用液相质谱法鉴定盐酸关附甲素在大鼠胆汁中Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物(英文)

目的:研究盐酸关附甲素在大鼠胆汁中的代谢产物.方法:建立了液相质谱和串联质谱法(LC-MS)对关附甲素及其代谢产物鉴定的方法.大鼠静脉注射盐酸关附甲素后采集胆汁,通过与对照化合物的色谱保留时间、分子离子峰、碎片离子峰和紫外图谱对照从而鉴定Ⅰ相代谢物.胆汁经过葡萄糖醛酸酶或硫酸酯酶水解,鉴定其水解产物(苷元),从而确定Ⅱ相结合物,再通过LC-MS分离和确定分子离子峰,最后利用MS-MS寻找特征子离子和母离子的方法进行验证.结果:大鼠胆汁中存在Ⅰ相代谢物关附壬素;Ⅱ相结合物经葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶酶解后,出现关附甲素和关附壬素;LC-MS检测发现胆汁中m/z 606和 510两个准分子离子峰,推测分别为关附甲素葡萄糖醛酸苷和关附甲素硫酸酯:经MS-MS鉴定出m/z 606特征子离子m/z 177和m/z 430,进一步确证大鼠胆汁中存在关附甲素葡萄糖醛酸苷.结论:大鼠胆汁中存在Ⅰ相代谢产物关附壬素,以及Ⅱ相结合物关附甲素葡萄糖醛酸和硫酸结合物、关附壬素葡萄糖醛酸和硫酸结合物.     

高效液相-质谱联用法对盐酸关附甲素在大鼠尿中代谢物的研究

目的研究盐酸关附甲素在大鼠尿中的代谢产物。方法大鼠iv盐酸关附甲素后收集尿,用高效液相-质谱联用方法测定。通过与标准化合物的色谱保留时间、分子离子峰、碎片离子峰对照从而鉴定I相代谢物。通过用葡糖醛酸酶和硫酸酯酶酶解鉴定其水解产物(苷元)从而确定II相结合物。结果大鼠尿中发现I相代谢物关附醇胺和关附壬素;尿经过葡糖醛酸酶和硫酸酯酶酶解后,产生关附甲素和关附壬素。结论盐酸关附甲素在大鼠体内可以转化为关附壬素、关附醇胺、关附甲素葡糖醛酸和硫酸结合物、关附壬素葡糖醛酸和硫酸结合物。经过生物转化,代谢产物的极性增加,药效下降。     

高效液相-电喷雾质谱分析7-羟基黄酮在大鼠体内的代谢产物

目的:研究7-羟基黄酮在大鼠体内的代谢。方法:应用高效液相-电喷雾质谱检测大鼠灌胃7-羟基黄酮后血浆、尿液、胆汁和粪便中的代谢产物。实验采用Zorbax C18色谱柱,二元线性梯度洗脱进行色谱分离,并与电喷雾质谱联用,根据负离子模式的分子离子峰获得化合物相对分子质量信息,推测化合物的可能结构。结果:在大鼠尿液、粪便、血浆、胆汁中检测到原形成分7-羟基黄酮和7-羟基黄酮葡萄糖醛酸结合物,在胆汁或尿中尚检测到7-羟基黄酮硫酸结合物。结论:7-羟基黄酮在大鼠体内主要以Ⅱ相代谢产物葡萄糖醛酸结合物和硫酸结合物的形式存在。     

大鼠体内大豆苷元及其代谢物分布影响因素研究

目的研究大鼠灌胃给予大豆苷元后,多剂量与性别对大豆苷元及其代谢物在大鼠血浆中分布的影响。方法雌、雄大鼠分别单次或多次灌胃给予大豆苷元1.0 mg·kg-1,血浆样品经沉淀蛋白处理,采用LC-MS/MS方法测定血浆样品中大豆苷元及其II相代谢物的质量浓度,采用Winnolin6.4计算各化合物的主要药动学参数,并对获得的药动学参数进行统计分析。结果大鼠多次灌胃给予大豆苷元后,血浆中大豆苷元及其代谢物的AUC_(0-24)明显高于单次给药。多次给药后雌鼠血浆中大豆苷元主要以大豆苷元-7-葡萄糖醛酸结合物和大豆苷元-7-硫酸结合物形式存在,雄鼠血浆中主要以大豆苷元-7-葡萄糖醛酸结合物、大豆苷元-7-硫酸结合物和大豆苷元-7-葡萄糖醛酸-4'-硫酸结合物形式存在。结论多次给药及性别差异明显影响大豆苷元在大鼠血浆中的分布。     

