马钱子碱对人白血病细胞株K562细胞的诱导凋亡作用

本研究旨在观察马钱子碱对人白血病细胞株K562细胞的诱导凋亡作用。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测马钱子碱对K562细胞生长抑制作用;应用AO/EB荧光染色、Annexin-V/PI细胞凋亡检测法、DNA-ladder片段凝胶电泳法检测马钱子碱对K562细胞凋亡的影响。结果显示:马钱子碱能有效抑制K562细胞的生长,在一定范围内,抑制率随马钱子碱浓度的增高而增高,马钱子碱浓度为400μg/ml作用72小时后对K562细胞抑制作用最为明显,抑制率达94.0%;K562细胞经浓度为400μg/ml马钱子碱作用72小时后大部分细胞核染色质被EB染成桔红色并呈固缩状或圆珠状显示为晚期凋亡的细胞形态;马钱子碱作用72小时可诱导K562细胞凋亡,在马钱子碱浓度为50-400μg/ml范围内随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐上升;马钱子碱400μg/ml作用72小时后的K562细胞出现细胞凋亡的典型梯形条带。结论 :马钱子碱能有效抑制K562细胞生长,诱导其凋亡,并且在50-400μg/ml范围内呈剂量效应关系。     

YB-1蛋白对白血病细胞K562/A02生物学行为的影响

本研究探讨YB-1基因表达下调后对白血病细胞K562/A02生物学行为的影响及其机制。采用脂质体介导的方法将已构建的人YB-1基因特异性shRNA及随机片段HK的真核表达载体转染进白血病细胞K562/A02中,RT-PCR和免疫印迹反应检测YB-1 mRNA和蛋白表达量的改变;采用MTT法和细胞周期测定分析对白血病细胞增殖的影响;用AnnexinⅤ检测白血病细胞的凋亡程度;采用MTT法检测细胞IC50值变化;RT-PCR和流式细胞术检测基因转染前后细胞中的MDR1 mRNA和P-gp表达的变化。结果表明,阳性转染的3组细胞YB-1基因和蛋白的表达量明显低于随机片段组和未转染细胞;生长曲线提示阳性转染组细胞生长缓慢,细胞周期动力学分析显示阳性转染组G1期细胞增多,G2期与S期细胞显著减少;在小剂量As2O3作用下,阳性转染组细胞的凋亡数量明显高于对照组细胞;阳性转染细胞的阿霉素IC50明显低于随机片段组和阴性对照组;阳性转染细胞MDR1 mRNA水平明显降低,P-gp的峰值较对照组明显左移。结论:YB-1特异性shRNA能有效降低白血病细胞中YB-1的表达,减慢细胞生长,增加白血病细胞对化疗药物的敏感性,加速细胞凋亡。     

中药复方君子汤对白血病细胞株K562增殖和凋亡的影响

本研究探讨中药复方君子汤（FFJZ）对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的生物学特点及其可能的作用机制。应用细胞形态学、台盼蓝拒染法观察细胞生长状态;四氮甲唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果表明：一定浓度范围的FFJZ作用于K562细胞后,随FFJZ药物浓度的升高其对K562细胞生长的抑制率明显增加（p〈0.01）,其半数抑制浓度（IC50）约为5.6mg/ml。在FFJZ浓度为4mg/ml时,细胞凋亡以早期凋亡为主,而至8mg/ml组时晚期凋亡比例显著增多,与未加药组比较有显著差异（p〈0.01）。结论：在体外FFJZ一定浓度范围内可以抑制白血病K562细胞的生长增殖,诱导其凋亡并呈浓度依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

孤啡肽诱导白血病细胞K562凋亡

本研究探讨孤啡肽对白血病细胞K562增殖的影响及诱导凋亡的作用，采用MTT（四唑氮蓝）法检测不同浓度的孤啡肽对K562细胞生长的影响，应用瑞氏染色、电子显微镜观察药物作用后K562细胞形态的改变，流式细胞术检测孤啡肽对K562细胞细胞凋亡作用，DNA琼脂糖凝胶电泳观察孤啡肽作用后K562细胞内DNA的损伤程度。结果表明：10^-6～-10^-13mol／L孤啡肽明显抑制K562细胞的生长，且存在时间依赖性，而剂量依赖性不明显；10^-6-10^-7、10^-9、10^-12mol／L孤啡肽作用72小时后显示明显的细胞毒作用。与对照组相比，10^-9mol／L孤啡肽作用72小时后K562细胞出现典型凋亡特征；流式细胞术检测发现：0、10^-7、10^-8、10^-9mol／L孤啡肽作用72小时后出现凋亡峰，凋亡率分别为0％、22．8％、23．8％、26．5％；DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯状条带。结论：孤啡肽能够抑制K562细胞增殖，诱导其凋亡。     

