中间型β地中海贫血的基因诊断

研究中间型β地中海贫血（地贫）的分子缺陷，为中间型β地中海贫血的基因诊断和产前诊断提供科学依据。方法应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交、多重等位基因特异聚合酶链反应（ＭＡＳ－ＰＣＲ）、双链ＤＮＡ循环测序和珠蛋白肽链生物合成速率测定等技术，对１４例中间型β地贫病例进行了血液学、珠蛋白基因（α、β和γ）以及珠蛋白肽链生物合成速率的分析。并对２５０例脐带血的α珠蛋白基因组织进行了鉴定。结果１４例β地贫病人中４例为β地贫杂合子复合右侧和（或）左侧不等交换型α珠蛋白基因增多（ααａｎｔｉ３．７和／或αααａｎｔｉ４．２），３例为β地贫遗传复合体复合α珠蛋白基因减少，１例为β地贫遗传复合体复合γ珠蛋白基因上游启动区－１５８ｎｔＣ→Ｔ的突变杂合子，６例的α和Ｇγ珠蛋白基因未见异常。对２５０例脐带血共５００条染色体的α珠蛋白基因的分析表明，共有８条染色体的α珠蛋白基因异常，占染色体总数的１．６％，其中—ＳＥＡ１条，α－３．７４条，αααａｎｔｉ３．７３条。结论除β地贫基因纯合子或遗传复合体复合α珠蛋白基因缺失外，β地贫基因杂合子复合α珠蛋白基因增多是导致中间型β地中海贫血的又一种重要的分子病因。     

广西β地中海贫血基因突变类型SSCP分析

目的：建立一种简便易行,准确可靠,易于推广应用的β地中海贫血基因诊断方法。同时探讨单链ＤＮＡ碱基构成与最适ＳＳＣＰ电泳温度（Ｔｓ）的相关性。方法 应用巢式ＰＣＲ方法扩增β珠蛋白基因,然后用自行改良的ＳＳＣＰ方法对ＰＣＲ扩增片段进行分析。结果１２种已知β地中海贫血突变均被检出．结论 改良的ＳＳＣＰ方法简便易行,准确可靠,适于推广应用。Ｔｓ与胞嘧啶碱基（Ｃ）成正相关,与腺漂呤碱基（Ａ）成负相关,由此得     

中国不同省区β地中海贫血基因变异的分布特征

β地中海贫血是一种具有高发病率的常染色体遗传病,临床上表现为溶血性贫血,也是我国常见的遗传性疾病之一。已证实β地中海贫血的相关基因有200多个变异位点,我国现已报道了34种突变。β地中海贫血的基因突变分布具有明显的种族特征和地域差异。广东、广西、海南、福建、台湾五个地区基因变异存在一定的相似性;云南和贵州两个地区基因变异存在一定的相似性;云南、贵州两地区和广东、广西、海南、福建、台湾五个地区之间基因变异相差较大。现就我国不同地区和群体主要基因突变类型予以综述。     

肇庆地区人群中β-地中海贫血的基因型分析

摘要：目的了解广东省肇庆地区人群中β-地中海贫血的基因类型及分布频率。方法应用聚合酶链反应技术（PCR）结合反向点杂交（RDB）技术检测β-地中海贫血基因。结果239例β-地中海贫血患者的基因突变类型包括209例杂合子占87．44％,21例双重杂合子占8．79％,9例纯合子占3．77％。其中最常见的基因突变类型为CD41_42占50．96％。其余常见的B-地中海贫血基因突变位点有,-28,A—G;IVS-2nt654,c—T;CDl7,A_T和CD71-72,＋A;BECD26（G-A）;CD27—28,＋C;分另0占14,56％、11．15％、6．51％、6．13％、4．21％和4．21％。结论肇庆地区β-地中海贫血基因最常见的突变类型为CD41-42,双重杂合子及纯合子β-地中海贫血较多见。做好婚前、产前检查和遗传咨询,对预防β-地中海贫血患儿出生极有必要。     

