上调SMYD3对人胆管癌FRH0201细胞中DNMT3B表达及细胞增殖的影响

目的: 研究人胆管癌细胞株FRH0201中SET和MYND结构域含有蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)过度表达对DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达及细胞增殖能力的影响。方法: 瞬时转染SMYD3真核表达质粒后, RT-PCR检测细胞中DNMT3B mRNA水平的变化;Western blotting检测细胞中DNMT3B蛋白水平的变化;CCK-8检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期的改变。结果: 以未处理组为对照,胆管癌细胞FRH0201在转染pEGFP-C3-SMYD3质粒后,DNMT3B蛋白及mRNA表达均显著上升(P<0.01);细胞的增殖能力显著提高、细胞增殖速度加快(P<0.05);进入G₂/M期的细胞明显增多(P<0.05)。结论: 过度表达SMYD3,可引起细胞中DNMT3B的表达上调并增强细胞增殖能力。     

miR-24在胆管癌组织和细胞系HCCC-9810中的表达

目的探讨microRNA-24(miR-24)在胆管癌患者组织中的表达情况,并分析其表达预后价值及生物学功能。方法收集124例胆管癌患者的癌组织和癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR检测miR-24含量,使用χ~2检验对miR-24和胆管癌临床病理学特征的关系进行分析,并通过Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型评估miR-24在胆管癌中的预后价值。以人胆管癌细胞系HCCC-9810为研究对象,通过转染pEGFP-C1-miR-24融合表达载体,分析miR-24对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 miR-24在胆管癌组织中的表达较癌旁组织上调(P0.05),且与患者淋巴结转移、肿瘤细胞分化及TNM分期显著相关。miR-24高表达的胆管癌患者的整体生存率显著低于低表达患者(P0.001),是胆管癌的独立预后因子(HR=5.518, 95%CI=2.394～12.717,P0.001)。此外,胆管癌细胞中上调的miR-24能够显著地促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭的能力。结论胆管癌中表达水平上调的miR-24与患者不良预后显著相关,并参与了胆管癌的进展过程,可能成为胆管癌治疗的新靶点。     

miR-195靶向调控PDK4表达抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡

目的 探讨miR-195调控PDK4表达在肝癌增殖和凋亡中的作用.方法 体外培养肝癌细胞,分别转染miR-195模拟物或阴性对照质粒Nc,转染48h后,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测迁移能力,Western blot和PCR检测PDK4表达.采用双荧光素酶实验检测miR-195与PDK4的靶向调控关系.结果 转染miR-195可明显抑制肝癌细胞内PDK4的表达,抑制肝癌细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡.HEPG2细胞转染miR-195 mimics后,细胞增殖率和细胞迁移能力较对照组和miR-NC组显著下降(P＜0.05);细胞凋亡率较对照组和miR-NC组显著升高,PDK4 mRNA及蛋白表达水平较对照组和miR-NC组显著下降(P＜0.05).Target Scan结果提示PDK4可能是miR-195的下游靶基因,miR-195能够抑制野生型PDK4 3'UTR报告基因载体的荧光素酶活性,但是对突变型PDK4 3'UTR无明显影响.结论 上调miR-195能靶向抑制PDK4,进而对肝癌细胞起抑制增殖、迁移和促进凋亡的作用.     

miR-124靶向调节STAT3基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124及STAT3在甲状腺乳头状癌组织中的表达,以及抑制或过表达miR-124对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测17例患者甲状腺乳头状癌组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,Western bolt法检测STAT3蛋白的表达。将miR-124 inhibitors及miR-124 mimics转染至甲状腺乳头状癌Kl细胞株,Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,CCK-8方法和克隆形成实验检测转染后Kl细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-124在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于癌旁组织,STAT3蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.01)。转染miR-124 inhibitors的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高(P0.01);转染miR-124 mimics的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著降低,细胞内STAT3蛋白表达亦明显降低(P0.01)。结论 miR-124抑制甲状腺乳头状癌Kl细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关。     

