大鼠大脑海马结构内有髓神经纤维髓鞘老年性改变的体视学研究

目的 进一步认识大鼠大脑海马内有髓神经纤维髓鞘的老年性改变.方法 将16只雌性Long-Evans大鼠分为青年组(6月龄)5只、中老年组(18月龄)5只和老年组(27月龄)6只,运用新的体视学方法和透射电镜技术分别对大鼠大脑海马内有髓神经纤维直径,有髓神经纤维轴突直径,有髓神经纤维髓鞘内外周长和平均厚度进行定量研究.结果 老年组有髓神经纤维平均直径较中老年组明显增加了10.8%(P<0.05),而与青年组比较则无显著性改变(P>0.05).老年组直径＜0.3 μm的有髓神经纤维髓鞘厚度比中老年组减少了24.4% (P<0.05),老年组直径在0.4～0.5(不含0.5,以下类推)、0.5～0.6、0.7～0.8 μm范围的有髓神经纤维髓鞘厚度较青年组均有明显增大(P<0.05).结论 正常老年大脑海马结构内有髓神经纤维存在细小直径纤维脱髓鞘改变的同时,还存在中等直径的有髓神经纤维继续髓鞘化.     

短期丰富生存环境对中老年大鼠空间学习能力的作用及性别差异

目的:探讨短期丰富生存环境对中老年大鼠空间学习能力的作用及性别差异.方法:将14月龄的Sprague-Dawley(SD)大鼠分雌、雄性后再随机分为丰富生存环境组与空白对照组,前者在丰富生存环境条件下饲养,后者在普通环境下饲养,4个月后分别测试在Morris水迷宫中的成绩.结果:短期丰富生存环境下,雌性大鼠的空间学习能力显著强于空白对照组,而同样条件干预的雄性大鼠空间学习能力与空白对照组相比无显著性差异.另外,在普通环境中饲养4个月的雄性大鼠空间学习能力明显强于雌性大鼠,而丰富生存环境条件下雌、雄性大鼠空间学习能力相比无显著性差异.结论:中老年雄性大鼠空间学习能力强于雌性大鼠,但中老年雌性大鼠大脑功能的可塑性可能要强于雄性大鼠,短期丰富生存环境的干预对于中老年雌性大鼠空间学习能力有显著性影响.本研究结果为将来寻找延缓大脑衰老过程的行为学手段提供了重要的理论依据.     

大鼠海马结构有髓神经纤维体视学方法的建立

目的:建立定量研究海马结构及其内有髓神经纤维的无偏体视学方法.方法:选择6 mo龄正常雌性Long-Ev-ans大鼠5只,运用卡瓦列里原理计算海马结构的总体积.根据随机抽样原则在海马结构内切取5～6个组织块,用球切法保证满足三维空间内各向同性抽样原则后,切取60 nm厚的超薄切片,在透射电子显微镜下从每张切片随机拍摄15个视野.使用无偏计数框计算海马结构内有髓神经纤维的长度密度;使用等距测点框计算海马结构内有髓神经纤维的体积密度.用长度密度,体积密度分别乘以海马结构的体积,获得海马结构内有髓神经纤维的总长度和总体积.测量与纤维断面的最长轴相垂直的所有横轴中最长的一条横径为其直径.结果:得到大鼠海马结构的平均体积为(85.9±14.0)mm3;海马结构内有髓神经纤维的总长度为(9.1±3.8)km;总体积为(4.3±1.2)mm3;平均直径为(0.7±0.1)μm.结论:本研究建立的体视学方法可为定量研究正常老年及各种神经系统退行性疾病状态下海马结构内有髓神经纤维的改变提供依据.     

大鼠胼胝体中段和压部体积及有髓神经纤维老年改变的体视学研究

目的研究大鼠胼胝体中段和压部体积及其内有髓神经纤维的老年改变。方法运用新的体视学方法和透射电镜技术定量研究成年、中年和老年雌性Long-Evans大鼠胼胝体中段和压部的体积、有髓神经纤维的长度密度、总长度、有髓神经纤维的直径。结果胼胝体中段体积在老年组比成年组和中年组分别显著降低21.5%和18.1%,而胼胝体压部体积变化不明显。胼胝体中段和压部有髓神经纤维的长度密度、总长度、平均直径均没有明显的老年改变。老年组大鼠大脑胼胝体中段内直径为0.7～0.8μm的有髓神经纤维总长度比成年组大鼠显著减少3.45km,直径为1.5～1.6μm的有髓神经纤维的总长度比成年组显著增加0.5km。老年组大鼠大脑胼胝体压部内直径为1.2～1.3μm和1.4～1.5μm的有髓神经纤维总长度分别较成年组大鼠显著增加0.123km和0.108km。结论老年大脑胼胝体压部没有发生显著性萎缩。老年大脑胼胝体中段体积显著性下降,胼胝体中段内小直径的有髓神经纤维总长度显著性降低可能是老年胼胝体中段体积显著性下降的重要原因之一。     

