曲古菌素A对结肠癌Lovo细胞增殖抑制的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（TSA）对结肠癌Lovo细胞增殖活性的抑制作用。方法:采用不同浓度的TSA处理结肠癌Lovo细胞。MTT法检测药物作用前后的细胞增殖情况。流式细胞仪检测TSA处理前后细胞周期的变化。结果:TSA在500ng/mL浓度以上才能明显抑制结肠癌Lovo细胞的增殖，抑制率由第2天至第5天显著增加（57.21%至82.76%）细胞周期检测发现20ng/mL TSA即可导致细胞G1期阻滞，但没有诱导明显的细胞凋亡;≥100ng/mL TSA可诱导明显的细胞凋亡。结论:TSA可以抑制体外结肠癌Lovo细胞的生长，可能通过细胞周期G1期阻滞及诱导细胞凋亡发挥抑癌作用。TSA可能是结肠癌治疗的潜在靶点。     

联合应用华蟾素与氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的 探讨单一华蟾素体外对人胃癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用以及与5-氟尿嘧啶（5-FU）联合应用对胃癌细胞的影响.方法 实验分为对照组;华蟾素（cino）组;5-FU组和cino＋5-FU组.利用体外细胞培养、倒置显微镜和荧光显微镜、MTT比色技术及流式细胞仪等方法,观察细胞形态,检测cino和5-FU对人胃癌细胞株BGC823细胞抑制率、细胞凋亡和细胞周期.结果 cino对人胃癌细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖性.cino＋5-FU对BGC-823细胞的增殖抑制率显著高于单独使用组（P＜0.05）.定量分析显示cino＋5-FU组的凋亡细胞发生率显著高于cino组和5-FU组（P＜0.05）.cino＋5-FU可使G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,且大多数被阻滞于S期.结论 cino对胃癌BGC-823细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,与5-FU联用可显著提高后者的化疗效果,且呈时间剂量依赖关系.     

三氧化二砷抑制人结肠癌细胞生长的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)抗人结肠癌细胞SW480生长及其机制。方法采用MTT法和流式细胞术对细胞生长、凋亡、细胞周期、增殖细胞核抗原(PCNA)、Fas、Bcl-2表达率及细胞内钙离子(IECa2+)含量进行分析。结果As2O3可显著抑制SW480细胞生长并诱导凋亡,且呈现剂量和时间依赖关系,其24、48和72h的半数抑制浓度(IC50)分别为9.71、8.78和7.34μmol/L。As2O3作用的SW480细胞周期阻滞在G2/M期,Fas和IECa2+含量增加、PCNA表达下降(P<0.01),但Bcl-2表达无变化(P>0.05)。结论As2O3可有效抑制SW480生长并诱导凋亡,其机制可能与上调Fas和IECa2+含量、降低PCNA表达及阻滞细胞周期有关。     

奥曲肽抑制体外培养人肝癌细胞生长的实验研究

我们通过观察奥曲肽对体外培养的7402人肝癌细胞株生长的影响,探讨生长抑素抑制肝癌细胞生长的机理。材料与方法1.细胞培养:将人肝癌细胞用1640培养液CO2恒温培养箱内培养3~6d然后备用。对各个观察指标重复1~2次。2.药物敏感性实验:(1)噻唑蓝(MTT)比色法:加入不同浓度的奥曲肽,     

反义抑制PTTG对胆管癌细胞株QBC939中VEGF表达的影响

目的：探讨抑制垂体瘤转化基因（PTTG）表达后对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：将已构建好的反义PTTG真核表达载体pcDNA3.1-PTTGas按浓度梯度转染至胆管癌细胞株QBC939中，培养48h后利用RT-PCR和Western Blot方法检测PTTG和VEGF表达量的变化，并将两者的变化行直线相关分析。结果：成功转染反义PTTG至QBC939中;转染后PTTG和VEGF在mRNA水平最大抑制率分别为40.62%和34.14%;在蛋白质水平分别为55.55%和38.46%。在mRNA和蛋白质两个层面上均下降，呈线性正关系(r=0.970,0.985,P<0.05)。结论：反义阻断胆管癌细胞株中的PTTG表达能使VEGF的表达下降，下降程度呈正相关。     

