细胞凋亡的组织形态学检测方法

细胞凋亡（apoptosis），又称程序性细胞死亡（programmedcelldeath，PCD），是细胞的一种生理性死亡过程，细胞凋亡机理的研究已成为基础医学一个新的、十分令人关注的热门课题。细胞调亡贯穿于机体的整个生命周期，完成新旧细胞的生死交替，它对机体的发育，存活及保持正常生理功能都有重要意义。在许多病理过程，尤其是肿瘤的发生发展过程中也有重要意义［1、2］。细胞凋亡的检测手段正日趋增多及完善，普通光镜及电镜的形态学观察和细胞DNA电泳分析是最基本的检测方法，荧光激活细胞分类法具有快速、准确、特异性高且样品用量少的优…     

流式细胞术在程序性细胞死亡研究中的应用

本文对流式细胞（ＦＣＭ）在程序性细胞死亡研究中的作用作了综述，包括ＰＩ染色法、Ｈｏｅｃｈｓｔ－ＰＩ双染色法、ＩＳＮＴ或ＴＵＮＥＬ技术及ＦＣＭ在程序性细胞死亡相关基因表达和信号转导机制研究中应用。     

用流式细胞术研究血液病细胞死亡生物学

Darzynkiewicz等提出的细胞死亡生物学,意在研究细胞死亡前、中、后的形态、生化和分子生物学等的全过程以及细胞死后邻近组织的反应。经过半个多世纪对细胞增殖动力学的研究后,人们终于认识到细胞死亡与增殖同等重要。两者的不平衡是多种疾病的根源,因而细胞死亡的研究成为近年来生命科学的研究热点。细胞凋亡在骨髓增生异常综合征,慢性淋巴细胞白血病,慢性粒细胞白血病,以及急性白血病发生发展中的作用已获得初步证实。深入研究其机理有利于发展新的靶向治疗。为了准确判断细胞死亡类型,可靠的实验技术至关重要。流式细胞术(FCM)能多参数、快速、定性、定量测定群体细胞中单个细胞的生物学过程,例如用光散射可测定细胞形态,用膜联蛋白(Annexin V),碘化丙啶(PI)和吖啶橙(AO)等,可测定早期细胞膜结构与通透功能。若丹明123(rhodamine 123)是线粒体特异标志。DNA经内切酶降解后在FCM-DNA图中出现亚G_1峰。用各种抗基因蛋白单克隆抗体如Bcl-2,Bcl-XL,Bax,ICE,c-myc,Fas/FasL等可测知单个细胞中与细胞凋亡相关基因蛋白表达及其间关系。Tunnel法与PI双标志法是判断凋亡细胞发生在哪个周期时相的最可靠方法。本文简要介绍各种方法的原理与质量控制以及如何正确判断实验结果。     

缺血—再灌注肌肉损伤中程序性细胞死亡的研究

目的：探讨程序性细胞死亡在缺血再灌注肌肉损伤中的作用及缺血再灌注肌肉损伤的发生机制。方法：运用末端脱氧核糖转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记技术（ＴＵＮＥＬ）观察止血带致大鼠右后肢缺血再灌注腓肠肌细胞程序性死亡的特征与规律，并以左后肢作自身正常对照。结果：正常肌肉肌细胞完整，无程序性死亡细胞；再灌注４小时，肌细胞深度蓝染，程序性死亡细胞率为０．７０±０．０７；再灌注２４小时，肌细胞蓝染程度减轻，其程序性死亡细胞率为０．４８±０．０８，与再灌注４小时比较有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）；再灌注２４小时，重度程序性死亡细胞率为０．１２±０．０８，与再灌注４小时（０．３６±０．０９）比较有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论：缺血再灌注能致肌肉细胞发生程序性死亡，以再灌注４小时最重，再灌注２４小时较４小时明显缓解     

流式细胞术在程序性细胞死亡研究中的应用

本文对流式细胞术（ＦＣＭ）在程序性细胞死亡研究中的作用作了综述,包括ＰＩ染色法、Ｈｏｅｃｈｓｔ－ＰＩ双染色法、ＩＳＮＴ或 ＴＵＮＥＬ技术及 ＦＣＭ在程序性细胞死亡相关基因表达和信号转导机制研究中应用。     

细胞凋亡与自噬关系的探讨

细胞凋亡与自噬同属于程序性细胞死亡,而上述二者对于维持细胞和机体的稳态均是必不可少的基本生理机制.细胞凋亡与自噬之间既有区别又有联系,而两者关系较为复杂,迄今为止尚未被完全阐明.笔者对细胞凋亡与自噬之间的关系进行综述,以期为临床研究及基础实验提供理论参考.     

