壬基酚对成年雄性SD大鼠生殖功能的影响

目的 研究壬基酚对SD雄性大鼠生殖功能的影响。方法 将成年雄性SD大鼠经口染毒壬基酚（50，100，200mg/kg)28d后，处死，测定生殖功能相关指标，并作睾丸组织病理学检查。取成年雄性大鼠睾丸细胞进行体外培养，壬基酚染毒，测定睾丸酚分泌量的变化，并对其间质细胞，支持细胞的生精细胞的超微结构进行电镜观察。结果 经口染毒壬基酚剂量≥100mg/kg可引起大鼠精子计数和活力的显著降低，睾丸组织病理学切片显示曲精管萎缩，生精能力下降。睾丸细胞体外培养研究显示，壬基酚能抑制睾酮的分泌，且电镜观察可见间质细胞内质网肿胀，表明合成功能减弱。结论 壬基酚在高浓度时能明显损伤雄性大鼠的生殖功能。     

基于综合评分法优选猪苓最佳炮制方法

[目的]优选猪苓最佳浸泡时间和干燥方法。[方法]通过考察猪苓药材不同浸泡时间和不同干燥方法,以猪苓中麦角甾醇、麦角甾酮、多糖和水溶性浸出物为评价指标,采用综合评分法优选猪苓的最佳炮制方法。[结果]猪苓不同炮制方法的综合评分值差异较大,浸泡8 h综合评分最高,其分值达0.796;干燥方法中自然晾干综合评分最高,其分值达0.745,烘干法以50℃烘干综合评分最高,分值达0.631。[结论]猪苓最佳炮制方法为:用水浸泡8 h后切片,于50℃烘箱中烘干。该方法可较好地控制猪苓药材质量,适合于大规模生产中。     

新生期脂多糖暴露对大鼠睾丸发育及波形蛋白表达的影响

目的探讨新生期脂多糖暴露对睾丸发育及波形蛋白表达和分布的影响。方法选取新生雄性SD大鼠150只,随机分为对照组和实验组,实验组于生后第4～12d期间,隔日皮下注射脂多糖（75μg/kg）,共5次,对照组在相同时间皮下注射等容生理盐水。常规饲养至生后14d、21d、28d、包皮分离日、60d、77d分批取材,采用组织学和免疫组化技术,观察脂多糖对大鼠睾丸发育、波形蛋白的表达与分布的影响。结果①与同龄对照组相比,实验组大鼠生精小管横径变小,生精上皮变薄,细胞排列紊乱,生精细胞与支持细胞分离,脱落至管腔,性成熟以后,管腔内精子生成减少;②对照组波形蛋白阳性染色从基膜围绕支持细胞核形成棕黄色的环,并呈辐射状延伸至管腔;实验组支持细胞变矮、变圆,波形蛋白仅见于核周或核的基部胞质,伸向管腔的辐射状条带变短或消失。结论新生期脂多糖暴露,可改变支持细胞波形蛋白的有序分布,造成生精细胞脱落,干扰生精细胞的发育成熟,这种影响可延续至成年期,导致成年期精子生成减少。     

睾丸支持细胞与间质细胞的相互作用

睾丸中主要包括3种细胞,支持细胞与间质细胞及生精细胞。生精细胞与生精有关;间质细胞分泌雄激素;而支持细胞主要维持睾丸曲细精管的结构、维持血睾屏障的完整性、维护睾丸组织天然免疫豁免的功能以及对生精细胞及间质细胞功能的调控,因此间质细胞与支持细胞为组织工程睾丸组织构建的潜在种子细胞。本文就间质细胞及支持细胞之间的相互作用、调控予以综述。     

