bFGF使血管外膜成纤维细胞DNA合成增加18~23倍、胶原合成增加17~21倍、细胞数目增加18~22倍,E2可使bFGF的这些促血管外膜成纤维细胞增殖效应降低约50%。bFGF使VAF中ERK蛋白表达量增加350%,使ERK磷酸化蛋白表达量增加120%,E2使bFGF诱导的VAF中ERK蛋白表达量下降44%,ERK磷酸化蛋白表达量下降22%;E2使bFGF诱导的VAF中MKP-1的蛋白表达量增加154%。结论E2可抑制bFGF诱导的VAF增殖,其抑制VAF增殖与抑制VAF中ERK蛋白表达,降低ERK活性,促进MKP-1表达有关。     

The regulatory role of AT 1 receptor on activated HSCs in hepatic fibrogenesis:effects of RAS inhibitors on hepatic fibrosis induced by CCl(4)

AIM:To assess the effect of ACE inhibitor and Ang II type 1 (AT1) receptor antagonist in preventing hepatic fibrosis caused by CCl(4) administration in rats;to investigate whether or not there are expression of AT 1 receptors on hepatic stellate cells; and to observe the effect of Ang II on proliferation and ECM synthesis of cultured HSCs.METHODS:Studies were conducted in male Sprague-Dawley rats. Except for the hepatofibrotic model group and the control group, in three treated groups, either enalapril (5mg/kg), or losartan (10mg/kg), or enalapril + losartan were given to the fibrotic rats by daily gavage, and saline vehicle was given to model and normal control rats. After 6 weeks, liver fibrosis was assessed directly by hepatic morphometric analysis, which has been considered the gold standard for the quantification of fibrosis. The expressions of AT 1 receptors and (alpha-mooth muscle actin,alpha-SMA) in liver tissue or isolated hepatic stellate cells (HSCs) were detected by immunohistochemical techniques. The effect of Ang II on HSC proliferation was determined by MTT method. Effect of Ang II on collagen synthesis of HSCs was determined by (3)H-proline incorporation.RESULTS:Contrasted to the fibrosis in rats of the model group, groups of rats treated with either enalapril or losartan, or a combination of two drugs showed a limited expansion of the interstitium (4.23 plus minus 3.70 vs 11.22 plus minus 4.79, P<0.05), but no difference was observed among three treated groups (5.38 plus minus3.43, 4.96 plus minus 2.96, 4.23 plus minus 2.70, P>0.05). Expression of AT 1 receptors was found in fibrotic interstitium of fibrotic rats, whereas in normal control rats they were limited to vasculature only to a very slight degree. AT 1 receptors were also expressed on activated HSCs in the culture. At concentrations from 10(-9) to 10(-5)mol/L, Ang II stimulated HSC proliferation in culture in a dose dependent manner. Increasing Ang II concentrations produced corresponding increases in (3)H-proline incorporation. Differences among groups were significant.CONCLUSION:Angiotensin converting enzyme inhibitors and AT 1 blocker may slow the progression of hepatic fibrosis;activated HSCs express AT 1 receptors, and Ang II can stimulate the proliferation and collagen synthesis of HSCs in a dose-dependent manner; and activation of RAS may be related to hepatic fibrogenesis induced by CCl(4).     

血小板衍化生长因子对血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

目的 :观察血小板衍化生长因子 （PDGF）对培养的血管平滑肌细胞 （VSMC）增殖及胶原蛋白合成的影响。方法 :采用培养的兔动脉 VSMC,应用 3H- Td R的 3H-脯氨酸掺入方法 ,观察 PDGF- BB对兔 VSMC DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果 :PDGF- BB可促进处于静止状态的兔 VSMC DNA及胶原蛋白的合成 ,并呈现明显的浓度依赖关系 ,在 40 μg/ L 的浓度时 DNA及胶原蛋白的合成达到高峰 ,DNA及胶原蛋白分别处于 36 h和 48h合成最为显著。结论 :PDGF- BB可明显促进培养的 VSMC增殖及胶原蛋白的合成。