基因FoxM1介导DFOG抑制人乳腺癌细胞生长和诱导凋亡的研究

目的探讨7-二氟甲氧基-5,4′-二-正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)对人乳腺癌细胞生长、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞。平皿集落形成法测定DFOG对乳腺癌细胞集落形成率的影响;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及分析细胞周期分布;Western blotting分析转录因子FoxM1及其下游蛋白CDK1、cyclin B、survivin、p27kip1表达。结果 DFOG以浓度依赖的方式抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞生长和诱导凋亡,并且伴随G2/M期细胞周期阻滞。DFOG能下调FoxM1及其下游蛋白CDK1、cyclin B、survivin表达,上调p27kip1蛋白表达。通过siRNA干扰技术下调FoxM1表达能增强DFOG对乳腺癌细胞的诱导凋亡作用。结论 DFOG显著抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞生长和诱导凋亡,下调FoxM1表达可能是其作用机制之一。     

二甲双胍联合compound C对小鼠4T1乳腺癌细胞增殖和细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨二甲双胍及单磷酸腺苷活化蛋白激酶抑制剂（compound C）对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖及细胞周期蛋白D1（cyclin D1）表达的影响。方法 选取小鼠乳腺癌4T1细胞体外培养,分别以完全培养基为空白组,4T1细胞为对照组,在细胞培养中分别加入浓度为2.5、5、10、20、40 mmol/L的二甲双胍为实验组1-5,以10 mmol/L的二甲双胍联合20μmol/Lcompound C的为实验组6,20μmol/L compound C的为实验组7。检测各组细胞株增殖情况及细胞内cyclin D1的表达。结果 二甲双胍作用24、48 h时,实验组1与对照组存活率无显著差异（P〉0.05）,实验组2-5细胞存活率显著低于对照组（P〈0.05）;72 h时,实验组1-5存活率均显著低于对照组（P〈0.05）;实验组3、4、5在24、48、72 h时,各组cyclin D1的相对表达量均显著低于对照组（P〈0.05）;各组48 h时cyclin D1的相对表达量显著低于24 h时（P〈0.05）;72 h时cyclin D1的相对表达量显著低于各组48 h时（P〈0.05）;实验组3 cyclin D1的相对表达量显著低于对照组（P〈0.05）,实验组6、7在各时间点与对照组比较无显著差异（P〉0.05）。结论 二甲双胍能抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖,而compound C对其有拮抗作用;二甲双胍对小鼠乳腺癌4T1细胞cyclin D1蛋白表达有下调作用。     

IL-13等因素对肾小球系膜细胞表达细胞周期调节负控蛋白p27的影响

目的 :探讨IL 13、ET 1、甲基强的松龙及肝素钠对肾小球系膜细胞表达细胞周期负控蛋白p2 7的变化。方法 :不同浓度IL 13 (10ng/mL、10 0ng/mL)、ET 1(10 7mol/L)、甲基强的松龙 0 5μg/mL、肝素钠 2 0 0mg/L和10 0 μg/L ,作用于培养的系膜细胞。流式细胞仪检测p2 7表达水平。结果 :IL 13 10ng/mL浓度组和 10 0ng/mL浓度组p2 7表达为 46 74± 3 2 5和 2 3 8± 2 56,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 0 1,P <0 0 5) ,两不同浓度组之间差异有显著意义 (P <0 0 1)。ET 1刺激 14h和 18h后p2 7的表达分别为 14 76± 1 49和 12 18± 1 3 0 ,与对照组比较差异均有显著意义 (P <0 0 5,P <0 0 5)。甲基强的松龙 48h及 72h后p2 7表达为 9 9± 1 0 1和 9 12±0 93 ,与对照组比较明显降低 ,P <0 0 0 1。肝素钠 10 0mg/L浓度组和 2 0 0mg/L浓度组p2 7的表达分别为 2 6 94±1 2 3和 2 8 0 4± 0 99,较对照组明显升高 (P <0 0 5) ,不同浓度组间比较无明显差异。结论 :肾小球系膜细胞受不同因素作用后细胞周期调节负控蛋白p2 7表达水平不同。p2 7在调节系膜细胞增殖过程中起重要作用     