5个中间型β-地中海贫血家系临床结果分析

目的了解现行PCR-RDB法对中间型β-地贫基因诊断的准确性。方法对5个中间型β-地贫家系进行血常规、血红蛋白电泳和β-地贫基因的PCR-RDB法检测,并用长链PCR法检测家系1和家系2中的先证者及母亲的β-地贫基因的缺失突变。结果 5例先证者HbF含量均增高,其中2例为轻度贫血,3例为中度贫血;4例先证者PCR-RDB法结果为杂合子与其表现的临床症状不符,1例先证者PCR-RDB结果为纯合子与父母基因检测结果不符;先证者1及其母亲长链PCR法显示阴性,先证者2及其母亲长链PCR法均为东南亚(SEA)缺失型HPFH。结论若在产前诊断时仅用PCR-RDB法检测β-地贫基因,会造成缺失型β-地贫基因漏诊,引起一系列严重的社会问题。     

四川地区重型β-地中海贫血患儿及双亲基因突变的研究

目的 探讨四川地区重型β-地中海贫血患儿及其双亲突变基因类型的特点。方法 对27例β-地中海贫血患儿及双亲采用盐水渗透性试验测定红细胞渗透脆性、碱变性法测定抗碱血红蛋白(HbF)、醋酸纤维薄膜电泳比色法测定血红蛋白A2(HbA2)和氰化高铁血红蛋白法测定Hb等β-地中海贫血血液学检查。用常规方法抽提外周血白细胞DNA,多重等位基因特异聚合酶链反应(MASPCR)分析其基因类型。结果 27例重型β-地中海贫血患儿及其双亲共81例标本中检测出最常见的3种基因突变是CD17(A→T)、CD41-42(-TTCT)、IVS-Ⅱ-654(C→T),占总数的94．54％。结论 采用MASPCR法进行基因诊断,具有操作简单、快速准确,一次可检测多种突变基因型,提高了基因诊断率。     

罕见β-珠蛋白基因突变导致儿童β-地中海贫血的研究

目的：研究儿童罕见β-地中海贫血(β-地贫)的β-珠蛋白基因突变类型、血液学特征和临床表现。方法：选取广西医科大学第一附属医院2022年1—12月检测地中海贫血的病例。血细胞分析仪行血常规检测,高效液相色谱法行血红蛋白(Hb)分析;跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)法、荧光PCR熔解曲线法和DNA测序检测α-地中海贫血(α-地贫)和β-地贫基因突变。结果：共检出99例β-地贫患儿,其中2例为罕见β-珠蛋白基因突变导致β-地贫的患儿。病例1为1岁女患儿,轻度贫血,血常规示Hb 101.00 g/L,红细胞计数(RBC)5.43×10¹²/L,红细胞平均体积(MCV)56.90 fL,红细胞平均血红蛋白量(MCH)18.60 pg,红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)327.00 g/L,红细胞比容(HCT)0.31 L/L和红细胞体积分布宽度(RDW)0.19;Hb分析结果示Hb A₂5.70%,Hb F 2.60%。基因分析及DNA测序结果显示β-珠蛋白基因IVS-Ⅰ-2(T>C)突变杂合子。病例2为6岁男孩,轻度贫血,血常规示Hb...     

β—地中海贫血基因治疗研究：I.以逆转录病毒作载体将人...

We used a replication-defective retrovirus vector containing the human beta-globin gene to transfect the ecotropic packaging cell line psi-2, and then harvested the virus supernatant to infect the amphotropic packaging cell line PA317. As a result, a recombinant vector producing cell line (PIW beta) with a titer of 1.1 x 10(5) CFU/ml was isolated. By infecting Friend cells with this high titer virus vector, high efficiency gene transfer was achieved. Southern blot hybridization analysis indicated that the intact human beta-globin gene was stably integrated into the genome of the target cells. Our results provide a useful reference for further studies of gene therapy of beta-thalassemia.     

β-地中海贫血患者与其父母地中海贫血基因检测结果分析

目的 检测β-地中海贫血患者及其父母地中海贫血基因型，了解其遗传规律，提倡产前检测地中海贫血基因，同时时重症地中海贫血胎儿进行出生前缺陷干预。方法 收集29例β-地中海贫患者及其父母血样，提取DNA，采用寡核苷酸探针反向斑点杂交法时β-地中海贫血基因突变点进行分析。结果 29例β-地中海贫血患者中地贫基因型以CD41／42位点突变杂合子、CD41／42和IVSI-Ⅱ-654位点突变双重杂合子为主，其父母均为杂合子。结论 β-地中海贫血患者基因突变符合遗传规则；产前基因诊断是控制重症地中海贫血患者出生及疾病遗传的有效手段。     

