体外定向诱导人脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞

背景：人脐带间充质干细胞具有获取容易、免疫原性低等优点,目前尚缺乏体外诱导其分化为胰岛样细胞的成熟方案。 目的：探讨人脐带间充质干细胞在体外一定条件下分化为胰岛样细胞的可能性。 方法：无菌条件下分离培养人脐带间充质干细胞,细胞传3代后,采用两步法诱导其向胰岛样细胞分化：第1步,加入含100 μg/L β-神经生长因子,4 nmol/L ActivinA,10 mmol/L 尼克酰胺,25 μg/L表皮生长因子,体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养7 d;第2步,将诱导液换为含10 mmol/L尼克酰胺,10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子,1%胰岛素-转铁蛋白-硒的DMEM/F12培养基,诱导时间为14 d。对照组单纯加入DMEM/F12培养基进行培养。 结果与结论：诱导2周后脐带间充质干细胞开始聚集成团,诱导3周后,葡萄糖刺激试验阳性、PDX-1和Insulin基因表达。而对照组细胞无胰岛素分泌,胰岛细胞相关基因表达阴性。实验成功地将脐带间充质干细胞诱导成了胰岛样细胞。     

Pdx1基因修饰的人脐带间充质干细胞体外诱导分化为胰岛β样细胞

本研究探讨胰十二指肠同源框因子-1(Pdx1)基因修饰的人脐带间充质干细胞(MSCs)体外分化为胰岛β样细胞。采用携带Pdx1基因的重组腺病毒感染MSCs 7d,联合细胞因子分阶段诱导分化。RT-PCR及Westernblot、免疫细胞化学法检测诱导后细胞胰岛素相关基因表达变化;化学发光法检测诱导后细胞培养液上清中胰岛素和C肽的分泌水平。用流式细胞术检测胰岛素阳性细胞百分率。结果显示:诱导转入Pdx1基因的人脐带MSCs后,梭形细胞聚集形成胰岛样细胞团,双硫腙染色胞浆呈亮红色;诱导后的细胞表达Pdx1、胰岛素、C肽和葡萄糖转运体2基因;诱导细胞分泌胰岛素和C肽,并且在高糖作用后,胰岛素和C肽分泌增加;诱导后胰岛素阳性细胞百分率为(11.61±4.83)%。结果表明,Pdx1修饰人脐带MSCs在体外能够诱导分化为胰岛β样细胞。     

人脐带间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞

目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)体外诱导向神经细胞分化的潜能.方法 用生长因子bFGF和EGF联合全反式维甲酸(RA)、中药单体熊果酸、新生大鼠皮层神经元原代无血清培养的上清液3种方法,诱导hUC-MSCs向神经细胞分化,观察形态改变,用免疫细胞化学法检测神经细胞相关的标记物Nestin、Musashi-1和Tubulin、GFAP、O4.结果 hUC-MSCs经细胞因子、2mg*L的熊果酸诱导后,细胞由成纤维状逐渐变成双极、多极或锥形,胞体缩小;有些细胞伸出突起,随时间推移逐渐伸长,有些可形成次级突起,相互连结形成网状.另有一些胞体呈球形,突起较短.新生大鼠皮层神经元原代无血清培养的上清液诱导hUC-MSCs先形成Nestin和Musashi-1阳性的神经球,再经历上述形态变化,分化形成神经元样细胞.hUC-MSCs经诱导14 d后,有少量细胞表达Tubulin、GFAP、O4.结论 hUC-MSCs在体外特定条件下,可诱导分化为神经细胞,作为神经系统疾病细胞移植治疗的备选来源.     