性别差异对脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2 基因表达的影响

目的:探讨性别差异对脓毒症大鼠心肌Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白-2(MD-2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响。方法:取40只清洁级Wistar大鼠,雌雄各半,分为正常雌雄性对照组(各10只),雌雄性脓毒症组(各10只)。采用腹腔注射5mg/kg内毒素(LPS)制作脓毒症大鼠模型,无菌留取大鼠心肌组织标本,利用RT-PCR法检测心肌组织TLR4、MD-2以及TNF-α基因表达,利用放免法检测大鼠血浆雌二醇含量。结果:正常雌雄性大鼠心肌组织均可表达少量TLR4、MD-2及TNF-α基因,两组差异无统计学意义(P>0.05),但是注射LPS后雌性大鼠心肌组织各项指标明显低于雄性大鼠(P<0.01)。相关分析表明,雌性及雄性脓毒症大鼠心肌组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0.05)。结论:LPS注射后大鼠心肌组织TLR4、MD-2及TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠心肌组织对LPS的反应性弱于雄性。     

胼胝体额区有髓神经纤维髓鞘超微结构老年改变的体视学研究

目的 探讨大鼠胼胝体额区有髓神经纤维髓鞘超微结构的老年性改变.方法 运用电子显微镜和三维体视学方法分别对年轻组(6月龄)、中老年组(18月龄)和老年组(27月龄)雌性Long-Evans大鼠大脑胼胝体额区有髓神经纤维超微结构进行定量研究.结果 年轻组、中老年组和老年组的有髓神经纤维轴突平均直径(内径)、有髓神经纤维平均...     

早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠海马结构内有髓神经纤维改变的体视学研究

目的 探讨早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠海马结构内有髓神经纤维及髓鞘的改变.方法 运用Morris水迷宫方法测试10月龄APP/PS1转基因AD小鼠和同月龄野生型小鼠的空间学习和记忆能力改变的情况;运用无偏体视学方法结合透射电子显微镜技术对各组小鼠海马结构总体积,CA1和齿状回(dentate gyrus,DG)内有髓神经纤维的总长度和总体积,以及有髓神经纤维髓鞘总体积进行三维定量研究.结果 ①与野生型小鼠相比,10月龄APP/PS1转基因AD小鼠的逃避潜伏期显著性增加(P＜0.05),所在象限游泳时间百分比显著减少(P＜0.01),而穿台次数差异无统计学意义(P＞0.05);②与野生型小鼠相比,10月龄APP/PS1转基因AD小鼠海马体积、CA1体积、DG体积均显著性减小(P ＜0.05,P＜0.01);③与同月龄野生型小鼠相比,10月龄APP/PS1转基因AD小鼠海马CA1区和DG内有髓神经纤维的总长度差异没有统计学意义(P＞0.05),但是海马CA1区和DG内有髓神经纤维的总体积显著性减小(P＜0.05),髓鞘总体积也显著减小(P ＜0.05,P＜0.01).结论 10月龄时APP/PS1转基因AD小鼠海马CA1和DG内均存在脱髓鞘改变,可能是引起AD早期空间学习记忆能力减退的结构基础之一.     

双环己酮草酰二腙诱导的精神分裂症样小鼠大脑皮质体积及有髓神经纤维的体视学观测

目的 探讨双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的精神分裂症样小鼠大脑皮质体积及其内有髓神经纤维的改变.方法 将6周龄的雄性C57BL/6小鼠分为CPZ组和对照组,CPZ组小鼠用含0.2％ CPZ混合饲料饲育,对照组小鼠用标准的实验室饲料饲育.6周后进行行为学实验以证实精神分裂症样动物模型造模成功.然后运用透射电镜技术和体视学方法对小鼠大脑皮质体积和大脑皮质内有髓神经纤维进行定量研究.结果 行为学实验中CPZ组小鼠出现精神分裂症样表现,体视学定量研究中CPZ组与对照组小鼠相比大脑皮质总体积没有显著性改变(P＞0.05).与对照组小鼠相比,CPZ组小鼠大脑皮质有髓神经纤维长度密度和总长度分别显著性降低了64.3％和68.9％ (P ＜0.01),有髓神经纤维平均直径显著性增加了17.8％ (P ＜0.01).直径为0.2～＜0.4 μm、0.4～＜0.6 μm和0.6～ ＜0.8 μm的大脑皮质有髓神经纤维总长度与对照组小鼠相比分别显著性减少了4.317、3.313 km和0.940 km(P ＜0.01),CPZ组小鼠其他直径段大脑皮质有髓神经纤维总长度与对照组小鼠相比无显著性差异(P＞0.05).结论 CPZ组小鼠存在大脑皮质有髓神经纤维总长度的降低和平均直径的增加,有髓神经纤维总长度的降低主要是由小直径纤维丢失造成的.     