昆明胚鼠生殖腺发育的形态学观察

目的 研究及观察发育不同时期胚鼠生殖腺发育的形态变化。方法 取发育不同时期的胚鼠进行石蜡切片及H、E染色。结果 从胚胎切片标本中可观察到,交配后第11天出现生殖嵴,第12天出现未分化生殖腺,第13天可在胚胎标本切片上区分雌雄性,第14天雄性的生殖腺演变为睾丸,出现生精小管,为实心的小管。第16天出现睾丸间质细胞,支持细胞的细胞核明显可见。第16天雌性的生殖腺演变为卵巢,皮质及髓质两者分化明显。第20天睾丸内可见生精小管横断面数目明显增多,管腔内出现空腔,管内有一层精原细胞和一层精母细胞。卵巢内可见一团团粗大的生卵泡性索沿着卵巢周边分布,内含许多原始的卵原细胞,此时有原始的卵泡出现。结论 11~12 d为分离原始生殖干细胞(PGCs)最佳时期。     

昆明胚鼠生殖腺发育的形态学观察

目的 研究及观察发育不同时期胚鼠生殖腺发育的形态变化。方法 取发育不同时期的胚鼠进行石蜡切片及H、E染色。结果 从胚胎切片标本中可观察到，交配后第11天出现生殖嵴，第12天出现未分化生殖腺，第13天可在胚胎标本切片上区分雌雄性，第14天雄性的生殖腺演变为睾丸，出现生精小管，为实心的小管。第16天出现睾丸间质细胞，支持细胞的细胞核明显可见。第16天雌性的生殖腺演变为卵巢．皮质及髓质两者分化明显。第20天睾丸内可见生精小管横断面数目明显增多。管腔内出现空腔，管内有一层精原细胞和一层精母细胞。卵巢内可见一团团粗大的生卵泡性索沿着卵巢周边分布，内含许多原始的卵原细胞，此时有原始的卵泡出现。结论 11～12d为分离原始生殖干细胞(PGCs)最佳时期。     

雷公藤多甙及其单体T4对大鼠精子发生影响的初步观察

雷公藤多甙(GTW)抗生育作用部位主要在睾丸内,可致圆形精子细胞向长形精子转变过程受阻,附睾中出现大量头部异常的精子,精子头尾分离和贮积大量不活动精子。从雷公藤多甙分离的有效抗生育单体T_4,抗生育剂量为GTW的1/200,主要作用于附睾精子,对睾丸形态结构及精子形态的影响不明显。提示T_4作用部位较理想。     

山楂叶总黄酮对2型糖尿病大鼠睾丸组织的保护作用及其机制研究

目的 研究山楂叶总黄酮（hawthorn leaves favonoids,HLF）对2型糖尿病大鼠睾丸组织的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法 将80只大鼠采用数字表法随机分为正常组、模型组、HLF低（50mg/kg）、中（100mg/kg）、高（200mg/kg）剂量组,每组16只;采用高脂高糖饮食8周后腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的方法制备2型糖尿病大鼠模型;灌胃给药,每天1次,疗程6周。治疗完成后,测定各组大鼠空腹血糖水平,称量体重并计算睾丸指数,测定血清睾酮含量;HE染色观察睾丸组织形态结构改变,透射电镜观察睾丸组织超微结构改变;TUNEL染色法观察细胞凋亡状况并计算凋亡指数（apoptosis index,AI）。结果 与模型组比较,HLF中、高剂量组大鼠空腹血糖水平显著降低,体重及睾丸指数显著升高,血清睾酮含量显著升高,差异均有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。HE染色后光镜下可见模型组大鼠睾丸曲细精管萎缩、生精细胞脱落且数量显著减少等病理性改变;电镜下可见模型组睾丸组织细胞呈现线粒体减少、内质网扩张、细胞核固缩、染色质呈块状浓集等超微结构改变;模型组睾丸组织凋亡细胞数量较正常组明显增多;经HLF治疗后上述病理性变化和细胞凋亡状况均明显改善,其中以HLF高剂量组效果最为显著且HLF中、高剂量组AI显著降低（P<0.05,P<0.01）。结论 HLF能够有效降低2型糖尿病大鼠空腹血糖,对睾丸的相关保护可能是源自降低血糖带来的收益。     

