老鹳草素对破骨细胞Ⅱ型碳酸酐酶蛋白表达的影响

目的评价老鹳草素(geraniin)对培养的破骨细胞Ⅱ型碳酸酐酶蛋白表达的影响,探讨其抗骨质疏松症作用的分子机制。方法机械法分离获得破骨细胞(osteoclast,OC),应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色技术,观察不同浓度老鹳草素对OC数量的影响。应用免疫细胞化学技术ABC方法检测不同浓度老鹳草素和乙酰唑胺干预下对培养的OC CA Ⅱ蛋白表达的影响。结果老鹳草素呈浓度依赖性减少破骨细胞的数目;老鹳草素呈浓度依赖性下调pOC和mOC中CA II蛋白阳性单位的数量。结论老鹳草素抗骨质疏松症作用的机制可能与老鹳草素明显抑制体外培养OC的生成,下调OC中CA Ⅱ蛋白的表达有关。     

当归补血汤经TGF-β1/Smad2通路对Ang Ⅱ诱导肥大心肌细胞的保护机制研究

目的:研究当归补血汤对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9C2肥大心肌细胞的保护作用及机制,探讨其与转化生长因子β1(TGF-β1)及下游分信号Smad2信号通路的关系。方法:体外培养细胞,用α-actin抗体免疫组化法鉴定心肌细胞;采用10-7mol/L AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大,通过检测心肌细胞蛋白含量及心钠素(ANF)mRNA表达以验证心肌细胞肥大模型;在模型建立成功的基础上利用逆转录聚合酶链反应RT-PCR法测定不同浓度(5%、10%、15%、20%)当归补血汤含药血清对肥大心肌细胞ANF mRNA表达的影响,选取最佳干预浓度;将心肌细胞分组为空白对照组、10-6mol/L AngⅡ模型组、10-7mol/L AngⅡ模型组和10%含药血清组,镜下观察各组细胞形态,并利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组TGFβ1/Smad2信号通路相关蛋白TGFβ1、Smad2表达与活化情况。结果:鉴定细胞符合心肌细胞特征;与空白对照组相比,10-7mol/L AngⅡ模型组心肌细胞蛋白含量与ANFmRNA表达均显著增加,说明10-7mol/L AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大模型建立;10%、15%当归补血汤含药血清浓度组较模型组ANF mRNA表达显著减少,10%当归补血汤含药血清组ANF表达降低更为明显;形态学观察,AngⅡ模型组心肌细胞密度和形态增大,漂浮细胞增多;10-6mol/L、10-7mol/L AngⅡ模型组较空白对照组TGF-β1、Smad2蛋白表达均显著增多,10%当归补血汤含药血清组较10-6mol/L、10-7mol/L模型组TGF-β1、Smad2蛋白表达均显著减少。结论:当归补血汤含药血清具有抗心肌细胞肥大的作用,其保护机制可能与调控心肌细胞TGF-β1/Smad2信号通路有关。     

老鹳草素通过Wnt/β-catenin信号通路影响小鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化

目的:观察Wnt/β-catenin信号通路在老鹳草素诱导小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化中的作用机制。方法:分离、培养小鼠BMSCs,分为对照组(DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素低剂量组(10-9mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素中剂量组(10-8mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量组(10-7mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量+DKK1(Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂)组和DKK1组。成骨诱导第7天时,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量。成骨诱导48 h时,采用Real time-PCR和Western-blot检测各组Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达。结果:成骨诱导第7天时,老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖,呈剂量依赖性(均P<0.05);同时ALP活性及OCN含量较对照组显著升高,呈剂量依赖性(均P<0.05)。成骨诱导48 h时,老鹳草素各剂量组Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达较对照组显著上调,GSK-3βmRNA和蛋白表达较对照组显著下调,呈剂量依赖性(均P<0.05)。加入DKK1后,细胞增殖受到显著抑制,ALP活性及OCN含量显著降低(均P<0.05);同时Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达显著下调,GSK-3βmRNA和蛋白表达显著上调(均P<0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs的增殖及向成骨方向分化,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

