阻断内源性bcl-2蛋白表达提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究

目的：探讨与bcl—2翻译起始部位碱基互补的反义bcl—2寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucletide，ODN)对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响。方法：以脂质体Lepofectin加为载体，转染20μM反义bcl—2 ODN于BcaCD885细胞内，阻断内源性bcl—2蛋白表达，再以43℃40min加热后，以流式细胞术—抗体及DNA分析对bcl—2蛋白、bax蛋白和细胞凋亡进行检测。结果：反义bcl—2 ODN阻断BcaCD885细胞内源性bcl—2蛋白表达后，bax／bcl—2升高，细胞凋亡率明显提高。结论：阻断BcaCD885细胞内源性bcl—2蛋白表达能提高其热敏感性。     

硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响

目的　探讨硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸(AS-sODN)对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响。方法　以脂质体Lipofectin为载体,转染AS-sODN于BcaCD885细胞内,倒置显微镜观察细胞形态学改变,TUNEL原位末端标记检测细胞凋亡,流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达水平;转染AS-sODN于BcaCD885 细胞内,再以43℃,40 min加热细胞,FCM检测细胞凋亡率。结果　AS-sODN转染后,BcaCD885颊癌细胞出现皱缩、呈浮起状,TUNEL原位末端标记阳性,Bcl-xL蛋白表达明显下降(P<0·05),热诱导细胞凋亡率明显提高(P< 0·05)。结论　硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸能诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡并能提高其热敏感性。     

反义bcl-2寡脱氧核苷酸对BcaCD885细胞内源性bcl-2表达的阻断作用

目的　探讨与 bcl-2翻译起始部位碱基互补的反义 bcl-2寡脱氧核苷酸 ( oligodeoxynucleotide,ODN)对 Bca-CD885细胞内源性 bcl-2表达的阻断作用。方法　以脂质体 Lepofectin为载体 ,一过性转染 2 0 μmol/L 反义及正义 bcl-2 ODN于 Bca CD885细胞中 ,FCM-抗体观测转染后 2 4h、3 6h、48h细胞内 bcl-2基因蛋白表达变化 ,RT-PCR技术检测转染后 2 4h bcl-2 m RNA的表达变化。结果　转染反义 bcl-2 ODN后 2 4h、3 6h、48h Bca CD885细胞内 bcl-2基因蛋白表达与对照组相比都明显下降 ( P<0 .0 5 ) ,而正义组与对照组无差异 ( P>0 .0 5 ) ;正反义组 bcl-2m RNA与对照组相比无明显变化 ( P>0 .0 5 )。结论　反义 bcl-2 ODN能在蛋白翻译水平特异性抑制颊癌细胞内源性 bcl-2蛋白表达     

热诱导颊癌细胞凋亡与Bcl-xL蛋白表达的关系

目的：探讨热诱导颊BcaCD885细胞凋亡与Bcl-xL蛋白表达变化的关系。方法：43℃40min水浴加温诱导BcaCD885细胞产生死亡。采用流式细胞仪（FCM）及抗体检测技术分别测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达量，观测诱导颊癌细胞凋亡过程中Bcl-xL蛋白表达的动态变化，探讨二者间的关系。结果：凋亡组内Bcl-xL蛋白表达量明显低于对照组（P＜0．05），凋亡率与Bcl-xL蛋白表达水平存在负相关关系（r=-0.89，P＜0．05）。结论：Bcl-xL在热诱导BcaCD885细胞凋亡的调控中起重要作用。     

高温诱导颊癌细胞凋亡的相关机理研究

目的 :探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡的分子机理。方法 :水浴加温诱导BcaCD885产生凋亡。通过FCM DNA、FCM 抗体检测技术 ,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中bcl- 2及bax基因蛋白表达的动态变化。结果 :凋亡率与bcl- 2蛋白表达水平存在负相关关系 ,与bax蛋白表达水平存在正相关关系。结论 :高温作为一种外来刺激信号通过下调bcl 2基因的表达、上调bax基因的表达、上调bax基因的表达 ,诱导BcaCD885细胞凋亡的发生     

转染Bax基因提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究

目的：探讨Bax基因对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响。方法：采用脂质体Lipofectamine 2000转染人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α于人颊癌细胞株BcaCD885细胞中，再对细胞进行43℃ 40min水浴加温处理，用流式细胞仪检测BcaCD885细胞的凋亡率及Bax蛋白的表达水平；用RT-PCR技术检测BcaCD885细胞的Bax mRNA的表达水平。结果：Lipofectamine 2000能将人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α导人BcaCD885颊癌细胞中，Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α能在BcaCD885颊癌细胞中表达，提高BcaCD885颊癌细胞内Bax蛋白质及mRNA的水平，促进热诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡的发生。结论：转染Bax基因于BcaCD885颊癌细胞内，能提高细胞对热杀伤的敏感性。     