运用新的体视学方法研究大鼠胼胝体及胼胝体额区有髓神经纤维

目的 建立定量研究胼胝体体积及胼胝体额区有髓神经纤维的体视学方法 .方法 运用卡瓦列里原理计算胼胝体和胼胝体额区体积.采用随机抽样原则在胼胝体额区切取组织块,用"球切法"保证满足三维空间内各向同性抽样原则后,用超薄切片机切取60 nm厚的超薄切片,在透射电子显微镜下从每张切片随机拍摄4个视野.使用无偏计数框计算胼胝体额区有髓神经纤维长度密度,使用等距测试点计算胼胝体额区有髓神经纤维体积密度.胼胝体额区内有髓神经纤维的长度密度和体积密度分别乘以胼胝体额区的体积就得到了胼胝体额区内有髓神经纤维的总长度和总体积.测量所有被无偏计数框计数的有髓神经纤维的直径.与纤维断面的最长轴相垂直的所有横轴中最长的1条横径为其直径.结果 大鼠胼胝体的体积为(70.67±5.64)mm3,胼胝体额区体积为(15.29±1.62)mm3,胼胝体额区有髓神经纤维的总长度为(16.01±2.28)km,胼胝体额区有髓神经纤维的总体积为(9.11±0.44)mm3,胼胝体额区有髓神经纤维髓鞘的总体积为(3.91±0.40)mm3.胼胝体额区有髓神经纤维的直径为(0.58±0.05)μm.结论 本研究建立了定量研究胼胝体体积和胼胝体额区内有髓神经纤维总长度、总体积和有髓神经纤维直径的研究方法 .     

跑步锻炼对APP/PS1双转基因AD模型小鼠大脑白质及白质内有髓神经纤维的作用

目的:运用新的体视学方法定量研究跑步锻炼对APP/PS1双转基因模型小鼠行为学、大脑白质及白质内有髓神经纤维的作用。方法:将6月龄雌性APP/PS1双转基因阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠分为对照组(n=7)和跑步组(n=12),跑步组给予4个月的跑步锻炼干预。跑步后运用Morris水迷宫实验检测小鼠的空间学习和记忆能力;用精确的三维体视学方法来定量测定小鼠白质总体积、白质内有髓神经纤维总长度,白质内有髓纤维、髓鞘和轴突的总体积。结果:经过4个月的跑步锻炼后,跑步组小鼠的定位航行实验显示其平均逃避潜伏期明显短于对照组(P=0.000),空间探索实验表明跑步组穿台次数和平台所在象限时间百分比明显大于对照组(P=0.000,P=0.009)。与对照组小鼠比较,跑步组小鼠白质总体积、白质内有髓纤维总体积和轴突的总体积明显增加(P=0.026,P=0.042,P=0.027),而白质内有髓神经纤维总长度和有髓神经纤维髓鞘总体积差异无统计学意义(P=0.259,P=0.901)。结论:跑步锻炼对白质体积和有髓神经纤维的作用可能是跑步锻炼延缓AD学习和记忆力下降的重要结构基础之一。     

压力耐受大鼠和压力易感大鼠大脑白质及白质内有髓神经纤维的体视学研究

目的 探讨在慢性不可预知性应激(chronic unpredictable stress,CUS)后压力耐受大鼠大脑白质体积及白质内有髓神经纤维总体积的改变,分析对压力的耐受能力是否与大脑白质的改变有关.方法 选用50只4～5周龄雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠,采用完全随机法分为空白对照组和模型组.模型组的大鼠在给予4周的CUS之后,根据糖水偏好实验(sucrose preference test,SPT)的结果筛选出压力易感组和压力耐受组.采用旷场实验(open field test,OFT)评估各组的行为学水平,运用体视学方法计算各组大鼠白质体积和白质内有髓神经纤维的体积.结果 压力易感组的蔗糖偏好百分比显著低于空白对照组和压力耐受组(P＜0.01).压力耐受组OFT总成绩显著优于空白对照组和压力易感组(P＜0.01).压力耐受组的白质体积显著性高于压力易感组(P＜0.01),但与空白对照组比较,差异没有统计学意义(P＞0.05).压力耐受组白质的有髓神经纤维总体积显著性高于压力易感组(P＜0.01),与空白对照组相比差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 白质和白质内有髓神经纤维的改变可能与抑郁易感性差异存在关系.     