秦巴硒菇提取物硒蛋白多糖荷瘤药物血清促慢性红白血病细胞株K562凋亡的实验研究

目的:探讨秦巴硒菇提取物硒蛋白多糖制备的含药血清对慢性红白血病细胞株(K 562)凋亡的影响。方法:建立荷瘤小鼠模型,采用血清药理学方法制备硒蛋白多糖含药血清,常规培养K 562细胞。通过甲基噻唑基四唑(M TT)比色法检测硒蛋白多糖含药血清对肿瘤生长的抑制率;用形态学和DNA电泳技术观察细胞凋亡的发生;用比色法检测凋亡相关基因caspase 3的表达。结果:秦巴硒菇提取物硒蛋白多糖含药血清可显著抑制K 562细胞生长,且呈时间剂量依赖性。形态学、DNA电泳结果均证实有凋亡发生,与空白血清组比较,caspase 3基因上调明显。结论:秦巴硒菇提取物硒蛋白多糖含药血清可促进K 562细胞凋亡,其机制可能与上调caspase 3基因有关。     

垫状卷柏提取物对人白血病细胞K562诱导凋亡的研究

目的 研究垫状卷柏提取物(Selaginelpulvinate extracts,SP)对人白血病细胞诱导凋亡的机制.方法 采用浸提+超声的方法提取制备SP,采用流式细胞术检测法检测12.5μg/mL至100μg/mL生药浓度范围的SP其对K562肿瘤细胞凋亡的影响.结果 与PBS空白对照组相比较,50μg/mL和10...     

人红白血病K562细胞的红系终末分化研究

人红白血病K562细胞是一株恶性程度较高的人红白血病体外细胞系，但在体外 种诱导剂诱导向红素终末分化，出现红系表征：停止分裂、表达珠蛋白基因产物、核固缩直至自然排核，因此已成为体外研究肿瘤细胞恶性表达调控的良好模型。本文就K562细胞红系分化的机制和研究进展作一综述。     

大黄素对人红白血病细胞株HEL作用的研究

本研究探讨大黄素(emodin)对人红白血病细胞株HEL增殖的抑制作用及其诱导凋亡的机制.应用MTT比色法检测大黄素对细胞增殖的抑制作用,AO/EB荧光染色法观察大黄素作用后细胞形态的变化,流式细胞术检测大黄素对细胞周期和凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白表达的变化.结果显示,大黄素能有效抑制HEL细胞的增殖,且呈浓度依赖性(r=0.995),作用48小时的IC50约为4.19 μmol/L.AO/EB荧光染色法发现,大黄素作用后24小时HEL细胞发生凋亡,胞核呈致密浓染或碎片并发出黄绿色荧光;流式细胞术检测显示大黄素作用后24和48小时细胞的凋亡率分别为(27.35±1.68)％和(58.49±1.55)％,与空白对照组相比,大黄素作用后G0/G1期细胞比例增多,S期细胞比例减少(p ＜0.01);Akt蛋白的表达未见明显变化(p＞0.05),P-Akt、P-GSK3B和HSP70蛋白的表达下调(p＜0.05).结论:大黄素能显著抑制HEL细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与P-Akt、P-GSK3β和HSP70蛋白的表达下调有关.     

浙江蝮蛇蛇毒诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究浙江蝮蛇毒诱导人白血病K562细胞凋亡的作用及机制。方法MTT法测IC50值及细胞毒作用,Hoechest33258荧光染色法观察凋亡小体形成,流式细胞仪PI染色法检测凋亡峰和细胞周期,同时FCM及Westernblot法检测Bcl2蛋白表达。结果浙江蝮蛇毒能抑制细胞生长且呈剂量依赖关系,并能诱导人白血病K562细胞凋亡,Bcl2蛋白表达下降。结论浙江蝮蛇毒能诱导人白血病K562细胞凋亡且呈剂量依赖关系,此作用与Bcl2蛋白表达下调有关。     

