应用PCR从丙型肝炎患者外周血B淋巴细胞扩增抗体基因

用常规ＲＴ－ＰＣＲ法，以１组人抗体重链和轻链筒并引物，直接从５名丙型肝炎患者外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Ｆｄ基因和ｋ轻链基因。结果提示，用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取细胞总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇ（ｄＴ）引导合成ｃＤＮＡ第一链，再经ＰＣＲ扩增的方法，是值得优先采用的方法。     

应用PCR从丙型肝炎患者外周血B淋巴细胞扩增抗体基因

用常规RT PCR法 ,以 1组人抗体重链和轻链简并引物 ,直接从 5名丙型肝炎患者外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Fd基因和κ轻链基因。结果提示 ,用Trizol试剂提取细胞总RNA ,以Olig(dT)引导合成cDNA第一链 ,再经PCR扩增的方法 ,是值得优先采用的方法。细胞总RNA的提取不必追求高纯度 ,少量外周血即足以满足构建抗体库所需 ,简并引物可获得良好的扩增效果 ,为构建噬菌体抗体库奠定了基础     

分泌血型特异性抗体人B淋巴细胞系的建立

目的:建立Epstein-Barr病毒(EBV)转化的分泌血型特异性抗体的永生化B淋巴细胞系。方法:采用EBV转化外周血B淋巴细胞,加入环孢素抑制T淋巴细胞,建立B血型人B淋巴细胞系(B-LCL),红细胞凝集试验检测细胞培养上清与血型红细胞结合活性。结果:共采集B血型健康人全血15份,成功转化12份,转化率为80%;获得9株分泌抗A抗体的人B淋巴细胞系。结论:建立了分泌抗A抗体B淋巴细胞系,为进一步研制人源血型特异性单克隆抗体奠定基础。     

聚合酶链反应扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因

目的利用二次聚合酶链反应(PCR)扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,并将其克隆到T载体进行测序验证。方法收集50例动脉粥样硬化患者外周动脉血标本,密度梯度离心法分离淋巴细胞,TR Izol法提取总RNA,用逆转录-PCR扩增轻链可变区基因(包括VK和Vλ)和重链可变区基因(VH),分别酶切后克隆到T载体上,随机挑取2个克隆进行测序验证。结果总RNA的纯度和完整性都较好,经过2次PCR成功扩增出了抗体全套轻、重链可变区基因。测序结果与已有的人抗体基因的序列高度同源。结论该方法成功扩增出了人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,为下一步噬菌体单链抗体库的构建和筛选奠定了基础。     

聚合酶链反应扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因

目的 利用二次聚合酶链反应(PCR)扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,并将其克隆到T载体进行测序验证.方法 收集50例动脉粥样硬化患者外周动脉血标本,密度梯度离心法分离淋巴细胞,TRIzol法提取总RNA,用逆转录-PCR扩增轻链可变区基因(包括VK和Vλ)和重链可变区基因(VH),分别酶切后克隆到T载体上,随机挑取2个克隆进行测序验证.结果 总RNA的纯度和完整性都较好,经过2次PCR成功扩增出了抗体全套轻、重链可变区基因.测序结果与已有的人抗体基因的序列高度同源.结论 该方法成功扩增出了人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,为下一步噬菌体单链抗体库的构建和筛选奠定了基础.     

用半套式PCR扩增人外周血B淋巴细胞的HgVH基因

以Ａｎｇｒａｙ ＳＫ和自行设计的引物作半套式ＰＣＲ，成功地从人外周血Ｂ淋巴细胞中扩增出Ｉｇ重链可变区基因。扩增产物的分子量为６６０ｂｐ左右。该文结果提示，在建立全套抗体基因文库时，半套式ＰＣＲ法能较好地解决Ｉｇ可变区基因多样性的扩增问题。     

对流行性出血热患者静脉血异型淋巴细胞的临床评价

本文观察了流行性出血热(EHF)患者静脉血异型淋巴细胞(ALC)的动态变化及其与病情的关系,结果表明发热期ALC较高,以后逐渐下降,重型患者ALC高于轻、中型,可以认为ALC就是EHF病毒直接作用于淋巴细胞所表现出的异常特征。本文还就ALC在EHF诊断中的作用进行了讨论。     

