黏着斑激酶在2型糖尿病大鼠肾组织中的表达变化及意义

 目的：观察黏着斑激酶（FAK）在2型糖尿病（T2DM）大鼠肾组织中的动态变化,探讨其在糖尿病肾病（DN）发病机制中的作用。方法：复制T2DM模型,随机分为糖尿病8、12和16周(DM8、DM12和DM16)组,另设正常对照(NC)组和高脂高糖对照(HC)组。免疫组织化学检测肾组织中FAK、转化生长因子β1(TGF-β1)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2和纤维连接蛋白(FN)的表达;Western blotting检测FAK和p-FAK(Tyr397)蛋白水平;RT-PCR法检测肾皮质FAK mRNA的水平。结果：DM各组TGF-β1、p-ERK1/2和FN蛋白表达显著高于NC组及HC组(P<0.05);DM12和DM16组肾皮质FAK和p-FAK (Tyr397)表达均较NC组、HC组及DM8组显著增多(P< 0.05),且p-FAK(Tyr397)与总FAK蛋白表达趋势一致;FAK与TGF-β1、p-ERK1/2、FN呈显著正相关（P<0.01）。DM12和DM16组FAK mRNA比NC组、HC组及DM8周组表达明显增加(P< 0.05)。结论: 在2型糖尿病中,FAK可能作为TGF-β1的下游分子被活化,并通过活化ERK1/2使FN表达增多,从而参与了糖尿病肾病的发生发展。     

川穹嗪对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及可能机制

目的 观察川穹嗪对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其可能的信号机制.方法 将36只SD大鼠随机分为对照组(control)、糖尿病肾病模型组(DN)和川穹嗪治疗组(TMP),每组12只.于造模成功后第8周,生化分析仪检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;测定肾脏指数;HE染色观察各组大鼠肾组织病理学改变;ELISA方法检测各组大鼠肾组织IL-6、C反应蛋白(CRP)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平;Western blot方法检测各组大鼠肾组织中JAK激酶2(JAK2)、p-JAK2、信号转导与转录因子3(STAT3)及p-STAT3的蛋白表达.结果 川穹嗪能够降低糖尿病肾病大鼠血清中Scr、BUN含量(P＜0.05);降低糖尿病肾病大鼠肾脏指数,减轻肾脏的病理损伤(P＜0.05);降低糖尿病肾病大鼠肾组织IL-6、CRP与TNF-α水平(P＜0.05);下调糖尿病肾病大鼠肾组织p-JAK2及p-STAT3的蛋白表达(P＜0.05).结论 川穹嗪可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻糖尿病肾病大鼠的炎症反应.     

Raf激酶抑制蛋白在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的 探讨Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)在宫颈癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测RKIP在正常官颈组织、官颈上皮内瘤变组织、官颈癌及其转移淋巴结组织的表达,并在体外应用RT- PCR及Western印迹方法检测RKIP mRNA及蛋白在4种不同来源的宫颈癌细胞系中的表达情况,探讨其与官颈癌临床病理学特征的关系.结果 RKIP在宫颈癌转移淋巴结中的阳性表达率低于宫颈癌组织;RKIP在宫颈癌组织的表达低于正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤变组织,差异有统计学意义(x2 =9.211,P＜0.05);而RKIP在正常官颈组织及官颈上皮内瘤变组织的表达差异无统计学意义(x2=0.805,P＞ 0.05);RKIP在宫颈癌组织中的表达与淋巴结转移有关(x2=10.341,P＜0.05),与肿瘤的病理类型、分化程度及临床分期无关(x2分别为0.190、4.101、1.402,P＞0.05).RT- PCR及Western印迹结果显示RKIP在高侵袭性宫颈癌细胞系Caski中的表达低于其他各组(x2=4.08,P＜0.05).结论 RKIP基因在宫颈上皮内瘤变向官颈癌转变中可能起重要作用,是官颈癌发生淋巴结转移的重要标记.     