白血病细胞形态学的新认识

本文回顾我们五年来白血病细胞形态学工作的体会结合当前的进展作一浅谈。一、白血病细胞的多态性在实践中,我们常遇这样情况:一部分病人的原幼细胞既象这系统的细胞又似那一系统的细胞或既有某系统的又有另一系统的原细胞。有时在分化和成熟的中晚期细胞也存在,很难判定是粒细胞还是单核细胞抑或其他细胞。在化疗后也常可见白血     

肿瘤研究的热点——细胞凋亡

1972年Kerr等用“细胞凋亡”(apop-tosis)一词来描述一系列与昆虫和动物细胞生理性死亡有关的细胞现象,如细胞膜突起、细胞体积缩小、染色质浓缩和DNA降解等。与细胞坏死(necrosis)不同,它是一个主动的、固有的程序化现象,故又称为细胞程序性     

小鼠神经管发生中程序性细胞死亡的时空规律

目的：研究小鼠神经管发生中程序性细胞死亡(programmed cell death．PCD)的时空规律。方法：分别取交配后9．0d、交配后9．5d、交配后10．5d鼠胚做石蜡包埋连续切片的TUNEL染色。进行神经上皮凋亡细胞的计数分析。结果：观察到交配后9．0d神经上皮的细胞凋亡率(0．1815&;#177;0．14)最高，交配后9．5d后细胞凋亡率(0．1377&;#177;0．09)降低，交配后10．5d(0．1284&;#177;0．07)降至更低。从空间分布看，神经管头端的凋亡细胞明显多于尾端。结论：交配后9．0d神经管的高细胞凋亡率，可能与神经管的关闭有关；神经管颅侧的细胞死亡与脑泡的塑形有关。     

小檗碱上调程序性细胞死亡蛋白4抑制黑色素瘤B16细胞增殖及促细胞凋亡的研究

目的探讨小檗碱对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响。方法使用CCK-8法检测细胞增殖活力;使用流式细胞仪检测细胞周期;使用脂质体转染siRNA敲减程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)基因;使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)明确敲减情况;使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;使用Western-blotting检测PDCD4增殖、凋亡情况及其相关蛋白表达。结果小檗碱可抑制黑色素瘤B16细胞的增殖活力,并将其细胞周期阻滞于G0/G1期; PDCD4是小檗碱抑制B16细胞增殖、促细胞凋亡的关键基因;小檗碱处理可增高PDCD4、Cleaved Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,降低Ki-67、Bcl-2的表达水平,敲除PDCD4能减弱小檗碱对黑色素瘤B16细胞Ki-67、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3的影响。结论小檗碱通过上调PDCD4来抑制黑色素瘤B16细胞增殖并促使其凋亡。     

Towards a definition of death anxiety

There is currently no consensus about what the notion of death anxiety means. This commentary explores the complexity of death anxiety, asserts the distinction between anxiety and fear, and attempts a definition that encompasses the many facets associated with the term.     

