乳腺癌耐药性与MAPK信号转导关系的研究

目的探讨乳腺癌细胞阿霉素耐药性与p38MAPK通路的关系。方法用流式细胞术检测SB203580(15μmol/L)干预后细胞的凋亡、细胞内阿霉素浓度的改变、细胞对阿霉素敏感性。结果经SB203580(15μmol/L)干预24h和48h后,流式细胞仪检测见MCF-7/Adr细胞发生显著凋亡,凋亡率分别为25.36±1.17%和38.21±1.25%,并呈一定时间依赖性(P<0.05);显著高于空白对照组及DMSO组MCF-7/Adr细胞的0.65±0.21%和0.81±0.16%(P<0.01);细胞内阿霉素浓度亦显著增加,平均荧光强度分别为32.45±2.36及41.66±3.12,均显著高于空白对照组及DMSO组的14.17±1.45及16.28±0.63(P<0.01);另外,SB203580干预48h使MCF-7/Adr细胞内阿霉素浓度增加的作用强于24h组,两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论提示p38MAPK通路与乳腺癌细胞阿霉素耐药密切相关。     

EGR-1的表达对乳腺癌细胞株耐药的调节作用

目的 探讨转录因子EGR-1对人乳腺癌阿霉素耐药细胞MCF-7/Adr耐药的调节作用.方法 采用脂质体转染法将EGR-1质粒转入细胞,Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术、MTT法和Western印迹分别检测MCF-7/Adr细胞早晚期凋亡、细胞增殖活性.结果 细胞稳定转染EGR-1质粒后,与阴性对照组和空载体组比较,细胞凋亡率(41.43±2.34)%高于阴性对照组(4.32±0.87)%及pcDNA3.1空载体转染(5.28±1.46)%(P＜0.05);在一定阿霉素药物浓度范围内,MCF-7/Adr细胞存活率抑制率明显下降(P＜0.05);Western印迹检测见MCF-7/Adr-EGR-1细胞中Caspase-3蛋白均较转染前明显增加,而p-gp蛋白质水平较转染前明显下降(P＜0.05).结论 上调EGR-1表达能有效逆转乳腺癌细胞阿霉素耐药性,其作用机制可能与EGR-1上调耐药细胞中Caspase-3的水平、诱导细胞发生凋亡相关.     

Targeting of p38 Mitogen-activated Protein Kinases to Early Growth Response gene 1 （EGR-1） in the Human Paclitaxel-resistance Ovarian Carcinoma Cells

To investigate the relationship between the expression of early growth response gene 1 (EGR-1) and p38MAPK pathway in the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cells, the effect of p38MAPK inhibitor SB203580 on cell apoptosis was examined by using Hoechst 33258 staining. The intracellular Rh123 (Rhodamine 123) accumulation was detected by the flow cytometry (FCM). The 50% inhibition concentration (IC50) of paclitaxel for A2780/Taxol cells was determined by MTT method. Electrophoretic motility shift assay (EMSA) was employed to examine the EGR-1DNA binding activity. MDR1 and EGR-1 mRNA were assessed by RT-PCR. The expressed of p-gp, phos- phorylated p53 and p38 were detected by Western blotting. SB203580 could remarkably promote the apoptosis of A2780/Taxol cells, and the cell apoptosis was in a time-dependent manner. Cellular Rh123 accumulation was increased, and the IC50 of paclitaxel for A2780/Taxol cells was decreased significantly. A2780/Taxol cell line after SB203580 treatment was shown to have a significantly higher level of EGR-1 DNA binding activity. SB203580 down-regulated the activity of p38MAPK pathway, but up-regulated EGR-1 expression. SB203580 significantly increased the level of cellular phosphorylated p53 protein, but decreased the p-gp protein level and MDR1 mRNA level in A2780/Taxol cells. There existed a close relationship between p38MAPK pathway and the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cells. The expression of EGR-1 mediated by p38MAPK pathway plays a critical role in paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cells.     

