免疫酶斑点法检测载脂蛋白B_(100)

<正> 载脂蛋白(apo)B_(100)是血清低密度脂蛋白的主要蛋白成份。近来研究表明,和血清总胆固醇(TC)相比,apo B_(100)含量变动可作为冠心病风险度更可靠的预测指标。目前常用于检测 apo B_(100)的方法有免疫扩散法、免疫比浊法、火箭电泳法、放射免疫分析以及ELISA。前两者抗体用量大,火箭电泳法不适合大批量标本的测定,后两者操作复杂。我们应用辣根过氧化物酶标记抗 apo B_(100)单克     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞,制备抗原,免疫BALB/c小鼠,取其牌细胞与Sp2/0-Ag14细胞融合,建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B_6杂交瘤细胞株。3B_6McAb经鉴定属于IgG_3亚类。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B_6McAb在加有豚鼠血清后可阻止HCMV感染后细胞病变的出现。3B_6 McAb经间接免疫荧光法检测中,晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原,在68例标本中有一例为阳性,阳性率为1.47％。该法方便,快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

抗人载脂蛋白B单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及应用

利用硫酸葡聚糖沉淀脂蛋白的方法从人血浆中分离出低密度脂蛋白。免疫BALB/c小鼠,进行杂交,成功地建立了三株持续稳定分泌抗apo B单克隆抗体(McAb),并进行了鉴定分析。本抗体特异性高,除与apo B起反应外,不与其它apo Lp有交叉反应。杂交瘤细胞经染色体分析,腹水行聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ig亚类鉴定,证实为单一的单克隆抗体杂交瘤细胞株。经与卫生部北京老年医学研究所生化室,河北医学院生化教研室对照及我院的临床应用,效果良好,apo B的McAb可作为临床检测血清的诊断试剂。     

抗兔出血症病毒单克隆抗体的研究

本文利用兔出血症病毒(RHDV)感染发病兔肝组织液,经高速离心提取病毒抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合,接种24孔板融合率为100％,96孔板融合率为42％,经ELISA试验测定分泌抗体阳性率分别为35％和10％,选其一株进行3次克隆并连续传代2月余,经酶联检测分泌McAb性能稳定。杂交瘤细胞培养上清液滴度为1:40～1:80,小鼠腹水单抗为1:1600～1:3200,Sp2/0细胞培养上清液,正常鼠血清对照为阴性。同时利用腹水McAb     

血清胆碱酯酶单克隆抗体的制备及临床应用

用纯化的人血清胆碱酯酶(SCHE)免疫BALB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术,经间接ELISA法筛选出8株分泌抗人SCHE单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。取其中3株高滴度、抗不同抗原决定簇的McAb,建立了快速、敏感和特异的三位抗体夹心ELISA法,本法的标准曲线用人SCHE标准品连续稀释所得,其检测灵敏度为1.25ng/ml,变异系数为6.78～9.55％。50名健康献血人员的SCHE平均含量为4.13mg/L,正常值范围为3.23～5.04mg/L。     

抗人IgA单克隆抗体的特性分析和初步应用

用常规免疫法和脾内直接注射抗原(SIgA)法免疫小鼠,平行作细胞融合实验,建立4株分泌抗人IgA McAb杂交瘤细胞株,所得McAb对人IgA有较高特异性和抗体效价,经免疫印染法表明对α重链呈特异性。用抗原竞争抑制ELISA和ELISA添加试验分析McAb的抗原结合位点,均表明McAb A4与A1b、A3b、A9针对不同的抗原位点。用于检测EB病毒VCA和EA的IgA抗体,显示满意的特异性和敏感性,这将为有关试剂的生产提供稳定的抗体来源。     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