一株抗独特型人单抗轻链可变区基因的克隆及序列测定

目的：探索抗独特型抗体模拟抗原的分子机理。方法：利用反转录－ＰＣＲ方法，从分泌肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单抗的杂交瘤细胞系（Ｃ８），成功地克隆了抗ＨＦＲＳＶ Ｉｄ人单抗轻链可变区基因，并将此基因重组入Ｍ１３噬菌体ＤＮＡ中，测定了此轻链可变区基因全序列。结果：经计算机分析，基因全长共３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸，氨基酸序比较性分析发现所得的该单抗ＣＤＲ２区与ＨＦＲＳＶＧ２蛋     

外周血淋巴细胞中汉坦病毒基因检测对HFRS早期诊断的意义

目的　探讨外周血淋巴细胞中汉坦病毒 (HV)基因的检测对流行性出血热 (又名肾综合征出血热 ,HFRS)早期诊断的意义。　方法　用RT PCR法检测 40例发病 3～ 7日内的HFRS患者外周血淋巴细胞和血浆中的HVRNA ,并与特异性IgM检测结果进行比较。　 结果　淋巴细胞中HVRNA阳性率为 82 .5 % (3 3 /4 0 ) ,特异性IgM阳性率为 90 % (3 6/4 0 ) ,两种方法的检出率无显著性差异 (χ2 =3 .2 5 ,P >0 .0 5 ) ,其一致率为 82 .5 % (3 3 /4 0 ) ;血浆中HVRNA阳性率为 5 5 % (2 2 /4 0 ) ,明显低于淋巴细胞 (χ2 =10 .3 7,P <0 .0 1)。　结论　RT PCR检测外周血淋巴细胞中HVRNA对HFRS的早期诊断具有潜在的应用价值     

出血热病毒抗原与其抗独特型抗体基因的研究

为了解抗独特型抗体与抗原的基因特征和相互关系。方法采用基因工程方法，从分泌肾病综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单克隆抗体杂交瘤细胞系（Ｃ８），克隆获得的抗ＨＦＲＳＶＩｄ人单克隆抗体重链和轻链可变区基因，并与出血热病毒基因进行了比较。结果抗Ｉｄ人单克隆抗体重链可变区第４５～５５位氨基酸序列和轻链可变区第５８～６８位氨基酸序列，均与出血热病毒Ｇ２膜蛋白的第４４７～４５７位氨基酸序列高度同源，而且同源区域具有相似的蛋白质二级结构。结论抗Ｉｄ人单克隆抗体模拟抗原具有一定的分子基础。     

一株可模拟出血热病毒的抗独特型人单抗可变区抗原性分析

利用抗独特型抗体作为肿瘤和病毒疫苗是新型疫苗研究的一个方向，我们在成功获得了分泌抗出血     

肾综合征出血热患者病毒特异性淋巴细胞的临床分析

目的通过检测外周血中分泌IFN-γ的淋巴细胞含量水平，探讨病毒特异性淋巴细胞在HFRS发病机制中的作用。方法对我院2008年2月-7月收治的31例肾综合征出血热患者用流式细胞仪对PMBC体外刺激后IFN-γ的淋巴细胞含量水平进行检测。结果发热期组、低血压期组、少尿期组、多尿期组和恢复期组含量相互间均有显著统计学差异（P〈0．05），且发热期、少尿期和多尿期含量均与健康对照组有显著统计学差异（P〈0．05）。结论HFRS发病机制尚未完全清楚，但动态观察不同病程HFRS患者淋巴细胞表达的消长规律可能会成为监测HFRS病情状态的一个新指标。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183—B2重链可变区基因的体外扩增,克 …

目的；分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３－Ｂ２重链可变区（ＶＨ）基因并测定其序列。方法；用反转录－ＰＣＲ扩增抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ ＶＨ基因，将其克隆入Ｐ＾ＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ‘ｓ双脱氧链终止法测定序列，将序列与Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ及已发表的抗体序列比较。     

RT-PCR扩增人抗HBsAg抗体Fab段基因

目的:采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)的方法从少量外周血中扩增抗HBsAg抗体重链Fd和κ轻链基因。方法：用RNAex试剂提取细胞总RNA，以Olig(dT)引导合成cDNA第一链．再经PCR扩增的方法，以重链Fd和κ轻链基因简并引物．直接从人外周血混合淋巴细胞中扩增出抗HBsAg抗体重链Fd和κ轻链基因。结果：扩增出分子量为700bp的抗HBsAg抗体重链Fd和κ轻链基因。结论：得到的抗体基因为下一步构建含人抗HBsAg抗体Fab段基因的腺相关病毒载体奠定了基础。     

