老鹳草素对破骨细胞Ⅱ型碳酸酐酶蛋白表达的影响

目的评价老鹳草素(geraniin)对培养的破骨细胞Ⅱ型碳酸酐酶蛋白表达的影响,探讨其抗骨质疏松症作用的分子机制。方法机械法分离获得破骨细胞(osteoclast,OC),应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色技术,观察不同浓度老鹳草素对OC数量的影响。应用免疫细胞化学技术ABC方法检测不同浓度老鹳草素和乙酰唑胺干预下对培养的OC CA Ⅱ蛋白表达的影响。结果老鹳草素呈浓度依赖性减少破骨细胞的数目;老鹳草素呈浓度依赖性下调pOC和mOC中CA II蛋白阳性单位的数量。结论老鹳草素抗骨质疏松症作用的机制可能与老鹳草素明显抑制体外培养OC的生成,下调OC中CA Ⅱ蛋白的表达有关。     

老鹳草素抗骨质疏松作用机制研究进展

老鹳草素是来源于大戟科叶下珠的多酚类化合物,具有抗骨质疏松、抗病毒、抗癌等多种药理作用。现将国内外关于老鹳草素抗骨质疏松药理作用的相关研究文献进行综述。     

针灸对骨髓源性破骨细胞形成数和 IL-6 mRNA表达的影响

目的:探讨针灸对骨髓源性破骨细胞形成数和白细胞介素6信使RNA(IL-6 mRNA)表达的影响。方法:进行骨髓源性破骨细胞培养、鉴定及IL-6 mRNA基因表达水平的检测。结果:模型组破骨细胞形成数明显多于假手术组(P<0.01),针刺后破骨细胞形成数显著低于模型组(P<0.01);模型组与假手术组比较,骨髓细胞IL-6 mRNA表达呈有意义增高(P<0.01),而针刺后其升高的水平明显低于模型组(P<0.01)。结论:(1)针刺有效调节白细胞介素6(IL-6)的分泌,使IL-6 mRNA表达下降;(2)针刺使破骨细胞形成数减少。     

8-异戊烯基柑橘素与柑桔素对体外培养破骨细胞活性影响的比较研究

目的: 研究8-异戊烯基柑橘素(8-prenylnaringenin, PNG)和柑桔素(naringenin, NG)影响体外培养破骨细胞活性和凋亡的差异,探讨8-异戊烯基团的生理活性. 方法: 从青紫兰乳兔四肢长骨中分离出破骨细胞,培养于含10%FBS的α-MEM培养液中,分别加入浓度为1×10^-5 mol·L^-1的PNG和NG.药物干预4 d后进行TRAP染色和TRAP酶活性测定,7 d后进行甲苯胺蓝染色.于加药后48 h内多个时间点进行Annexin V-FITC染色,观察破骨细胞凋亡情况,并提取总RNA,用Real-time RT-PCR法检测TRAP及Cathepsin K(CTSK)的基因表达情况. 结果: 与对照组相比,PNG和NG组的TRAP阳性细胞即破骨细胞数均显著减少,TRAP酶活性显著降低,形成骨吸收陷窝的数量和面积明显减少,TRAP和CTSK的基因表达水平明显降低.PNG组与NG组相比,以上所有指标均是前者显著低于后者.此外,PNG组的破骨细胞凋亡高峰于加药后12 h到达,而NG组是24 h后到达,且前者的凋亡总数显著高于后者. 结论: PNG抑制破骨细胞骨吸收和诱导破骨细胞凋亡的活性明显高于NG.由于两者分子结构的唯一差别在于8-异戊烯基团,因此,8-异戊烯基团可提高黄酮母核的抗骨吸收活性.     

参芪复方对GK大鼠主动脉血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达的影响

目的 观察参芪复方对GK（Goto-Kakizaki）大鼠大血管病变主动脉血管紧张素Ⅱ1型受体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R） mRNA表达的影响。方法 67只GK大鼠随机分为GK组（18只）、模型组（16只）、阿托伐他汀组（17只）及参芪复方组（16只）,另设正常Wistar对照组（18只）。以L-NAME 0.10 mg/（mL·d）加入大鼠饮用水中复制糖尿病大血管病变模型。除正常Wistar对照组外,其他4组均喂饲高脂饲料。阿托伐他汀组及参芪复方组分别按1.60 mg/（kg·d）、1.44 g/（kg·d）灌胃相应药物,均每天1次,连续35天。采用葡萄糖氧化酶法每周测定血糖1次;给药5周后,夹心酶联免疫吸附法测定甘油三酯（TG）及总胆固醇（TC）水平,放射免疫法检测血清血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）水平,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测主动脉AT1R mRNA表达。结果 给药4周末阿托伐他汀组和参芪复方组血糖水平均较本组给药前明显降低（P<0.05）,且参芪复方组明显低于模型组同期（P<0.05）。模型组TC、TG、血清AngⅡ及主动脉AT1R mRNA水平均明显高于正常Wistar对照组（P<0.01）。给药5周后,阿托伐他汀组和参芪复方组TC、TG、AngⅡ及AT1R mRNA水平明显低于模型组（P<0.01,P<0.05）。阿托伐他汀组AT1R mRNA明显低于参芪复方组（P<0.05）。结论 参芪复方可降低GK大鼠早期大血管病变模型的血糖、血脂,减少血清AngⅡ含量及主动脉AT1R mRNA表达。AT1R可能是参芪复方治疗糖尿病大血管病变的有效靶点之一。     

