去泛素化酶影响低氧诱导因子-1α泛素化过程的研究进展

低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)是一种具有氧依赖性的核转录调控因子。在缺氧条件下HIF-1α大量聚集于细胞浆,继而转入细胞核促进靶基因转录表达,增强肿瘤的增殖、侵袭和转移能力;常氧条件下,HIF-1α的合成与降解水平保持相对平衡,其降解主要通过泛素-蛋白酶体途径实现。大量研究已经证实,去泛素化酶不仅可以有效逆转HIF-1α的泛素化-蛋白酶体降解过程,也可以通过各种途径促进肿瘤的发生发展,本文就去泛素化酶影响HIF-1α泛素化过程的作用机制作一综述。     

金雀异黄素通过下调HIF-1α蛋白抑制K562细胞mdr1表达的实验研究

研究发现mdr1基因的表达与缺氧诱导因子-1(HIF-1)有关[1].金雀异黄素(Gen)是一种酪氨酸激酶抑制剂,可抑制由P-gp介导的药物转运[2].我们之前已证实Gen可抑制氯化钴(CoCl2)诱导的K562细胞HIF-1α蛋白表达[3].本研究中我们观察不同浓度Gen对mdr1表达的影响,探讨HIF-1α与mdr1表达的相关性.     

SUMO-1在HIF-1/VEGF信号通路中作用

目的研究SUMO-1在低氧激活的HIF-1/VEGF信号通路中作用。方法构建稳定表达SUMO-1的细胞系,采用荧光显微镜观察SUMO-1的细胞内定位,利用Western blot检测在低氧培养细胞中SUMO-1和HIF-1α的表达;利用荧光素酶报告基因实验检测SUMO-1对依赖于HIF-1的报告基因表达的影响。结果 SUMO-1主要分布在细胞核中,低氧可以上调SUMO-1的表达,SUMO-1可以上调HIF-1α的表达,促进依赖于HIF-1的荧光素酶报告基因的表达。结论低氧可能通过上调细胞中SUMO-1的表达,进而稳定HIF-1α或者上调HIF-1α的表达,增强HIF-1的转录活性。     

SUMO-1在HIF-1／VEGF信号通路中作用

目的研究SUMO-1在低氧激活的HIF-1／VEGF信号通路中作用。方法构建稳定表达SUMO-1的细胞系，采用荧光显微镜观察SUMO-1的细胞内定位，利用Westerm blot检测在低氧培养细胞中SUMO-1和HIF-1α的表达；利用荧光素酶报告基因实验检测SUMO-1对依赖于HIF-1的报告基因表达的影响。结果SUMO-1主要分布在细胞核中，低氧可以上调SUMO-1的表达，SUMO-1可以上调HIF-1α的表达，促进依赖于HIF-1的荧光素酶报告基因的表达。结论低氧可能通过上调细胞中SUMO-1的表达，进而稳定HIF-1α或者上调HIF-1α的表达，增强HIF-1的转录活性。     

低氧诱导因子及其低氧调节机制

低氧诱导因子(hypoxiainduciblefactor,HIF)是介导哺乳动物细胞适应低氧状况的核转录因子,由α和β亚基组成的异二聚体,其中α亚基受氧调节,是调节HIF活性的功能亚单位。目前已知HIF-1α的氧调节途径主要包括两种:常氧下VHL蛋白与氧依赖降解结构域羟化的Pro-564结合,介导HIF-1α的常氧下的泛素降解;常氧下天冬胺酰羟化酶使HIF-1αAsp-803羟基化,抑制其募集共刺激因子p300/CBP的作用,从而抑制其转录活性。此外,还包括PAS结构蛋白抑制因子等低氧调节途径。深入研究HIF的低氧调节机制,有利于认识缺血缺氧性疾病的发病机制。     

低氧诱导因子及其低氧调节机制

低氧诱导因子(hypoxis inducible factor，HIF)是介导哺乳动物细胞适应低氧状况的核转录因子，由α和β亚基组成的异二聚体，其中α亚基受氧调节，是调节HIF活性的功能亚单位。目前已知HIF-1α的氧调节途径主要包括两种：常氧下VHL蛋白与氧依赖降解结构域羟化的Pro-564．结合，介导HIF-1α的常氧下的泛素降解；常氧下天冬胺酰羟化酶使酶使HIF-1αAsp-803羟基化，抑制其募集共刺激因子p300／CBP的作用。从而抑制其转录活性。此外，还包括PAS结构蛋白抑制因子等低氧调节途径。深入研究HIF的低氧调节机制，有利于认识缺血缺氧性疾病的发病机制。     