雄性裸鼹鼠可育个体与不可育个体生殖系统结构与功能差异初探

目的 观察和分析雄性裸鼹鼠中可育个体和不可育个体生殖系统结构和功能的差异,初步探索雄性不可育个体不能繁育后代的原因。方法 健康雄性裸鼹鼠可育个体和不可育个体各5只,先采集一侧睾丸和附睾组织,称重后换算脏器系数;再采集另一侧睾丸组织,用中性福尔马林溶液进行固定后制备组织切片;取另一侧附睾用作精子计数、精子活动度的测定;采集血清测定血清中黄体生成素（LH）和睾酮（T）浓度。结果 与可育个体组相比较,不可育个体组的睾丸重量下降（P＜0.05）,附睾重量显著下降（P＜0.01）,且睾丸系数和附睾系数均显著下降（P＜0.01）;精子数量显著减少（P＜0.01）,精子活动度也显著减弱（P＜0.01）;血清黄体生成素和睾酮水平均显著降低（P＜0.01）;睾丸组织切片观察显示,不可育个体各级生精细胞严重脱落,排列混乱无序,支持细胞和间质细胞均有减少。 结论 雄性裸鼹鼠不可育个体生殖系统存在睾丸和附睾萎缩、生精功能下降和性激素分泌减少等现象。     

ICR小鼠胚胎及生后不同阶段睾丸内生殖细胞的发育

目的 :观察ICR小鼠胚胎及出生后的睾丸内生殖细胞在不同阶段的发育情况 ,了解雄性生殖细胞分化、发育和成熟的过程。方法 :采用半薄切片甲苯胺蓝染色法 ,对雄性胚胎第 13,16 ,18d和出生后第 1,3,7,10 ,15 ,19d、4 ,6周及成年 (8周 )睾丸生殖细胞进行观察。结果 :原始生殖细胞向精原细胞的演化经历了一个分散 居中 分散靠边的过程。出生后第 7d ,支持细胞达到一个增殖高峰 ;出生后第 10d ,原始生殖细胞出现一个增殖高峰 ;出生后第 10d ,间质细胞达到一个增殖高峰 ;出生后第 15d ,出现初级精母细胞 ;出生后第 4周 ,产生精子细胞 ,同时间质细胞出现另一个增殖高峰并保持在一个高水平 ;出生后第 6周 ,开始有精子出现。结论 :当精原细胞大量增殖和生成精子细胞与精子时 ,生殖细胞可能需间质细胞提供大量激素相辅助 ;支持细胞在支持生精细胞、促进生精细胞转位及精子生成过程中起了一定作用。     

Effects of Hydro-alcoholic Extract of Launaea acanthodes on Serum Gonadotropin and Testosterone Levels and the Structure of Seminiferous Tubules in Hyperglycemic Rats

Objective:To investigate the effects of hydro-alcoholic extract of Launaea acanthodes,a blood glucose lowering plant in folk medicine of Iran,on the structure of seminiferous tubules and serum gonadotropin and testosterone levels in hyperglycemic rats.Methods:Twenty-four Wistar rats were randomly allocated into4 groups(n=6):control,streptozotocin(STZ),STZ+insulin[STZ+Ins,5 IU/(kg·day)],and STZ+Launaea acanthodes extract[STZ+Ext,150 mg/(kg·day)].Blood samples were collected at the 2nd and 4th weeks for detection of testosterone,follicle stimulating hormone(FSH)and luteinizing hormone(LH)with enzyme-linked immuno sorbent assay(ELISA),and the right testes of rats were removed at the 7th week for the evaluation of diameter and wall thickness of seminiferous tubules and number of Leydig cells using unbiased stereological techniques.Results:In comparison with the control group,at the 2nd week FSH(0.45 vs 0.03,0.02,0.02 IU/L in STZ,STZ+Ins and STZ+Ext groups,respectively)and LH(1.02 vs 0.37,0.2,0.29 IU/L)showed significant decreases(all P0.05)and testosterone(4.2 vs 8.37,7.78,11.8 ng/mL)showed a remarkable increase(all P0.05).The levels of these hormones became closer in the STZ+Ext and the STZ+Ins groups to the control at the 4th week.A significant decrease in diameter and wall thickness of seminiferous tubules and number of Leydig cells were observed in the STZ group as compared with the control(P0.01).Conclusions:Administration of Launaea extract demonstrated a beneficial impact on the protection of testis from pathogenic and degenerative effects of hyperglycemia which may be partly due to its potential antioxidative effects.     