体外诱导胰腺干细胞向胰岛样细胞团的分化***☆

背景：目前由于胰岛来源匮乏,使得胰岛细胞移植治疗糖尿病无法满足临床需求,故体外将胰腺干细胞诱导分化为胰岛成为研究焦点。 目的：于体外将小鼠胰腺干细胞诱导成胰岛样细胞团并对其进行相关检测,探寻一种胰腺干细胞体外诱导分化成胰岛及鉴定的技术和方法。 方法：体外获得纯化的小鼠胰腺干细胞,采用联合诱导剂对其进行成胰岛方向的诱导分化,并对诱导形成的胰岛样细胞团进行形态学观察、双硫腙染色、RT-PCR和Western blot检测。 结果与结论：实验通过细胞形态学和细胞生长特性的观察以及免疫细胞化学染色证实体外成功获得了小鼠胰腺干细胞,采用联合诱导剂将其诱导成胰岛样结构,呈球形,以较细长的蒂部与瓶底连接,双硫腙染色将其染成铁红色。RT-PCR和Western blot 法可分别检测到胰岛样细胞团的胰岛素mRNA和胰岛素蛋白。结果证实小鼠胰腺干细胞可体外诱导分化成含β细胞的胰岛样细胞团。 关键词：胰腺干细胞;诱导;胰岛样细胞团;干细胞培养;小鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.020     

人脐带间充质干细胞分化胰岛样细胞过程中胰岛素和巢蛋白的表达

BACKGROUND:Domestic and international studies have confirmed that human umbilical cord mesenchymal stem cells could be induced to differentiate into islet-like cells, but little is reported about the changes of insulin and nestin expressions during the differentiation phase. OBJECTIVE:To observe the changes of insulin and nestin expressions during the differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells into islet-like cells. METHODS:Human umbilical cord mesenchymal stem cells were cultured using UltraCULTURE medium in vitro. Stem cells were cultured for three generations to observe cell morphological changes under an inverted microscope, to test immunophenotype by flow cytometry, and to identify the capacity of osteogenesis and adipogenic differentiation. Induction protocol was divided into two stages. In stage 1, stem cells were induced for 14 days in the UltraCULTURE medium with 4 nmol/L activin A, 25 μg/L epidermal growth factor, 100 μg/L β-nerve growth factor, 10 mmol/L nicotinamide. In stage 2, the cells were cultured in the UltraCULTURE medium with 1% insulin-transferin-selenium, 10 mmol/L nicotinamide, 10 μg/L basic fibroblast growth factor for an additional 14 days. The expressions of nestin and insulin in those differentiated cells were tested by flow cytometry, and zinc ion expression in the islet-like cell clusters was identified by dithizone staining. RESULTS AND CONCLUSION:During the differentiation process, the insulin level was increased gradually in the induction group and reached a higher level on day 28, but the insulin expression showed negative in the control group. In addition, on day 14 of induced differentiation, the nestin expression reached the peak and then gradually reduced along with the prolonged inductive time. On day 28 of induction, islet-like cell clusters formed and were positive for dithizone staining. In this experiment, the umbilical cord mesenchymal stem cells were successfully induced and differentiated into islet-like cells, accompanied with the variation of insulin and nestin expression.     

肝匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞分化为肝样细胞

背景：前期实验证明大鼠肝组织匀浆上清液能诱导人脐带间充质干细胞发生形态学变化,但诱导后细胞是否具有肝细胞的表型和功能特征尚不清楚。 目的：以人脐带间充质干细胞为研究对象,对肝组织匀浆上清液定向诱导分化后细胞是否具有肝细胞的表型和功能特性进行初步验证。 方法：选取第3代人脐带间充质干细胞,采用肝组织匀浆上清液作为诱导培养基,进行如下分组：单纯肝组织匀浆上清液作为阴性对照组,QSG-7701人肝细胞株作为阳性对照组,基础培养的人脐带间充质干细胞作为标准对照组;肝组织匀浆上清液处理3,5,7 d诱导组;在蛋白水平和转录水平对肝细胞特异性标志物甲胎蛋白、角蛋白18和色氨酸2,3-加双氧酶进行检测。 结果与结论：经肝组织匀浆上清液诱导后,细胞形态发生了显著变化,随诱导时间延长梭形干细胞逐渐减少,细胞呈三角形,多角形或不规则形。肝组织匀浆上清液诱导干细胞3,5,7 d后肝细胞标志物甲胎蛋白、人细胞角蛋白18和色氨酸2,3-加双氧酶在蛋白和mRNA水平均显著高于标准对照组(P < 0.01)。实验结果提示在体外经肝组织匀浆上清液诱导后,人脐带间充质干细胞能够分化为具有肝细胞特异性标记的肝样细胞,并具有部分肝细胞功能。     