miR-124靶向调节STAT3基因对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124及STAT3在骨肉瘤组织中的表达,以及miR-124对骨肉瘤MG-63细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测67例患者骨肉瘤组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,免疫组织化学方法检测STAT3蛋白的表达。使用脂质体将miR-124抑制剂及miR-124模拟物转染至骨肉瘤MG-63细胞株,以无关序列作为阴性对照。Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,采用MTT方法与Transwell实验检测转染后MG-63细胞的增殖侵袭能力变化。结果 miR-124在骨肉瘤组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.01);STAT3蛋白在骨肉瘤组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.01);转染miR-124抑制剂的MG-63细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高;转染miR-124模拟物后则得到相反的结果(P0.01)。结论 miR-124抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关。     

miR-429在食管鳞癌中的表达及对细胞增殖迁移的影响

目的探讨微小RNA-429(miR-429)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对细胞增殖及迁移的影响。方法选取本院45例ESCC患者手术切除的癌组织(ESCC组)及癌旁组织(正常组)标本为研究对象,并采用实时荧光定量(q RT-PCR)检测两组miR-429表达水平。体外培养ESCC癌细胞株系ECa109及人正常食管上皮细胞株Het-1A,将转染试剂、miR-429阴性对照质粒、miR-429mimic质粒分别转染ECa109细胞,命名为空白组、阴性转染组、miR-429过表达组,同时应用生物信息学工具预测miR-429的靶基因为CTl0激酶调节子样蛋白(CRKL),荧光素酶活性检测miR-429与CRKL的靶向调控关系。采用qRT-PCR法检测细胞中miR-429与CRKLmRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测细胞中CRKL蛋白表达。MTT法检测细胞增殖情况,Transwell检测细胞迁移能力。结果与正常组相比,ESCC组miR-429表达水平显著降低(P0.05);荧光素酶活性测定显示3'UTR-Wt细胞中miR-429过表达组荧光素酶活性显著低于阴性对照组(P 0.05),3'UTR-Mut细胞中miR-429阴性转染组与过表达组比较差异无统计学意义(P 0.05);与Het-1A细胞相比,ECa109细胞中miR-429表达水平显著降低(P0.05),而CRKL mRNA及蛋白表达水平显著升高(P 0.05);与空白组、阴性转染组相比,miR-429过表达组miR-429表达水平显著升高(P 0.05),而CRKL mRNA及蛋白表达水平显著降低(P 0.05);与空白组、阴性转染组相比,miR-429过表达组细胞增殖率及迁移数量均显著降低(P 0.05)。结论 ESCC中miR-429呈低表达,其可通过下调CRKL表达进而抑制ESCC细胞增殖及迁移。     

5Aza-dc对癌细胞TIMP-3启动子去甲基化的作用

目的：观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-2'-deoxycytidine，5Aza-dc）对癌细胞TIMP-3启动子甲基化的影响。 方法： 用5Aza-dc处理TIMP-3启动子甲基化的H2M肝癌细胞和A431表皮癌细胞，用Transwell检测癌细胞的侵袭及运动能力，用Western blot 检测TIMP-3的蛋白表达，用RT-PCR检测TIMP-3 mRNA的表达，用甲基化特异性PCR检测TIMP-3基因启动子的甲基化。 结果： （1）5Aza-dc作用后的H2M和A431细胞的侵袭及运动能力降低；（2）5Aza-dc作用后的H2M和A431细胞的TIMP-3蛋白及mRNA表达量增加；（3）5Aza-dc作用后的H2M和A431细胞的TIMP-3启动子区未检测到甲基化。 结论： 5Aza-dc可以使肝癌和表皮癌细胞TIMP-3启动子区去甲基化，使TIMP-3得以重新表达，恢复其抑制肿瘤侵袭和移动的能力。     

miR-646高表达抑制EGFR/Akt通路及肺癌细胞增殖扩散的研究

目的 探讨微小RNA(microRNA,miR)-646对EGFR/Akt通路的作用及对肺癌A549细胞增殖扩散的影响及相关的作用机制.方法 利用Lipo2000将miR-646转染到肺癌A549细胞中,采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-PCR)法检测转染后各组细胞中miR-646的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕和Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting法检测EGFR/Akt通路中各蛋白的变化水平.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-646组其miR-646表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),A549细胞转染miR-646后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,转染miR-646组中p-EGFR和p-Akt的蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).结论 miR-646可显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-Akt的蛋白水平,进而抑制细胞的增殖和扩散能力.     