EGR-1在乳腺癌细胞株中的表达

目的检测转录因子EGR-1在人乳腺癌细胞的表达情况。方法采用脂质体法将EGR-1质粒转染入人乳腺癌细胞株,RT—PCR检测EGR-1 mRNA表达水平。结果细胞稳定转染EGR-1质粒后,与阴性对照组和空载体组比较,RT—PCR检测见MCF-7／Adr—EGR-1细胞中EGR-1 mRNA较转染前明显增加。结论转染EGR-1基因后,EGR-1 mRNA的表达水平明显提高。     

MAPK信号通路与乳腺癌的研究进展

MAPK位于胞浆,受到刺激后磷酸化进入核内,激活靶基因。主要有ERK1/2、JNK/SAPK和P38三条途径,MPKA信号转导通路与乳腺癌的关系密切,对MAPK信号转导途径的研究,有望找到治疗乳腺癌的新靶点。     

p38 MAPK信号转导通路在骨关节炎中的相关研究

<正>骨关节炎（osteoarthritis,OA）又称骨关节病、骨性关节炎,是机械性和生物性因素的共同作用,破坏关节软骨细胞、细胞外基质和软骨下骨正常合成与降解偶联的结果[1]。根据流行病学研究,我国60岁以上的人群患病率可达50%,75岁以上的人群高达     

氯胺酮通过p38 MAPK信号通路对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨氯胺酮通过p38 MAPK信号通路对乳腺癌细胞增殖、侵袭与迁移的影响.方法:以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,根据细胞培养基添加氯胺酮和p38 MAPK抑制剂(SB203580)分为4组:control组(无氯胺酮和SB203580)、氯胺酮组(10μg/mL)、SB203580组(20μmol/L...     

p38 MAPK信号传导通路与胚泡植入的研究进展

胚泡植入是生殖过程的关键环节，是指在特定的植入窗口期，胚泡定位、附着并侵入子宫内膜的全过程，也是人类和哺乳动物妊娠早期母体和胚胎建立密切的营养和信息交流的关键环节。关于胚泡植入机制的研究不仅是生殖生物学中的一个极其重要的理论问题，而且是生育、不育和计划生育中的一个重要应用课题。国内外许多专家学者对此进行了广泛深入的研究。     

MAPK信号通路在乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是常见恶性肿瘤中女性高发的疾病,雌激素在乳腺肿瘤的发生发展中扮演着重要的角色。丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）信号转导通路是雌激素受体介导的通路中的一条重要的参与基因组效应和非基因组效应的信号通路。近年来,存在很多有关MAPK信号通路调控乳腺细胞异常增殖的研究,本文从乳腺癌发病率、危险因素、雌激素对MAPK信号通路的调节和MAPK信号通路在乳腺癌中的作用等角度进行综述,以推动乳腺癌的研究。     

p38 MAPK 信号转导通路研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)是细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，它存在于大多数细胞内，是真核细胞转导细胞外信号到细胞内引起细胞反应的一类重要信号系统。它通过影响基因的转录和调控，进而影响细胞的生物学行为，如细胞增殖、分化、转化及凋亡等。研究发现，其中的p38 MAPK信号通路参与了细胞的生长发育及细胞问功能同步等多种生理过程，并与炎症、应激反应的调控密切相关，被认为是细胞信息传递的交汇点和共同通路。     

自噬在槲皮素诱导人乳腺癌MCF-7细胞死亡中的作用

目的研究自噬在槲皮素诱导的人乳腺癌MCF-7细胞死亡中的作用。方法用不同浓度的槲皮素处理人乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法测定槲皮素对MCF-7细胞增殖的抑制作用;应用MDC荧光染色观察给药后MCF-7细胞的自噬征象;应用JC-1荧光染色观察给药后MCF-7细胞的线粒体变化;检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率以观察用自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）阻断自噬后槲皮素抑瘤作用的变化。结果槲皮素对MCF-7细胞增长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;槲皮素给药后早期可诱导MCF-7细胞发生自噬及线粒体变化;在槲皮素给药前和给药后阻断自噬,槲皮素对MCF-7细胞的细胞毒性作用均增强。结论槲皮素能明显抑制MCF-7细胞的生长,并诱导其发生自噬,伴随线粒体发生变化。由槲皮素引发的自噬能够明显保护MCF-7细胞,减少因槲皮素导致的细胞死亡。     