生后不同发育阶段大鼠睾丸生精小管和间质细胞形态学的变化

目的通过对生后不同年龄SD大鼠睾丸生精小管、间质细胞的组织形态学观察,探讨生后不同发育阶段睾丸生精细胞和间质细胞的发育及变化规律。方法取10天、20天、30天、4月、12月、24月龄雄性大鼠睾丸,常规石蜡包埋、切片、HE染色,镜下观察不同发育阶段生精小管和间质细胞的变化,并进行定量组织学分析。结果⑴生后10天睾丸生精小管细而稀疏,小管中仅见精原细胞和支持细胞,可见单个和成群存在的间质细胞,20天小管中出现初级精母细胞,间质细胞消失,30天龄出现精子细胞,间质细胞再度出现;⑵4月龄生精小管密集、小管外直径和细胞层数均明显增加（P（0.05）并达最大值,上皮内生精活跃,间质内见有大量嗜酸性的间质细胞;⑶12月龄生精细胞层数减少并出现空泡变性,上皮变薄,间质细胞数量减少,体积变小,成纤维细胞增多,界膜增厚;⑷24月龄生精小管明显稀疏,上皮层数降低（P（0.05）,生精细胞和间质细胞均明显减少,内空泡增多,支持细胞也出现空泡变。结论生后10~30天生精小管内尚无精子形成,处于幼年期,除20天龄外,间质内均可见较多的间质细胞;4月龄的青年期生精小管内生精能力和激素分泌能力达高峰,处于生殖旺盛的性成熟阶段;12月龄的中年期睾丸出现衰老性变化,至24月龄老年期生精能力和激素奇泌能力均明显降低.     

壬基酚对断乳期子代雄性SD大鼠睾丸组织发育及凋亡的影响

目的研究壬基酚（NP）对断乳期子代雄性SD大鼠睾丸组织发育及凋亡影响的机制。方法对母鼠孕期第7d直至产后断乳期染毒NP（50、100、200mg／kg）,每个剂量组处死F1雄性子代大鼠10只,股动脉取血,测定NP浓度,取雄性子代睾丸进行组织病理学观察,并对睾丸进行Bax、Bcl-2和Caspase-3免疫组织化学分析。结果F1子代大鼠断乳期血清NP浓度在100、200mg／kgNP剂量组高于对照组（P〈0．05）,组织病理学观察可见200mg／kgNP组睾丸生精小管与对照组相比显著缩小。免疫组化结果显示,NP组睾丸生精小管Bax和Caspase-3的表达增强,Bel-2表达减弱。结论母鼠孕期和哺乳期染毒NP能够影响断乳期子代雄性SD大鼠睾丸的正常发育。     

成年型睾丸间质细胞激活素A的作用不容忽视

睾丸支持细胞和间质细胞功能紊乱所导致的睾丸发育不全是引起男性不育的重要原因之一．传统观点认为,胚胎时期支持细胞是睾丸索形成的主要上皮细胞,其分泌信号诱导睾丸索的生长和分化,间质细胞则分泌雄激索,并不参与睾丸索的形成。而2010年6月8日刊登在《美国科学院院刊》（Proc Natl Acad Sci USA）上的一篇文学提出,胚胎型间质细胞分泌的激活素A也参与胚胎时期睾丸索的形成。本文就其中的一些发现提出自己的观点,即成年型间质细胞分泌的激活素A存在生后睾丸的发育和生殖细胞分化中也起一定的作用。     