上调miR-187*表达对人结肠癌细胞株增殖活性的影响

 目的：研究微小RNA-187*(miR-187*)在人结肠癌细胞株及正常结肠组织中的表达,同时分析miRNA-187*上调对人结肠癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法：选取3例结直肠癌组织及配对正常黏膜组织进行miRNA芯片检测,筛选出大肠癌组织中异常表达的miRNA;提取8株结肠癌细胞株和10例正常结肠组织中总RNA,采用Taqman 实时定量PCR方法检测miR-187*的表达;预测miR-187*的靶基因,采用实时定量PCR方法检测靶基因的表达;采用脂质体介导的转染方法将miR-187*模拟物转染人结肠癌细胞株HCT116;检测转染后miR-187*和靶基因的表达;通过MTS试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测miR-187*对细胞周期的影响。结果：miRNA芯片检测结直肠癌组织中miR-187*的表达较正常黏膜明显降低;miR-187*在结肠癌细胞株中的表达较正常结直肠黏膜组织明显下调;而B细胞特异性莫洛尼小鼠白血病病毒整合位点1（BMI-1） mRNA在结肠癌细胞株中表达较正常黏膜组织中明显增高;转染miR-187*模拟物后,miR-187*表达明显增加;同时miR-187*的高表达可以显著抑制BMI-1 mRNA的水平;miR-187*模拟物转染组和阴性对照组相比,细胞增殖活力明显受抑制（P＜0.05）,同时增殖细胞核抗原表达亦明显降低;细胞周期检测结果显示,miR-187*模拟物转染组G2/M期细胞增多,和阴性对照组间差异有统计学意义。结论：miR-187*在人结肠癌细胞株中表达下调;上调miR-187*表达可抑制结肠癌细胞增殖活性,影响结肠癌细胞周期;miR-187*可能通过抑制BMI-1 在结肠癌中发挥抑癌作用。     

MiR-143通过靶控KRAS表达对白血病细胞增殖的影响

目的：探讨miR-143靶向KRAS对急性髓系白血病细胞系HL-60增殖的影响。方法选取HL-60为研究对象,采用荧光素酶报告基因实验验证miR-143对KRAS的靶向作用;采用RT-PCR检测细胞中miR-143及KRAS mRNA表达;采用Western印迹检测细胞中KRAS蛋白表达;采用MTT法检测HL-60增殖水平。结果与正常人外周血单个核细胞（ peripheral blood mononuclear cell, PBMNC）相比较, HL-60中miR-143表达显著降低, KRAS蛋白表达显著增加（ P＜0.01）。 miR-143可与KRAS基因3＇-非翻译区（ un-translated region, UTR）特异性结合。转染miR-143模拟物（ miR-143 mimic）可使HL-60中miR-143表达显著提高, KRAS蛋白表达显著降低,细胞增殖受到抑制;转染miR-143模拟物＋KRAS可使KRAS蛋白表达显著提高,同时部分逆转miR-143对HL-60细胞增殖的抑制作用。结论 miR-143可通过靶向KRAS抑制急性髓系白血病细胞系HL-60增殖。     

FOXA1 positively regulates gene expression by changing gene methylation status in human breast cancer MCF-7 cells

Objective: DNA methylation is an important epigenetic modification with tumor suppressor gene silencing in cancer. The mechanisms underlying DNA methylation patterns are still poorly understood. This study aims to evaluate the potential value of FOXA1 for controlling gene CpG island methylation in breast cancer. Methods: FOXA1 was down-regulated by transfection with siRNA and up-regulated by transfection with plasmid in MCF-7 cell lines. The DNA methylation and mRNA levels were examined by qMSP and qRT-PCR. The cell proliferation and apoptosis was detected by MTT and Flow cytometry. Results: Suppression of FOXA1 enhanced the methylation status of DAPK, MGMT, RASSF1A, p53, and depressed mRNA levels of these tumor suppressor genes, whereas over-expression of FOXA1 showed the opposite effects. DNMT1, DNMT3A and DNMT3B mRNA were up-regulated by siRNA knock-down of FOXA1. At the same time, FOXA1 suppression promoted cell growth and inhibited apoptosis. Conclusions: FOXA1 may be associated with methylation of the tumor suppressor genes promoter through changing DNMTs expression. FOXA1 could be a potential demethylation target for prevention and treatment of breast cancer.     