B淋巴细胞形态转化的实验研究

利用形态学观察及放射自显影等方法对 SPB 诱导的小鼠 B 淋巴细胞转化过程进行了动态观察。结果表明:(1)生发中心(GC)内最先出现的是无裂细胞,但转化过程可能在 GC 形成之前或细胞进入 GC 之前即已开始;(2)转化过程中的形态学变化主要发生于 GC 内,表现为胞核、核仁增大和染色质解聚等,体积较大的无裂细胞是 B 细胞形态转化的后期阶段;(3)裂细胞不一定是 B 细胞转化的必经阶段,但也有可能是在进入 GC 之前由小淋巴细胞转化而来。上述结果对于淋巴瘤的分类学研究具有一定指导意义。     

抗2型登革病毒特异性免疫球蛋白重链可变区基因的扩增与纯化

提取抗２型登革病毒单克隆抗体杂交瘤细胞ｍＲＮＡ和ＤＮＡ反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＰＣＲ扩增并纯化特异性免疫球蛋白重链可变区（ＶＨ）基因。琼脂糖凝胶和聚丙烯胺凝胶电泳观察结果;该ＶＨ基因约４５０ｂｐ。实验证明,上述两种方法均是分离和扩增ＶＨ基因的有效方法,但提取ＤＮＡ后进行ＰＣＲ较提取ｍＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ经济,简单。     

聚合酶链反应用于人巨细胞病毒B基因编码区段的体外扩增

A nucleic acid amplification procedure, the polymerase chain reaction (PCR), has been used to amplify the human cytomegalovirus (HCMV) B gene code region, and its glycoprotein 52 kd antigenic domain. The primers used in the PCR assay were based on a conserved region of the HCMV B gene sequence. By using primer 1 (5'-AAAGAATTCATGGAATCCAGGATCTG-3', upstream nucleotides 157 to 2877), primer 2 (5'-AAAGAATTCATGAACGTGAAGGAATCG-3', upstream nucleotides 1846 to 2877), and primer 4(5'-ATAAAGCTTAATCAGACGTTCTCTTCTTC-3', downstream nucleotides 157 to 2877 and 1846 to 2877), the HCMV B gene code region sequence and its glycoprotein 52 kd antigenic domain sequence were amplified from the recombinant plasmid pBH1 DNA containing the HCMV B gene. Amplification cycles consisted of denaturation at 92 degrees C for 1 min, annealing at 55 degrees C for 1 min, and extension at 72 degrees C for 1.5 min. The cycles were carried out 30 times in three different water baths, respectively. After the last extension, 10 microliter of each reaction mixture was removed and subjected to electrophoresis on 1.2% agarose gel. Ten microgram of PCR products were obtained from 0.2 microgram of template DNA after the 30 times cycles, and were enough for being used in the restriction site analysis and the construction of clones.     

肾综合征出血热患者血清Zn、Se含量和T淋巴细胞亚群的关系

目的探讨肾综合征出血热(HFRS)中,血液锌(Zn)、硒(Se)对T淋巴细胞亚群的影响。方法对40例HFRS病人进行血清Zn、Se含量及T淋巴细胞亚群进行动态观察。结果显示HFRS病人血清Zn、Se含量在发热期明显低于正常对照组,CD4+细胞在发热期明显降低,CD8+细胞在发热期明显升高,其变化在少尿期最重,并且发现Zn、Se含量和T细胞亚群变化有一定的相关性,即Zn、Se和CD4+细胞数量正相关,和CD8+细胞数量成负相关,与CD4+/CD8+负相关。结论HFRS病人免疫功能紊乱现象与血清Zn、Se含量有关。     

催乳素对人B淋巴细胞IgG基因表达影响的实验研究

目的:研究人催乳素(PRL)对B淋巴母细胞系IM-9细胞IgG基因表达的影响。方法:应用人PRL(10ng/ml)刺激IM-9细胞,培养48h后用试剂盒提取细胞总RNA,反转录为cDNA,RT-PCR扩增IgGcDNA,琼脂糖凝胶电泳观察扩增情况。结果:该cDNA片段的大小为98bp,LPS、PRL与LPS-PRL组cDNA条带在第24循环时出现,LPS-Br与LPS-PRL-Br组cDNA条带在第28循环时出现,并随循环数的增加亮度逐渐增强,LPS-PRL组该cDNA条带亮度最强。结论:PRL能够上调B淋巴细胞中IgG基因的表达,但该功能能够被Br拮抗。