DLL4基因对白血病细胞株K562细胞中YY1和c-Myc蛋白表达及细胞增殖的影响

本研究旨在探讨Notch的配体DLL4基因在白血病细胞株K562中对转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白表达及细胞生长的影响。实验分正常对照组、阴性对照组(转染质粒pBudCE4.1)和实验组(转染质粒pBudCE4.1-DLL4)。转染后48小时,用免疫印迹法和免疫细胞化学法检测外源性DLL4瞬时转染表达水平及YY1和c-Myc蛋白的表达水平;用细胞计数试剂盒-8法检测各组细胞的增殖;转染后48小时用流式细胞仪检测各组细胞的周期分布和凋亡。结果表明,在各组K562细胞中均检测到DLL4、YY1和c-Myc蛋白的表达,实验组的DLL4、YY1和c-Myc蛋白表达量比两个对照组显著增多(p<0.05);实验组K562细胞的生长速度明显低于对照组;实验组较对照组G0/G1期细胞增多(p<0.001),凋亡率增加(p<0.001)。结论:DLL4基因能增加细胞转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白的表达,诱导细胞生长速度减慢、细胞周期停滞于G0/G1期,并能增高凋亡率增加。     

两种菌种来源的左旋门冬酰胺酶抗白血病作用与机制比较

比较大肠杆菌来源的左旋门冬酰胺酶（Ecoli—L-Asp）与欧文菌来源的左旋门冬酰胺酶（Erwinia-L-Asp）体外抗白血病作用,并探讨其作用机制。以两种来源的L—Asp分别处理急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞株（REH、Jurkat）,采用CCK、8试剂盒检测细胞增殖变化（IC50）,AnnexinV／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,高压液相色谱（HPLC）检测用药后培养液中4种氨基酸[门冬酰胺（Asn）、门冬氨酸（Aspa）、谷氨酰胺（Gin）、谷氨酸（Glu）]浓度的变化。结果表明,REH、Jurkat细胞株对两种L—Asp的抑制作用均敏感,且在一定时间内存在明显剂量效应关系,即在较低的药物浓度下,细胞增殖抑制率处于较低水平,而药物浓度增加后,细胞的增殖抑制率明显升高,其中作用后24h,Erwinia-L—Asp组细胞抑制率、细胞凋亡率均明显高于Ecoil．L—Asp组（P〈0．05）,但至48h两组比较差异无显著性（P〉0．05）。两种药物在低浓度时均能耗竭培养液中的Asn,且作用相当（P〉0．05）,高浓度时耗竭Gin作用才凸显,而Erwinia-L—Asp的作用明显强于E．coli—L—Asp（P〈0．05）。结论：两种菌种来源的L-Asp抗白血病作用与剂量存在量效关系,除耗竭外环境中的Asn和Gln外,诱导细胞凋亡也是其抗白血病作用之一。Erwinia—L—Asp具有起效快、Gln耗竭作用较强的特点．可作为临床儿童ALL治疗的一线药物选择。     

商陆提取蛋白体外抗柯萨奇病毒的实验研究

目的:探讨商陆提取蛋白(PAP)在体外抗柯萨奇病毒(CVB3)的效应。方法:(1)用MTT法检测PAP对Hela细胞的毒性作用;(2)在Hela细胞上采用微量细胞病变抑制法观察PAP直接灭活CBV3的作用。结果:(1)连续作用6dPAP对Hela细胞的50%毒性浓度依次降低;(2)实验的第1、2、3d,0.1至25mg/L-3浓度的PAP能抑制100TCID50和1000TCID50柯萨奇病毒在胞内复制;(3)实验的第4、5、6d,0.1至25mg/L-3浓度的PAP作用于感染了CVB3的Hela细胞发生了病变。结论:在体外细胞培养上,商陆提取蛋白能起到阻断或减缓柯萨奇病毒吸附细胞的作用。     