miR-148a 通过DNMT1 调控MSCs 向心肌分化的内在作用机制研究

目的:验证DNA 甲基转移酶1(DNMT1)是miR-148a 直接调控的靶基因,探究miR-148a 通过靶向DNMT1 调控骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌分化的作用机制。方法:MSCs 细胞经5忆鄄氮胞苷(5’-aza)诱导向心肌分化后,使用miRNA芯片筛选出诱导前后表达差异的miRNAs。Targetscan 软件分析异常表达的miR-148a 的靶基因,将野生型或突变型DNMT1 的3’-UTR 区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(DNMT1-wt 或DNMT1-mut)并分别与miR-148a mimics(miR-148a 模拟物)或scramble(miR-148a 阴性对照)共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基DNMT1,qRT-PCR 和Western blot 分别检测转染miR-638 mimics 和scramble 后,对DNMT1 的mRNA 和蛋白表达的影响。构建miR-148a 慢病毒质粒,分别在转染到MSCs 后的第1、7、14 和28 天后检测miR-148a 对GATA 结合因子4(Gata-4)基因上游DNA 调控序列CpG 甲基化水平的影响、qRT-PCR 和Western blot 分别检测转染miR-148a 慢病毒质粒后对心肌特异蛋白:球蛋白重链(MHC) 和心脏肌钙蛋白T(cTnT)、MSCs 分化特征蛋白CD90 和CD29 表达的影响,以及对心肌特异转录因子心脏特异性同源盒基因(Nkx2.5)和Gata-4表达的影响。结果:miRNA 芯片筛选5’-aza 诱导MSCs 向心肌分化后表达异常的miRNAs,包括miR-146a-5p、miR-148a、miR-539 等,其中miR-148a 表达明显上调。Targetscan、荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR 验证DNMT1 是miR-148a 直接调控的靶基因。miR-148a 慢病毒感染MSCs 细胞,证实在转染的不同时间,Gata-4 上游基因甲基化水平发生改变,且随着转染时间延长,Gata-4 甲基化水平呈不断降低趋势,MSCs 细胞内MHC 和cTnT 表达提高,CD90 和CD29 表达降低,Nkx2.5 和Gata-4 表达提高,MSCs 细胞出现向心肌分化。结论:miR-148a 可通过靶向调控DNMT1 而调控MSCs 细胞的向心肌分化。     

过表达B7-H6在自然杀伤细胞介导的肝细胞凋亡中的作用

目的:探讨过表达B7同源物6(B7-H6)在自然杀伤(NK)细胞介导的肝细胞凋亡中的作用。方法:设计针对B7-H6全长的寡核苷酸引物,经PCR扩增调取B7-H6全长,并将其亚克隆入线性化的真核表达载体p IRES2-EGFP,构建重组B7-H6过表达载体p IRES2-EGFP-B7-H6,通过双酶切、PCR及测序进行鉴定。利用脂质体将p IRES2-EGFP-B7-H6重组质粒转染正常肝细胞系L02,采用荧光显微镜观察EGFP的表达,流式细胞技术检测转染效率,qRT-PCR和Western blot检测B7-H6 mRNA和蛋白的表达水平。将转染p IRES2-EGFP-B7-H6重组质粒的L02细胞与NK-92细胞以不同的效靶比共培养,利用CCK-8实验分析检测NK-92细胞对L02细胞的杀伤效应。结果:经PCR、酶切及测序等方法证实成功构建p IRES2-EGFP-B7-H6过表达载体;经脂质体转染L02细胞48 h后,在荧光显微镜下观察到较强绿色荧光表达,流式检测显示转染效率达到92.6%;qRT-PCR和Western blot结果显示L02细胞B7-H6的mRNA和蛋白高表达;CCK-8实验证实相对于转染空载体p IRES2-EGFP,NK-92细胞对转染了p IRES2-EGFP-B7-H6的L02细胞的杀伤活性显著增强(P0.05)。结论:成功构建过表达B7-H6的真核表达载体p IRES2-EGFP-B7-H6,并进一步证实NK-92细胞对过表达B7-H6的L02细胞具有显著的杀伤效应。     

