法舒地尔对高糖培养肾小管上皮细胞增殖和纤维化的影响

目的：探讨法舒地尔（Fasudil）对高糖培养的肾小管上皮细胞（HK-2）增殖和纤维化的影响。方法：将HK-2细胞分为正常对照组（NG组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L）、高张组（HM组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L＋甘露醇54.5 mmol/L）、高糖组（HG组,葡萄糖浓度60 mmol/L）、高糖＋小剂量法舒地尔干预组[FA（5）组,D-葡萄糖60 mmol/L＋法舒地尔5μmol/L]、高糖＋中剂量法舒地尔干预组[FA（10）组,D-葡萄糖60 mmol/L＋法舒地尔10μmol/L];6高糖＋大剂量法舒地尔干预组[FA（20）组,D-葡萄糖60 mmol/L＋法舒地尔20μmol/L]。四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定HK-2细胞增殖;免疫共沉淀法检测p-MYPT1-Thr853;Western印迹法检测结缔组织生长因子（CTGF）的表达;ELISA法检测细胞培养上清液转化生长因子β1（TGF-β1）和纤维连接蛋白（Fn）的含量。结果：与NG组比,HG组HK-2细胞出现增殖增加,p-MYPT1-Thr853、TGF-β1、CTGF和Fn的表达增加。与HG组比,FA（5）组、FA（10）组、FA（20）组均抑制了HK-2细胞的过度增殖,p-MYPT1-Thr853、TGF-β1、CTGF和Fn的表达均减少。结论：法舒地尔可能通过抑制Rho激酶活性抑制高糖培养的肾小管上皮细胞增殖和纤维化。     

VEGF对上皮间充质转化的抑制与Smad信号途径及SnoN表达的变化

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad2/3,Smad7信号途径以及SnoN表达的影响。方法体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μg/L)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5μg/L)+VEGF165(100μg/L)共同作用组。采用WesternBlot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad2/3和Smad2/3(共同作用30和60min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad7、SnoN的表达水平(共同作用48h)。结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF-β1单独作用组比较明显减弱(P0.05)。体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60min,与正常对照组比较,(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比值明显升高,TGF-β1+VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30min时下降明显。TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad7表达明显升高(P0.05)。VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad2/3)/(Smad2/3)、Smad7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P﹥0.05)。TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P﹥0.05),各组SnoNmRNA表达差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad2/3磷酸化、上调Smad7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关。     

Smad signal transduction pathway involved in supression of VEGF on TGF-β1 induced EMT of HK-2 cells

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad 2/3,Smad 7信号途径以及SnoN表达的影响.方法 体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μgL)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5 μg/L)+ VEGF165(100 μg/L)共同作用组.采用Western Blot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad 2/3和Smad 2/3(共同作用30和60 min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad 7 、SnoN的表达水平(共同作用48 h).结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF -β1单独作用组比较明显减弱(P＜0.05).体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60 min,与正常对照组比较,(p-Smad 2/3)/(Smad 2/3)比值明显升高,TGF-β1 +VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30 min时下降明显.TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad 7表达明显升高(P＜0.05).VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad 2/3 )/(Smad 2/3)、Smad 7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P＞0.05).TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P＜0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P＞0.05),各组SnoN mRNA表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad 2/3磷酸化、上调Smad 7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关.     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制

[目的] 观察淫羊藿苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮-间质转化的作用以及对Smad信号通路的影响。[方法] 将肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组。采用CCK-8法检测10、20、40 μmol/L的淫羊藿苷干预10 μg/L TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞的增殖影响; 使用实时定量聚合酶链式反应法检测检测上皮间质转化分管关键因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达量; 采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量; 划痕实验和侵袭迁移小室法(Transwell小室)分别检测HK-2细胞的迁移和侵袭能力。[结果] 与空白对照组比较, TGF-β1组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增高(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著增加(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.05)。与TGF-β1组比较, TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著降低(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著增加(P<0.05)。淫羊藿苷对TGF-β1诱导HK-2细胞抑制增殖、迁移和侵袭能力以及上皮间质转化无剂量依赖性。[结论] 淫羊藿苷可以抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮-间质转化的分化, 可能与抑制Smad信号通路有关。     