双苯氟嗪在大鼠体内的代谢途径

目的研究双苯氟嗪在大鼠体内的代谢途径。方法大鼠ig双苯氟嗪，LC/DAD/MS法分离、鉴定尿中代谢产物。结果在大鼠尿中有1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮及其葡糖醛酸结合物、4-羟基二苯甲酮及其葡糖醛酸结合物、4-氟-γ-羟基苯丁酸及其葡糖醛酸和硫酸结合物、二苯甲醇及其葡糖醛酸结合物和双苯氟嗪，二苯甲酮。结论 双苯氟嗪在大鼠体内主要经哌嗪环1-和4-氮脱烷基代谢，部分代谢物再与葡糖醛酸和/或硫酸结合。     

HPLC-ESI/MS分析5-羟基黄酮在大鼠体内的代谢产物

目的研究5-羟基黄酮在大鼠体内的代谢产物。方法应用高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESI/MS)检测大鼠灌胃5-羟基黄酮后血浆、尿液、胆汁和粪便中的代谢产物。实验采用Zorbax C18色谱柱,0.05%甲酸乙腈-0.05%甲酸水二元线性梯度洗脱进行色谱分离,并与电喷雾质谱联用,根据正离子模式的分子离子峰获得化合物分子量信息,推测化合物的可能结构。结果仅在大鼠粪便中检测到原形成分,在大鼠尿液、粪便、血浆、胆汁中检测到5-羟基黄酮葡糖醛酸结合物。结论 5-羟基黄酮吸收差,在大鼠体内主要以II相代谢产物葡萄糖醛酸结合物的形式存在。     

叔丁基对苯二酚在大鼠体内的代谢研究

目的利用液相色谱/质谱联用仪(LC/MS)分析叔丁基对苯二酚(TBHQ)在大鼠血清中的代谢物,探讨了TBHQ在大鼠体内的代谢途径。方法通过一级质谱分析,对大鼠血清中TBHQ的代谢物进行鉴别;通过多级质谱分析,对大鼠血清中的TBHQ及其代谢物进行鉴定。结果在大鼠血清中检测到TBHQ(3.5%),TBHQ的代谢物包括硫酸型结合物(93.2%)、葡萄糖醛酸型结合物(1.5%)和一种极性不明代谢物(推测为TBHQ二羟基化物的谷氨酸结合物,1.8%)。结论TBHQ在大鼠血清中主要经Ⅱ相反应(与硫酸或葡萄糖醛酸结合)代谢,此外少量TBHQ会发生Ⅰ相反应,推测为氧化反应,生成的二羟基化物与谷氨酸结合。     

6，7-双乙酰化黄芩素在大鼠体内的代谢产物研究

研究6，7-双乙酰化黄芩素在大鼠体内的代谢产物。大鼠灌胃给予6，7-X2K,酰化黄芩素后，采用HPLC—DAD和LC／MS^n方法，检测大鼠肠内和血浆中的代谢产物。6,7-双乙酰化黄芩素在大鼠肠内降解为6-单乙酰黄芩素和黄芩素；在大鼠血浆中检测到4种葡萄糖醛酸苷类代谢产物，初步鉴定为6-O-葡萄糖醛酸黄芩素，6-O-甲基-7-O-葡萄糖醛酸黄芩素，6，7-O-双葡萄糖醛酸黄芩素和6-O-葡萄糖-7-O-葡萄糖醛酸黄芩素。首次报道了6，7-双乙酰化黄芩素在大鼠体内的药物代谢，在肠内和血浆中共鉴定了六个代谢产物。     