Modulatory role of garlicin in migration and invasion of intrahepatic cholangiocarcinoma via PI3K/AKT pathway

Increasing evidences have indicated the role of garlicin in inhibiting the progression of various tumors including glioma, pulmonary carcinoma and pancreatic carcinoma, via mediating cell apoptosis or cell cycle. The regulatory effect and related molecular mechanism of garlicin in intrahepatic cholangiocarcinoma, however, remained unknown. This study thus aimed to investigate this scientific issue. HCCC-9810 cell line was treated with serially diluted garlicin, followed by cell proliferation assay using MTT approach. Transwell migration and invasion assays were further employed the regulatory effect of garlicin. The expression level of p-AKT and AKT proteins in tumor cells was quantified by Western blot. The growth of tumor cells was significantly inhibited by high concentration of garlicin (> 1.5 μM). Lower concentration of garlicin showed dose-dependent inhibition of tumor cell invasion and migration. After using specific agonist IGF-1 (50 ng/mL) of PI3K/AKT signaling pathway, such facilitating effects of garlicin were depressed (P < 0.05). Western blotting showed significantly decreased phosphorylation level of AKT after treated with gradient concentrations of garlicin, while leaving the total AKT protein level unchanged. Garlicin may inhibit the invasion and migration of intrahepatic cholangiocarcinoma cells via inhibiting PI3K/AKT signaling pathway.     

MicroRNA-100对肝癌细胞增殖活力和细胞周期的影响

 目的：探讨microRNA-100(miR-100) 对肝癌细胞增殖活力和细胞周期的影响及其可能机制。方法：通过脂质体介导将人工合成的miR-100模拟物及其阴性对照转染人肝癌HepG2细胞,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法检测转染后HepG2细胞的增殖活力,用流式细胞术判定细胞周期分布,并进一步用实时荧光定量RT-PCR和Western blotting分析Polo样激酶1(Plk1)的表达水平。结果：荧光显微镜下观察到经阳离子脂质体介导的细胞转染效率大于85%。转染miR-100模拟物的实验组细胞的增殖抑制率在24、48和72 h分别为(43.5±12.2)%、(46.5±3.7)%和(52.1±0.2)%,均显著高于对照组细胞（P<0.01）,并且在72 h实验组细胞增殖指数（35.8±1.4）低于阴性对照组（39.2±1.0）和单纯脂质体组（40.7±2.0）(P<0.05)。同时与对照组相比,实验组细胞Plk1　mRNA和蛋白表达水平在转染miR-100后 72 h明显降低（P<0.05)。结论：miR-100可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与其下调Plk1的表达有关。     

siRNA特异性抑制卵巢癌细胞葡萄糖调节蛋白78表达及其意义的研究

目的研究利用小分子干扰技术（RNAi）,构建Grp78靶向RNA干扰质粒载体,观察其对人类卵巢癌细胞SKOV3Grp78基因表达的抑制作用。初步探讨RNA干扰技术抑制Grp78的表达作为卵巢癌基因治疗的可行性。方法从GeneBank中选取人类卵巢癌细胞Grp78基因序列,采用siRNA Target Designer-Version 1.51设计软件设计Grp78基因发卡寡核苷酸,序列符合siRNA表达载体psiSTRIKETMU6的要求并与psiSTRIKETM质粒载体连接,采用脂质体转染法将含有特异性小分子干扰Grp78 mRNA的重组载体psiSTRIKETM/Grp78导入卵巢癌细胞系SKOV3中,分别在转染前、转染后24h、48h和72h通过RT-PCR和Western blot检测Grp78 mRNA及蛋白水平的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞经梯度浓度紫杉醇处理后的细胞存活率。结果成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp78 RNA干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp78。将上述质粒转染到卵巢癌细胞后,观察到psiSTRIKETM/Grp78能够有效的抑制Grp78 mRNA及蛋白表达。转染psiSTRIKETM/Grp78基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制,出现凋亡征象,且对化疗药物的敏感性增加。结论构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp78能明显抑制Grp78 mRNA及蛋白的表达,增加卵巢癌细胞的化疗敏感性。RNAi技术抑制Grp78表达为卵巢癌的基因治疗开辟了新的思路。     