细胞周期蛋白依赖激酶对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨细胞周期蛋白依赖激酶（cyclin dependent kinase,CDK）对原发性肝癌（肝癌）细胞增殖及凋亡的影响。方法：对体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721分别予浓度为0μmol／L、2μmol／L、4μmol／L、8μmol／L、16μmol／L、32μmol／LCDK抑制剂rosco-vitine干预72h,分别通过倒置显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪、逆转录PCR法观察SMMC-7721细胞的生长、增殖,细胞周期时相的分布、凋亡以及CDK2、半胱氨酸蛋白酶-3和BCL-2mRNA的表达。结果：予roscovitine干预72h后,光镜下可见随着roscovitine浓度的增加,部分细胞核固缩、胞体折光性减弱、胞浆内可见有颗粒和核碎片形成,其中以32μmol／L组的改变最为明显。四甲基偶氮唑蓝法结果显示,不同浓度的roscovitine对细胞生长均有一定的抑制作用,roscovitine对细胞的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪检测发现,经roscovitine干预后肝癌细胞G0期、G1期及凋亡细胞的比例增加。逆转录PCR发现,随着roscovitine浓度的增加．CDK2mRNA及凋亡相关基因BCL-2mRNA水平降低,半胱氨酸蛋白酶-3mRNA表达升高。结论：CDK表达降低可抑制增殖期肝癌细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,凋亡机制可能与BCL-2、半胱氨酸蛋白酶．3的表达改变有关。CDK在肝癌细胞增殖及凋亡中起着重要作用。     

丙戊酸钠对Kasumi-1细胞细胞周期的阻滞作用及其机制探讨

目的 研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)对白血病细胞系Kasnmi-1细胞周期的影响并探讨其分子机制.方法 不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间,碘化丙锭染色流式细胞术分析细胞周期的变化.RT-PCR及Western blot方法 分析细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21 WAF1/CIP mRNA或蛋白水平变化.结果 ①VPA抑制Kasumi-1细胞的细胞周期,使其阻滞于G0/G1期.3 mmol/L VPA处理3 d,G0/G1期细胞由(50.7±2.8)%上升至(80.7±1.7)%.②以3 mmol/LVPA处理Kasumi-1细胞不同时间,与对照组比较,3 mmol/L VPA组cyclin D1 mRNA表达水平下调;以不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞3 d,结果 发现随着VPA药物浓度增加cyclin D1 mRNA表达水平降低,呈现剂量依赖性.③VPA诱导p21WAF1/CIP mRNA表达明显增加,呈现时间及剂量依赖性.不同浓度VPA处理细胞3 d时,随着用药浓度的增加,p21WF1/CIP蛋白相对表达水平增加,3 mmol/L VPA处理细胞2 d与0 d比较,p21 WAF1/CIP蛋白相对表达水平明显增加(2.498±0.240对0).结论 VPA可以通过对cyclin D1及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21WAF1/CIP调节使Kasumi-1细胞周期阻滞于G0/G1期.     

p27^kip1、Skp2与肿瘤

细胞周期的运行受多种因素所调控。有两个主要调控点 :一个处于G1/S转折点 ,是控制细胞进入S期的控制点(G1期检测点 ) ,另一个处于G2 /M转折点 ,是控制细胞进入M期的控制点 (G2 期检测点 )。参与细胞周期调控的主要因子有 :周期蛋白 (cyclin) ,周期蛋白依赖性激酶 (cyclindepen dentkinase,CDK ) ,周期蛋白依赖性激酶抑制剂 (CKI)。CDK与cyclin CDK复合物正性催化细胞周期过程 ,而CKI通过与cyclin ,CDK或cyclin CDK复合物结合抑制并阻断细胞周期进程。p2 7kip1就是一种新发现的CKI ,p2 7kip1活性的改变影响细胞周期进程 ,进而…     

细胞周期因子对乳腺癌生物学行为和预后判定的影响

目的:研究乳腺癌组织中细胞周期蛋白D2、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependentkinase4,CDK4),探讨它们与P27kip1蛋白表达、与临床病理指标的关系及其预后意义。方法:对1996-01/2000-12在河北工程学院医学院病理教研室进行病理检查的乳腺癌标本用免疫组化S-P法,检测96例乳腺癌,18例癌旁正常乳腺组织石蜡切片中CyclinD2和CDK4的表达,比较它们与P27kip1蛋白表达,与临床病理学指标之间的关系。结果:①96例乳腺癌组织中CyclinD2,CDK4和P27kip1的表达率分别为42%,54%和38%,与正常乳腺组织相比差异有显著性意义(P<0.001)。②CyclinD2和CDK4的表达与乳腺癌的组织学分级,核分裂数有关(P<0.001),和局部复发有关(P<0.05),而与患者年龄,肿瘤大小、组织类型无关(P>0.05),CDK4的表达与乳腺癌的淋巴结转移,雌激素受体状态也有密切关系(P<0.01)。③P27kip1的表达缺失,与肿瘤大小、组织学分级,核分裂数,有无淋巴结转移以及局部复发均有关系(P<0.05),而且P27kip1的表达与CyclinD2和CDK4的表达呈显著负相关(P<0.01)。结论:CyclinD2和CDK4的表达与乳腺癌的发生、发展有关,而P27kip1的表达缺失和CDK4的异常表达与乳腺癌的侵袭、转移及复发有关,可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的重要指标。     