高温诱导颊癌细胞凋亡的相关机理研究

目的：探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡的分子机理。方法：水浴加温诱导BcaCD88产生调亡。通过FCM－DNA、FCM－抗体检测技术,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中bcl-2及bax基因蛋白表达的动态变.:地亡率与bcl-2蛋白表达水平存在负相关关系,与bax蛋白表达存在正相关关系。结论：高温作为一种外来刺激信号通过下调bcl-2基因的表达、上调bax基因的表达、上调bax基因的表达,诱导BcaCD885细胞凋亡的发生。     

ADAM28反义核酸对人牙囊细胞生物学特性的影响

目的：研究ADAM28反义核酸（As—ODN）对人牙囊细胞（HDFC）增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响。方法：采用细胞培养、基因转染、四唑盐（MTT）比色法、酶动力学方法和流式细胞术（FCM）检测ADAM28反义核酸转染HDFC后对细胞生物学特性的影响。结果：ADAM28AS—ODN组HDFC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶（ALP）分泌活性显著降低，凋亡细胞百分比明显上升。结论：ADAM28反义核酸可显著抑制HDFC的增殖和ALP的活性，显著诱导HDFC的凋亡并影响细胞周期的变化。     

nm23-H1基因对BcaCD885细胞侵袭、粘附和运动力影响的研究

目的：通过nm23-H1的转化及导入BcaCD885细胞株，建立稳定、高效、低毒的转染方法，观察nm23-H1对BcaCD885细胞株侵袭转移能力的影响。方法：（1）利用基因转化技术，制备高纯度的nm23-H1真核表达质粒；（2）利用阳离子脂质体介导的转染技术，完成转染方法的建立；（3）利用免疫组化技术，检测转染前后的NDPKA的表达；（4）利用transwell小室和冲刷实验，观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。结果：（1）使用重组的pCMV-N-B 的真核表达载体，将nm23-H1转染口腔癌,细胞并获得稳定表达；（2）发现BcaCD885细胞株nm23-H1基因的转染前后表达水平有明显差异；（3）转染后的BcaCD885细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。结论：nm23-H1对BcaCD885细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用。     

CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸导入对颊癌细胞株BcaCD885生物学行为的影响

目的研究CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸导入对颊癌细胞株BcaCD885生物学行为的影响,验证CyclinD1在口腔黏膜癌变中的作用。方法采用差示PCR技术检测颊癌细胞株BcaCD885中CyclinD1编码基因的扩增,并以脂质体为载体,将CyclinD1 mRNA的反义寡核苷酸序列转染肿瘤细胞,观察转染前后细胞增殖速度、体外集落形成能力的变化。结果 BcaCD885细胞株中出现CCND1基因扩增,扩增倍率6.9;转染CyclinD1mRNA的反义寡脱氧核苷酸后,细胞增殖速度减慢,体外集落形成能力下降。结论转染CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸,能部分抑制体外培养肿瘤细胞的增殖活性和恶性表型。     

高温诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡及检测

目的　探讨热诱导 Bca CD885颊癌细胞凋亡的动力学改变及热杀伤肿瘤细胞的机理。方法　水浴加温诱导Bca CD885细胞产生凋亡。通过细胞形态观察、原位末端标记、DNA电泳及流式细胞术 DNA测定 ,从形态学、生物化学、分子生物学以及细胞学水平确定凋亡细胞特征。结果　Bca CD885细胞经 43°C40 min加热 ,呈现细胞凋亡形态改变 ,TUNEL标记见明显的凋亡小体 ,DNA电泳呈现有一定间隔的梯状条带。同时细胞周期发生了明显的特异性改变 :G0 / G1 期百分比增加 ,S期百分比下降 ,G2 / M期百分比在加热后 3 h时也发生了明显的下降。 45°C 40 min加热则出现明显的坏死改变。结论　高温杀伤 Bca CD885细胞存在细胞坏死和细胞凋亡两种方式 ,治癌温度是通过诱导细胞凋亡发挥作用。高温诱导 Bca CD885细胞的凋亡具细胞周期特异性     

顺铂诱导颊癌细胞凋亡及凋亡分子(Apo-1)表达的实验研究

目的:研究细胞毒类化疗药——顺铂诱导人颊癌细胞凋亡发生的规律以及凋亡分子Apo-1的表达。探讨口腔癌化疗的细胞凋亡机制。方法:以建株人颊癌细胞系BcaCD885为对象,采用光镜、电镜以及流式细胞术等手段观察顺铂诱导颊癌细胞凋亡的形态特征及规律,同时检测顺铂对颊癌细胞Apo-1表达的影响。结果:顺铂作用后的颊癌细胞出现典型的凋亡细胞形态学特征;顺铂诱导颊癌细胞凋亡呈现时间及剂量依赖性效应关系;顺铂能上调颊癌细胞Apo-1的表达。结论:细胞凋亡可能是顺铂杀灭颊癌细胞的重要机制,Apo-1在顺铂诱导颊癌细胞凋亡中可能起着关键性调节作用     