Persistently Upregulated Hippocampal mTOR Signals Mediated by Fecal SCFAs Impair Memory in Male Pups with SMM Exposure in Utero

Objective To investigate the molecular mechanisms of the adverse effects of exposure to sulfamonomethoxin(SMM) in pregnancy on the neurobehavioral development of male offspring. Methods Pregnant mice were randomly divided into four groups: control‐(normal saline), low‐[10 mg/(kg.day)], middle‐[50 mg/(kg.day)], and high‐dose [200 mg/(kg.day)] groups, which received SMM by gavage daily during gestational days 1‐18. We measured the levels of short‐chain fatty acids(SCFAs) in feces from dams and male pups. Furthermore, we analyzed the mR NA and protein levels of genes involved in the mammalian target of rapamycin(m TOR) pathway in the hippocampus of male pups by RT‐PCR or Western blotting. Results Fecal SCFA concentrations were significantly decreased in dams. Moreover, the production of individual fecal SCFAs was unbalanced, with a tendency for an increased level of total fecal SCFAs in male pups on postnatal day(PND) 22 and 56. Furthermore, the phosphatidylinositol 3‐kinase(PI3 k)/protein kinase B(AKT)/mTOR or mT OR/ribosomal protein S6 kinase 1(S6 K1)/4 EBP1 signaling pathway was continuously upregulated until PND 56 in male offspring. In addition, the expression of Sepiapterin Reductase(SPR), a potential target of m TOR, was inhibited. Conclusion In utero exposure to SMM, persistent upregulation of the hippocampal mTOR pathway related to dysfunction of the gut(SCFA)‐brain axis may contribute to cognitive deficits in male offspring.     

Endocrine Disruption of Cadmium in Rats Using the OECD Enhanced TG 407 Test System

Objective To evaluate the endocrine disrupting effects of cadmium(Cd) using OECD enhanced TG407 test guideline. Methods Sprague-Dawley(SD) rats were randomly divided into six groups and accordingly administered with 0, 1, 2.5, 5, 10, 20 mg/kg·BW/day of Cd by gavage for 28 days. Body weight, food consumption, hematology, biochemistry, sex hormone levels, urinary β2-microglobulin, organ weights and histopathology and estrous cycle were detected. Results Cd could significantly decrease animals' body weight(P0.05). Serum luteinizing hormone(LH) at 10-20 mg/kg·BW groups and testosterone(T) at 2.5 and 10 mg/kg·BW groups decreased significantly(P0.05). However, no statistically significant change was found in urinary β2-microglobulin among Cd-treatment groups(P0.05). Endpoints related to female reproduction including uterus weight and histopathological change at 10-20 mg/kg·BW groups showed significant increase(P0.05). While among male rats in 2.5, 10, 20 mg/kg·BW groups, weight of prostate, thyroids, and seminal vesicle glands significantly decreased(P0.05). Moreover, no histopathological change was observed in kidney. Conclusion Results suggested that Cd can cause endocrine disrupting effects in SD rats. Comparing with possible renal toxicity of Cd, its toxicity on endocrine system was more sensitive.     

高脂饮食诱导大鼠生精功能障碍

目的观察给予高脂饮食对大鼠生精功能的影响。方法健康成年雄性SD大鼠20只随机分为正常对照组和高脂饮食模型组。正常对照组给予正常饮食喂养,高脂饮食模型组大鼠给予高脂饮食喂养,8周后观察其生精功能的变化。结果与正常组大鼠相比,高脂饮食组大鼠的睾丸重量/体重下降,组织学分析显示睾丸生精小管直径、生精细胞计数、间质细胞计数均下降,血清性激素水平明显异常。同时,高脂饮食组大鼠睾丸凋亡增强。结论高脂饮食可诱导大鼠生精功能障碍。     