不同细胞接种浓度影响人脐带间充质干细胞生长及多向分化

背景：在干细胞培养过程中寻找合理的细胞接种浓度,从而得到能稳定、高效生长的干细胞非常重要。 目的：观察不同接种浓度对人脐带间充质干细胞原代培养及分化为神经元样、胰岛样、脂肪样细胞的影响。 方法：分离人脐静脉内皮及内皮下层细胞,按不同接种浓度分组进行原代培养,记录原代培养时间并进行传代。取第1代人脐带间充质干细胞,体外诱导其向神经元样、胰岛样、脂肪样细胞分化。 结果与结论：原代培养发现以5×105~1×106/cm2细胞浓度接种的人脐带间充质干细胞生长状态最佳。经β-巯基乙醇诱导6 h,细胞即表达Nestin、神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白;经尼克酰胺,活化素A,胰高血糖素样肽1诱导21 d可见明显的胰岛样细胞团,双硫腙染色呈砖红色;经成脂诱导培养基诱导后细胞油红O染色阳性,有明显脂滴出现。可见选取合适的细胞浓度可以快速获得大量的人脐带间充质干细胞,且该细胞经体外诱导可向神经元样、胰岛样及脂肪样细胞分化。关键词：细胞浓度;脐带间充质干细胞;原代培养;分化;神经元样细胞;胰岛样细胞;脂肪样细胞 缩略语注释：MSCs：mesenchymal stem cells,间充质干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.14.016     

肝损伤大鼠血清诱导培养脐带间充质干细胞向肝样细胞的分化

背景：脐带间充质干细胞来源于新生个体脐带组织,来源广泛,无社会伦理学因素制约,有望代替骨髓间充质干细胞成为细胞移植和再生医学的理想种子细胞。 目的：探讨肝衰竭大鼠血清对人脐带间充质干细胞肝向诱导分化作用,为临床上利用脐带间充质干细胞治疗终末期肝病提供实验依据。 方法：腹腔注射10%四氯化碳溶液建立急性肝损伤大鼠模型,对照组腹腔注射等剂量的大豆油,48 h后腹主动脉取血离心分离血清。取第3代人脐带间充质干细胞,分别用体积分数为20%肝损伤大鼠血清和体积分数为20%胎牛血清诱导培养,观察诱导前后人脐带间充质干细胞形态学改变,检测培养液上清甲胎蛋白、白蛋白水平。 结果与结论：肝损伤大鼠血清培养第1天细胞形态变化不大,呈梭形,仍呈编织状或漩涡状生长,第2天细胞呈短梭形,第3天细胞呈类圆形,第4天呈圆形,并有极少量细胞漂浮。肝损伤大鼠血清培养人脐带间充质干细胞4 d,其上清液白蛋白水平较诱导前和对照组均有升高趋势(P < 0.001),甲胎蛋白水平无明显变化。结果表明肝损伤大鼠血清可使脐带间充质干细胞向肝样细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

通过基因转染诱导骨髓间充质干细胞为胰岛样细胞的进展

随着器官和组织移植技术的进步,胰腺和胰岛移植已开始用于治疗糖尿病并成为热点,但是关于胰岛细胞的来源问题还是存在着许多不足和改进之处。其中骨髓间充质干细胞(BMSCs)因为具有获取简单、易于培养和免疫抑制等优点成为被诱导为胰岛样细胞的热点。近几年来人工构建类胰岛细胞（即利用基因重组及基因转染再造胰岛样细胞）的技术提高了单...     