Hic-5/ARA55抑制大肠癌细胞生长的实验研究

目的 研究Hic-5/ARA55对大肠癌细胞生长的影响及其机制.方法 流式细胞仪检测已稳定转染Hic-5/ARA55的大肠癌细胞系(Lovo-Hic-5/ARA55组)的细胞周期,用未转染质粒(Lovo组)和转染空质粒的Lovo细胞(Lovo-Vector组)作为对照.Western blot方法检测各组细胞之间主要细胞周期蛋白的表达差异,Luciferase Assay进一步研究Hic-5/ARA55与细胞周期蛋白的作用机制.建立裸鼠皮下种植瘤模型,7周后切取瘤体并称重,应用免疫组织化学方法检测各组皮下种植瘤的Hic-5/ARA55及相关细胞周期蛋白的表达差异.结果 Lovo-Hic-5/ARA55组细胞由G0/G1期进入S期明显延迟,并且细胞周期蛋白P27表达升高,Luciferase Assay证明Hic-5/ARA55在转录水平上调P27的表达.Lovo-Hic-5/ARA55组皮下种植瘤质量[(0.33±0.23)g]明显低于Lovo组[(1.20±0.39)g]和Lovo-Vector组[(1.30±0.49)g],差异有统计学意义(P＜0.05).Lovo-Hic-5/ARA55组种植瘤Hic-5/ARA55和P27均高表达,而Lovo组和Lovo-Vector组均低表达或阴性表达,差异有统计学意义(P＜0.05),并且Hic-5/ARA55和P27的表达呈正相关(r=0.816,P＜0.05).结论 Hic-5/ARA55在体外和裸鼠体内均通过在转录水平上调细胞周期抑制蛋白P27的表达来抑制大肠癌细胞的生长.     

反苯环丙胺对结肠癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨抑制赖氨酸特异性脱甲基酶1(lysine specific demet hylase 1,LSDl)活性对人结肠癌细胞迁移的影响.方法 本研究应用反苯环丙胺抑制LSD1酶的活性,通过划痕试验和Transwall实验在体外观察人结肠癌Lovo细胞迁移和侵袭的变化.用RT-PCR和Western blot法检测LSD1的表达和H3K4me2甲基化水平. 结果 经过不同剂量反苯环丙胺(40、60和80 μmol/L)处理后,细胞增殖实验结果显示对人结肠癌Lovo细胞增殖无影响(P＞0.05);60μmol/L反苯环丙胺干预后,划痕试验结果发现Lovo细胞迁移明显受抑制.TranswaⅡ实验发现穿过小室的细胞数:60 μmol/L反苯环丙胺组为(69.7±2.5),而对照组为(222.7±11.0),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测显示Lovo细胞中的LSDl mRNA和蛋白水平的表达无改变,但H3 K4me2甲基化水平升高.结论 60μmol/L反苯环丙胺能抑制结肠癌Lovo细胞的LSD1酶活性,降低细胞的迁移和侵袭能力.     

重组人p53腺病毒与常用化疗药物对大肠癌-174细胞株生长抑制的对比

目的:对比了解重组人p53腺病毒注射液对大肠癌-174细胞株的体外抑制效应及其半数致死量(IC50),更好地指导临床应用。方法:通过体外细胞培养、利用MTT法对比检测重组人p53腺病毒注射液与5-氟尿嘧啶、替加氟、顺铂、奥沙利铂、丝裂霉素以及紫杉醇等大肠癌常用化疗药物的IC50和残存肿瘤细胞存活率(Imax%),明确重组人p53腺病毒注射液体外抑瘤的活性。结果:rAdp53的IC50为5.73×1011VP/ml,具剂量、时间依赖性抑瘤效应,但与常用化疗药物相比抑瘤效应较弱;5-氟脲嘧啶、紫杉醇、丝裂霉素单用时抑瘤效应最强;紫杉醇、5-氟脲嘧啶体外抑瘤效应敏感性最好。结论:重组人p53腺病毒注射液具有良好的体外抑瘤效应,IC50为5.73×1011VP,且有剂量和时间依赖性;但其单用时体外抑制大肠癌-174细胞株的作用远逊于经典的化疗药物,如丝裂霉素、5-氟尿嘧啶和顺铂。     