RKIP在不同类型肺癌中表达的变化及临床意义

目的 观察Raf激酶抑制蛋白（RKIP）在不同类型肺癌中表达的变化及探讨其临床价值。方法 选取鳞癌21例、腺癌23例及小细胞肺癌10例设为实验组,肺良性病变10例设为对照组,采用免疫组化的方法检测RKIP的表达,观察在不同类型肺癌中表达的差异及与临床分期的关系。结果 与对照组比较,实验组中RKIP的表达水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。实验组中RKIP的表达最低的是小细胞癌,其次为鳞癌,再次腺癌。对腺癌进一步研究发现,与Ⅰ及Ⅱ期比较,RKIP在Ⅲ及Ⅳ期的表达更低;与Ⅰ期比较,RKIP在Ⅱ期中表达稍有减低,但差异无统计学意义（P＞0.05）;与Ⅲ期比较,RKIP在Ⅳ期中表达稍有减低,但差异无统计学意义（P＞0.05）。磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达趋势与RKIP相反,与Ⅰ和Ⅱ期比较,在Ⅲ和Ⅳ期中表达明显升高。相关性分析显示,RKIP与p-ERK1/2的表达呈负相关（r=-0.893,P＜0.05）。结论 RKIP表达水平的缺失可能促进了ERK1/2的磷酸化,从而促进了肺癌的发生及发展,因此检测RKIP的表达水平可能对诊断肺癌及分期预后有重要的临床价值。     

Raf激酶抑制蛋白对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的：探讨Raf激酶抑制蛋白（RKIP）对鼻咽癌细胞增殖的影响。 方法：采用脂质体转染方法将反义RKIP核酸表达质粒pcDNA3.1(-)-asRKIP及空白载体pcDNA3.1(-)分别转染鼻咽癌细胞系6-10B细胞，用Western 印迹检测RKIP表达，建立RKIP表达下调的稳定转染细胞和对照细胞系。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、流式细胞术和软琼脂集落形成实验检测RKIP表达下调对鼻咽癌细胞增殖、细胞周期分布和停泊非依赖性生长的影响。结果：建立了RKIP表达下调的6-10B鼻咽癌细胞系；RKIP表达下调促进6-10B细胞增殖和停泊非依赖性生长，并加速其越过G0/G1期。结论：RKIP具有抑制鼻咽癌细胞增殖和停泊非依赖性生长的作用，可能在鼻咽癌发病中具有重要作用。     

葡萄籽原花青素对顺铂所致小鼠肾毒性作用的影响

 目的:探讨葡萄籽原花青素（GSP）对顺铂（CP）肾毒性作用的防护及可能机制。方法:雄性C57小鼠分为4组：正常对照组（N组,n=10）、CP组（腹腔注射20 mg/kg CP,n=20）、GSP组（第1天及第3天灌胃GSP 500 mg/kg,n=15）和CP+GSP组（腹腔注射CP 30 min前给予500 mg/kg GSP灌胃,第3天灌胃等量的GSP,n=20）。给药后第5天取血,肾组织病理HE染色,应用蛋白印迹法和免疫组化法检测小鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的蛋白表达。结果:与N组比较,CP组肾脏指数升高,血尿素氮和血清肌酐水平升高（P＜0.05）,肾病理损伤明显,肾组织GRP78和p-ERK蛋白表达增加（P＜0.05）。与CP组相比,CP+GSP组肾脏指数降低,血尿素氮和血清肌酐水平下降（P＜0.05）,肾病理损伤减轻,GRP78和p-ERK蛋白表达明显降低（P＜0.05）。结论:GSP能明显降低CP所致的肾毒性,其机制与GSP下调CP导致的内质网应激有关。     

皮层电刺激对左旋多巴诱发异动症大鼠纹状体c-fos及ENK表达的影响

为了研究皮层电刺激对左旋多巴诱发异动症(LID)大鼠纹状体神经元c-fos及脑啡肽(ENK)表达的影响,探讨皮层-纹状体通路可塑性改变在LID发生机制中的作用,本实验制备Parkinson病(PD)和LID大鼠模型,将实验大鼠分成三组:正常对照组、PD组和LID组。电刺激运动皮层后,免疫组化法检测纹状体区c-fos、ENK、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及其活化形式磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的表达。结果显示:与对侧比较,皮层电刺激使各组同侧纹状体c-fos、ENK、ERK1/2、p-ERK1/2表达均增加(P<0.01);LID组c-fos(0.67±0.03)以及p-ERK1/2的表达(0.17±0.05)较PD组(0.08±0.03)和正常组(0.07±0.02)增加(P<0.05),LID组ENK(0.21±0.07)的表达和PD组(0.18±0.08)相比较无统计学差异(P>0.05),但均较正常组(0.08±0.01)增加(P<0.01);三组ERK1/2的表达无统计学差异(P>0.05),但LID组p-ERK1/2的表达(0.17±0.05)较PD组和正常组有所增加(P<0.01)。本研究结果表明,LID大鼠皮层-纹状体通路兴奋使纹状体c-fos以及p-ERK1/2表达增加,ENK的表达没有显著变化。上述结果提示皮层-纹状体通路活动增强以及p-ERK1/2表达的增加与LID的发生机制有关,而ENK在LID的发生过程中可能不发挥重要作用。     