宫颈癌患者5项相关指标的表达研究

目的探讨宫颈癌患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、凋亡抑制因子(survivin)、B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)的表达、相互关系及临床意义。方法选取宫颈病变组织169例、正常对照组25例。采用免疫组化法检测组织中上述5项指标的表达。结果宫颈癌组织内存在HIF-1α、VEGF、MMP-13、survivin、bcl-2的表达,差异有统计学意义(P0.05);与预后呈负相关;但与年龄、性别、肿块类型无关。HIF-1α、VEGF、survivin、bcl-2与临床分期有关,随着临床分期的增高表达增强,差异有统计学意义(P0.05)。VEGF、MMP-13、survivin的表达与淋巴结转移有关,有淋巴结转移组阳性率明显高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P0.05)。肿瘤中央区HIF-1α、VEGF的表达水平较周边区高,肿瘤表达水平与微血管密度密切相关,差异有统计学意义(P0.05)。HIF-1α与VEGF、survivin与bcl-2呈正相关,其余无直接相关性。结论 HIF-1α、VEGF、MMP-13、survivin、bcl-2的异常表达参与了宫颈癌的发生和发展,联合检测上述5项指标有望为宫颈癌的早期诊断、手术化疗疗效的评价、预后的判断提供有力的临床指导。     

缺氧诱导因子-1α在白血病中的表达及其意义

缺氧诱导因子(HIF)-1是由两个亚基组成的转录调节因子,在缺氧环境下细胞基因转录调控中起关键作用.多种实体肿瘤、白血病细胞中HIF-1α表达上调、活性增强,现就HIF-1α在白血病中的表达、调节及意义进行综述.     

辣椒碱对缺氧培养的HaCaT细胞增殖及低氧诱导因子-1α蛋白表达的研究

目的研究辣椒碱对HaCaT细胞增殖以及缺氧培养的HaCaT细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达的影响,探讨其对银屑病的作用机制。方法不同浓度的辣椒碱作用于HaCaT细胞后,观察其对细胞增殖的影响。辣椒碱作用于缺氧培养的HaCaT细胞后,免疫荧光检测其对HIF-1α蛋白表达的影响。结果辣椒碱对HaCaT细胞的生长具有明显的抑制作用,辣椒碱作用于缺氧培养的HaCaT细胞后HIF-1α蛋白表达减弱。结论辣椒碱抑制HaCaT细胞增殖及缺氧培养的HaCaT细胞HIF-1α蛋白的表达。     

低氧诱导因子-1α在血液系统恶性肿瘤中的研究进展

低氧诱导因子1-α(Hypoxia inducible factor, HIF-1α)为低氧环境下诱导产生的转录因子,调控低氧相关基因转录,是细胞特别是肿瘤细胞适应低氧环境生存的重要转录因子。HIF-1α在乳腺癌、肝癌等实体肿瘤中研究较多,HIF-1α表达水平增高与肿瘤的血管生成、转移、化疗耐药相关。近年来研究发现HIF-1α参与血液系统恶性肿瘤如白血病的发生、发展,其表达水平与患者预后相关。我们就HIF-1α在血液系统恶性肿瘤中的研究进展进行综述。     

小泛素类蛋白对低氧诱导因子-1调控作用的研究进展

低氧诱导因子-1的表达和调节对肿瘤的发生、生长、血管形成、转移、凋亡、糖代谢及耐药性产生重要影响。小泛素类蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)是一类结构与泛素类似的小分子蛋白,在低氧应激等状态下表达增加,SUMO通过与泛素竞争HIF-1结合位点增强HIF-1的稳定性,包括SUMO化和去SUMO化及增强SENP活性和抑制pVHL作用等机制。这对寻找新的肿瘤干预靶点具有非常重要的意义。     

颈椎病终板软骨组织中血管内皮生长因子和缺氧诱导因子-1α表达的相关性

目的:探讨颈椎病软骨终板组织中血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1!(HIF-1α)的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测25例颈椎病患者和20例颈椎外伤患者(对照组)终板软骨组织中VEGF和HIF-1α的表达,并且对颈椎病患者终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达进行相关性分析。结果:颈椎病终板软骨组织中VEGF和HIF-1α阳性表达率分别为(28±12)%和(39±17)%,对照组VEGF及HIF-1α阳性表达率分别为(43±14)%和(63±11)%;终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达均低于对照组(P<0.05);相关分析显示,颈椎病终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达存在正相关性(r=0.86,P<0.05)。结论:颈椎病终板软骨组织中VEGF和HIF-1α表达明显减少,HIF-1α对调节VEGF的表达起到关键性作用。     