脑缺血再灌注后皮质区和纹状体区细胞周期蛋白D1和周期蛋白依赖性蛋白激酶4基国表达对神经细胞凋亡的影响

背景脑缺血再灌注后细胞周期蛋白的表达以其在凋亡机制中的作用为主,部分细胞凋亡是由于细胞增殖周期的异常调控所致. 目的研究脑缺血再灌注后细胞周期蛋白 D1( cyclin D1)和周期蛋白依赖性蛋白激酶 4( cyclin dependent kinase,CDK4)基因表达及其与神经细胞凋亡的关系. 设计随机对照的实验研究. 地点和材料本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成.成年健康雌性 SD大鼠 36只,体质量 230～ 270 g,清洁级,由中国科学院上海实验动物中心提供.将动物随机分为假手术组 4只和实验组 32只,实验组再进一步分为缺血 1.5 h再灌注 2, 6, 12 h, 1, 2, 3, 7和 14 d亚组,每组 4只. 方法全部实验均由本文作者完成.具体方法应用线栓法经左侧颈外-内动脉插线建立 SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,原位末端标记法检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的变化,原位杂交技术检测 cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA的表达. 结果脑缺血再灌注 2 h脑组织即开始出现凋亡神经细胞,并于 1 d和 2 d分别在皮质区和纹状体区达高峰(分别为 72.80± 4.66和 96.75 ± 4.37).神经细胞 cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA的表达分别于再灌注 2 h和 6 h开始逐渐增强,并于 12 h和 1 d分别在皮质区和纹状体区达高峰(皮质区分别为 94.50± 2.75和 85.75± 3.73,纹状体区分别为 88.25± 5.06和 89.80± 2.93),至再灌注 14 d降至假手术组水平. cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA的表达与凋亡细胞的区域基本相同. 结论脑缺血再灌注后皮层区较纹状体区对缺血更为敏感, cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA表达可能是诱导细胞凋亡的重要因素之一.     

地西他滨对白血病Kasumi-1细胞的毒性作用及其机制研究

目的:探讨地西他滨对白血病Kasumi-1细胞的毒性作用及其机制。方法:应用CCK-8法检测0.5～100μmol/L地西他滨作用Kasumi-1细胞24、48、72 h后的细胞存活率,An-nexinⅤ-FITC/PI双染色法检测0.5～20μmol/L地西他滨处理Kasumi-1细胞48 h后的细胞凋亡率,流式细胞碘化丙啶单染色法观察G0/G1期、S期、G2/M期Kasumi-1细胞比例;逆转录PCR法检测p21WAF1/CIP1基因表达水平的变化。结果:0.5～100μmol/L地西他滨均可抑制Kasumi-1细胞增殖,并呈现剂量依赖性与时间依赖性,作用24、48、72 h的IC50浓度分别为6.92、5.03、4.47μmol/L;0.5～20μmol/L地西他滨诱导Kasumi-1细胞凋亡水平较低,但能以剂量依赖的方式阻滞Kasumi-1细胞G2/M期,上调p21WAF1/CIP1基因表达。结论:地西他滨对Kasumi-1细胞具有毒性作用,其机制可能与上调p21WAF1/CIP1表达以及阻滞细胞周期有关。     

灯盏花乙素对急性髓系白血病细胞增殖的影响及作用机制研究

目的:探讨灯盏花乙素(SCU)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、周期与凋亡的影响及相关分子机制。方法:体外培养人AML HL-60细胞，分别以0、2、4、8、16、32、64μmol/L浓度的SCU处理HL-60细胞，采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。以4、8、16μmol/L浓度的SCU处理HL-60细胞，并设置阴性对照组(NC组)，采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡，Western blot法检测细胞周期、凋亡相关蛋白及JAK2/STAT3通路相关蛋白的表达。结果:SCU对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用，且增殖抑制作用呈浓度(r=0.958)、时间(r=0.971)依赖性。与NC组比较，SCU 4、8、16μmol/L组HL-60细胞G0/G1期比例、细胞凋亡率均显著升高，S期比例均显著降低(P <0.05); p21、p53、caspase-3、Bax蛋白相对表达量均显著升高，CDK2、cyclin E、Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低(P <0.05),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均显著降低(P <0.05)，且上述...     