糖尿病大鼠肺组织PI3K/Akt表达的变化及意义

目的研究糖尿病大鼠肺组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(Akt)表达的变化及意义。方法 40只大鼠随机分为对照组(10)和糖尿病组(30),通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型。糖尿病模型建立后,检测血糖、血脂的改变;采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠肺组织中PI3K、Akt和p-Akt表达的变化情况。结果与对照组比较,糖尿病模型组大鼠血糖、血脂值明显增高(0.01)。免疫组织化学和Western blot结果显示,糖尿病模型组大鼠模肺组织PI3K、Akt和pAkt的表达量均显著高于对照组。结论 PI3K/Akt信号通路可能参了与糖尿病肺组织病变的发生发展。     

双氢青蒿素缓解脓毒症大鼠急性肝损伤

目的 探讨双氢青蒿素（DHA）对脓毒症大鼠急性肝损伤作用以及丝氨酸苏氨酸激酶（AKT）/细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径的影响。方法 将SPF级雄性SD大鼠分为对照组、模型组、DHA(25、50、100 mg/kg)组，除对照组外其余各组大鼠均用盲肠结扎术制成脓毒症动物模型，DHA组大鼠于造模前2 h腹腔注射上述剂量的DHA，造模48 h后，HE染色观察肝组织病理损伤情况、检测肝功能和血脂代谢指标变化、ELISA法检测血清炎性因子水平、Western blot检测肝组织凋亡相关蛋白、AKT和ERK1/2蛋白水平和免疫组化检测肝组织中AKT表达水平。结果 对照组肝组织细胞形态完整、结构正常，模型组肝细胞分布排列紊乱、细胞核固缩严重、细胞结构不完整，DHA(50、100 mg/kg)组肝细胞结构完整性、核固缩和细胞分布情况均明显改善。模型组ALT、AST、TC、TG、LDL水平和cleaved cas9、cleaved cas3蛋白水平均高于对照组（P<0.05），血清IL-6、MCP-1、IL-10含量和肝组织中iNOS、IL-10、p-AKT/AKT、p-ERK1/2...     

二苯甲酰甲烷通过抑制NF-κB/NLRP3炎症小体对糖尿病肾病大鼠肾损伤的影响

目的 探究二苯甲酰甲烷对糖尿病肾病大鼠肾损伤的改善作用及可能机制。方法 SPF级雄性SD大鼠30只,随机分为对照组（Control组）、糖尿病肾病组（DN组）、二苯甲酰甲烷组（Dibenzoyl组）,每组10只。测量大鼠空腹血糖;全自动生化分析仪检测大鼠血清Scr和BUN水平及24h尿微量白蛋白含量;HE染色观察肾组织病理形态变化;Western blot检测肾组织NF-κB、NLRP3、cleaved caspase-1和IL-1β表达。结果 二苯甲酰甲烷降低糖尿病肾病大鼠空腹血糖、血清Scr和BUN水平及24h尿微量白蛋白含量,改善肾组织病理损伤,降低肾组织NF-κB、 NLRP3、 cleavedcaspase-1和IL-1β蛋白表达。结论二苯甲酰甲烷可通过抑制NF-κB/NLRP3信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾损伤。     

AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及JNK表达的作用

 目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor autoantibody,AT1-AA）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾脏细胞凋亡及内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）相关的JNK表达的作用。方法:高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射制备DN大鼠模型,采用ELISA法检测大鼠AT1-AA阳性率,根据检测结果随机选择AT1-AA阳性和AT1-AA阴性大鼠共12只纳入DN组,同时选择6只正常大鼠纳入NC组;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;Western blotting技术测定肾组织ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78 （GRP78）及凋亡蛋白p-JNK的表达水平。结果:DN组大鼠肾脏细胞凋亡率较NC组显著升高,且AT1-AA阳性大鼠凋亡率明显高于AT1-AA阴性大鼠（P<0.01）。Western blotting结果显示,GRP78和p-JNK蛋白在DN组大鼠肾组织中的水平较NC组显著升高,AT1-AA阳性DN大鼠肾组织中,前述蛋白的改变较AT1-AA阴性DN大鼠更为明显（P<0.05）。结论: AT1-AA可诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并通过ERS相关的JNK凋亡途径介导肾脏细胞凋亡,损害肾脏功能。     