液相色谱-大气压化学电离质谱联用在小分子药物代谢研究中的应用

目的：建立可用于尿样检测的小分子药物代谢分析的液相色谱-大气压化学电离质谱联用(LC/APCI/MS)方法。方法：对14种小分子药物服用者的尿样经前处理后,考察尿样中原药和代谢产物;收集克罗帕米1次给药后24h的尿样,考察尿样中原药量与时间的关系;对1种小分子药物的葡萄糖醛酸结合物进样1μg,考察APCI／MS行为。结果：在本实验的LC/APCI/MS条件下,14种小分子药物服用者的尿样全部给出了原药或代谢产物的准分子离子峰,大多数峰为基峰,少数峰为强峰,极少数为弱峰,末发生漏检;克罗帕米服用者的尿样显示,24h内从尿样中可明确检出原药,其中3．0h和11．0h的尿样中原药浓度达峰值;雌酮的葡萄糖醛酸结合物在APCI/MS条件下既给出明确的3—O-葡萄糖醛酸—1β—基雌酮的准分子离子峰,又给出明确的雌酮碎片和β—葡萄糖醛酸碎片的互补离子蜂。结论：LC/APCI/MS用于小分子药物代谢和排泄研究既可分析经前处理的尿样,又可分析未经处理的尿样,灵敏度高,有广阔应用前景。     

大鼠灌胃四逆散提取物后血浆、尿液、粪便、胆汁中主要代谢产物的鉴定

采用UPLC-Q-TOF/MS研究四逆散提取物在大鼠体内的代谢产物,利用碰撞能量梯度(MSE)和质量亏损过滤(MDF)技术进行分析,鉴定大鼠灌胃四逆散提取物后血浆、尿液、粪便、胆汁中的代谢产物。四逆散提取物中柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷、甘草苷、甘草素、甘草酸、甘草次酸、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d在大鼠不同代谢途径中推测出原形、羟基化、葡糖醛酸化、硫酸化、葡糖醛酸化与硫酸化结合、羟化葡糖醛酸化等共41个代谢产物。     

二苯乙烯苷在大鼠体内外的代谢研究

采用肝微粒体温孵和大肠杆菌培养等方法对二苯乙烯苷进行体外代谢研究.灌胃给予二苯乙烯苷后,对大鼠血液、胆汁、尿液、粪便、胃和小肠内容物进行体内代谢产物分析,并通过制备液相色谱从胆汁中获得主要代谢物的纯品,采用1HNMR、13CNMR及MS方法进行结构确证.结果表明,二苯乙烯苷在大鼠肝脏代谢为葡萄糖醛酸结合物,并经胆汁排泄,在肠道内菌或酶的作用下水解为二苯乙烯苷随粪便排出.     

雷公藤甲素和雷公藤红素在大鼠体内的代谢产物分析

大鼠灌胃给予雷公藤甲素与雷公藤红素混合液.采用液相色谱-串联质谱法,在负离子模式下,以一级、二级全扫描方式检测大鼠血清、尿与粪中的代谢产物.在大鼠血清中仅发现原形药物.在尿样中检测到了雷公藤甲素的3种代谢产物,推测分别为其单羟基化代谢产物、环氧化物水解开环代谢产物及谷胱甘肽结合物.在粪中则检测到1种代谢产物,推测为雷公藤甲素的另一单羟基化代谢产物.在尿样中检测到雷公藤红素的1种代谢产物,推测为葡萄糖醛酸结合物;在粪中检测到硫酸结合物.     