人脐带间充质干细胞体外诱导分化为成纤维细胞

背景：脐带间充质干细胞具有多向分化能力,但其向成纤维细胞分化研究较少。 目的：验证人脐带间充质干细胞向成纤维细胞的分化能力。 方法：采用贴壁法分离脐带间充质干细胞,流式细胞仪分析其表面抗原。取第3代脐带间充质干细胞进行成脂成骨诱导分化,以碱性成纤维细胞生长因子诱导脐带间充质干细胞向成纤维细胞分化。 结果与结论：贴壁法能稳定从脐带中分离出干细胞,脐带间充质干细胞极低表达 CD31、CD45 、CD40、HLA-DR,强表达 CD29、CD90、CD44、CD105。脐带间充质干细胞成脂诱导后油红O染色显示胞浆中充满红色的油滴;成骨诱导后茜素红染色可在细胞密集区见红色的钙结节。碱性成纤维细胞生因子诱导后细胞表达Ⅰ型胶原明显高于对照组。提示贴壁法分离脐带间充质干细胞可靠、纯度高,碱性成纤维细胞生长因子可诱导脐带间充质干细胞向成纤维细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

人脐血MSCs向神经元样细胞分化过程中neurogenin1的表达变化

目的: 探讨人脐血间质干细胞(MSCs)体外向神经元样细胞分化过程中neurogenin 1的表达变化。方法: 常规从人脐血中分离MSCs,采用生长因子EGF和bFGF联合诱导人脐血MSCs向神经元样细胞分化,免疫细胞化学法检测诱导前、后神经元表面标志蛋白NF-M、NSE、胶质细胞标志蛋白GFAP和neurogenin 1的表达情况;Western blotting和RT-PCR法检测诱导前、后人脐血MSCs中neurogenin 1蛋白和mRNA的表达变化。结果: 诱导前,人脐血MSCs不表达NF-M、NSE和GFAP;诱导7 d,人脐血MSCs可以分化为神经元样细胞, 同时表达NF-M、NSE和GFAP。诱导前,人脐血MSCs不表达neurogenin 1,诱导后neurogenin 1蛋白和mRNA表达显著增加。结论: Neurogenin 1可能参与了体外诱导人脐血MSCs向神经细胞分化的过程。     

人脐血间充质干细胞体外分离培养及基因载体特性研究

目的证实脐血中含有间充质干细胞,探讨其体外分离、培养条件,并进行生物学特性和表面抗原的鉴定,初步探索间充质干细胞作为基因治疗的载体携带目的基因的可能性及方法。方法无菌条件下取正常足月剖宫产的脐血分离、培养和纯化,获得间充质干细胞;对获得的间充质干细胞进行形态学观察;绘制生长曲线,分析间充质干细胞的增殖情况;用流式细胞仪检测间充质干细胞表面抗原的表达情况。采用脂质体转染法将pDNA316-IRES-EGFP质粒转入间充质干细胞中,观察绿色荧光的表达以及转染后细胞生长情况。结果自脐血中成功分离获得间充质干细胞,可传代培养,经表面标志检测,表达CD29、CD44、CD105,不表达CD45和HLA-DR。质粒pDNA316-IRES-EGFP通过脂质体介导转染间充质干细胞后,荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达。转染后的细胞生长受到一定影响。结论人脐血来源的间充质干细胞能在体外分离、培养、扩增,并且具有和骨髓源间充质干细胞类似的生物形态和抗原表型。EGFP基因可被成功转入间充质干细胞中并获表达。转基因间充质干细胞用于基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。     

人脐带间充质干细胞的快速分离、纯化及冻存

目的:建立在一般实验条件下快速分离、纯化及冻存人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的简便有效方法并研究其冻存复苏后的增殖及多向分化能力。方法:用胶原酶Ⅱ、胰蛋白酶次序消化及二步离心法从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs,通过把握传代时的消化程度及酸化培养基来快速纯化UC-MSCs,以流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定;用简易二步法(-4℃停留30 min,-20℃存放2 h,-80℃长期保存)冻存UC-MSCs,半年后复苏,扩增、传代,检测其胚胎干细胞特异性抗原Oct4、SSEA-4和人端粒酶逆转录酶hTERT的表达情况,并诱导其向神经元样细胞、成肌细胞和肝细胞样细胞分化。结果:通过双酶次序消化结合二步离心法,2 h可提取全脐带中的MSCs,原代培养7 d即可传代,通过适度消化传代和选用弱酸性培养基培养,第3代即可得到纯化的UC-MSCs,UC-MSCs表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45,极低表达HLA-DR、CD80、CD86和CD106。简易法冻存半年后复苏的UC-MSCs表达Oct4、SSEA-4和hTERT,可向三个胚层来源的细胞分化。结论:双酶次序消化结合二步离心法是从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs的一种简便有效方法,偏酸性环境有利于UC-MSCs的扩增及纯化;简易二步法冻存对UC-MSCs增殖和多向分化能力没有明显影响。     