本文报道,从肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠鼠脑中提取高滴度的血凝素(HAN),以该血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。融合率为60％和78％,阳性孔率为15％和44％。IFA筛选后共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中1A_3,2A_(11),1B_3,3D_8,2F_7,1G_4,1G_9,3G_1,3G_(11),2H_1十株细胞系用有限稀释法进行了3～4次克隆化,阳性克隆率达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养巳6个多月,仍能稳定地分泌单克隆抗体。冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。应用血凝抑制(Hl)试验证明其中9株为特异性分泌抗HFRSVHHAN McAb 的杂交瘤细胞系,1株(2A_(11))是抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系,其中(1:81920)和3G_1(1:40960)具有高滴度的血凝抑制活性。应用微量细胞培养中和试验(NT)证明其中6抗1A_8,1B_3,3D_8,1G_4,3G_1,3G_(11))具有中和活性.尤其3D_8(1:5120)和3G_1(>1:10240)有较高的中和效价。IFA测定了10株杂交瘤细胞的McAb与HFRSV陈株抗原片反应的抗体效价,其中培养上清为1:40～1:320,杂交瘤腹水为1:1万～1:8万。10种单克隆抗体与JEV、HSV-I和正常Vero-E_6细胞抗原片均无交叉反应。但均能与不同疫区、不同宿主分离的HFRSV陈株81-14A,A9和R_(22)抗原片反应,说明HFRSV血凝素McAb具     

淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用(简报)

用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得4A_8、4C_2、5C_9,6B_5四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA),测知培养上清抗体滴度为1∶16～1     

载脂蛋白B100单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和应用

利用顺序超速离心法从正常人血浆中分离低密度脂蛋白,密度为1.030～1.05g/ml,免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合试验,成功地建立了3株持续稳定地分泌载脂蛋白B100单克隆抗体(Apo B100)的杂交瘤细胞系,并进行了鉴定分析。用纯化的ApoB100抗原进行ELISA实验,显示具有特异性;特异性阻断试验表明该抗体只能被Apo B100吸收及阻断;聚丙烯酰胺盘状电泳分析,杂交瘤腹水有一特异的明显区带;此外,进行了免疫球蛋白类型鉴定及柒色体检查。经临床应用,84例正常人血清Apo B100含量为78.64±34.75mg％;50例高胸血症患者为197.8±42.8mg％,两组平均值比较,差异非常显著(P<0.01)。Apo B100McAb可作为检测血清ApoB100的诊断试剂。     

重组人碱性成纤细胞生长因子单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFGF杂交瘤细胞株,制备抗rhbFGF单克隆抗体,采用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效,Western blot鉴定抗体特异性。HRP标记McAb并建立夹心ELISA检测方法。结果获得2株(分别命名2D3、5F7)可分泌特异性McAb的强阳性细胞株,腹水抗体效价在10-5以上,IgG亚类均为IgG1,轻链为K链。Western blot证明2株McAb特异性良好,双抗体夹心ELISA检测rhbFGF最低检测限达到2 ng/ml。结论成功制备高效价的抗rhbFGF单克隆抗体,建立抗rhbFGF双抗体夹心ELISA定量检测方法。     

烛缸法建立抗牛型布氏杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞系

我们采用烛缸法,简易CO_2环境,进行了抗牛型布氏杆菌单克隆抗体杂交瘤的研究,融合六次,四次成功,融合率20.0％抗体分泌阳性率1.40％,经过筛选,得到五株抗布McAb杂交瘤细胞:84-9.6B_4,84-12.2C_6,84-12.2E_7,85-2.28D_2,85-5.1A_5冻存6～12个月,传50代以上。稳定分泌抗牛型布氏杆菌特异性单一抗体。ELISA检测,上清液10~(-3)阳性,腹水10~(-7~-9)阳性。     

重组人γ-干扰素单克隆抗体的制备与纯化研究

本文报道重组人γ-干扰素单克隆抗体的制备与纯化研究。用常规法将分泌重组人γ-干扰素(γHu2FN-γ)单克隆抗体(McAb)细胞株(A_3和B_3E_7)接种组织相容性的动物体内,诱生有活性的IFN-γ-McAb,其中一株A_3杂交瘤分泌抗Hu2FN-γ-McAb的性能非常稳定。它比B_3E_7杂交瘤分泌的McAb效价高5～10倍。为提供较高纯度的A_3、B_3E_7 McAb制品、本     

抗人巨细胞病毒单克隆抗体的建立及初步临床应用

应用人巨细胞病毒AD169株(HcMV-AD169)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得两株(1F9 2H10)分泌抗HCMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。经鉴定,两株McAb的Ig亚类为IgG1,腹水效价间接ELISA法为10~(-5)和10~(-6)。两株McAb仅与HCMV反应,而与其他疱疹病毒无反应,2H10有中和病毒作用而1F9则无。用HCMV-McAb建立抗体捕获ELISA法测定150例孕妇血清中HCMV-IgM抗体,阴阳性总符合率与间接ELISA法相比较,为99.3％(149/150)。文中尚对HCMV-McAb用途作了讨论。     