高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法分析瑞香素在大鼠肠壁的代谢产物

研究瑞香素在大鼠肠壁产生的代谢产物。采用大鼠在体肠灌流模型,分别收集瑞香素0～2 h内的十二指肠、空肠、回肠和结肠灌流液,以液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法分析肠道灌流液中瑞香素的代谢产物。在大鼠十二指肠、空肠、回肠灌流液中共发现瑞香素原形药物和4个代谢产物,分别推测为瑞香素-7-硫酸酯、瑞香素-8-硫酸酯、瑞香素-7-葡糖醛酸结合物和瑞香素-8-葡糖醛酸结合物;而在结肠灌流液中未发现代谢产物。在瑞香素的4个代谢产物中,瑞香素-7-硫酸酯和瑞香素-8-硫酸酯(m/z 257)为首次发现的瑞香素在大鼠体内的Ⅱ相代谢产物,揭示了其在大鼠体内代谢的新途径。     

鉴定大鼠注射绿原酸后体内的代谢产物

绿原酸为多种中药注射液的主要成分, 本文采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法 (UPLC/Q- TOF MS) 鉴定大鼠注射给予绿原酸后胆汁、尿、粪和血浆中的代谢产物。利用碰撞能量梯度 (MS^E) 和质量亏损过滤 (MDF) 技术, 在大鼠胆汁、尿、粪和血浆中共检测到35种代谢产物。胆汁中主要代谢产物为O-甲基绿原酸谷胱甘肽结合物, 其排泄量超过胆汁中全部代谢物的80%, 尿中主要为原形、O-甲基结合物、水解代谢产物及葡糖醛酸结合物, 粪中主要为O-甲基结合物及其半胱氨酸结合物, 血浆中主要为原形化合物。绿原酸及其代谢产物经尿和粪便排泄比例相近。实验结果表明, 绿原酸在大鼠体内代谢广泛, 主要途径之一是与谷胱甘肽结合, 提示绿原酸的烯酮双键具有亲电性, 可能与蛋白的巯基共价结合, 导致过敏性不良反应, 应予以关注。     

安石榴苷大鼠体内肠代谢产物的鉴定分析

摘要：目的:研究安石榴苷在大鼠体内代谢转化的一般规律。方法:大鼠灌胃安石榴苷原料药后收集肠内容物和粪便样品,预处理后进高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF/MS)系统,负离子模式下扫描,结合相关文献推测可能的代谢产物。结果:在大鼠肠内容中鉴定出的代谢产物有尿石素D、尿石素C、尿石素A、二甲基-鞣花酸、尿石素B、硫酸化尿石素A-葡萄糖苷、甲基化尿石素A和尿石素C-二葡萄糖苷。在大鼠粪便中鉴定出的代谢产物有硫酸化尿石素A、尿石素A、二甲基-鞣花酸、尿石素C-二葡萄糖苷以及鞣花酸。安石榴苷在大鼠体内代谢的主要途径有甲基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化等。结论:安石榴苷在肠道菌群作用下代谢为尿石素系列物。     

何首乌水提物给药后大鼠体内成分研究

目的 考察连续42 d灌胃何首乌水提物（PMW）后大鼠肝、肾、血浆和胆汁中的成分累积特征,为何首乌肝毒性研究提供数据支撑。方法 采用UPLC-LTQ-Orbitrap MS技术,通过与对照品比对及通过scitific library模块分析,对大鼠不同组织中何首乌原型成分及代谢产物进行定性鉴别和推测。结果 大鼠经过长期灌胃（PMW）诱导后,体内可检测到24个何首乌相关化合物,其中7个为原型成分,5个为Ⅰ相代谢产物,12个为Ⅱ相代谢产物。主要成分为二苯乙烯苷和蒽醌类原型及其代谢物。各类成分具有选择蓄积性,肾脏中蓄积成分最多,肝脏和胆汁中相当,血浆中最少。二苯乙烯苷以硫酸化和葡萄糖醛酸化反应为主,大黄素多发生氧化反应和葡萄糖醛酸化反应。结论 原型成分大黄素、芦荟大黄素、大黄素-8-O-葡萄糖苷、二苯乙烯苷、大黄酸、没食子酸很可能与何首乌引发的不良反应相关,应引起关注;大黄素-葡萄糖醛酸化物和二苯乙烯苷-葡萄糖醛酸化物-硫酸化物仅在胆汁中检出,没食子酸及原儿茶酸以及大量大黄素Ⅱ相代谢物仅在肾脏中检出,这类成分的潜在毒性风险应进一步研究。     