Immunohistochemical Study of Serum Proteins in Normal and Cadmium-Treated Mouse Testis by in vivo CryotechniqueImmunohistochemical Study of Serum Proteins in Normal and Cadmium-Treated Mouse Testis by in vivo Cryotechnique

Objective To investigate time-dependent changes of serum proteins permeability in the normal and cadmium（Cd）-treated mouse testis, reflecting tight junctional （TJ） barriers of Sertoli cells Methods The serum proteins, albumin and immunoglobulin-G（IgG）, in the seminiferous tubules were firstly immobilized by the “in vivo cryotechnique”, in which the dynamic blood circulation was always kept. The cryofixed testicular tissues were then processed for the freeze-substitution method, and embedded in the paraffin wax. Serial sections of 5μm thickness were immunostained by anti-mouse albumin or IgG antibody with peroxidase immunostaining, and also stained with hematoxylin-eosine （HE）for morphological observation. Results In normal seminiferous tubules, albumin immunoreaction products were localized around peritubular myoid cells and among Leydig cells, as well as in blood vessels. They were also localized as arch-like patterns around some spermatogonia in basal compartments. The number of the immunopositive arch structures was different according to developmental stages of the seminiferous cycle, judging from the arrangement of germ cells by HE-staining. The patterns of localization of IgG immunostaining in normal mouse testis were similar to that of albumin. In 24 h after Cd-treatment, some enlarged spaces and vesicular formation in the seminiferous epithelium were observed on the paraffin sections by HE-staining. The albumin or IgGimmunolocalization was seen not only in the basal compartments, but also in the adluminal compartments between Sertoli.cells and germ cells. Conclusion The structural changes of inter-Sertoli TJ barriers in vivo, such as different immunostaining patterns of serum proteins between the normal and Cd-treated mouse seminiferous tubules, could be clearly detected by the “in vivo cryotechnique” with albumin or IgG immunohistochemistry.     

饮用水中有机污染物的雄性生殖毒性病理学研究

目的：探讨饮用水有机污染物的潜在生殖危害。方法：用GDX-102树脂吸附饮用水中有机污染物：昆明种雄性小鼠分为对照组及12.5、25、50L/kg试验组，腹腔注射染毒，分别于染毒后10、35d处死动物取材，应用光镜和电镜技术对睾丸、附睾、精囊、前列腺进行组织病理学研究。结果：染毒后10d，仅发现50L/kg组间质细胞增生，坏死生精细胞较多；染毒后35d，50L/kg组间质细胞呈大片聚集状增生，曲细精管萎缩，生精细胞空泡化。电镜观察所见，染毒后10d，50L/kg组Leydig细胞线粒体肿胀、嵴紊乱；染毒后35d，Leydig细胞、生精细胞损伤随剂量增加而加重，损伤以线粒体的肿胀、空泡化甚至溶解为主。附睾、精囊、前列腺均未发现异常形态学变化。结论：饮用水有机污染物存在生殖危害，睾丸是其作用靶器官，靶细胞为Leydig细胞和生殖细胞，线粒体为主要作用部位。     

Rad18缺失对雄小鼠生殖细胞的影响

[目的]了解Rad18敲除雄小鼠生殖细胞的变化。[方法]用免疫组织化学方法检测2、6、12月龄Rad18-/-雄小鼠生精小管生殖细胞的特异性标记物TRA98的表达及分布,并与野生(WT)雄小鼠比较;用原位杂交技术检测Rad18在1周龄WT雄小鼠生精小管未分化精原细胞中的表达。[结果]缺失TRA98标记的早期精原细胞的生精小管比例在12月龄Rad18-/-和WT雄小鼠中分别为39.50%和2.76%,差异有显著性意义(P<0.05);但Rad18-/-退化生精小管中保留正常的Sertoli细胞,其附睾中未见TRA98阳性的生殖细胞,且精子形态正常;1周龄WT小鼠睾丸未分化精原细胞中有Rad18蛋白表达。[结论]Rad18可能对精原干细胞有维持作用。