相关因素对破骨细胞功能活性影响的研究进展

破骨细胞作为骨吸收的主要细胞,其活性及骨吸收功能受激素、细胞因子的作用和调节。因此主要就激素、细胞因子及中药对破骨细胞功能活性的影响进行回顾和综述。     

补骨脂对破骨细胞-成骨细胞耦联功能的影响*

目的:探讨补骨脂水提物在破骨细胞抑制情况下对破骨细胞-成骨细胞耦联功能的影响及其潜在的作用机理。方法:制备补骨脂水提物,利用MTT法测定补骨脂水提物对RAW264.7细胞的毒性;在RANKL诱导的BMMs破骨细胞分化模型中测定补骨脂水提物对破骨细胞分化的抑制作用,并收集上清液制备条件培养基(CM);采用补骨脂干预后的CM作用于MC3T3-E1前体成骨细胞的间接共培养模型评价补骨脂对破骨细胞-成骨细胞耦联功能的影响;利用RT-qPCR法测定破骨细胞分化关键基因以及破骨细胞源性耦联因子的mRNA表达水平。结果:结果显示,补骨脂水提物在无细胞毒性的浓度下剂量依赖性的抑制破骨细胞分化;破骨细胞-成骨细胞耦联功能研究显示补骨脂在破骨细胞分化抑制的情况下能够维持破骨细胞-成骨细胞耦联功能,其CM分化液不影响MC3T3-E1成骨细胞分化能力;RT-qPCR结果表明补骨脂水提物抑制破骨细胞关键基因DC-Stamp、Oscar和Trap的mRNA表达,促进破骨细胞源性耦联因子C3a mRNA的mRNA表达水平。结论:补骨脂水提物能够在抑制破骨细胞分化抑制的情况下维持正常的破骨细胞-成骨细胞耦联功能,其机...     

中药Liu-OGN对大鼠破骨细胞体外培养的影响

目的：研究中药Liu-OGN对体外培养的大鼠破骨细胞的作用。方法：采用Fenton^[1]等人的方法加以改良,从新生大鼠四肢长骨中分离培养破骨细胞,将破骨细胞均匀接种于含预置新鲜成年牛股骨骨磨片的24孔培养板中;中药Liu-OGN溶于5％阿拉伯胶中喂大鼠后,提取含中药Liu-OGN药物血清加到培养液中,24孔培养板中的培养液每2天更换一次,用不同药物干预,分别于培养期24、48、72、96小时取出骨片TRAP染色,计数TRAP（＋）多核细胞数量、结果用SPSS软件包分析。结果：在培养期的前48小时,每张骨片上TRAP（＋）的破骨细胞样细胞的数量有不同程度的增加,培养期72小时后不同浓度中药Liu-OGN对大鼠破骨细胞样细胞抑制作用明显（与对照组相比P＜0．01）。结论：中药Liu-OGN对大鼠破骨细胞样细胞的体外生长有抑制作用,此作用依浓度变化而变化。     

蛇毒复方制剂对W256癌细胞诱导的骨癌痛大鼠破骨细胞的影响

目的观察冰茶栓(蝮蛇毒、冰片、茶叶、桂枝)对骨癌痛大鼠破骨细胞数量和活性的影响。方法将40只雌性SD大鼠分为冰茶栓组、阳性药对照组、模型对照组及假手术组,采用骨髓腔注射W256癌细胞复制骨癌痛模型;自模型复制第13天开始,冰茶栓组给予冰茶栓101 mg/kg;阳性药对照组给予伊班膦酸注射液20μg/kg,模型对照组和假手术组给予空白栓,末次给药后,取各组大鼠患肢骨组织采用TRAP染色法计数破骨细胞数量、透射电镜观察破骨细胞结构、免疫组化法观察骨保护素表达。结果冰茶栓可明显降低W256细胞诱导的骨癌痛大鼠骨组织破骨细胞数量(P<0.01);诱导破骨细胞凋亡;明显上调骨组织骨保护素表达(P<0.01)。结论冰茶栓可抑制骨癌痛大鼠骨组织破骨细胞的数量和活性。     