β-地中海贫血基因分析与临床

目的：探讨β-地中海贫血的基因型与临床表现之间的关系。方法：小细胞低色素贫血患儿外周血用血红蛋白电泳法作临床诊断。以8种中国人最常见的β地中海贫血寡核苷酸探针阵列用荧光斑点杂交法对患儿及其父母进行基因突变分析。结果：24例患儿中重型地中海贫血14例，β^E3例，轻型7例，发现10种基因突变类型，轻型者其基因型全部为杂合子，重型1例是纯合子（17/17），13例是双重杂合子，他们的临床表现为起病早，贫血程度重，HbF显著增高，需要长期输血才能维持其生命和生长发育，B^E中1例为重型，2例为中间型，结论：β-地中海贫血的临床表现和其基因型密切相关，本地区重型β-地中海贫血以双重杂合子多见。患儿双亲均为携带者。本组病例中以CD17，IVS-Ⅱ-654，CD71-72基因突变发生率较高，β^E的患儿临床表现差异较大。     

异常HbK复合β地中海贫血家系及其风险胎儿的产前诊断

目的 了解一种由β珠蛋白肽链合成异常的HbK复合轻型β地中海贫血的家系及其风险胎儿的产前诊断.方法 用美国Helena公司全自动快速电泳分析系统进行血红蛋白电泳各区带定量分析和反向点杂交-RDB法进行β地贫基因联合检测,对家系及风险胎儿进行产前诊断.结果 先证者为异常HbK复合B珠蛋白基因ⅣS-Ⅱ-654突变双重杂合子,临床表型为中间型β地贫.父亲为β-珠蛋白基因ⅣS-Ⅱ-654突变杂合子,母亲为异常HbK杂合子,再次妊娠行产前诊断的胎儿为异常HbK杂合子,母亲和胎儿地贫基因型正常,建议保留胎儿.出生后8个月随访结果与产前诊断一致.结论 对β珠蛋白肽链合成异常和β地贫基因携带者的家庭进行遗传咨询和产前诊断,可预防中间型β地贫患儿出生.采用电泳技术联合β地贫基因检测技术,可在产前诊断中解决同类问题.     

广西地区β地中海贫血基因突变类型分析

目的探讨β地中海贫血的基因突变类型及临床表现型特点。方法采用反向斑点杂交技术检测中国人群8个常见位点和9个少见位点突变的共17种β地贫基因,分析β地贫基因型与临床表现型特点。结果β地贫1082例,检出10种突变基因类型,分别为β^0的CD41-42、CD17、CD27-28、CD71-72、CD43和β^＋的IVS-2-654、-29、-28、IVS-1-1以及类似β地贫变化异常血红蛋白E（CD26）。814例杂合子β地贫中有9种基因型,β^0杂合子637例（5种基因型）,β^＋杂合子122例（3种基因型）,血红蛋白E（HbE）55例。双重杂合子β地贫146例,β^0/β^＋双重杂合子69例（12种基因型）,β^0/β^0双重杂合子73例（7种基因型）,β^＋/β^＋双重杂合子4例（4种基因型）。纯合子β地贫82例,β^0纯合子β地贫77例（3种基因型）,β^＋纯合子5例（1种基因型）。β地贫复合HbE40例（5种基因型）。结论β地贫基因突变类型与以往报告的广西β地贫基因型一致;β地贫临床表现型复杂多变;基因检测对于地贫的临床诊断、治疗和预防有重要的意义。     

五例β地中海贫血患者的珠蛋白合成

本实验测定了三例对照及五例β地中海贫血患者的珠蛋白链合成速率比对照组的α和非α链的合成处于平衡状态。一例β~0地贫纯合子无β链的合成,γ/α值为0.34,其他四例患者的β/α值为0.39—0.70,β链的合成速率明显减慢,并证实β地贫患者的红细胞内有一个较大的游离α链池。本文对珠蛋白链合成速率测定中常出现的放射前峰进行了其生成机制的初步探讨,认为前峰可能系珠蛋白链的衍生物及白细胞合成的非珠蛋白所构成。     

用反向点杂交快速检测中国人β—地中海贫血基因突变

将一系列针对中国人18种β-地中海贫血(β-地贫)基因突变的ASO探銈固定在尼龙膜条上。用此膜条与用5′端生物素化引物扩增获得的β-珠蛋白基因片段杂交。再用酶标抗生物素蛋白及底物系统检出。用本法检测已知的18种中国人β-地贫突变样品,可准确识别这些突变的杂合子.纯合子和双重杂合子或正常DNA。应用此项技术经一二次杂交即可确定β-地贫基因型。这一技术不依赖同位素,操作简便,检测范围广。可望在我国β-地贫的大样本人群基因调查和临床普及产前诊断上起推动作用。     