糖尿病大鼠肾组织中PTEN/AKT/mTOR通路对自噬的调控作用

目的:观察糖尿病大鼠肾组织中PTEN和自噬水平的变化,探讨糖尿病肾病中PTEN/AKT/m TOR通路对自噬的调控机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)和糖尿病组(DM组),每组各8只。用链脲佐菌素复制DM大鼠模型。于成模后10周处死大鼠后测定相应生化指标和肾脏指数,免疫组化观察肾小管上皮细胞PTEN蛋白的表达部位;Western blotting法检测肾组织LC3、PTEN及PTEN/AKT/m TOR通路的变化;realtime PCR检测肾组织PTEN的mRNA表达水平。结果:DM组的血糖、24 h尿蛋白量和肾脏指数均显著高于NC组(P0.05)。与NC组相比,DM组大鼠肾组织的LC3I和LC3II水平明显降低(P0.05)。PTEN主要分布于肾小管上皮细胞中,DM组PTEN蛋白的表达水平明显低于NC组(P0.05)。DM大鼠肾组织中,PTEN/AKT/m TOR通路的活性增高。结论:糖尿病大鼠肾脏组织中细胞自噬水平下降,而参与自噬调控的PTEN/AKT/m TOR通路活性升高,提示其自噬水平的变化可能受到PTEN/AKT/m TOR通路的调节。     

基质金属蛋白酶9在大鼠糖尿病肾病发病中的作用

目的 探讨糖尿病肾病大鼠肾局部金属蛋白酶9(MMP-9)在糖尿病肾病发生发展的作用.方法 健康雌性清洁级大鼠,随机分成糖尿病组和正常对照组,采用腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型.分别于4、8周处死,应用免疫组化及酶谱分析方法(zymography)观察各组肾组织MMP9的蛋白表达及其活性水平,分析MMP-9与细胞外基质Ⅳ型胶原、层粘连蛋白(LN)的相关性.结果 MMP-9在正常对照组肾小球、肾小管细胞均有阳性表达(4周,26.63%+2.94%;8周,29.86%±0.89%);而糖尿病组随病程延长表达明显减弱(4W,16.11%±2.86%;8周,13.14%±2.68%),MMP-9活性也明显降低(正常组4周110.47±7.12;8周,111.50±6.95;糖尿病组4周82.74±10.92;8周,80.05±12.83),两组间各项指标的差异有统计学意义(均P＜0.01).MMP-9活性与Ⅳ型胶原(r=-0.852,-0.795,P＜0.01)、LN(r=-0.897,-0.832,P＜0.01)呈显著负相关.结论 糖尿病肾病时肾组织中MMP-9表达水平降低,糖尿病肾病的发病机制可能与MMP-9水平降低有关.     

盐酸吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TOLL 受体4 / MAPKs 信号通路的影响

目的:探讨吡格列酮对糖尿病肾病大鼠肾组织中TOLL 受体4/ MAPKs 信号通路的影响。方法:将雄性SD 随机分为对照组(n =8)和试验组(n =32)。试验组SD 鼠造模成功后随机分为3 组进行干预,应用Western blot 检测对照组和干预组大鼠肾组织中丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2 及p38MAPK 磷酸化水平。结果:与对照组比较,各组大鼠肾组织中TOLL 受体4 表达增强,其中ERK1/2 与JNK 磷酸化水平明显升高(P<0郾05),但p38MAPK 水平变化不明显(P>0郾05);与模型组比较,吡咯列酮干预组大鼠肾组织中ERK1/2 与p38MAPK 磷酸化水平降低(P<0郾05)。结论:吡格列酮通过TOLL 受体4/ MAPKs/ERK1/2 与TOLL 受体4/ MAPKs/ JNK 信号通路来完成,延缓糖尿病肾病的发生与发展。     

Rosiglitazone Ameliorates Diabetic Nephropathy by Reducing the Expression of Chemerin and ChemR23 in the Kidney of Streptozotocin-Induced Diabetic Rats