丹参酸乙对大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原基因表达的影响

目的 :探讨丹参酸乙 (SA B)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )孵育的新生大鼠心脏成纤维细胞功能的影响。 方法 :将培养的心脏成纤维细胞分成四组 :空白对照组 ;AngⅡ组 :培养基中加了 10 7mol/LAngⅡ ;SA B10 6mol/L组 :培养基中加 10 7mol/LAngⅡ 10 6mol/LSA B ;SA B10 4mol/L组 :培养基中加 10 7mol/LAngⅡ 10 4mol/LSA B。加药后 2 4h分别作3 H TdR细胞增殖测定和采用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的转录水平。结果 :10 4mol/LSA B可有效抑制由AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖。 10 5mol/LSA B可抑制胶原Ⅲ型mRNA的表达量 ,而 10 6mol/LSA B和 10 5mol/LSA B都可显著抑制胶原Ⅰ型mRNA的表达。结论 :丹参酸乙可逆转由AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达水平。     

增骨Ⅱ号注射液对大鼠成骨细胞OC和OPN mRNA表达的影响

目的:研究增骨Ⅱ号注射液对体外培养的大鼠成骨细胞OC和OPN mRNA表达的影响,探讨增骨Ⅱ号注射液防治骨质疏松症的分子机制.方法:体外培养大鼠成骨细胞,分别给予不同浓度、时间的增骨Ⅱ号注射液进行干预实验,然后用RT-PCR技术分别检测各组细胞的OC and OPN mRNA表达,并进行定量分析.结果:增骨Ⅱ号注射液在不同浓度时连续干预至1～5 d,以1 mg/ml浓度条件下,OC and OPN mRNA表达最强;而以1 mg/ml生骨注射液干预防1～5 d,OC和OPN mRNA的表达随时间逐渐增强.结论:增骨Ⅱ号注射液对体外培养的大鼠成骨细胞OC和OPN mRNA表达有明显促进作用,其作用强度随浓度、时间而改变.     

老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化相关基因表达的影响

目的:观察老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并对成骨分化过程中相关基因表达进行检测。方法:分离、培养小鼠BMSCs,加入不同浓度老鹳草素(1×10-9,1×10-8,1×10-7mol·L-1)培养,另设空白组,分别于成骨诱导第7,14天采用碱性磷酸酶(ALP),骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量,并进行ALP染色。于成骨诱导第21天时采用茜素红染色检测成骨分化过程中钙结节形成数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测BMSCs成骨分化过程中OCN,ALP,骨涎蛋白(BSP),Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA和蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,成骨诱导后第7,14天时,老鹳草素各剂量组ALP活性,OCN含量及ALP染色强度均明显升高(P0.05),成骨诱导第21天时,老鹳草素各剂量组矿化结节数量及OCN,ALP,BSP,Runx2 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs向成骨方向分化,成骨相关基因OCN,ALP,BSP,Runx2均参与这一过程。     

糖皮质激素诱导破骨细胞产生自噬及β-蜕皮甾酮的保护作用

目的:观察超生理剂量糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)对体外培养破骨细胞产生自噬及牛膝活性成分β蜕皮甾酮(β-Ecdysone,β-Ecd)的保护作用,以探讨糖皮质激素引起骨质疏松的部分分子机制及β-脱皮甾酮对其的保护作用。方法:由骨髓干细胞分化培养破骨细胞,用地塞米松(Dexamethasone,Dex)10-5mol/L浓度作用细胞,将细胞分为7组:⑴正常对照组;⑵1×10-5mol/L GC模型组;⑶GC+10-5mol/L抑制剂Ru486组;⑷GC+10-5mol/L阿仑膦酸钠(Alendronate,ALN)组;⑸GC+10-5mol/Lβ蜕皮甾酮组;⑹GC+10-6mol/Lβ蜕皮甾酮组;⑺GC+10-7mol/Lβ蜕皮甾酮组。实时荧光定量PCR(Real time PCR)检测相关基因mRNA表达,WesternBlot检测LC3(Ⅰ、Ⅱ)蛋白表达。结果:⑴10-5mol/L GC使破骨细胞AKT1、mTOR、p70S6K mRNA表达下降(P<0.05),10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/Lβ蜕皮甾酮能不同程度保护细胞降低的基因mRNA表达水平。⑵10-5mol/L GC使破骨细胞LC3(Ⅰ、Ⅱ)蛋白表达升高(P<0.05),10-5mol/Lβ蜕皮甾酮能抑制GC对细胞的影响。结论:超生理剂量糖皮质激素可能通过影响mTOR信号通路引起破骨细胞产生自噬现象;一定剂量β蜕皮甾酮则能不同程度地保护糖皮质激素对破骨细胞的影响。     