高温诱导颊癌细胞凋亡过程中Bax基因表达的动态变化

目的：探讨Ｂax基因在热诱导ＢcaCD885细胞凋亡过程中的作用。方法：水浴加温诱导ＢcaCD885细胞产生凋亡,通过ＦＣＭ－ＤＮＡ－抗体检测及ＲＴ－ＰＣＲ技术,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程 Ｂax基因蛋白及mRNA表达的动态变化。结果：凋亡率与Ｂax蛋白表达水平存在正相关关系;加热后,细胞ＢaxmRNA相对量明显升高。结论：高温作为一种外来刺激信号通过上调Ｂax基因的表达,诱导ＢcaCD885细胞凋亡的发生。     

Role of the c-myc proto-oncogene in the proliferation of hereditary gingival fibromatosis fibroblasts

BACKGROUND: Hereditary gingival fibromatosis (HGF) is a fibrotic gingival enlargement. In previous work, HGF fibroblasts grew faster and produced more collagen and fibronectin (FN) than normal gingival (GN) fibroblasts. HGF FN and collagen production, but not proliferation, were under autocrine transforming growth factor (TGF)-beta control, suggesting other means of activation of HGF proliferation. Elevated/prolonged expression of the proto-oncogene c-myc is implicated in disregulation of cell growth. The objectives of this study were to: 1) determine if c-myc expression is abnormal in quiescent and serum-stimulated HGF and GN fibroblasts and 2) determine the relationship between c-myc expression and fibroblast proliferation using a c-myc antisense oligonucleotide (ODN). METHODS: Proliferation was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), measuring incorporation of bromodeoxyuridine into DNA. Expression of c-myc was determined by quantitative polymerase chain reaction (PCR), using incorporation of fluorescent dCTP and detection via electrophoresis. RESULTS: Proliferation was minimal until 24 hours or more after serum stimulation, when HGF proliferation was greater than GN (P < or = 0.02). All cells expressed c-myc mRNA at quiescence and > or = 1 hour after serum stimulation. Expression of c-myc in quiescent HGF fibroblasts was elevated, and it peaked and remained higher after serum stimulation than in GN cells. Proliferation of an HGF cell line was inhibited by 4 microM c-myc antisense ODN (14% decrease; P < or = 0.006) and 8 microM c-myc antisense ODN (approximately 80% decrease; P < or = 0.0001), but generally not by c-myc sense ODN. This effect was reversed by hybridizing the c-myc antisense and sense ODNs (P = 0.007). CONCLUSION: Data suggest that elevated proliferation of an HGF fibroblast cell line is related to elevated c-myc expression.     

OK-432���˿�ǻ�۰�ϸ��ϵTca8113��BcaCD885ҩ���������о�

??Objective    To study the cytotoxic effects of OK-432 on the two human oral squamous cell carcinoma Tca8113 and BcaCD885 cell lines. Methods    The inhibitory effects and the 50% inhibition concentration values??IC50??of OK-432 against Tca8113 and BcaCD885 with different drug concentration were evaluated by methyl thiazolyl tetrazolium??MTT??. The time-dependent cytotoxic effects of OK-432 were in 1-5 days??and the dose-effect relationship was investigated at the 4th day. Results    OK-432 had high anticancer effects on Tca8113 and BcaCD885??and compared with the control group they were significantly higher??P < 0.05????and the cytotoxic effects were dose-dependent. Conclusion        OK-432 significantly inhibits the proliferation of  Tca8113 and BcaCD885 cell??and the inhibition on Tca8113 is stronger than on BcaCD885.     

人颊癌BcaCD885细胞Fas表达水平与移植瘤形成和增殖的关系

目的 :研究Fas表达水平与人颊癌BcaCD885细胞移植瘤形成、增殖及凋亡的关系 ,探讨其相关机制。方法 :用脂质体将真核表达重组质粒pBK -Fas导入人颊癌BcaCD885细胞。转染 72h后 ,收集转染及未转染细胞 ,每组细胞分别接种 10只裸鼠。观察移植瘤形成及增殖状况 ,绘制肿瘤生长曲线。实验结束采集肿瘤标本 ,称重 ,计算肿瘤生长抑制率。同时以RT -PCR检测两组移植瘤细胞FasmRNA表达 ,流式细胞仪检测移植瘤细胞凋亡、增殖和Fas蛋白表达。结果 :Fas转染组移植瘤形成时间平均延长 3 .4d ,各观察点移植瘤体积均小于未转染组 ,二者差异有显著性 (P <0 .0 1)。RT -PCR和流式细胞术检测显示 ,Fas转染上调FasmRNA表达 ,提高Fas蛋白阳性表达率、阳性表达强度和细胞凋亡指数 ,但不影响肿瘤细胞增殖指数。结论 :Fas基因转染抑制移植瘤形成和增殖与提高Fas表达、增加肿瘤细胞凋亡有关。