帕金森病大鼠黑质细胞凋亡与Bax蛋白表达相关性的实验研究

目的：观察6-羟基多巴胺（6-OHDA）能否诱发黑质细胞凋亡以及Bax蛋白表达与黑质细胞凋亡的关系。方法：72只Wistar雄性大鼠随机分为对照组36只及通过脑立体定位注射60HDA的方法建立的大鼠帕金森病模型组（PD）组36只，采用TUNEL方法、免疫组织化学、电镜等观察术后l、7、14及21d时2组大鼠脑黑质细胞凋亡的数量及超微结构变化，并检测黑质细胞Bax蛋白的表达。结果：术后TUNEI．法发现，与对照组比较，PD组存在明显的黑质细胞凋亡（P％0．05），且在1—21d时细胞凋亡数逐渐增高；电镜观察显示，PD组黑质细胞存在典型细胞凋亡，Bax蛋白表达在ld为最高，其后很快下降，但仍显著高于对照组。结论：6-羟基多巴胺能诱发大鼠黑质细胞凋亡，Bax蛋白是黑质细胞凋亡的关键启动因素。     

热休克蛋白90α、70、27mRNA在急性白血病细胞中表达的研究

运用RNA分子杂交的方法,观察了热休克蛋白(heat shock protein,HSP)90α、70、27在22例白血病病人细胞,正常血细胞及K562红白血病细胞系中的表达。结果表明:16例白血病病人中,4例急性淋巴细胞白血病(ALL),6例急性非淋巴白血病(ANLL)、1例慢性粒细胞白血病急变期(慢粒急变)和2例骨髓增生异常综合征(MDS)血细胞呈现HSP27高水平表达,较正常血细胞显著增多,ALL(5例)与ANLL(7例)白血病细胞HSP27表达水平无明显改变。检测了7例白血病细胞HSP70的表达水平,除1例ALL及1例MDS明显升高外,其余5例(包括1例ALL,3例ANLL和1例慢粒急变)显著低于正常血细胞。17例白血病病人细胞(包括9例ANLL、5例ALL、2例慢粒急变和1例MDS)HSP90α表达水平均升高,明显高于正常。结果提示:白血病细胞HSP90α表达水平的升高可能与白血病细胞活跃异常增殖有关,而HSP27基因的高表达可能不是某种急性白血病的特殊标志。     

三氧化二砷诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

[目的]研究三氧化二砷(As2O3)在体外诱导人肝癌细胞BEL—7402凋亡的作用。[方法]用MTT、琼脂糖凝胶电泳、原位末端转移酶技术(TUNEL)、透射电镜及流式细胞仪等方法观察细胞凋亡。[结果]As2O3在体外对BEL—7402细胞生长具有显著抑制作用，随着作用时间的延长和As2O3剂量的增加，抑制作用随之增强。As2O3诱导50％以上BEL—7402细胞发生凋亡的浓度为2μmol/L。经As2O3作用后的BEL—7402细胞，在琼脂糖电泳中出现了典型的DNA凋士条带，用流式细胞仪检测出了典型的凋亡峰，电镜下观察到了典型的凋亡细胞形态学改免令细胞核仁消失，染色质浓缩、碎裂，聚于核膜边缘并形成凋亡小体。[结论]As203在体外能有效诱导人肝癌细胞BEL—7402发生凋亡。     

促凋亡蛋白Bim基因在白血病中的表达以及与铁蛋白的关系

目的 研究白血病患者与其骨髓中促凋亡蛋白Bim基因表达的关系，以及Bim基因的表达与血清铁蛋白水平的关系。方法用半定量RT—PCR方法检测30例白血病患者和10例特发性血小板减少性紫瘢（ITP）患者（对照组）中BimmRNA的表达，并分析其与血清铁蛋白水平的关系。结果白血病患者和对照组中均存在BimmRNA的表达，但白血病患者BimmRNA的表达明显低于对照组（P＜0．01），与铁蛋白成负相关性（Y=1237．6-1280X，r=-1280）。结论BimmRNA在白血病患者中呈低表达，与白血病的发生密切相关，Bim的促凋亡机制和细胞内铁吸收转运有关。     

IL-24体外诱导儿童急性白血病骨髓单个核细胞凋亡研究

本研究探讨IL-24对儿童急性白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)凋亡的影响,为临床应用提供理论依据。纳入本研究的确诊未治的儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)、儿童急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者各20例。取患者骨髓分离单个核细胞;用琼脂糖电泳方法检测BMMNC DNA;采用碘化丙锭染色流式细胞术和细胞核形态观察同时检测体外培养的急性白血病BMMNC增殖、分化过程中的凋亡状况;观察IL-24对它们的影响,并进行了定量分析。采用RT-PCR检测bcl-2及caspase-3 mRNA表达水平,观察IL-24对它们的影响。结果发现:IL-24可诱导体外培养的急性白血病BMMNC凋亡。在培养的48小时,可见到DNA出现梯形条带;IL-24 50 ng/ml用药组细胞凋亡程度较没加IL-24的对照组明显增加。IL-24可下调体外培养的急性白血病BMMNC bcl-2基因mRNA的表达,上调caspase-3 mRNA的表达。结论:IL-24可诱导白血病BMMNC凋亡,其机制之一可能是下调bcl-2 mRNA的表达,上调caspase-3 mRNA的表达。     