中医药对体外破骨细胞功能的干预作用

骨质疏松症是以骨量减少和骨的微观结构退化,继而引起骨胳脆性增加和骨折危险性增高为特征的一种全身性骨骼疾病。随着人口结构的老龄化,老年性骨质疏松症的发病率渐趋上升。中医药在治疗骨质疏松症方面有一定的优势,毒副作用小,可长期使用且价格便宜。近年来,我国在中医药防治骨质疏松症的研究方面有很大的发展。     

健骨颗粒对体外破骨细胞整合素αV及β3 mRNA表达的影响

目的:探讨补肾健脾中药健骨颗粒对体外破骨细胞整合素(Itg)αV、β3mRNA表达的影响。方法:采用破骨前体细胞系诱导培养法,通过M-CSF和RANKL诱导剂诱导RAW264.7细胞,分化为成熟破骨细胞。分别用健骨颗粒含药血清和生理盐水血清干预,运用实时荧光定量PCR法检测ItgαV、β3mRNA表达,并取骨片行甲苯胺蓝染色,骨陷窝和骨吸收面积计算分析。结果:经M-CSF和RANKL诱导后,RAW264.7细胞的形态特征、TRAP染色均符合成熟破骨细胞特异性表现;含药血清组破骨细胞ItgαV、β3mRNA表达水平明显低于生理盐水血清组(P<0.05),同时骨磨片的骨吸收陷窝数和面积亦呈同样变化趋势。结论:RAW264.7细胞经诱导分化后可以获取成熟破骨细胞;健骨颗粒能有效抑制破骨细胞Itgαv、β3 mRNA表达,影响破骨细胞功能活性。     

巴戟天与雌激素对骨质疏松大鼠破骨细胞RANK和CAII的表达影响分析

目的:探讨巴戟天与雌激素对骨质疏松大鼠破骨细胞RANK和CAII的表达影响。方法:选用4月龄SPF级健康成年雌性SD大鼠,建立去势大鼠骨质疏松模型,分离大鼠原代破骨细胞并分为3组:B组给予17β-雌二醇10-6mmol/L,C组给予1.0 mmol/L巴戟天,D组给予17β-雌二醇10-6mmol/L和1.0 mmol/L巴戟天进行培养,观察比较各组CAII、RANKmRNA表达等指标差异。结果:B、C和D组破骨细胞数量均较A组明显减少,而D组减少最明显(P0.05);B、C、D组骨吸收陷窝面积相均低于A组(P0.05),而D组骨吸收陷窝面积明显低于其他组(P0.05);B、C、D组CAII、RANKmRNA基因表达水平明显低于A组(P0.05),B组和C组RANKmRNA基因表达水平差异无统计学意义(P0.05),而CAIImRNA基因表达水平差异有统计学意义(P0.05),D组CAII、RANKmRNA基因表达水平最低(P0.05)。结论:巴戟天联合雌激素能明显降低骨质疏松大鼠破骨细胞RANK和CAII的表达,起到抑制骨质疏松的作用。     

补肾法对IL—1诱导的破骨细胞性骨吸收及破骨细胞MMP—9

用从出生２４小时的乳鼠长骨中分离出来的破骨细胞,从１月龄大鼠长骨中分离出来 的骨在质细胞,建破骨细胞培养和破骨细胞、骨髓基质细胞培养系。在白细胞介素－１（ＩＬ－１α）作用的同时,加入不同剂量的密骨片药液,分别与牛骨片共同培养２０小时。计数骨片形成的陷窝数及测算吸收陷窝面积。并采用原位杂交技术,研究密骨细胞基质金属蛋白酶９（ＭＭＰ－９）ｍＲＮＡ表达的调控。结果显示,在基质细胞存在的条件下,ＩＬ－１可     

淫羊藿对成骨细胞及破骨细胞影响的研究进展

综述淫羊藿对成骨细胞及破骨细胞影响的研究进展。淫羊藿通过增加成骨相关因子的表达,增加Ca2+浓度,激活BMP/Smad、Wnt/β-catenin信号通路促进成骨细胞增殖、分化,提高成骨细胞骨形成的功能,并从能量代谢、骨架结构、MAPK信号通路、雌激素水平等方面抑制破骨细胞增殖和吸收。     

青娥丸不同萃取部位对成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响

目的 探讨青娥丸不同萃取部位对大鼠成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响.方法 取新生大鼠颅骨,用改良组织块法消化分离成骨细胞,MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸.酶(AKP)的活性.分离培养大鼠破骨细胞,加药共培后检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性.结果 复方青娥丸RJ-1,R J-3,J-4,乙醇RJ-5四个萃取部位,OD -2,OD -3,0D -4,全方水煮OD -5四个不同提取物均能促进成骨细胞增殖;RJ-1,J-2两个萃取部位,生杜仲等6个不同提取物均能提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性.复方青娥丸石油醚等6个萃取部位,生杜仲等6个不同提取物均降低破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性.与对照组比差异有显著性.结论 复方青娥丸多种部位能促进成骨细胞的增殖和分化,抑制破骨细胞的活性.从而维持骨代谢平衡.     