当归补血汤通过miR-27a/TGF-β1/Smad3通路抑制HK-2细胞纤维化作用及机制研究

  目的  探讨当归补血汤通过miR-27a调控HK-2细胞纤维化的机制。  方法  HK-2细胞分为对照组、高糖组、高糖+空白血清组、高糖+当归补血汤含药血清组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况; 采用Western blot法检测纤维化相关因子波形蛋白(Vimentin)、Ⅳ型胶原(COL Ⅳ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3/Smad3和转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达情况; qPCR法检测miR-27a及纤维化相关因子mRNA的表达情况; 通过转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA并向培养基中加入TGF-β1, 观察miR-27a的表达和纤维化相关蛋白表达的情况。  结果  MTT结果显示, 与对照组相比, 高糖组细胞增殖率明显降低(P < 0.05, P < 0.001), 当归补血汤含药血清作用24、48 h后细胞增殖率明显提高(P < 0.05, P < 0.001)。Western blot结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化相关蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3的表达(P < 0.05, P < 0.01)。qPCR结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1 mRNA和miR-27a的表达(P < 0.05, P < 0.01)。TGF-β1处理细胞后, 细胞纤维化加重, miR-27a的表达升高(P < 0.05, P < 0.01), 当归补血汤含药血清可明显降低TGF-β1诱导的纤维化细胞中miR-27a的表达升高(P < 0.001)。转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA可明显降低TGF-β1诱导的细胞纤维化蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达的升高(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  当归补血汤含药血清可促进HK-2细胞增殖, 并通过miR-27a/TGF-β1/Smad3信号通路调控HK-2细胞纤维化。      

基于TGF-β/Smad信号通路研究芒果苷对肝纤维化大鼠的作用机制

目的基于TGF-β/Smad信号通路研究芒果苷对肝纤维化大鼠的作用机制。方法健康SD大鼠40只随机分为5组,包括空白组、模型组、芒果苷低剂量组、芒果苷中剂量组及芒果苷高剂量组。除空白组外,其余组采用四氯化碳诱导肝纤维化大鼠模型,造模成功后,芒果苷低、中、高剂量组分别以15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg芒果苷生理盐水溶液灌胃,空白组、模型组等量生理盐水灌胃,1次/d,连续6周,待最后一次给药72h后眼眶取血并处死动物,采样。HE、Masson染色观察肝组织病理学改变; ELISA检测血清TGF-β1、HA、HYP、SOD水平;免疫组化检测肝脏组织Collagen I、α-SMA、Smad2、TGF-β的表达; RT-PCR检测肝脏组织中Smad2、TGF-β、MCP-1 m RNA表达。结果 HE和Masson染色结果显示芒果苷高剂量组可明显减轻肝脏组织病理损伤;与模型组相比,仅芒果苷高剂量组能明显降低TGF-β1、HA、HYP、Collagen I、α-SMA、Smad2、TGF-β、MCP-1水平,明显升高SOD水平,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论芒果苷具有抑制大鼠肝纤维化作用,其机制可能与减轻炎症反应保护肝功能,抑制TGF-β/Smad信号通路有关。     

LX-2与HK-2细胞共培养模型的建立及对其细胞转分化的影响

[目的]建立人肝星状细胞(LX-2)与人肾小管上皮细胞(HK-2)共培养体系的理论模型,研究LX-2对HK-2转分化的影响。[方法]以Transwell小室建立体外LX-2细胞和HK-2细胞间接共培养体系。应用细胞免疫组织化学法检测HK-2细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各组细胞培养液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR法)检测HK-2细胞TβRⅠm RNA、TβRⅡm RNA、Smad2 m RNA、Smad3 m RNA、Smad7 m RNA的表达。[结果]除了空白组,形态学上其他两组均可看到HK-2细胞胞浆染棕黄色,不同数量细胞由立方铺路石样转变为梭形长条状,细胞肥大;HK-2细胞高表达α-SMA(P0.01);HK-2细胞上清液中TGF-β1含量明显高于空白组(P0.01);HK-2细胞TβRⅠ、Smad2、Smad3基因表达明显上调,而TβRⅡ、Smad7基因表达明显下调。[结论]Transwell共培养法可诱导HK-2细胞转分化,其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路有关。     

黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-pl/Smads信号蛋白的影响,探讨黄芪对腹膜纤维化的阻抑作用与机制.方法 实验分为5组,每组10只.阴性对照组:每日腹腔注射生理盐水20 mL/只,共35d;模型组:每日腹腔注射4.25％葡萄糖腹透液20 mL/只,共35 d;黄芪低、中、高剂量组:于造模第16天开始每日腹腔注射黄芪腹透液(腹透液中加入黄芪注射液,分别含黄芪生药终浓度10、20、40 mg/mL)20 mL/只,共20d.HE染色观察腹膜病理改变;快速免疫组化法检测腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN、E-cadherin、α-SMA的表达;Western blot检测腹膜组织TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad2/3、p-smad2/3、Smad7蛋白的表达;RT-PCR检测TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad7mRNA表达.结果 ①模型组PMCs呈圆形或柱形,有脱落,间皮下基质增生,大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积,腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN表达上调,黄芪各干预组上述变化有改善,以高剂量组作用较为明显;②模型组EMT标记蛋白α-SMA表达上调,E-cadherin表达下调,高、中剂量黄芪组能一定程度地逆转腹膜组织E-cadherin表达下降与α-SMA高表达;③模型组Samds信号蛋白p-smad2/3、Smad7表达上调,黄芪可不同程度地下调p-smad2/3高表达,增强Samd7的表达,高剂量组作用较为显著.结论 高糖腹透析液可促使PMCs EMT的发生,黄芪很可能通过抑制TGF-β1,并作用于Smads信号转导通路正、负反馈环路中的Smad2/3、Smad7关键信号蛋白,阻抑PMCs EMT的发生.     

白细胞介素-10对肾小管上皮细胞转分化的影响

目的研究白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）转分化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）的影响。方法将培养的HK-2细胞通过完全随机设计分为5组：①对照组：5．5mmol／L的D-葡萄糖组;②高糖组：30mmol／L的D-葡萄糖组;③30mmol／L的D-葡萄糖＋1ng／ml IL-10组;④30mmol／L的D-葡萄糖＋5ng／ml IL-10组;⑤30mmol/L的D-葡萄糖＋25ng／ml IL-10组。培养48h后,RT-PCR法检测各组细胞CTGF mRNA的表达;免疫细胞化学法和Western blot法检测各组细胞α-SMA的表达;ELISA法检测各组细胞FN的分泌。结果在高糖中加入1、5、25ng／ml的IL-10作用后,与高糖组相比HK-2细胞CTGF、α-SMA和FN表达减少,且均有统计学差异（P〈0．05）。结论IL—10可以抑制高糖环境下的。肾小管EMT。     

法舒地尔对高糖培养肾小管上皮细胞增殖和纤维化的影响#br#

目的：探讨法舒地尔（Fasudil）对高糖培养的肾小管上皮细胞（HK-2）增殖和纤维化的影响。方法：将HK-2细胞分为正常对照组（NG组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L）、高张组（HM组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L+甘露醇54.5 mmol/L）、高糖组（HG组,葡萄糖浓度60 mmol/L）、高糖+小剂量法舒地尔干预组[FA（5）组,D-葡萄糖60 mmol/L+法舒地尔5μmol/L]、高糖+中剂量法舒地尔干预组[FA（10）组,D-葡萄糖60 mmol/L+法舒地尔10μmol/L];⑥高糖+大剂量法舒地尔干预组[FA（20）组,D-葡萄糖60 mmol/L+法舒地尔20μmol/L]。四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定HK-2细胞增殖;免疫共沉淀法检测p-MYPT1-Thr853;Western印迹法检测结缔组织生长因子（CTGF）的表达;ELISA法检测细胞培养上清液转化生长因子β1（TGF-β1）和纤维连接蛋白（Fn）的含量。结果：与NG组比,HG组HK-2细胞出现增殖增加,p-MYPT1-Thr853、TGF-β1、CTGF和Fn的表达增加。与HG组比,FA（5）组、FA（10）组、FA（20）组均抑制了HK-2细胞的过度增殖,p-MYPT1-Thr853、TGF-β1、CTGF和Fn的表达均减少。结论：法舒地尔可能通过抑制Rho激酶活性抑制高糖培养的肾小管上皮细胞增殖和纤维化。     

人牙龈结合上皮细胞和口腔龈上皮细胞生物学特性的比较

目的：从人口腔龈上皮细胞中分选出P-钙黏蛋白（P-cadherin）阳性表达和阴性表达的细胞,并将之与人牙龈结合上皮细胞的黏附、增殖和迁移的生物学特性进行比较。方法：分离培养人口腔龈上皮细胞,通过磁珠从中分选出P-钙黏蛋白阳性表达和阴性表达的细胞;分离培养人牙龈结合上皮细胞;测定人牙龈结合上皮细胞、口腔龈上皮细胞及从中分选出的P-钙黏蛋白阳性表达和阴性表达细胞的黏附、增殖和迁移能力。结果：P-钙黏蛋白阳性表达细胞占全部口腔龈上皮细胞的20%。P-钙黏蛋白阳性表达的口腔龈上皮细胞和人牙龈结合上皮细胞表现出较强而相似的黏附和迁移能力,但前者增殖较旺盛（0.72±0.06）, 后者增殖较慢（0.60±0.05,P<0.05）; 而P-钙黏蛋白阴性表达的口腔龈上皮细胞与牙龈结合上皮相比,表现出的黏附（48%±6% vs. 87%±11%,P<0.05）、增殖（0.36±0.04 vs. 0.60±0.05,P<0.05）和迁移能力［（10.3±2.7）个 vs. （23.4±4.8）个,P<0.05］均较弱。结论：P-钙黏蛋白阳性表达的口腔龈上皮细胞与牙龈结合上皮细胞在生物学特性方面有一定相似性而又有区别,提示口腔龈上皮细胞转化为牙龈结合上皮细胞的过程中,可能不仅仅是部分细胞的简单迁移,其中可能牵扯到更为复杂的基因、蛋白表达方面的改变。     