miR-132 靶向调控Ezrin 抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡的实验研究

目的:探讨微小核糖核酸分子(miRNA)-132 在卵巢癌中生物学作用和作用靶点。方法:收集22 例卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本,RT-PCR 检测miR-132 表达量;RT-PCR 检测人正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞系中miR-132 表达量;选择miR-132 表达量最高或最低的卵巢癌细胞株,分别转染阴性对照质粒(NC)和miR-132 mimic 质粒,RT-PCR 检测转染后miR-132 表达量;CCK-8 法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot 检测Ezrin 蛋白表达。结果:卵巢癌组织中miR-132 表达量显著低于癌旁非肿瘤组织,而卵巢癌细胞系中miR-132 表达量显著低于正常卵巢上皮细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);选择卵巢癌细胞株中miR-132 表达量最低卵巢癌SKOV3 细胞株进行基因转染,与转染阴性对照质粒相比,转染miR-132 mimic 质粒后miR-132 表达量显著上升,细胞增殖显著降低,细胞凋亡显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot 结果显示,上调miR-132 表达后,卵巢癌SKOV3 细胞株中Ezrin 蛋白表达显著上升(P<0.05)。结论:在卵巢癌中,miR-132 可能作为一种抑癌基因通过靶向调控Ezrin 抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡。     

肝内及肝外胆管癌表达下调microRNAs表达谱的鉴定

目的筛选并鉴定肝内及肝外胆管癌组织表达下调的miRNAs,进行初步的功能研究。方法利用miRNA-基因芯片方法筛选肝内、肝外胆管癌组织特异表达下调或共同表达下调的miRNAs,选择real-time PCR方法进行验证;根据肝内及肝外胆管癌不同的下调miRNAs表达谱,选择差异明显且具有代表性的miRNAs,利用miRNA特异模拟物转染胆管癌细胞系QBC939,利用MTT试剂盒分析细胞增殖变化,研究表达下调miRNAs与胆管癌细胞增殖的关系。结果表达分析显示,肝外胆管癌组织特异表达下调的miRNAs共25个,肝内胆管癌组织特异表达下调的miRNAs共15个,在肝内及肝外胆管癌组织均表达下调的miRNAs共6个。在胆管癌细胞系QBC939中分别过表达miR-181a、miR-596、miR-492以及miR-602可以明显抑制细胞增殖。结论肝内及肝外胆管癌具有不同的miRNAs表达谱,表达下调的miRNAs可以明显抑制胆管癌细胞增殖。     

miR-143-3p 靶向MAPK1对人结肠癌细胞增殖，凋亡和侵袭的调节作用#br#

目的　研究miR-143-3p靶向MAPK1与人结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的关系。 方法　qRT-PCR检测miR-143-3p mimic转染效果和MAPK1的mRNA表达水平;双荧光素酶报告实验分析miR-143-3p与MAPK1的靶向关系;蛋白质印迹检测MAPK1的蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖倍数,Hoechst染色检测细胞增殖,体外侵袭实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测Ki67、VEGF、MMP-2和cleaved caspase-3的表达。 结果　miR-143-3p mimic抑制人结肠癌细胞SW620中MAPK1 mRNA和蛋白的表达水平;miR-143-3p mimic与MAPK1野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低;miR-143-3p mimic转染SW620细胞后,细胞增殖、侵袭能力显著降低,凋亡细胞数目显著增加,Ki67、VEGF和MMP-2的表达水平显著降低,cl-caspase-3的表达水平显著上升;miR-143-3p mimic能缓解MAPK1高表达对SW620细胞增殖、侵袭的诱导作用和对细胞凋亡的抑制作用。 结论　miR-143-3p抑制人结肠癌细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向抑制MAPK1有关。