左旋紫草素体内代谢研究

本文对紫草素在大鼠体内的生物转化进行了研究,对经苯巴比妥预处理（i.p.60mg.kg^-1.day,3天）的Wistar种健康雄性大鼠腹腔注射紫草素（20mg.kg^-1),收集到的胆汁和血样分别经β－葡萄糖醛酸酶水解后,用乙酸乙酯提取,建立PP－HPLC／DAD方法对紫草素及其代谢物大大鼠胆汁和尿样中的分布进行了初步考察,根据色谱峰的保留时间和紫外光谱分析,大鼠的胆汁和尿样中分别有10个代谢物。     

LC/MS/MS法同时测定细胞孵化液中6种雌激素类化合物的含量

目的建立同时测定细胞孵化液中6种雌激素类化合物含量的LC/MS/MS法,并用该法研究E1S在乳腺癌细胞中的代谢行为。方法细胞孵化样品经处理后,采用Diamonsil C18柱分离,流动相为乙腈和5 mmol.L-1醋酸铵(pH 7.8),梯度洗脱,采用电喷雾电离(electrospray ionization,ESI)源,以多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)方式进行检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 269.3→m/z 145.2(雌酮,estrone,E1),m/z 271.1→m/z 145.2(雌二醇,estradiol,E2),m/z349.2→m/z 269.2(硫酸雌酮e,strone-3-sulfate,E1S),m/z 351.1→m/z 271.3(硫酸雌二醇,estradiol-3sulfate,E2S),m/z 445.5→m/z 269.3(β-D-葡萄糖醛酸雌酮,estrone-3-glucuronide,E1G),m/z 447.4→m/z 271.0(葡萄糖醛酸雌二醇,estradiol-3-glucuronide,E2G)和m/z 253.4→m/z 223.0(大豆苷元,内标)。结果该方法中E1、E2、E1S、E2S的线性分别为9.8～5 000.0 nmol.L-1,E1G、E2G的线性为0.98～500.00 nmol.L-1;日内和日间精密度均小于10.8%,相对误差在±11.7%以内。结论该法适用于细胞孵化液中6种雌激素类化合物的同时测定。     

RP-HPLC法同时测定中药关白附中关附甲素、关附壬素和关附辛素含量

目的：建立同时测定关白附中3种二萜生物碱———关附甲素、关附壬素和关附辛素的RP-HPLC分析方法。方法：色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C8柱（2.1 mm×150 mm,5μm）,流动相：庚烷磺酸钠缓冲液（加入0.2%三乙胺,磷酸调至pH 3）-乙腈（梯度洗脱）,柱温：25℃,流速：0.2 mL.min-1,检测波长：205 nm。结果：3种生物碱的相邻色谱峰分离度大于1.5,关附壬素、关附甲素和关附辛素质量浓度分别在0.100～0.502、0.100～0.498和0.100～0.500 g.L-1的范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,其平均加样回收率（n=9）分别为97.29%、101.46%、102.33%。结论：本法分离效果和重复性好,简便易行,可用于关白附药材中3种生物碱的同时定量分析及药材质量控制。     

模式生物斑马鱼用于5-羟基黄酮代谢的合理性研究

目的 采用模式生物斑马鱼研究5-羟基黄酮的代谢,探索斑马鱼用于药物Ⅱ相代谢的适用性。方法 将斑马鱼培养于5-羟基黄酮溶液中,定时取鱼体及药液,采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用检测,根据正、负离子模式准分子离子峰获得化合物分子量信息,通过与文献数据或对照品对照,结合碎片离子,推测可能的代谢产物。结果 在斑马鱼体内或体外药液检测到5-羟基黄酮原型及其2个单羟基葡萄糖醛酸结合物和1个单羟基硫酸结合物。结论 5-羟基黄酮在斑马鱼作用下的葡萄糖醛酸化反应与其在大鼠体内的Ⅱ相代谢机制高度一致,并首次在负离子模式下检测到5-羟基黄酮硫酸结合物。斑马鱼用于药物Ⅱ相代谢具合理性,且具有化合物用量少、成本低、方法简单、高效的优势,为建立斑马鱼体内药物代谢新模型提供重要参考。