B淋巴增殖性疾病的SOX11、cyclin D1、cyclin D2和cyclin D3的表达研究

目的 探讨各B淋巴增殖性疾病(B-LPD)中SOX11、cyclin D1、cyclin D2和cyclin D3表达的差异和相关性,以及与慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者临床特征的关系.方法 采用实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测154例B-LPD患者与12例健康对照SOX11、cyclin D1、cyc...     

肝癌中cyclin D1和cyclin E的表达及其意义

目的 :研究cyclinD1和cyclinE蛋白在肝癌中的表达和意义。方法 :用免疫组化方法检测肝癌组织 5 0例 ,癌旁组织 2 2例 ,正常肝组织 9例中cyclinD1和cyclinE蛋白的表达。结果 :cyclinD1和cyclinE只在肝癌中有过度表达 ,其过度表达与肿瘤分化程度和有无肝内转移相关。结论 :本试验表明 :cyclinD1和cyclinE过度表达可反应肝癌的侵袭力 ,它们与肝癌的发生发展密切相关。     

CD174、细胞周期素D1、E在消化道肿瘤中的表达

目的观察CDl74、cyclin D1和cyclinE在消化道肿瘤组织的表达水平,以及三者之间的相关性,初步探讨CDl74对消化道肿瘤诊断和预后判定的价值。方法用流式细胞仪分别检测消化道肿瘤组织及相应的远端组织中CDl74、cyclinD1和cyclinE蛋白质的表达。用免疫组化染色了解消化道组织中CDl74的表达和分布状况。结果CDl74在消化道肿瘤组织的表达水平明显低于瘤旁正常组织（P〈0．05）,cyclinD1和cyclinE表达水平则高于瘤旁正常组织（P〈0．05）。CDl74、cyclinD1和cyclinE在不同性别人群中的表达无统计学意义（P〉0．05）;cyclinE的表达水平在肿瘤长径〉3cm组明显高于肿瘤长径≤3cm组（P〈0．05）;CDl74在腺癌中表达水平高于鳞癌（P〈0．05）;CDl74和cyclinE蛋白质的表达水平在TNM分期为Ⅲ一Ⅳ期肿瘤组织中低于I～Ⅱ期肿瘤（P〈0．05）,而cyclinD1表达水平则相反（P〈0．05）。肿瘤组织中CDl74与cyclinD1和cyclinE蛋白质呈负相关（r=一0．61、r=-0．57）。免疫组化染色亦显示,肿瘤组织中CDl74阳性细胞率明显低于瘤旁组织。结论CDl74在消化道肿瘤组织的表达水平明显降低,且与肿瘤的分化、浸润和转移相关。CDl74与cyclinD1、cyclinE的联合检测有助于消化道肿瘤的诊断和预后的判断。     

细胞周期素B1在大肠癌中的表达及意义

目的 为探讨细胞周期素B1（cyclin B1）在大肠癌中的表达、临床意义.方法 收集80例手术切除的大肠癌标本,同时取距癌灶5cm以外的癌旁组织及10cm以外的正常组织,采用免疫组化SP法检测癌组织、癌旁组织及正常组织中cyclinB1的表达.结果 80例标本癌组织中cyclin B1过表达率为55.0%;癌旁组织为2.5%;正常大肠组织中未见cyclin B1过表达,癌组织中cyclin B1的过表达率与正常组织及癌旁组织有显著性差异（P＜0.01）.cyclin B1的过表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型之间存在显著性差异（P＜0.05）.结论 cyclin B1的过表达可能是大肠癌发生的早期事件,针对抑制cyclin B1表达的措施可能成为治疗早期大肠癌的重要手段之一.     