E1A基因对人乳腺癌细胞化疗药物敏感性的影响及机制探讨

目的 探讨E1A基因对人乳腺癌细胞化疗药物的增敏作用及相关机制.方法 通过PEI-Fe3O4纳米粒介导将E1A基因导入人乳腺癌细胞系MCF-7,经G418筛选获得稳定表达E1A的转染细胞(MCF-7-E1A).用不同浓度的表阿霉素、泰素帝及5-氟尿嘧啶等化疗药物处理细胞,通过MTT法测绘细胞存活曲线,观察E1A基因对表阿霉素、泰素帝、和5-氟尿嘧啶等化疗药物敏感性的影响;用同浓度的泰素帝和5-氟尿嘧啶处理细胞,观察E1A基因在不同时间对癌细胞存活率的影响.结果 转染E1A基因的人乳腺癌细胞(MCF-7-E1A)对表阿霉素和泰素帝的敏感性显著增加,与MCF-7和MCF-7-vect细胞系比较,MCF-7-E1A细胞对表阿霉素和泰素帝的敏感性增加11倍和15倍;对5-氟尿嘧啶的增敏作用不明显.结论 E1A基因能显著增加人乳腺癌细胞对表阿霉素和泰素帝等化疗药物的敏感性.     

cyclin D1和p53基因在早期食管癌中的表达

目的探讨cyclinD1和p53基因在食管癌发生中的作用及其相关性。方法应用免疫组织化学s—P法检测cyclinD1和p53基因在19例食管早期癌、20例异型增生以及10例正常食管黏膜标本中的表述。结果cyclinD1和p53基因在早期癌中的表达均高于正常食管黏膜（P〈0．05）。结论cyclinD1和p53基因与食管癌的发生有关,他们的变化是食管癌发生中的早期事件。     

硫氧还蛋白促使乳腺癌MCF-7细胞进入S期

目的 研究硫氧还蛋白1(thioredoxin-1,Trx-1)对细胞周期的影响.方法 用维生素C刺激乳腺癌细胞MCF-7,或者用pcDNA-Trx转染MCF-7使细胞中的Trx-1表达升高,另外在细胞培养液中加入不同浓度的Trx-1;用流式细胞仪检测细胞中进入S期细胞的比例.结果 维生素C的刺激使细胞内Trx-1表达上升,更多的细胞进入到S期.转染pcDNA-Trx的细胞Trx-1的表达上升,进入S期的细胞比例明显增加.将Trx-1蛋白加入到培养液中后,进入S期的细胞比例明显地随Trx-1浓度提高而升高.结论 无论在细胞外还是细胞内,Trx-1水平的上升均会促使细胞进入S期.     

乙酰阿地咪逆转肿瘤细胞多药耐药及其机制的研究

目的 探讨乙酰阿地咪体外逆转多药耐药细胞株人乳腺癌耐阿霉素细胞（MCF-7/Adr）以及人非小细胞肺癌耐阿霉素细胞（A549/Adr）的耐药作用及其作用机理。方法 采用乳酸脱氢酶释放法检测乙酰阿地咪与阿霉素共处理MCF-7、A549、MCF-7/Adr以及A549/Adr细胞的细胞毒作用,以观察增敏和逆转耐药作用;用全功能酶标仪测定乙酰阿地咪与阿霉素共同处理MCF-7/Adr和A549/Adr细胞后细胞内积累阿霉素的荧光强度,并采用Western blot检测细胞膜上多药耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）表达的变化。结果 乙酰阿地咪能降低MCF-7/Adr和A549/Adr对阿霉素的耐药性,10 μmol/L的乙酰阿地咪对MCF-7/Adr和A549/Adr逆转倍数分别为10.8、20.1,其逆转作用与乙酰阿地咪呈剂量依赖关系,且对MCF-7和A549细胞也具有增敏作用;随着乙酰阿地咪浓度的增加,MCF-7/Adr和A549/Adr细胞内积累阿霉素的荧光强度增加率增加,呈剂量依赖性;经乙酰阿地咪处理的MCF-7/Adr和A549/Adr细胞P-gp蛋白表达水平降低,且降低水平随乙酰阿地咪浓度增加而更明显。结论 乙酰阿地咪可显著逆转肿瘤细胞的多药耐药性,其机理与抑制多药耐药蛋白P-gp的表达有关,提示乙酰阿地咪具有潜在的克服肿瘤化疗中多药耐药现象的应用价值。     