丰富环境对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马突触超微结构及突触素表达的影响

目的探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马CA1区神经元突触超微结构和突触素(p38)表达的影响.方法按Rcie法制作HIBD新生动物模型,共计20只,随机分为干预组和非干预组.同时设假手术对照组10只.干预组大鼠于术后第2天开始给予丰富环境刺激,持续20 d.干预结束后用透射电镜观察各组海马CA1区锥体神经元超微结构,免疫组化和图像分析技术检测p38的表达.结果与对照组比较,非干预组海马CA1区锥体细胞见部分核膜消失、线粒体嵴模糊、神经元突触数量减少,突触间隙增宽,突触囊泡减少,突触后致密物变薄;干预组神经元和突触无明显异常.非干预组海马CA1区突出素光密度值明显低于干预组和对照组(P<0.01),而干预组和对照组之间无显著差异(P>0.05).结论阻止或减轻HI后突触超微结构的损伤、促进突触的重建可能是丰富环境发挥作用的物质基础.     

多西他赛和顺铂对大鼠脊髓损伤的形态学观察

[目的]探讨化疗药物多西他赛（doeetaxel）和顺铂对大鼠脊髓损伤的影响。[方法]将24只Wistar品系大鼠随机分为空白组、多西他赛组、顺铂组、顺铂和多西他赛合用组,腹腔注射单次给予多西他赛5mg／kg、顺铂5mg／kg、多西他赛和顺铂各5mg／kg。5个月后,行活体灌注固定,取材,光镜和电镜观察脊髓的形态学变化。[结果]光镜下观察与对照组相比,顺铂组：灰质神经元形态未见异常,但可见血管扩张明显,白质神经纤维髓鞘变性肿胀断裂;多西他赛组：灰质神经元肿胀,尼氏体减少并消失,神经纤维变性坏死,神经胶质细胞增生,白质神经纤维髓鞘变性肿胀断裂;顺铂与多西他赛合用组：灰质内胶质细胞核固缩,灰质神经纤维变性肿胀,空泡样变,血管扩张,神经元尼氏体明显,白质神经纤维髓鞘变性肿胀断裂。电镜下,与对照组相比,顺铂组部分髓鞘的板层结构松解、扭曲;多西他赛组部分髓鞘结构出现板层结构松解、扭曲等轻度变化,细胞器相对完好;多西他赛与顺铂联合组髓鞘结构出现板层结构松解、扭曲。[结论]脊髓损伤后神经细胞损伤在形态改变上呈现多样性。化疗药物多西他赛和顺铂明显加重脊髓损伤,且顺铂与多西他赛合用脊髓损伤更重。     

二氢睾酮对大鼠坐骨神经损伤后功能恢复的影响

目的观察皮下注射二氢睾酮（DHT）对坐骨神经损伤后功能恢复的影响的实验研究。方法实验于在山大一院骨科实验室完成。选用健康雄性SD大鼠40只,制备大鼠右侧坐骨神经挤压伤模型。实验动物随机数字表法分为五组,每组8只（一个对照组,四个不同用药时长组）,术后每周行坐骨神经功能检查（SFI）,术后8周时检测坐骨神经运动神经传导速度、小腿三头肌复合肌肉动作电位的波幅、潜伏期及形态学观察神经再生情况。结果坐骨神经功能指数在各时间点,用药组明显优于对照组;复合肌肉动作电位（CMAP）的潜伏期（LTP）,用药组明显小于对照组（p〈0.05）;神经传导速度和波幅用药组好于对照组（p〈0.05）。组织学检查：有髓神经纤维数在术后8周时用药组明显多于对照组（p〈0.05）;有髓神经纤维直径及髓鞘厚度,用药组明显优于对照组（p〈0.05）。超微结构观察：用药组再生神经的有髓纤维数,髓鞘厚度,髓鞘的成熟度明显好于对照组。而所有测量结果中,各不同用药时长组之间没有统计学差异。结论二氢睾酮对神经的再生和功能恢复有一定的作用。二氢睾酮对神经的恢复作用主要在损伤早期。     