温阳补肾方含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响

目的:探讨温阳补肾方含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法:体外诱导破骨前体细胞系RAW264.7细胞向破骨细胞分化,分别用温阳补肾方低、中、高剂量组含药血清和0.9%氯化钠溶液血清干预,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)酶动力法测定各组TRACP活性,实时荧光定量PCR检测温阳补肾方对破骨细胞组织蛋白酶K(Cts K)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA水平。结果:与对照组比较,温阳补肾方含药血清可显著抑制破骨细胞TRACP活性(P<0.01),显著降低破骨细胞骨Cts K、MMP-9 mRNA的表达(P<0.01)。结论:温阳补肾方含药血清可抑制破骨细胞的骨吸收功能,中剂量组效果最佳。     

老鹳草对小鼠无水乙醇型胃溃疡的影响

目的探讨老鹳草抗小鼠胃溃疡的机制,为临床使用中药治疗无水乙醇型胃溃疡提供理论依据。方法该实验通过检查胃溃疡指数,检测血清中NO含量,测定胃黏膜中PGE2的含量,来观察老鹳草提取物对无水乙醇型小鼠胃溃疡模型的影响。结果老鹳草水提物组能明显降低溃疡指数(P<0.01),提高血清中NO含量(P<0.01);老鹳草醇提物组能明显提高模型小鼠胃黏膜中PGE2的含量(P<0.05)。结论老鹳草提取物可对抗无水乙醇型小鼠胃溃疡,其中老鹳草水提物抗溃疡作用优于醇提物。     

增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外破骨细胞的影响

为阐明增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法治疗骨质疏松症的机理.从新生1天内的兔长骨骨干分离出破骨细胞,与骨磨片、盖玻片及添加增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号后共同培养,用相差显微镜及光镜观察骨吸收陷窝形态与破骨细胞形态变化,并进行骨陷窝计数.结果显示增骨Ⅰ号明显增加吸收陷窝数目(P＜0.01),破骨细胞形态小、数多、核少;增骨Ⅱ号明显抑制吸收陷窝数目(P＜0.01),破骨细胞形态大、数少、核多;增骨Ⅲ号对破骨细胞无影响(P＞0.05).表明增骨Ⅰ号能激活破骨细胞活性,增骨Ⅱ号能抑制骨吸收,增骨Ⅲ号对破骨细胞无作用.     

左归丸含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响以及成骨细胞对其的介导作用

目的:通过观察左归丸含药血清对破骨细胞(OC)骨吸收功能的影响,以及成骨细胞(OB)对其的介导作用,探讨其治疗骨质疏松症的作用机理。方法:体外分离培养大鼠OB与OC,观察左归丸含药血清对OC所致骨陷窝数目及面积的影响,以及OB在此过程中的作用。结果:OC与骨片共同培养的第7天,OVX血清能使OC所致的吸收陷窝数目和面积明显增加;而OVX含药大鼠血清能使OC活性明显下降。当OC与OB、骨片共同培养7d后,正常大鼠血清对OC单独培养和OC与OB共同培养所形成骨吸收陷窝的数目和面积没有明显的差异,但共同培养有增加的趋势。而在OVX血清的作用下,OC与OB共同培养所形成的骨吸收陷窝与OC单独培养相比,前者显著高于后者。本实验还发现,OVX含药血清与OB、OC共同培养的骨陷窝数目及面积明显低于OVX含药血清与OC单独培养。结论:在去势状态下,左归丸含药血清不仅对OC有直接的抑制作用,且可通过OB间接对OC产生抑制作用,这可能是其治疗骨质疏松症的作用机理。     

老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化相关基因表达的影响

目的:观察老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并对成骨分化过程中相关基因表达进行检测。方法:分离、培养小鼠BMSCs,加入不同浓度老鹳草素(1×10-9,1×10-8,1×10-7mol·L-1)培养,另设空白组,分别于成骨诱导第7,14天采用碱性磷酸酶(ALP),骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量,并进行ALP染色。于成骨诱导第21天时采用茜素红染色检测成骨分化过程中钙结节形成数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测BMSCs成骨分化过程中OCN,ALP,骨涎蛋白(BSP),Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA和蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,成骨诱导后第7,14天时,老鹳草素各剂量组ALP活性,OCN含量及ALP染色强度均明显升高(P0.05),成骨诱导第21天时,老鹳草素各剂量组矿化结节数量及OCN,ALP,BSP,Runx2 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs向成骨方向分化,成骨相关基因OCN,ALP,BSP,Runx2均参与这一过程。