Comparison of different cryopreservation protocols for human umbilical cord tissue as source of mesenchymal stem cells

The main purpose of this study is to establish an effective cryopreservation protocol for the umbilical cord tissue as a source of mesenchymal stem cells (MSCs). In this context, it was aimed to use a cryoprotectant that could be an alternative to dimethyl sulfoxide (DMSO) which is commonly used despite the toxic side effects. Therefore, two different cryopreservation solutions were prepared using 10% DMSO and 10% 1,2 propanediol (PrOH). The fresh tissue group that was not performed cryopreservation was used as the control group. Following the cryopreservation step, MSCs were isolated from all groups and compared with each other to assess the efficiency of the cryopreservation solutions. The comparison was performed in terms of followings: morphology, immunophenotypes, growth kinetics, differentiation, and ultrastructural features. Based on the results, there were no significant morphological and immunophenotypic differences between the MSCs isolated from cryopreserved tissue groups and the MSCs isolated from the fresh tissue group. According to the growth kinetic analysis, the cells isolated from the PrOH group had a lower proliferation rate than the cells isolated from the fresh tissue. However, there was no significant difference between the cryopreserved groups in this respect. Osteogenic and adipogenic differentiation was observed in all groups. Upon comparison of the cryopreserved groups, PrOH group was discovered to hold a minor superiority in terms of these modes of differentiation. These results suggest that PrOH, which is considered as a cryoprotectant with low toxicity, could be used as a preferred cryoprotectant instead of DMSO concerning the process of cryopreservation of the umbilical cord.     

人脐静脉来源的间质干细胞体外分离扩增及多向分化的研究

目的： 探讨人脐静脉来源的间质干细胞(MSCs) 的体外分离、纯化、扩增和多向分化条件。 方法： 无菌条件下取正常人脐静脉,1%胶原酶Ⅱ消化脐静脉细胞，以IMDM作为培养基进行培养和纯化细胞，瑞氏染色和电镜观察形态；FACS检测其免疫表型和细胞周期；体外诱导成骨细胞、脂肪细胞分化，von Kossa染色、油红O染色和RT-PCR检测骨钙蛋白、脂蛋白脂酶mRNA的表达以检测细胞向成骨、成脂肪细胞分化情况。 结果： 脐静脉来源的细胞呈纤维样贴壁生长，瑞氏染色和电镜观察具有MSCs特征；FACS检测结果显示, 表达MSCs相关的抗原CD29、CD44、CD105，而CD31、CD13、CD34、CD45、HLA-DR为阴性；体外诱导成骨细胞、脂肪细胞分化成功。 结论： 人脐静脉来源的MSCs的细胞形态、生长特性、免疫表型、多向分化能力与骨髓来源的MSCs相似，可作为满足实验和临床需要的MSCs来源。     

Immunomodulatory function of whole human umbilical cord derived mesenchymal stem cells

Bone marrow derived mesenchymal stem cells (MSCs) play a critical role in immune modulation. However, immunomodulatory function of whole human umbilical cord derived mesenchymal stem cells (UC-MSCs) remains unclear. In this study, UC-MSCs were separated from whole umbilical cord using a single enzyme digestion. UC-MSCs (CD73⁺, CD90⁺, CD105⁺, and CD34⁻, CD45⁻, HLA-DR⁻) were differentiated into adipocytes, osteocytes and chondrocytes in vitro under specific stimulatory environments. UC-MSCs suppressed umbilical cord blood lymphocyte proliferation stimulated by mitogen, and ELISA showed that the secretion of INF-γ was downregulated, and the secretion of IL-4 was upregulated, with CD8⁺ T cells markedly decreased and CD4⁺ T cells changed lightly. Moreover, the infusion of UC-MSCs in recipient mice transplanted with donor bone marrow cells ameliorated acute graft-versus host disease (aGVHD) and extended survival. In conclusion, UC-MSCs might negatively modulate immunoreactions, and have application potential in the treatment of aGVHD caused by allogeneic stem cells transplantation.     