低氧诱导因子抑制剂对白血病细胞株HIF-1α和VEGF表达及诱导细胞凋亡作用的研究

本研究探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5′-hydroxymethyl-2′-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人急性白血病病细胞低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)和血管内皮因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调节及诱导细胞凋亡作用。应用DAPI染色检查凋亡细胞的形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测K562、U937、Jurkat白血病细胞株hif-1α和vegf mRNA表达以及YC-1对U937细胞hif-1α、vegf mRNA表达影响;Western blot检测YC-1对U937细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达,以及BAX、BCL-2、caspase-3蛋白变化,分析YC-1诱导U937细胞凋亡的可能机制。结果表明:在3种白血病细胞株均可见hif-1α和vegf mRNA表达。4μmol/L YC-1处理U937细胞(0、8、16和24小时)后,可见凋亡细胞出现的典型凋亡形态特征;流式细胞术检测的细胞0、8、16和24小时凋亡率分别为(4.87±0.70)%、(27.27±2.00)%、(51.53±2.81)%及(60.5±3.20)%;vegf mRNA表达下调,而hif-1αmRNA表达无明显变化;HIF-1α蛋白、VEGF蛋白和BCL-2蛋白表达下调,而BAX和caspase-3蛋白表达上调,BAX/BCL-2比率升高并呈时间依赖性(r=0.973,p0.01)。结论:3种白血病细胞株均显示hif-1α和vegf mRNA表达,YC-1可以抑制白血病细胞HIF-1α蛋白表达,进而下调VEGF,并通过上调BAX/BCL-2比率、caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

缺氧诱导人视网膜色素上皮细胞整合素连接激酶的表达及其与HIF-1α、VEGF的相关性

目的:探讨缺氧条件下人视网膜色素上皮细胞(hRPE)整合素连接激酶(integrim linked kinase,ILK)的表达,及其与缺氧诱导因1α(hypoxia induciable factor,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular cndothclial growth factor,VEGF)表达的相关性。方法:hRPE培养,COCL2(150"mol/L)建立化学缺氧细胞模型。免疫组化方法检测缺氧0、6、12、24、48、72hhRPE细胞ILK、HIF-1α、VEGF的表达。Western blot和RT-PCR方法检测以上缺氧时间细胞ILK、HIF-1α、VEGF的蛋白及其mRNA表达水平并进行图像分析。结果:ILK表达于正常培养的hRPE中,随着缺氧时间的延长,其表达增加,且与HIF-1α、VEGF的表达呈正相关性。结论:ILK可能作为低氧反应性因子与HIF-1α、VEGF共同参与hRPE的低氧病理过程。     

STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF蛋白表达与肺癌侵袭和转移的相关性研究

目的:研究信号转导和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白表达在肺癌侵袭与转移中的作用.方法:应用免疫组织化学方法检测66例肺癌组织及其癌旁组织中STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF蛋白表达情况.结果:STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF在肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织;肺癌组织中它们之间的表达两两比较(秩和检验方法)均呈正相关,且与有无淋巴结转移和临床分期及分化程度有关,但与组织学类型、性别、年龄无关.结论:STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF可能在肺癌的发生发展、侵袭和转移中起重要的作用,抑制STAT3信号通路可望成为治疗非小细胞肺癌的治疗靶点.     

不同间歇性缺氧诱导方式对SW480细胞缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的利用不同方法模拟间歇性缺氧(intermittent hypoxia,IH)环境,观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在SW480细胞中的表达情况。方法利用CoCl2(A)和三气培养箱(B)两种方式诱导IH。根据缺氧时间的不同每种诱导方式分2组,IH2 h:A2、B2组,IH3 h:A3、B3组;C组为常氧组。利用免疫细胞化学检测HIF-1α蛋白的表达部位,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测HIF-1α表达量的变化。结果 HIF-1α蛋白主要在胞质表达。各缺氧组HIF-1αmRNA的表达水平高于C组(0.76±0.03),A3组(0.87±0.04)高于A2组(0.78±0.04),B3组(0.98±0.04)高于B2组(0.85±0.03),差异均有统计学意义(P<0.01)。HIF-1α蛋白在各缺氧组的表达水平高于C组(0.19±0.03),A3组(0.39±0.04)高于A2组(0.21±0.02),B3组(0.46±0.04)高于B2组(0.24±0.03),差异均有统计学意义(P<0.01)。B2、B3组HIF-1αmRNA和蛋白的表达量分别高于A2、A3组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IH可以上调HIF-1αmRNA及蛋白水平。HIF-1α在氧箱诱导的IH环境中上调更显著。     