河南省β地中海贫血基因突变类型的检验研究

目的 :探讨河南省 β地中海贫血基因突变类型及其基因诊断方法。 方法 :本研究综合应用突变引物延伸扩增 (MOEA)及巢式PCR等新技术 ,设计了针对中国人 β地贫最常见的 5种基因突变的检测方法。 结果 :完成了河南籍 8个家系成员的基因筛查诊断 ,14条 β地贫阳性染色体的检测结果为 :IVS Ⅱ 65 4(C→T) 5条 ,CD41 42 ( TTCT) 3条 ,TATAbox 2 8/ 2 92条 ,CD17(A→T) 2条 ,另 2条染色体突变性质不清。检出率达 85 7%。对 1例高危胎儿作了产前诊断 ,基因型分另为CD41 42 /A ,建议继续妊娠 ,经产后取材验证 ,结果与产前诊断一致。结论 :提示河南省 β地贫基因突变的种类与频率和我国南方诸省基本相同。应用本文设计的方法可对 90 %以上中国人 β地贫快速作出基因诊断和产前诊断 ,具有重要的临床意义     

不同基因突变类型β地中海贫血血液学特征比较

目的比较分析不同基因突变类型β地中海贫血（简称β地贫）的血液学特征,同时探讨本地区β地贫基因突变类型及发生频率。方法应用反向斑点杂交技术检测β地贫因基突变,用Sysmex XE2100血液分析仪测定病人全血获取红细胞的平均红细胞容积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞分布宽度（RDW）血液学特征,应用SPSS统计软件对实验数据进行统计分析。结果204例β地贫各型基因突变频率排列前5位依次为：CD41／42有96例占47．1％、IVS—nt654有45例占22．1％、CD17有21例占10．3％、TATAnt-28有21例占10．3％、CD71／72有6例占3．0％;β地贫4个血液学指标中MCV和MCV值较正常对照组明显降低（P〈0．01）,且各类型β地贫血液学特征亦存在差异,β^0地贫突变型的MCV和MCH明显低于β^＋地贫突变型的MCV和MCH。结论本地区β地贫基因突变类型及频率与广东和全国非常接近;β地贫血液学特征符合小细胞低色素性贫血,MCV和MCH的测定可作为β地贫的临床初筛依据。     

广西地区β－地中海贫血突变基因的分析

应用聚合酶链反应结合寡核苷酸探针斑点杂交技术，和聚合酶链反应结合双脱氧核苷酸终止法ＤＮＡ测序技术，测定了广西地区５６例β－地中海贫血患者１０５条染色体的β基因突变类型及其频率。结果共检测出９种突变类型，其中ＩＶＳ－Ⅱ－５（Ｇ→Ｃ）是一种新发现的突变类型。如果将广西常见的ＨｂＥ和另一种少见的ＣＯＤＯＮ１４－１５（＋Ｇ）的突变类型计算在内的话，到目前为止，广西共发现有１１种β－地贫穷变类型。研究结果对在广西和邻近地区开展β－地贫的基因分析和产前诊断有一定的参考价值。     

β-地中海贫血的基因治疗研究

地中海贫血是最常见的单基因遗传病,它是由于珠蛋白肽链合成量之间不平衡导致,所以纠正珠蛋白肽链失衡成为地中海贫血治疗研究的关键。临床常采用输血并配合除铁剂,脾摘除,造血干/祖细胞移植等方法治疗地中海贫血,尽管同种异基因移植和姑息治疗已经取得了显著的进步,由于很多因素的限制,大部分患者依然受到死亡的威胁。本文对地中海贫血基因治疗的研究进展做一综述。     

β地中海贫血基因突变类型的研究及产前诊断

目的 开展β地中海贫血的基因分析及产前基因诊断。方法应用PCR—RDB技术，完成了54例β地贫患者及双亲共216条染色体的基因突变类型及频率数据。并进行8个家庭的8例β地贫高风险胎儿的产前诊断。结果 8例被检胎儿中4例为一种突变类型的杂合子，2例为双重杂合子，2例为正常胎儿。有6例出生后基因分析验证结果与产前诊断完全一致。结论显示，进行产前诊断能较准确地控制重型β地贫患儿出生，对实行优生具有重要意义。