人脐带间充质干细胞低氧条件培养液对小鼠造血系统自然衰老的影响

目的：通过探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSC）低氧条件培养液对小鼠造血系统自然衰老的延缓作用,进一步了解hUC-MSC对机体造血的支持作用机制。 方法：将6月龄的Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,前者腹腔注射MSC原代培养液,每四天1次,持续6个月;后者注射培养基。干预后观察小鼠一般情况,并于干预开始后第3个月和第6个月分别比较两组的外周血象（WBC与Hb）、单侧股骨骨髓有核细胞计数（BMNC）、造血祖细胞集落培养（CFU-GM、CFU-E、CFU-MK）、成纤维细胞集落培养（CEU-F）和外源性脾集落形成单位计数（CFU-S）。于第6个月时观察骨髓病理变化、测定比较骨髓细胞重建造血能力及p16蛋白表达情况。 结果：实验组小鼠的一般存活情况优于对照组;干预后第3个月,实验组的BMNC、CFU-GM和CFU-MK多于对照组,而外周血象、CFU-F和CFU-E无明显差别;干预后第6个月,外周血象仍无差别,其余的上述指标实验组均明显高于对照组,且各组的这些指标在干预前、第3个月、第6个月成不断下降的趋势,但实验组的下降速度明显慢于对照组,差异有显著性（p<0.05）。组织学观察发现,实验组造血组织较对照组丰富,p16蛋白的表达也明显低于对照组,而对照组骨髓脂肪化显著增加;实验还发现实验组骨髓细胞的造血重建能力明显优于对照组。 结论：人脐带MSC分泌的细胞因子能够延缓小鼠造血系统的衰退,有望应用于延缓衰老的研究。     

人脐血源性MSCs的免疫调节作用

目的 从人脐血中分离、培养间充质干细胞(MSCs)并探讨其对淋巴细胞的免疫调节作用.方法 淋巴细胞分离液分离人脐血单个核细胞,利用贴壁筛选法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型;将获得的MSCs分别以不同数量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用H3-TdR标记β液体闪烁计数仪检测细胞增殖,观察脐血来源的MSCs对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响.结果 从人脐血中分离获得的贴壁细胞,呈成纤维样的细胞形态,CD29、CD105和CD166表达阳性,CD14、CD34和CD45表达阴性;人脐血源性MSCs在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有明显的抑制作用,抑制作用与细胞数量呈正相关.结论 从人脐血中可以成功地分离出MSCs,其对同种异体淋巴细胞具有免疫调节作用,为其作为骨组织工程异基因种子细胞来源打下基础.     

人脐带间充质干细胞定向诱导分化成类神经元的实验研究

目的:采用不同细胞因子定向诱导人脐带间充质干细胞分化成类神经元,为脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤提供理论依据。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞,采用流式细胞术鉴定细胞。取第5代细胞随机分成A、B、C、D 4组,在A组基础培养基中加入b FGF,B组中加入b FGF和BDNF,C组中加入b FGF、BDNF和BHA诱导培养,D组为对照组,使用含有10%胎牛血清的DMEM-F12培养基培养。诱导2周后采用实时荧光定量PCR检测细胞的nestin、NEFH和GFAP mRNA表达情况,并通过原子力显微镜观察细胞超微结构的的变化。结果:Ⅱ型胶原酶消化法能成功分离人脐带间充质干细胞。通过流式细胞术检测第3代细胞发现,细胞均强表达CD29、CD44和CD105,而CD34、CD45和HLA-DR均未见表达。经定向诱导分化成类神经元后,原子力显微镜观察细胞表面突起增多,实时荧光定量PCR检测显示nestin在A、B、C组均呈阳性表达,NEFH在A、B组呈阳性表达,而GFAP在A、B、C、D 4组均不表达。A、B组n EFH和nestin表达具有显著差异(P﹤0.05)。结论:本实验成功分离培养人脐带间充质干细胞,所培养的细胞扩增迅速,生物学性状稳定;与b FGF单独处理相比,b FGF联合BDNF更能有效诱导人脐带间充质干细胞分化成类神经元。