手术后痛风

目的　探讨手术后痛风发作的临床和实验室检查特点,以及药物治疗的效果。方法　回顾性分析1985 年8 月～1996 年12 月治疗的既往有痛风病史且经手术处理,和既往无痛风病史但出现手术后痛风发作的患者237 例的临床资料。结果　41 例患者出现手术后痛风发作,其中男36 例,女5 例。年龄为22 ～80 岁(55-2 ±3-1 岁) 。38 例既往有痛风病史,14 例能长期坚持服药治疗,其余24 例未能坚持治疗。3 例术后痛风为首次发作。术后痛风发作距手术时间为2 ～17(4-6 ±0-7)d 。受累关节分布以下肢为主。诊断明确后,采用非甾体类抗炎药或秋水仙碱治疗效果好。结论　手术后痛风容易误诊为一般手术后的炎症反应。对围手术期关节痛病人,无论既往有无痛风病史,均应测定血清尿酸水平,必要时可行关节滑囊液检查     

PTTG对胆管癌细胞生长和5-FU敏感性影响的研究

目的探讨抑制垂体瘤转化基因(PTTG)表达后胆管癌细胞体外生长的变化及其对5-FU化疗敏感性的影响。方法将反义PTTG真核表达载体pcDNA3.1-PTTGas和空白载体pcDNA3.1(+)转染入胆管癌细胞株QBC939中,筛选获得稳定表达株tQBC939(PTTG-)和tQBC939(pcDNA3.1),并设立未转染的QBC939细胞对照组,绘制细胞生长曲线,以MTT法检测细胞增殖力的变化,流式细胞仪检测细胞周期的比例变化,并采用5-FU处理细胞后,以MTT检测3组细胞的生长抑制率,计算IC50值,流式细胞仪和Hoechst染色法检测各组细胞凋亡情况。结果 tQBC939(PTTG-)组与tQBC939(pcD-NA3.1)组和QBC939组比较,前者生长较为迅速,S期细胞比例增多,G2/M期细胞比例减少(P0.05),增殖指数较高(P0.05);经5-FU处理后,tQBC939(PTTG-)的IC50值明显低于tQBC939(pcD-NA3.1)和QBC939细胞(P0.05),细胞凋亡增多。结论转染PTTG反义DNA可增强胆管癌细胞的增殖力和对5-FU化疗的敏感性。     

他克莫司及阿霉素对肝癌细胞抑制作用的实验研究

摘要：目的:探讨他克莫司(FK506)及阿霉素（ADM）对肝癌细胞的影响。方法:培养HepG-2肝癌细胞株，将其分成对照组、FK506组、ADM及FK506加ADM组，分别处理24~48h。采用MTT法检测细胞增殖，流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡。结果:肝癌细胞增殖能力在FK506作用48h后明显受到抑制；FK506对肝癌细胞有促进凋亡作用，在5~100μｇ/L浓度范围内，凋亡率随浓度增加而增加，超过100μｇ/L时,凋亡率减低。FK506及ADM均使G2期显著延长;FK506联合ADM对G2/M期的阻滞有协同作用。FK506与ADM有协同促凋亡作用。结论:FK506对肝癌细胞的增殖有抑制作用,能使G2期阻滞,促凋亡。FK506与ADM体外联合应用对肝癌细胞有协同抑制作用。     