Ang Ⅱ诱导的心肌肥大中c-fos,c-jun mRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响

目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞c-fog,c-junmRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响.方法:取12只1 d龄新生Wistar乳鼠,进行心肌细胞培养,分为正常对照组,AngⅡ(10-6 mol·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+丹参酮ⅡA(10-8g·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+缬沙坦(10-mol·L-1)组,丹参酮ⅡA(10-1g·L-1)组,缬沙坦(10-6mol·L-1)组.相差显微镜测量心肌细胞大小,[3H]一亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率;RT-PCR检测心肌细胞c-fog,c-jun mRNA的表达.结果:在培养液中加入AngⅡ作用30 min后,心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达显著增强(P<0.01);AngⅡ作用24 h后,AngⅡ组心肌细胞蛋白质合成速率较对照组明显增加(P<0.01);AngⅡ持续作用7 d后,AngⅡ组心肌细胞直径较对照组显著增大(P<0.05).采用丹参酮ⅡA或缬沙坦干预,二者可抑制AngⅡ诱导的c.fog,c-jun mRNA的表达增强(P<0.01)、心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0.01)及心肌细胞直径增大(P<0.05).结论:丹参酮ⅡA可通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos,c-jun的表达增强,减轻心肌肥大.     

常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞VEGF表达的影响

目的探讨常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 将肝癌Hep1细胞用不同浓度的姜黄素(终浓度分别为0,5,10,15,20 μmol/L)处理,置于常氧环境中培养24h.RT - PCR检测Hep1细胞中VEGF mRNA表达水平的变化,Western - blot检测Hep1细胞VEGF蛋白表达的变化.结果 姜黄素10,15,20 μmol/L组VEGF mRNA的表达与空白对照组相比均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,且呈浓度依赖性.姜黄素0,5μmol/L组VEGFmRNA的表达与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05);姜黄素5,10,15,20 μmol/L组VEGF蛋白的表达与空白对照组相比均明显升高(P＜0.01),且呈浓度依赖性.姜黄素0 μmol/L组VEGF蛋白的表达与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 常氧条件下,姜黄素呈浓度依赖性方式上调肝癌Hep1细胞VEGF的表达.     

刺老苞根皮黄酮类化合物对MC31E-E1成骨细胞OPG和RANKL mRNA基因表达影响的实验研究

目的:探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3T3-E1成骨细胞骨保护素(OPG)和核因子κB受体激活因子配体(RANKL)mRNA基因表达的影响.方法:体外培养MC313-E1成骨细胞,分别加入含0mol·L-1、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1刺老苞根皮黄酮类化合物的培养液,48h及96h后分别提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析OPG/RANKL的mRNA的表达,进行半定量分析.结果:培养48h后,与对照组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物增强了OPGmRNA的表达,有显著性差异(P<0.05或P<0.01),VOPG/VRANKL比值增大;96h后,刺老苞根皮黄酮类化合物明显增强了OPG mRNA的表达,各浓度组与对照组相比,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01),各浓度组VOPG/VRANKL比值增大,有显著性差异(P<0.05或P<0.01).结论:刺老苞根皮黄酮类化合物可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到治疗骨质疏松症的目的.     

槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞IL-6的影响

目的:观察槲皮素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞产生IL-6的影响。方法:以不同浓度AngⅡ刺激培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,并以不同剂量的槲皮素干预24 h,用ELISA法检测不同时间点上清液中IL-6含量,用半定量RT-PCR法检测槲皮素对IL-6 mRNA表达的影响。结果:AngⅡ刺激血管平滑肌细胞产生IL-6具有剂量和时间依赖性。槲皮素对不同浓度AngⅡ刺激血管平滑肌细胞产生IL-6有明显剂量依赖性抑制作用,1000μmol/L时作用最为明显;不同浓度槲皮素均可下调AngⅡ(10-7M)所诱导的血管平滑肌细胞IL-6mRNA的表达,浓度为1000μM时作用最明显。结论:槲皮素可在蛋白和转录水平下调AngⅡ诱导血管平滑肌细胞IL-6的产生,提示槲皮素的抗动脉粥样硬化作用可能与其抗炎作用有关。     