p16和cyclin D_1蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其意义

目的　探讨鼻咽癌组织中p16和cyclinD1蛋白的表达及其意义。方法　应用免疫组化S P法检测p16和cyclinD1蛋白在 85例鼻咽癌和 18例鼻咽部炎性黏膜组织中的表达。结果　 85例鼻咽癌中p16的表达率为 41 2 %(35 / 85 ) ;cyclinD1的过表达率为 6 3 5 % (5 4/ 85 )。 18例鼻咽部炎性黏膜中 ,p16的表达率为 10 0 % ;cyclinD1的表达全部为阴性。高分化鳞癌p16的表达率为 75 0 % (6 / 8) ,低分化鳞癌为 38 2 % (2 6 / 6 8) ,两者差异显著 (P <0 0 5 )。有淋巴结转移的p16表达率为 2 8 6 % (14/ 49) ,无淋巴结转移的为 5 8 3% (2 1/ 36 ) ,两者差异非常显著 (P <0 0 1)。 35例p16 ( )的癌组织中有 2 8例cyclinD1呈过表达 ;5 0例p16 (- )的癌组织中有 2 6例cyclinD1呈过表达。结论　p16的缺失表达和cyclinD1的过表达两者可能单独或共同参与了鼻咽癌的发生发展过程。p16的缺失可能还与鼻咽癌细胞的分化、转移有关     

Primary hyperparathyroidism caused by parathyroid-targeted overexpression of cyclin D1 in transgenic mice

The relationship between abnormal cell proliferation and aberrant control of hormonal secretion is a fundamental and poorly understood issue in endocrine cell neoplasia. Transgenic mice with parathyroid-targeted overexpression of the cyclin D1 oncogene, modeling a gene rearrangement found in human tumors, were created to determine whether a primary defect in this cell-cycle regulator can cause an abnormal relationship between serum calcium and parathyroid hormone response, as is typical of human primary hyperparathyroidism. We also sought to develop an animal model of hyperparathyroidism and to examine directly cyclin D1's role in parathyroid tumorigenesis. Parathyroid hormone gene regulatory region--cyclin D1 (PTH--cyclin D1) mice not only developed abnormal parathyroid cell proliferation, but also developed chronic biochemical hyperparathyroidism with characteristic abnormalities in bone and, notably, a shift in the relationship between serum calcium and PTH. Thus, this animal model of human primary hyperparathyroidism provides direct experimental evidence that overexpression of the cyclin D1 oncogene can drive excessive parathyroid cell proliferation and that this proliferative defect need not occur solely as a downstream consequence of a defect in parathyroid hormone secretory control by serum calcium, as had been hypothesized. Instead, primary deregulation of cell-growth pathways can cause both the hypercellularity and abnormal control of hormonal secretion that are almost inevitably linked together in this common disorder.     

肿瘤标志物Cyclin D1与肿瘤预后相关性

Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１是一种重要的细胞增殖因子，是近几年才被确定的原癌基因，它通过促进Ｇ１－Ｓ期的转变而促进细胞周期。多种研究表明Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因扩增和（或）过表达与肿瘤发生、进展及预后有关。本文就Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１与肿瘤预后相关性作一文献回顾。     

急性白血病患者细胞周期蛋白B1表达的临床意义

目的　探讨细胞周期蛋白B1(cyclinB1)在白血病发生、发展中的作用及对成人急性白血病 (AL)预后的判断价值。方法　对 85例成人AL初治患者 ,并对其中 4 7例达到缓解及 18例复发的患者、10例持续完全缓解 (CCR)期的AL患者采用流式细胞术检测cyclinB1、p2 1cip1蛋白表达水平和细胞周期分布 ;采用半定量RT PCR检测cyclinB1、p2 1cip1、增殖细胞核抗原 (PCNA)mRNA水平。结果　 85例初治AL患者全周期或G1/S期cyclinB1蛋白表达水平明显高于正常对照 (P <0 .0 0 1) ;缓解患者cy clinB1蛋白表达与正常对照组比较差异无统计学意义 (P =0 .2 1) ,复发患者cyclinB1蛋白表达高于正常对照 (P <0 .0 5 ) ,但低于AL初治组 (P <0 .0 1) ,CCR组cyclinB1与正常对照组比较差异无显著性 (P=0 .6 94 ) ;初治AL患者的cyclinB1表达率高于正常对照组 (P <0 .0 0 1) ;cyclinB1蛋白高表达者均有G1期异常高表达 ;cyclinB1与p2 1的蛋白表达呈负相关 ;cyclinB1蛋白表达与其mRNA水平呈正相关 ;cy clinB1表达与细胞增殖指数 (PI)及PCNA表达水平呈正相关 ;cyclinB1表达水平高的患者有较高的治疗缓解率 (P <0 .0 1) ,但有较高的复发率 (P <0 .0 1) ,cyclinB1高表达者有较高的生存率。结论　cyclinB1在成人AL患者中有过度表达和周期分布 ,其