吡柔比星在III期原发性乳腺癌新辅助化疗中的近期效果观察

目的：探讨以蒽环类药物吡柔比星（THP）为主的联合新辅助化疗对III期原发性乳腺癌新辅助化疗的近期临床效果。方法：对138例手术前确诊的III期原发性乳腺癌采用以吡柔比星为主的CTF方案化疗1～4个周期，观察临床疗效、保乳手术率和毒副反应。结果：全组总有效率为75.4％（104/138）;其中完全病理缓解1例，临床完全缓解1例（0.7％），部分缓解102例（73.9％），无变化32例（23.2％），进展2例（1.4%）。实施保乳手术7例（5.1％）。施行化疗3+4周期的疗效和保乳手术率均明显高于1+2周期者（均P<0.05）。该方案的脱发反应轻，I度脱发28例（20.3％）;心脏毒性较小，室性期外收缩发生率1.4％（2/138），无充血性心衰病例。但骨髓抑制较明显，总发生率55.8％（77/138）,其中II度骨髓抑制发生率为27.5％（38/138），III度骨髓抑制发生率为21.0％（29/138），IV度骨髓抑制发生率为7.2％（10/138）。结论：以吡柔比星为主的CTF方案用于乳腺癌新辅助化疗心脏毒性小，近期疗效较满意;但骨髓抑制发生率高，治疗期间应予支持治疗。     

NK 4抑制结肠癌细胞增殖的机制初探

目的探讨肝细胞生长因子及其受体（HGF/c-Met）拮抗剂对结肠癌细胞的作用及其与MEK/ERK信号通路的关系,明确以HGF/c-Met为靶点治疗结肠癌的细胞内信号传导机制.方法分别将HGF及选择性c-Met拮抗剂NK-4作用于结肠癌细胞系LoVo,运用MTT法分别于0,6,12,24h检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察两者对细胞凋亡的影响.采用Western blot检测药物作用前后c-Met,p-c-Met,MEK2和p-ERK及其靶基因产物C-myc的表达.结果NK-4组呈剂量依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖,促进其凋亡,并使p-c-Met及MEK2/ERK通路相关蛋白表达下调,而HGF组则使其表达上调;同时处理24 h后,空白组与NK-4组（1μg/mL）中p-c-Met,MEK2,p-ERK及C-myc蛋白表达水平比值分别为2.5 8,1.89,1.67和2.21（P＜0.01）,而与HGF（50ng/mL）组相关蛋白比值为0.46,0.71,068和0.58（P＜0.01）.结论选择性HGF拮抗剂NK-4抗结肠癌可能通过阻断MEK2/ERK信号传导通路影响肿瘤细胞增殖与凋亡,以HGF/c-Met为靶点的结肠癌信号通路阻断治疗具有可行性和有效性.     

5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究和临床研究

目的 观察5-氟尿嘧啶(5-Fu)缓释剂对荷胰腺癌裸鼠肿瘤细胞及胰腺癌患者血清肿瘤标记物和细胞免疫的影响。方法 (1)5-Fu缓释剂的体外释放实验和体外抑瘤实验：测定浸出液药物的浓度，计算释放量；检测其浸出液对人胰腺癌细胞株PC3的抑制作用：(2)将荷胰腺癌细胞株Pc3裸鼠60只，随机分成静脉对照组(A组)、5-Fu静注组(B组)、基质植入组(C组)、大剂量5-Fu缓释剂植入组(D组)和小剂量5-FU缓释利植入组(E组)：治疗前及治疗后l4d测肿瘤大小。治疗2周后观察肿瘤组织学变化：免疫组化法测定bcl-2和Bax的蛋白表达水平；TUNEL法检测凋亡指数(Al)。(3)手术探查不能切除之胰腺癌69例随机分成3组：将5-FU缓释剂瘤内植入治疗组(治疗组)、术后行5-FU静脉化疗组(化疗组)和对照组。分别于术前1d和术后第14天采血，测定各组血清中NK细胞，T细胞亚群和CEA，CA50，CA19-9，CA125，CA242血清肿瘤标记物水平。结果 (1)5mg 5-FU缓释剂第1天释放量最大，为0．85mg，第3天为0．45mg，其后在0．25mg水平维持稳定的缓慢释放；释放时间长达l4d以上。(2)5-Fu缓释剂第1天的浸出液对人胰腺癌细胞株PC-3的抑制率达60．27％，第3天为34．25％，以后稳定在25．00％左右。5-Fu缓释剂瘤内注射治疗组裸鼠移植瘤生长速度减慢，bcl-2基因表达明显低于其他各组，而Bax基因表达明显高于其他各组，肿瘤细胞的Al明显高于其他各组。D组和E组肿瘤组织中炎症反应和血管内膜增厚程度明显高于其他各组。术后治疗组CD4 ／CD8 和NK细胞水平高于化疗组，而血清中E述5种肿瘤标记物低于对照组和化疗组。结论 5-Fu缓释剂能在2周内在体外较稳定地持续释放，对人胰腺癌细胞株PC3有持续抑制作用。该剂瘤内注射可明显抑制荷胰腺癌瘤裸鼠瘤体的生长，其作用机制与药物在肿瘤组织中引起的炎症反应和血管内膜增厚等因素有关；并可能与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。该剂植入患者胰腺癌实体内，能明显降低5种血清肿瘤标记物水平，同时对患者的细胞免疫功能影响较小，5-Fu缓释剂可望成为治疗不能切除之胰腺癌的较好的制剂。     