黄芪多糖离体条件下对H295R细胞维生素D系统相关蛋白表达及睾酮分泌的影响

目的:探讨黄芪多糖对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及睾酮表达的影响。方法:随机分为空白对照组、维生素D组、黄芪多糖25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL组,四唑盐(MTT)法检测不同浓度的黄芪多糖和维生素D对H295R细胞增殖率的影响,ELISA法检测睾酮分泌水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测维生素D受体(VDR)、25-羟基维生素D3-1α-羟化酶(CYP27B)、维生素D3-24-羟化酶(CYP24A)、17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD)、19α-羟化酶(CYP19A1)mRNA表达,Western blot法检测VDR、CYP27B、CYP24A蛋白表达。结果:黄芪多糖12.5μg/mL浓度,维生素D在0.25×10~(-11) mol/L和0.5×10~(-11) mol/L浓度,对H295R细胞增殖无显著影响。黄芪多糖200μg/mL,维生素D在2×10~(-11) mol/L和4×10~(-11) mol/L浓度时对H295R细胞增殖存在一定抑制作用。与空白对照组比较,维生素D组与黄芪多糖100μg/mL组睾酮分泌水平显著升高,VDR、CYP24A、17β-HSD mRNA表达显著上调,CYP27B蛋白及mRNA、CYP19A1 mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:离体条件下,黄芪多糖可能通过调节H295R细胞维生素D系统促进睾酮合成分泌。     

黄芪散对高糖作用下成骨细胞相关功能的影响

目的:观察黄芪散含药血清对高糖条件下成骨细胞功能的影响及与糖尿病性骨质疏松发病机制相关基因的影响,探讨黄芪散(HQS)对糖尿病性骨质疏松症的疗效机制。方法:选用健康清洁级5周龄Wistar大鼠10只,随机分为正常组和药物组。制备黄芪散含药血清和空白血清,选用健康清洁级新生大鼠乳鼠4只,体外以酶消化法分离培养新生乳鼠颅骨成骨细胞(Ob),行细胞计数(CCK-8)法测定高糖条件下(25.5 mmol·L~(-1))5%,10%,20%,30%含药血清对细胞增殖的影响,选取增殖活性最佳血清浓度,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测黄芪散对成骨功能相关基因骨桥蛋白(OPN),骨钙素(OC),碱性磷酸酶(ALP)和胰腺-骨骼相关基因骨保护素(OPG),叉头转录因子1(Fox O1)表达的影响。结果:10%和30%血清浓度组细胞增殖较空白组有明显升高(P0.05);20%血清浓度组较空白组有显著升高(P0.01)。与空白组比较,5%浓度条件下,OPN,OPG mRNA表达明显下调(P0.05);10%浓度条件下,OC,ALP,OPN mRNA表达明显上调(P0.05,P0.01);OPG,Fox O1 mRNA较空白组表达显著下调(P0.01)。20%浓度和10%浓度条件差异性一致,OPN,OPG,Fox O1 mRNA影响趋势较10%浓度药物血清组更明显。20%浓度血清条件下,与空白组比较,OC和OPN蛋白表达显著上调(P0.01),OPG蛋白表达显著下调(P0.01)。结论:黄芪散对糖尿病性骨质疏松的疗效机制可能与其促进高糖作用下成骨细胞增殖作用有关,与下调胰腺-骨骼相关基因OPG,Fox O1表达有关。     

淫羊藿苷对H295R细胞维生素D系统相关蛋白表达及孕酮、孕烯醇酮分泌的影响

目的:探讨淫羊藿苷对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及孕酮、孕烯醇酮相关基因表达的影响。方法:MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷和维生素D对H295R细胞增殖率的影响。ELISA法检测孕酮、孕烯醇酮分泌水平。RT-qPCR检测VDR、CYP27B、CYP24A、CYP17A1、CYP21 mRNA表达。Western blot法检测VDR、CYP27B、CYP24A蛋白表达。结果:淫羊藿苷10~(-8) mol/L浓度,维生素D在0.25×10~(-11) mol/L和0.5×10~(-11) mol/L浓度,对H295R细胞增殖无显著影响。而淫羊藿苷10~(-4) mol/L,维生素D在2×10~(-11) mol/L和4×10~(-11) mol/L浓度时对H295R细胞增殖存在一定抑制作用。与对照组比较,维生素D组与淫羊藿苷10~(-5) mol/L、10~(-6) mol/L组的VDR、CYP27B mRNA与蛋白表达明显上调,维生素D组与淫羊藿苷10~(-6) mol/L、10~(-7) mol/L组的CYP24A mRNA与蛋白表达则明显下调,维生素D组与淫羊藿苷各剂量组孕酮、孕烯醇酮分泌水平均明显下降,维生素D组与淫羊藿苷10~(-6) mol/L组CYP17A1、CYP21 mRNA表达均明显上调。结论:淫羊藿苷可能通过调节H295R细胞维生素D系统对孕酮、孕烯醇酮合成分泌产生影响。     