丰富环境结合水疗对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的干预效应

目的 探讨丰富环境刺激及水疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)的干预效应及可能机制.方法 新生7 d龄SD大鼠分为干预组、非干预组及假手术组,干预组又分为丰富环境组、水疗组、丰富环境 水疗组.干预组在HIBD第2天分别予相应干预治疗,持续28 d.以免疫组织化学法检测不同时相点海马CA1区NMDA受体NR1亚单位的表达,并于干预结束后利用Morris水迷宫测试各组学习记忆能力,透射电镜观察海马突触结构.结果 干预28 d,干预组海马CA1区NR1的蛋白表达及学习记忆能力明显高于非干预组,其中丰富环境组、丰富环境 水疗组与假手术组比较无显著性差异(P＞0.05),水疗组仍明显低于假手术组(P＜0.05).透射电镜下,干预组大鼠海马突触后膜致密物(postsynaptic density,PSD)较多,非干预组海马PSD最少,结构疏松.结论 丰富环境刺激及水疗有助于新生大鼠HIBD的恢复,其中以丰富环境刺激、丰富环境刺激联合水疗干预效果显著,海马NMDA受体表达变化是其可能的影响机制之一.     

神经干细胞移植联合促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察神经干细胞(NSCs)联合促红细胞生成素(EPO)对横断性大鼠脊髓损伤的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法:40只成年雌性Wistar大鼠建立大鼠T10全横断脊髓损伤模型,并随机分为对照组、NSCs组、EPO组和NSCs+EPO组,每组10只。术后8周采用NF-200免疫组织化学染色和免疫荧光染色对各组大鼠损伤区脊髓神经纤维再生情况进行形态学观察;应用BBB评分评估各组大鼠后肢运动功能恢复情况。结果:组织形态学观察,对照组大鼠横断处脊髓组织残端萎缩,脊髓白质和灰质间可见大量空洞形成,未见有明显的神经纤维再生;NSCs+EPO组大鼠横断处脊髓组织残端轻度萎缩,横断区可见大量呈杂乱、无序生长的神经纤维,可见有连续性神经纤维通过脊髓横断区,脊髓白质和灰质间可见少量空洞形成。NSCs+EPO组大鼠中,FITC共轭抗神经丝蛋白抗体NF-200标记的再生神经纤维在横断区头侧大量再生,呈无序状生长,并通过损伤区到达尾侧;NSCs组大鼠可见少量神经纤维再生,未通过损伤区到达尾侧。NSCs+EPO组大鼠后肢运动功能BBB评分,术后7 d内均高于其他各组(P<0.05);NSCs组大鼠后肢运动功能BBB评分术后7 d内均高于对照组和EPO组(P<0.05)。结论:NSCs移植联合腹腔注射EPO可有效促进大鼠损伤脊髓功能的恢复、轴突的存活和再生。     

大鼠周围神经端侧吻合后再生纤维来源和状况的研究

目的：探索周围神经端侧吻合后再生纤维的来源及状况。方法：SD雄性大鼠20只,随机分为端侧吻合(E-S)组和端端吻合(E-E)组,E-S组右侧建立胫腓神经端侧吻合模型,E-E组右侧建立腓神经端端吻合模型,术后3个月,行透射电镜、电生理检查及辣根过氧化物酶(horseradish pemxidase,HRP)标记神经元。结果：潜伏期运动神经传导速度(MNCV)及混合神经传导速度(CNCV)E-E组均优于E-S组,E-S组脊髓前角内侧及脊神经节均可观察到HRP标记的阳性细咆,吻合口远端有髓神经纤维再生。结论：腓神经远端的再生纤维来源于胫神经,再生纤维中感觉纤维和运动纤维均有;尽管端端吻合再生纤维质量优于端侧吻合,但端侧吻合仍不失为神经修复的一种选择。     

海洛因依赖大鼠部分脑区超微结构变化研究

目的探讨海洛因依赖大鼠中枢神经系统毒理病理损伤机制。方法海洛因依赖组（实验组）按逐日递增原则皮下注射海洛因建立海洛因依赖模型,对照组注射等量生理盐水。透射电镜观察海洛因依赖组及对照组部分脑区：兰斑（LC）、中脑导水管周围灰质（PAG）、杏仁核、黑质和海马区超微结构变化。结果海洛因依赖大鼠部分脑区神经细胞胞体固缩,神经纤维水肿,有髓神经纤维髓鞘松解,胞内线粒体肿胀、嵴断裂消失,线粒体畸形,内质网扩张、脱颗粒,多聚核糖体解聚,轴突内可见微囊形成,部分轴突内细胞器稀疏。结论海洛因依赖对中枢神经系统具有损害,相关脑区神经细胞和神经纤维超微结构皆发生不同程度改变。