Retinal pigment epithelial tear after intravitreous triamcinolone acetonide injection for fibrovascular pigment epithelial detachment

A 78-year-old woman was diagnosed with fibrovascular pigment epithelial detachment (PED) associated with age-related macular degeneration (AMD) affecting both eyes. Due to decreased vision in her left eye (20/2000) and disease progression, the patient received 4 mg of triamcinolone acetonide (TA) by intravitreal injection into her left eye. There were no immediate post-injection complications in the left eye. However, one week later, a retinal pigment epithelial (RPE) tear, temporal-inferior to the fovea in the left eye, was noted and confirmed by fundus photography, fluorescein angiography and optical coherence tomography. In contrast, there no similar RPE tear occurred in her right eye after treated several times by intravitreous bevacizumab injection. Not only anti-vascular endothelium growth factor agents, but also intravitreal TA when used to treat AMD with PED, would seem to induce a RPE tear in the absence of previous or concurrent adjuvant therapy. Further investigations are required to confirm the mechanism by which the RPE tear occurs.     

雌激素对实验性肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨雌激素在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化模型中对肾小管上皮细胞表型转化的影响。方法雌性SD大鼠30只，随机分为4组：对照组；生理雌激素组（单纯UUO）；低雌激素组（UUO＋OVX）；高雌激素组（UUO＋E2）。21d后处死各组大鼠，用光镜观察梗阻肾组织病理变化。并用免疫组化和RT-PCK方法检测肾组织α-SMA蛋白和mRNA的表迭。结果生理雌激素组出现肾小管间质纤维化改变，其肾组织α-SMA表迭上调，与对照组相比有统计学意义（P〈O．01）；和生理雌激素组相比，低雌激素组纤维化病变加重，α-SMA表达明显增多（P〈O．05）；而高雌激素组则病变减轻，上述表达减少（均为P〈O．05）。结论雌激素可能通过抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞裹型转化而发挥延缓肾间质纤维化的作用。     

解整合素-金属蛋白酶17在肺泡上皮细胞间质转化中的作用研究

目的：探讨解整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM 17)过表达和抑制在转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)介导的A549细胞上皮向间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)过程中的作用,以进一步揭示肺纤维化的机制。方法将A549细胞分为空白对照组、TGF-β1组、PMA(ADAM 17激活剂)组和TNF484(ADAM 17抑制剂)组。各组细胞培养36 h后,应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,Real-time PCR和Western blotting分别检测ADAM 17、上皮及间质细胞标记物在mRNA和蛋白水平上的表达情况。结果镜下观察发现未诱导的A549细胞呈鹅卵石形态,排列比较紧密;经TGF-β1诱导后,细胞形态伸长,出现伪足,排列较松散,细胞与细胞之间的紧密连接消失。Real-time PCR和Western blotting检测结果均显示ADAM 17在PMA组高表达,而在TNF484组低表达,差异有统计学意义;上皮细胞标记物E-cadherin在空白对照组和TNF484组高表达,间质细胞标记物Vimentin在TGF-β1组和PMA组高表达,差异同样有统计学意义。结论 ADAM 17的过表达有助于TGF-β1介导的A549细胞EMT进程,提示ADAM 17可作为肺纤维化的标记物之一。     

表皮生长因子受体拮抗剂对气道上皮细胞生长及修复的影响

目的 探讨表皮生长因子受体拮抗剂Tyrphostin AG1478对培养的气管上皮细胞生长以及修复的影响。方法 用MTT法测定不同浓度（0.1,0.2,1.0,2.5及10μmol/L)的Tyrphostin AG1478对原代培养的大鼠气管上皮细胞增殖的影响;同时,机械刮除一定面积的上皮细胞,观察Tyrphostin AG1478. 2.5μmol/L与低血清培养基两种不同的处理24h后刮除细胞面积的变化。结果 Tyrphostin AG1478对气管上皮细胞的增殖具有浓度依赖性抑制作用;Tyrphostin AG1478 2.5μmol/L处理组与低血清培养基组比较刮除细胞面积明显增大,P＜0．001。结论 Tyrphostin AG1478所抑制原代培养的大鼠气管上皮细胞的生长,并抑制其损伤的修复。     