Chemerin is shown to be associated with inflammation which is involved in the pathogenesis of diabetic nephropathy. This study aims to determine whether rosiglitazone and pioglitazone ameliorate renal function through an effect on the expression of chemerin and ChemR23 in streptozotocin-induced diabetic rats. The rats were randomized to control, diabetic, rosiglitazone-, and pioglitazone-treated groups. The expression level of chemerin and ChemR23 in the renal tissues was significantly elevated in the diabetic group compared with the control group. Rosiglitazone inhibited the overexpression of chemerin and ChemR23, while pioglitazone inhibited the overexpression of ChemR23 in the kidney of diabetic rats. In addition, chemerin expression level was positively correlated with transforming growth factor-β1, connective tissue growth factor, tumor necrosis factor-α, and intracellular cell adhesion molecule-1 expression in diabetic rats. Rosiglitazone ameliorates diabetic nephropathy by reducing the expression of chemerin and ChemR23 in diabetic rats.     

氯沙坦钾对2型糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β1、CD68和MCP-1 表达的影响

目的: 探讨氯沙坦钾对2型糖尿病肾病大鼠转化生长因子β₁ (transforming growth factor beta 1, TGF-β₁)、CD68(巨噬细胞标记物)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表达的影响,进一步说明氯沙坦钾对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法: 雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、模型组和治疗组,每组10只。15周后, 观测肾组织形态学、肾功能和24 h尿蛋白定量等指标的变化, 用免疫组化法检测肾脏TGF-β₁、CD68和MCP-1表达水平的变化。结果: (1)与正常对照组相比,模型组及治疗组大鼠体重均降低,血糖、甘油三酯、胆固醇及MCP-1、CD68、TGF-β₁的阳性细胞数升高,模型组24 h尿蛋白和肌酐升高;(2)与模型组相比,治疗组血肌酐、24 h尿蛋白、甘油三酯及MCP-1、CD68、TGF-β₁的阳性细胞数明显降低。结论: 在2型糖尿病肾病大鼠中氯沙坦钾可以通过减少肾组织MCP-1表达,阻止巨噬细胞的浸润,下调TGF-β₁表达,对糖尿病肾病病变起到保护作用。     

SnoN蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达及其意义

目的：动态观察核转录共抑制因子SnoN蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达变化，探讨其在糖尿病肾病（DN）发病机制中的作用。方法：SD大鼠随机分为3组，分别为糖尿病2周（DM2）、4周（DM4）和8周（DM8）组，每组均设相应的正常对照，链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病大鼠模型；免疫组织化学法检测肾组织中SnoN、TGF-β₁、Smad2/3、APC的表达；Western印迹法检测肾皮质SnoN蛋白的水平；生化方法测定血糖、血肌酐及24 h尿蛋白量；光镜检查肾组织的形态改变。结果：Western印迹和免疫组化检测发现DM2大鼠肾组织中SnoN的表达与正常组相比差异无显著，DM4组明显减少(P<0.01)，至8周时减少为正常对照组的42%。DM2组，大鼠肾小管上皮细胞中TGF-β₁、Smad2/3、APC较正常组显著增多，并随病程进展而增加（P<0.01）；DM4和DM8组，SnoN蛋白表达的减少与TGF-β₁、Smad2/3、APC表达增多呈显著负相关（P<0.01）。结论：糖尿病大鼠肾脏TGF-β₁表达增多，可能通过APC依赖的泛素化作用使SnoN蛋白降解，从而在DN的发病机制中起重要作用。     

糖尿病大鼠肾小球蛋白激酶Cα表达与肾病发病关系的研究

目的:观察四氧嘧啶诱发的糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶Cα(PKCα)、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的动态变化, 探讨3者之间相互关系以及与肾损害之间的关系。方法:将大鼠随机分为正常对照组(A组), 糖尿病1周组(B组), 糖尿病1月组(C组)和糖尿病2月组(D组)。用免疫组化和Western印迹法检查PKCα, TGF-β₁和α-SMA在肾小球的表达情况。光镜观察肾组织的形态改变, 生化法测定大鼠血糖, 血脂, 血尿肌酐以及尿蛋白。结果:糖尿病各组肾小球PKCα和TGF-β₁的表达多于正常组(P<0.05), 糖尿病各组PKCα, TGF-β₁和α-SMA3者间呈正相关, 并且与肾脏病变程度呈正相关。结论:糖尿病早期肾组织PKCα表达持续增加, 可使肾小球滤过率和滤过膜通透性增加, 参与了肾病早期蛋白尿的发生机制, 使TGF-β₁增多并诱导α-SMA的表达, 标志着肾脏固有细胞激活及表型转变和肾脏组织学改变。