常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞增殖及HIF-1α mRNA表达的影响

目的:研究常氧条件下姜黄素对Hep1细胞的增殖及HIF-1α mRNA表达的影响。方法CCK-8法检测常氧条件下不同浓度姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)对肝癌Hep1细胞增殖的影响;用终浓度为15μmol/L姜黄素对体外肝癌细胞系Hep1细胞进行干预,流式细胞术分析Hep1细胞凋亡的变化;常氧条件下不同浓度姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)对肝癌Hep1细胞作用24h后,RT-PCR检测Hep1细胞HIF-1α mRNA表达水平的变化。结果:5、10、15、20μmol/L的姜黄素在作用1周后,呈浓度依赖性抑制肝癌Hep1细胞增殖;流式分析显示15μmol/L的姜黄素使Hep1细胞凋亡率增高,差异具有统计学意义(P0.05);与空白对照组相比,10μmol/L姜黄素处理组的HIF-1α mRNA的表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05),15、20μmol/L姜黄素处理组的HIF-1α mRNA的表达水平升高更为显著(P0.01)。结论:常氧条件下,姜黄素呈浓度依赖性抑制肝癌Hep1细胞的增殖,促进Hep1细胞的凋亡和HIF-1α mRNA的表达,常氧条件下姜黄素抑制肝癌Hep1细胞增殖的机制可能与缺氧条件下姜黄素的抑瘤机制有所不同。     

马钱苷、莫诺苷对AGEs损伤HUVEC的增殖的影响

目的:研究山茱萸效应成分马钱苷、莫诺苷对晚期糖基化终末产物(AGEs)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响及保护作用。方法:体外培养HUVEC,加入阳性药氨基胍及马钱苷、莫诺苷(终浓度分别为0.05、0.1、0.5、1、5、10μmol/L),预孵1h后,加入终浓度为200 mg/L的AGEs,另设模型组及空白对照组,孵育24h后,采用MTT法检测吸光度(OD)值;体外培养HUVEC,加入氨基胍及马钱苷、莫诺苷(终浓度分别为1、10、100μmol/L)预孵1h后,加入终浓度为200 mg/L的AGEs,另设模型组及空白对照组,孵育24h后取细胞培养上清液,检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子-β(TGF-β)、白介素-1β(IL-1β)水平。结果:对增殖影响研究发现,氨基胍在终浓度5、10μmol/L时,马钱苷在终浓度1、5、10μmol/L时,莫诺苷在终浓度0.1、0.5、1、5、10μmol/L时,对AGEs损伤HUVEC具有显著的增殖保护作用,且随着浓度增高,增殖保护作用增强;对保护作用研究发现,模型组细胞上清液中SOD、NO含量降低,ROS、MDA、ET、AngⅡ、TGF-β、IL-1β含量增加;而马钱苷、莫诺苷可不同程度的提高SOD、NO活力,降低ROS、MDA、ET、AngⅡ、TGF-β、IL-1β活力,与模型组比较有显著性差异。结论:山茱萸效应成分马钱苷、莫诺苷可通过调节内皮细胞分泌功能、抑制氧化应激、炎症因子释放及抗细胞粘连等保护血管内皮细胞最终达到治疗糖尿病目的。     

抗纤益心方对去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨抗纤益心方对去甲肾上腺素(NE)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法采用CCK-8法筛选抗纤益心方最佳给药浓度。大鼠H9c2心肌细胞常规培养,饥饿8 h后细胞进行分组,正常组未做处理,模型组加100μmol/L的NE 100μl,抗纤益心方组加入筛选最佳浓度抗纤益心方溶液2μl+100μmol/L的NE 100μl、卡托普利组加入2×10~(-5)mol/L卡托普利5μl+100μmol/L的NE 100μl,各组设3个复孔,作用24 h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,并检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果最终筛选以0. 25 mg/ml的抗纤益心方为干预浓度进行实验。与正常组比较,模型组细胞凋亡率升高,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P 0. 01)。与模型组比较,抗纤益心方组和卡托普利组细胞凋亡率降低,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(P 0. 05或P 0. 01)。结论抗纤益心方可抑制NE诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调节凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