Nursing practice and the definition of human death

EDWARDS SD and FORBES K. Nursing Inquiry 2003; 10 : 229–235 Nursing practice and the definition of human death This paper aims to highlight the gap in nursing literature of discussion of the definition of human death — to show that nurses should engage in such discussion. For the nursing role in the care of brain dead patients and their relatives may unwittingly promote and foster a definition of human death which is fundamentally flawed. A person can be warm, pink, have an independently beating heart and be breathing, yet still be diagnosed as brainstem dead. Nursing literature which discusses issues surrounding brain death (as opposed to brain death itself), proposes that nurses should suppress any reservations which they may have in accepting that a patient with the characteristics described is dead; and that they should try to allay any reservations which relatives of such dead patients might have. But what if the concept of brainstem death is flawed? Surely, as accountable professionals, nurses should not accept the role just referred to without satisfying themselves that the concept of brainstem death is coherent and robust. This paper tries to show that, on examination, this is not the case. The definition of human death which guides practice in the UK and elsewhere is fundamentally flawed. Instead of suppressing their own intuitions, and the intuitions of patients’ relatives in the management of patients diagnosed as brainstem dead, nurses should critically examine the definition of death which currently informs clinical practice. Our conclusion is that this definition is false.     

程序性细胞死亡分子5在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达与意义

目的:程序性细胞死亡分子5作为一个重要的凋亡正调控分子,在许多疾病的发生发展过程中起着重要的作用,但有关其在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的作用研究甚少.实验拟验证程序性细胞死亡分子5在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达水平及细胞定位分布,探讨程序性细胞死亡分子5在类风湿关节炎发病中的可能作用.方法:实验于2005-06/2006-10在北京大学人民医院关节病诊疗研究中心完成.①实验材料:滑膜均取材于北京大学人民医院关节病诊疗研究中心行人工全膝关节表面置换术的类风湿关节炎或骨关节炎患者.所有患者均参照美国风湿病学会标准确诊.术前获得患者知情同意,并经北京大学人民医院伦理委员会批准.②实验方法:原代培养并传代分离获得型别均一的成纤维样滑膜细胞,提取细胞RNA和蛋白.③实验评估:实时定量聚合酶链反应及蛋白免疫印迹检测类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞和骨关节炎成纤维样滑膜细胞中程序性细胞死亡分子5 mRNA和蛋白的表达水平:制备细胞爬片采用免疫组织化学技术分析程序性细胞死亡分子5在成纤维样滑膜细胞中的定位分布特征.结果:①相对于骨关节炎,分离培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中程序性细胞死亡分子5在mRNA和蛋白水平上表达下调.②类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中程序性细胞死亡分子5的下调与抗凋亡分子Bcl-2的上调是协调一致的.③程序性细胞死亡分子5蛋白主要定位于体外培养的成纤维样滑膜细胞的胞浆中.结论:程序性细胞死亡分子5可能参与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞对凋亡刺激信号所产生的凋亡抑制过程,在类风湿关节炎的病理演变过程中可能具有抑制凋亡的作用.     

Pain symptoms in depression: definition and clinical significance

This article presents the findings of a focused literature review and consensus meetings on the definition and clinical significance of painful symptoms in patients with depression. About 50% of depressed patients report pain, and many types of pain occur more frequently in people with depression than in those without. There is some evidence that pain in depressed patients is associated with a poor response to treatment. Pain and depression may share common pathways and may both respond to treatment with certain antidepressants. Doctors need to be alert to pain in depressed patients and be prepared to treat it.     

前列腺穿刺活检中核仁的形态学测量及其诊断意义

目的 测量前列腺穿刺活检中各种良恶性病变细胞的核仁大小和数量，探讨核仁增大作为诊断前列腺癌形态学指标之一的定量标准。方法 在702例前列腺穿刺活检中，按病种随机选择切片质量佳、有明确诊断结果的各类良恶性病变共107例。在高倍镜下测量10个视野内直径≥0．5μm核仁的细胞数量及每个核仁的直径。结果 95％经典型前列腺癌核仁明显增大，并至少有2个核仁直径≥2．5μm。经典型癌与良性前列腺病变核仁的直径和数量均差异显著。3种癌前病变(高级别PIN；前列腺癌放疗和／或内分泌治疗后良性腺泡上皮不典型增生；非典型性基底细胞增生)可以出现直径≥2.5μm的核仁。结论 核仁明显增大是诊断前列腺癌的重要形态学指标，但不是绝对标准。2．5μm可以作为一个相对域值，在结构异常或呈浸润性生长的上皮细胞内出现，可基本排除良性病变。