抑制缺氧诱导因子-1α表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞裸鼠体内成瘤性的影响

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术抑制多发性骨髓瘤(MM)细胞系RPMI8226细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)表达,探讨对RPMI8226细胞在裸鼠体内成瘤性的影响.方法 利用短发夹RNA(shRNA)表达载体pSilencer 2.1-U6 hygro构建RNAi载体,在RPMI8226细胞中抑制HIF-1α的表达.应用RT-PCR技术和Western blot方法 ,鉴定RNAi后HIF-1α的表达.ELISA法测定细胞上清中血管内皮生长因子(VEGF)表达的改变.流式细胞术检测RNAi前后细胞周期的改变.研究缺氧(PO2为1%)条件下,抑制HIF-1α的表达对其靶基因VEGF和葡萄糖转运蛋白(Glut-1)表达的影响.利用异种移植瘤模型观察HIF-1α干扰后对肿瘤生长的影响.结果 RNAi后,HIF-1α的表达在mRNA和蛋白水平均明显降低.常氧条件下,RNAi组(RPMI8226-i1和RPMI8226-i2)和未干扰组(RPMI8226-c和RPMI8226)细胞上清中VEGF浓度无明显差异;缺氧条件下四组细胞上清中VEGF浓度分别为(506.0±53.2)、(494.7±63.1)、(984.4±61.9)和(938.2±62.2)pg/ml.RPMI8226-i1和RPMI8226-i2组较RPMI8226-c和RPMI8226组明显降低(P＜0.05).G0/G1期累积受到抑制,S期细胞比例增加.缺氧条件下VEGF和Glut-1等靶基因的表达明显下调(P＜0.05).裸鼠皮下成瘤性实验表明,抑制HIF-1α的表达,能够明显抑制肿瘤的生长.结论 RNAi抑制RPMI8226细胞HIF-1α表达,可能通过抑制肿瘤的血管新生和糖代谢过程来发挥肿瘤抑制作用.     

低氧对小鼠缺氧诱导因子-1α、P53和血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究低氧时小鼠肺组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、P53及血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化,探讨三者之间的关系,以及低氧与血管新生的关系.方法：实验用雄性昆明小鼠,分为低氧组与对照组,低氧仓浓度分别为10%、7%、5%.低氧时间分别为3天、6天、9天.用免疫组织化学技术检测小鼠在低氧条件下肺组织中的HIF-1α、P53和VEGF蛋白表达的变化及微血管密度（MVD）.结果：低氧组HIF-1α、P53和VEGF蛋白表达均增加,并且随低氧时间的延长及低氧浓度的降低而增强,而对照组HIF-1α无表达,P53和VEGF有少量表达（P＜0.05）;低氧组的MVD也高于对照组;P53,VEGF表达与MVD均与HIF-1α表达呈正相关（r分别为0.609、0.730与0.691）.结论：HIF-1α/VEGF通路在低氧致小鼠肺组织血管新生过程中起重要作用,P53基因的失活可能经HIF-1α/VEGF通路促进血管新生.     

缺氧诱导因子HIF-1α、3α在血管瘤不同时期的表达和意义

目的 探讨缺氧在血管瘤不同时期的表达和作用.方法 采用免疫组化SP法测定24例增生期血管瘤和18例消退期血管瘤中缺氧染色阳性率,HIF-1α、HIF-3α、VEGF、Ki-67和细胞凋亡表达情况.结果 24例增生期血管瘤中缺氧染色阳性率为80%(19/24),HIF-1α阳性指数为(23.40±4.73)、HIF-3α为(7.90±2.15)、VEGF为(16.90±3.34)、Ki-67为(57.60±11.33)、细胞凋亡指数为(4.50±1.51);而消退期血管瘤中缺氧染色阳性率为90%(16/18),HIF-1α为(9.50±2.67)、HIF-3α为(19.80±2.43)、VEGF为(2.70±0.32)、Ki-67为(11.20±2.65)、细胞凋亡指数为(11.40±2.67).不同时期血管瘤表达的HIF-1α、HIF-3α、VEGF、Ki-67、细胞凋亡指数均有显著性差别(P＜0.05).结论 缺氧是血管瘤不同时期的普遍现象,但对增殖期血管瘤的作用是通过HIF-1α促进内皮细胞繁殖,而对消退期血管瘤是通过HIF-3α促进其凋亡.     

缺氧诱导因子-1α及相关靶基因在缺血性脑卒中的作用研究进展

缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是低氧诱导的核转录调节因子,受细胞内氧浓度的调控。当脑缺血缺氧时,HIF-1α表达上调,可诱导下游靶基因的表达。随着缺血时间和缺氧程度的变化,下游的靶基因表现出的生物学功能也不尽相同,既可发挥神经保护作用又可发挥神经毒害作用。