抗α-苦瓜素单克隆抗体的制备与鉴定

用α-苦瓜素(α-MMC)免疫小鼠(BALB/c),分离免疫脾细胞,采用聚乙二醇(PEG)法将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗α-MMC素的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Mabselect亲和层析纯化McAb,所得McAb经亚类鉴定为IgG2b亚类,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测,所得McAb与α-MMC特异反应,与相同来源的MAP30无交叉反应,为深入研究α-MMC的结构与功能提供了检测手段。     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅱ.酶标霍乱弧菌单克隆抗体快速检测霍乱弧菌的实验研究

本文就所获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体中有种特异性的三株(2B_1H_1C_6,2B_1H_1F_6及2B_1H_1F_3)单克隆抗体及抗霍乱弧菌多克隆抗体,作酶标抗体直接法和间接法,对霍乱弧菌模拟标本进行快速检测,探究在临床诊断应用中的价值。结果表明,酶标McAb较酶标多克隆抗体敏感,前者在10~4/ml菌时可以检出,后者要在10~4～10~6/ml菌时才能检出;同时表明酶标间接法比直法敏感,特异性实验结果显示酶标单克隆抗体对10株霍乱弧菌有很高的     

抗rHIV—env1肽单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

用rHIV-env_1肽免疫BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合,经4次克隆化获5株杂交瘤细胞系,其分泌抗体类型均属IgM。经连续传代6个月及液氮冻存9个月,分泌抗体特性无明显变化。5株McAb对rHIV-env_1肽或HIV-1均能明显地识别。用ELISA间接法测定各株McAb的相对亲和力,有3株(F7、B10、D6)McAb的50％最大结合浓度介于0.9～5μg/ml之间,用已如HIV-gp120抗体阳性血清阻断4株McAb与相应抗原的结合试验,所获结果各异。其中McAb B10与rHIV-env_1肽抗原的结合均可被4份HIV-gp120抗体阳性血清明显阻断,故初步认为B10McAb与抗HIV-gp120抗体中的保守肽段具有共同成分,抗HIV-env_1肽高度保守肽段的McAb,对艾滋病(AIDS)患者和人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的诊断具有实际应用价值。     

Annexin A2单克隆抗体制备及初步鉴定

制备Annexin A2特异性单克隆抗体(McAb),为Annexin A2的体内外功能的研究提供有力的抗体工具。以原核表达的全长p36蛋白(Annexin A2单体)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备针对Annexin A2的McAb。以间接ELISA法筛选出目的杂交瘤细胞株并进行染色体计数;分析McAb的亚型,检测其效价、浓度及亲和常数;以细胞荧光染色,Western blot和RT-PCR鉴定McAb特异性。结果得到1株能稳定分泌特异性针对p36的McAb的细胞株F8,其抗体亚类重链为IgG2a,轻链为κ型;腹水纯化后效价为1∶4 000;亲和常数为3.4×109L/mol。成功获得了能稳定分泌AnnexinA2特异性McAb的细胞株。     

肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

抗精氨酸支原体单克隆抗体的制备

本室制备了4株(A11、E5、F5、D1)抗精氨酸支原体的单克隆抗体(McAb )。用APAAP桥联酶标技术测定该抗体腹水效价为1:640～1:40 960,A11抗体的Ig类型是IgM,而E5、F5及D1均为IgG1。建立的4株能稳定分泌抗精氨酸支原体的McAb,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。该McAb用于检测细胞培养中的支原体污染,可特异性地检出精氨酸支原体,达到快速、准确的要求。     

H_2S通过PKCα及AKT信号途径抑制HepG2细胞apo(a)的表达

<正>目的:探究H2S对HepG 2细胞apo(a)表达的影响及其机制研究。方法:培养HepG 2细胞至70%密度,以NaH S(0、25、50、100、200μmol/L)培养24 h及用200μmol/L NaH S处理0、6、12、24 h;RT-PCR和免疫印迹分别检测apo(a)mRNA和蛋白,ELISA测定apo(a)分泌水平。结果:外源性H2S剂量和时间依赖性下调apo(a)表达水平及apo(a)分泌水平,以100μmol/L