白花丹醌对人急性早幼粒细胞白血病细胞的体外效应

根据作者已往的临床经验，中草药白花丹对急性早幼粒细胞白血病（APL）治疗有效，但至今尚无关于白花丹对APL疗效方面的系统研究。本研究的目的是通过NB4细胞体外观察白花丹提取物白花丹醌（plumbagin）对细胞增殖及凋亡的影响。采用MTT比色法检测白花丹醌对NB4细胞增殖抑制作用；用光学显微镜及透射电镜观察细胞形态改变；DNA凝胶电泳及annexin V／PI双染实验测定检测细胞凋亡；DNAPI染色法检测细胞亚二倍体峰及细胞周期。结果显示：白花丹醌在2-15μmol/L浓度范围内能够显著抑制NB4细胞的增殖，且呈剂量依赖性效应关系（P〈0．01）；在光学显微镜及透射电镜下可见典型的细胞凋亡形态变化；白花丹醌诱导细胞出现DNA梯形条带，annexin V^＋／PI^-凋亡细胞及亚二倍体峰，细胞周期阻滞于G2／M期，凋亡细胞比例与白花丹醌呈剂量依赖性效应关系（P〈0．05）。结论：本研究首次证实白花丹醌能够抑制APL细胞系NB4的增殖、诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期进程。     

蛋白激酶C在红细胞生成素介导的早期信号转导中的作用

利用pfosluc 2质粒转染对Epo刺激有反应的ELM-I-1细胞系细胞,测定c-fos表达活性的研究方法观察蛋白激酶C在Epo介导的早期信号转导过程中的作用,c-fos表达活性以光子量表示。pfosluc 2质粒转染的细胞加PMA 50 nmol/L刺激,光子量由2 501±126/1×10~5细胞升高到4272±242/1×10~5细胞(n=3,P<0.001);PMA刺激诱导的c-fos活性表达呈剂量依赖性。以Epo 2 U/ml刺激细胞同时以 PMA 50 nmol/L刺激时,光子增加量明显比单独用Epo和PMA刺激时的光子增加量之和增多,结果提示PMA不仅本身能诱导c-fos表达活性,同时能增强Epo刺激诱导的c-fos表达活性。另一方面蛋白激酶C抑制剂H7明显抑制Epo和PMA诱导的c-fos表达活性,Epo诱导的c-fos表达活性下降57.8％。本研究结果提示蛋白激酶C在Epo介导的早期信号转导过程中具有重要的正性调节作用。     

热休克蛋白70在大鼠黑质多巴胺神经元损伤中的表达

目的 :探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )在大鼠黑质多巴胺 (DA)神经元损伤中的表达以及在帕金森病 (PD)诊断中的意义。方法 :将 48只大鼠随机分为黑质DA神经元损毁组 (PD组 )和对照组各 2 4只。PD组注射 6 羟多巴胺 (6 OHDA)损毁大鼠黑质DA神经元 ,对照组仅注射 6 OHDA溶媒。于注射后 1、7、14及 2 1d采用免疫组织化学、尼氏染色、电镜手段动态观察HSP70在损毁的DA神经元中的表达以及DA神经元形态学变化。结果 :在 6 O HDA损毁黑质 1～ 2 1d ,对照组黑质HSP70表达和尼氏细胞计数差异无显著性 (P >0 .0 5 )。PD组HSP70表达在 1d最高 ,7d锐减 ,14和 2 1d则逐渐减少 ,分别为 2 5 %、74%、87%及 88% ;尼氏细胞计数在 4个时间点分别减少1%、13%、35 %及 48% ;超微结构损伤程度呈进行性加重。结论 :PD渐进性发病具有其形态学基础 ,HSP70可作为DA神经元存活的指标和早期诊断PD的指标。