Survivin蛋白在卵巢上皮癌中的过度表达

目的:探讨Survivin蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及意义。方法:应用免疫组化的方法检测Survivin蛋白在正常卵巢组织、卵巢上皮性癌以及相应的转移标本中的表达,评估其与临床指标及预后的相关性。结果:Survivin蛋白在正常卵巢组织均不表达;卵巢上皮细胞癌组织中阳性表达率为64.3%(63/98),二者比较差异有统计学意义(P<0.001);在卵巢上皮性癌转移标本中Survivin蛋白阳性表达率达85.1%(57/67),与原位肿瘤相比其差异有统计学意义(P=0.004);Survivin蛋白表达与卵巢上皮性癌的预后相关(P=0.019),Survivin蛋白高表达患者预后较差。结论:Survivin基因在卵巢上皮性癌的发生发展中起一定作用。     

过表达Bcl-2肾小管上皮细胞株的建立及Bcl-2逆转录病毒对抗肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的 建立稳定过表达Bcl-2蛋白的肾小管上皮细胞,探讨Bcl-2过表达对抗大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用.方法 Bcl-2逆转录病毒感染培养肾小管上皮细胞株HK-2,经G418抗性筛选,PCR鉴定并命名为HK-2Bcl-2;原位杂交检测细胞Bcl-2 mRNA表达水平;甘油诱导大鼠急性肾功能衰竭模型,采用含重组Bcl-2浓缩逆转录病毒液,感染大鼠肾小管上皮细胞,采用免疫组织化学法检测Bcl-2蛋白表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡变化.结果 PCR和原位杂交显示G418抗性细胞克隆过表达Bcl-2;甘油注射后大鼠出现急性肾功能衰竭,Bcl-2逆转录病毒感染肾小管上皮细胞后,Bcl-2蛋白表达上调,并能显著对抗肾小管上皮细胞凋亡.结论 成功建立过表达Bcl-2蛋白的肾小管上皮细胞株HK-2Bcl-2;Bcl-2逆转录病毒显著抑制大鼠肾小管上皮细胞凋亡.     

Regulation of epithelial sodium channel a-subunit expression by adenosine receptor A2a in alveolar epithelial cells

Background The amiloride-sensitive epithelial sodium channel a-subunit (a-ENaC) is an important factor for alveolar fluid clearance during acute lung injury. The relationship between adenosine receptor A2a (A2aAR) expressed in alveolar epithelial cells and aα-ENaC is poorly understood. We targeted the A2aAR in this study to investigate its role in the expression of αa-ENaC and in acute lung injury.Methods A549 cells were incubated with different concentrations of A2aAR agonist CGS-21680 and with 100 μmol/L CGS-21680 for various times. Rats were treated with lipopolysaccharide (LPS) after CGS-21680 was injected. Animals were sacrificed and tissue was harvested for evaluation of lung injury by analysis of the lung wet-to-dry weight ratio, lung permeability and myeloperoxidase activity. RT-PCR and Western blotting were used to determine the mRNA and protein expression levels of α-ENaC in A549 cells and alveolar type II epithelial cells.Results Both mRNA and protein levels of α-ENaC were markedly higher from 4 hours to 24 hours after exposure to 100μmol/L CGS-21680. There were significant changes from 0.1 umol/L to 100 μmol/L CGS-21680, with a positive correlation between increased concentrations of CGS-21680 and expression of α-ENaC. Treatment with CGS-21680during LPS induced lung injury protected the lung and promoted α-ENaC expression in the alveolar epithelial cells.Conclusion Activation of A2aAR has a protective effect during the lung injury, which may be beneficial to the prognosis of acute lung injury.     

晶状体上皮细胞培养特征及细胞因子对其增殖影响的实验研究

目的 探讨体外培养的牛晶状体上皮细胞的培养方法及特性，并研究γ-干扰素（γ-inter-feron,γ-IFN）对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法 牛晶状体上皮细胞原代与传代培养，第2代培养细胞中添加γ-IFN，浓度10^1-10^5U/ml，通过甲基噻唑基四唑（MTT）测定法，观察γ-IFN对晶状体上皮细胞的影响。结果 γ-IFN在体外有抑制牛晶状体上皮细胞增殖作用。并以10^4U/ml最为明显。结论 γ-IFN可抑制晶状体上皮细胞增殖作用。因而能抑制后发障的形成。