丹参对血管紧张素Ⅱ致肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin信号通路活化干预的影响

目的:基于Wnt/β-catenin信号通路,探讨丹参对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)刺激肾脏系膜细胞后的影响。方法:浓度为(0~10-5mol/L)AngⅡ刺激系膜细胞,以及浓度为10-6mol/L的AngⅡ在不同时间(0 min~24 h)刺激系膜细胞,分别用氯沙坦和丹参注射液干预。用实时定量PCR与Western Blot方法分别检测细胞Wnt-1、β-catenin、PAI-1mRNA与蛋白水平,用ELISA方法测定细胞上清中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量。结果:AngⅡ使系膜细胞Wnt-1、β-catenin、PAI-1表达增加,FN水平升高,呈现剂量、时间依赖性。浓度为150 mg/mL的丹参注射液干预后,Wnt-1、β-catenin、PAI-1表达以及FN水平明显下降,与ARB作用相当。结论:AngⅡ通过刺激Wnt/β-catenin信号途径活化致肾小球硬化,而丹参能通过抑制AngⅡ诱导的系膜细胞Wnt/β-catenin信号途径活化进而下调PAI-1表达与FN合成而发挥抗肾小球硬化的作用。     

淫羊藿总黄酮及其含药血清对成骨细胞增殖及相关基因表达的影响

目的:研究淫羊藿总黄酮(total flavonoids of herba ep im ed ii,HEF)及其大鼠含药血清(HEF-S)、去蛋白含药血清(NP-HEF-S)对体外培养鼠颅骨成骨细胞增殖及骨钙素(osteocalc in,OC)、骨桥蛋白(osteopontin,OP)和Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,COLⅠ)mRNA表达的影响,以了解淫羊藿治疗骨质疏松的可能物质基础,及其对成骨相关蛋白基因表达的作用。方法:HEF及其HEF-S、NP-HEF-S的冻干样品的稀释液分别与鼠颅骨成骨细胞共培养,MTT法测定其增殖率;将NP-HEF-S与鼠颅骨成骨细胞共培养,RT-PCR测定细胞OC、OP和COLⅠmRNA的表达。结果:HEF对细胞增殖无明显影响,且在终浓度为1mg/m l时产生抑制作用;HEF-S在各实验浓度(100~0.1倍原血药浓度)下均能显著促进成骨细胞增殖,且呈一定的剂量依赖关系;NP-HEF-S的作用相似但作用强度略低;10倍量的NP-HEF-S可使OC mRNA表达量明显提高,定量分析表明其表达量近5倍于空白对照组,但对OP和COLⅠmR-NA表达影响甚微。结论:淫羊藿治疗骨质疏松的直接物质基础可能并非HEF,而与其经口给予后吸收入血的HEF代谢产物及其诱生物有关。血清中的HEF代谢产物不仅可促进细胞的分化增殖,且促进其OC mRNA表达。     

瑞香素对B淋巴细胞TLR1～10mRNA及IL-12 mRNA表达的影响

目的观察瑞香素对人外周血B淋巴细胞TLR1～10 mRNA及IL-12 mRNA表达的影响,研究瑞香素对B淋巴细胞作用的可能机制。方法尼龙毛柱分离法分离T、B淋巴细胞;MTT法探讨瑞香素作用B淋巴细胞的适宜浓度;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测瑞香素对B细胞TLR1～10 mRNA及IL-12 mRNA表达影响,同时检测用抗TLR4单抗封闭B细胞TLR4后TLR mRNA及IL-12 mRNA表达的变化。结果瑞香素浓度为6.25～25.00μg/ml时对B细胞增殖有明显增强作用(P<0.05),与SPA有较好协同作用,以浓度为12.50μg/ml瑞香素作用最强;瑞香素作用的未封闭组与封闭组的B细胞TLR4 mRNA、TLR9 mRNA、IL-12 mRNA表达均明显高于对照组(P<0.05);未封闭组B细胞TLR4 mR-NA、TLR9 mRNA、IL-12 mRNA表达量明显高于封闭组(P<0.05)。结论天然免疫途径中TLR4、TLR9参与瑞香素从基因转录水平增加IL-12的分泌,从而增强B淋巴细胞免疫功能。