质粒介导靶向c-myc的siRNA对MCF-7乳腺癌细胞增殖的影响

目的观察靶向原癌基因c-myc的siRNA对MCF-7人乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达及细胞增殖的影响。方法以原癌基因c-myc mRNA 589-609位碱基为靶序列构建靶向c-myc的siRNA真核表达质粒p-Mat01-1及其错配质粒p-Mis09-1,空质粒pEGFP-C1为对照,用脂质体Lipo2000包裹转染MCF-7细胞。采用RT-PCR、Western blot检测c-myc mRNA及蛋白表达,MTT法检测MCF-7细胞增殖。结果与pEGFP-C1及p-Mis09-1比较,转染p-Mat01-1能够特异性抑制MCF-7细胞c-myc mRNA(24h:P<0.01)及蛋白(5d:P<0.01)表达,显著降低MCF-7细胞增殖能力(3d:P<0.05,5、7d:P<0.01)。结论采用siRNA表达质粒技术能够有效抑制MCF-7乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达,初步证实下调c-myc/c-Myc表达能够抑制MCF-7细胞增殖,为RNA干扰技术在乳腺癌生物治疗中的应用打下一定实验基础。     

p27kip1基因转染增强放射抗拒人食管癌细胞的放射敏感性

目的研究腺病毒介导的p27kip1基因转染对人放射抗拒食管癌细胞放射敏感性的影响。方法以重组腺病毒介导的p27kip1基因转染人放射抗拒食管癌细胞EC9706R,免疫细胞化学法检测p27kip1表达;流式细胞仪检测转染前后肿瘤细胞周期,克隆形成实验检测p27kip1基因转染前后两种EC9706R细胞的放射敏感性。结果腺病毒转染后放射抗拒食管癌EC9706R细胞p27kip1表达明显升高,细胞周期结果显示G0/G1期阻滞;转染p27kip1前后放射敏感性参数检测结果比较:转染前EC9706R细胞SF2=67.4%,Dq=1.66 Gy,转染后SF2=49.7%,Dq=1.03 Gy,放射增敏比SERSF2、SERDq分别为1.36,1.61,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p27kip1基因转染能增强人放射抗拒食管癌细胞的放射敏感性。     

三羟异黄酮对人乳腺癌耐药细胞mdr-1、HER2/neu表达的影响

目的研究三羟异黄酮(Genistein,GEN)对体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM耐药细胞中mdr-1、HER2/neu基因及蛋白表达的影响,探讨其逆转多药耐药机制。方法采用MTT法检测GEN作用MCF-7/ADM细胞后的细胞增殖抑制率(IR)和半数抑制浓度(IC50);RT-PCR法检测MCF-7/ADM细胞经不同浓度阿霉素(ADM)、GEN及GEN联合ADM处理后,其mdr-1、HER2/neu mRNA表达的变化;Western blot检测其对c-erbB2蛋白及P-糖蛋白(P-gp)的影响。结果 GEN对MCF-7/ADM细胞生长抑制作用明显,其抑制效应呈时间-剂量依赖性,特别是GEN浓度增加到60μg/mL时,对细胞抑制作用急剧升高(P<0.01)。MCF-7/ADM细胞中有mdr-1、HER2/neu过量表达,经GEN单独及联合ADM作用后,HER2/neu mRNA表达明显下调,c-erbB2蛋白出现一致性的表达下调,但对mdr-1mRNA及P-gp无影响。结论人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性与耐药基因及原癌基因的高表达相关,GEN能下调MCF-7/ADM细胞HER-2/neu基因及蛋白表达,可能是其逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药性的机制之一,但对由P-gp介导的多药耐药无效。