甘遂和低分子量肝素联合应用治疗重症急性胰腺炎的实验研究

目的 ： 探讨甘遂和低分子量肝素联合应用对重症急性胰腺炎治疗是否有协同作用。方法 ：分析比较假手术组（A组）、重症急性胰腺炎组（B组）、重症急性胰腺炎甘遂治疗组（C组）、重症急性胰腺炎低分子量肝素治疗组（D组）、重症急性胰腺炎甘遂和低分子量肝素联合治疗组（E组）各组血清TNF-α，IL-6水平和胰腺组织的TXB2/6-keto-PGF1α比值以及组织学检查结果。结果 ：C，D，E 3个治疗组血清TNF-α，IL-6水平和胰腺组织的TXB2/6-keto-PGF1α比值在6，12，24h各时点的值较B组低（ P <0.05或 P <0.01），而C，D，E 3个治疗组在各时间点无显著差异。组织学检查结果显示，A组胰腺的形态学正常;C，D，E 3组胰腺病理学改变轻于B组。结论 ：联合应用甘遂和低分子量肝素治疗SAP有效，但尚未发现甘遂和低分子量肝素的协同作用，亦未发现不利影响。     

氟尿嘧啶与生长抑素受体基因联合治疗鼠 胰腺癌移植瘤的研究

目的 ： 观察生长抑素二型受体(SSTR2)基因体内转染后裸鼠胰腺癌移植瘤对5-氟尿嘧啶（5-FU）的反应，并探讨其可能机制。方法 ：将人胰腺癌细胞株panc-1种植于裸鼠背部皮下形成胰腺癌移植瘤模型。成模后动物随机分成4组（每组6只）;I组为对照组;II组为腹腔注射5-FU治疗组;III组为瘤内注射pCMV-6C-SSTR2-脂质体转染SSTR2基因治疗组;IV组为基因治疗+5-FU治疗组。观察肿瘤生长速度，测量瘤体大小及重量。用免疫组织化学方法和免疫印迹技术(Westernblot)检测转染效率;用凋亡原位检测方法(Tunel)检测胰腺癌细胞的凋亡率。结果 ：体内转染后SSTR2可重新表达。5-FU和SSTR2基因联合治疗(IV)组肿瘤生长速度显著慢于单独基因治疗(III)组及单独5-FU治疗(II)组和空白对照(I)组（ P <0.01）;最终肿瘤大小，重量也显著小于其他3组（均 P <0.01），而癌细胞凋亡率显著高于其他3组（均 P <0.01）。结论 ：SSTR2重新表达后可增强胰腺癌细胞对化疗药物5-FU的敏感性，联合5-FU 和SSTR2基因治疗可望成为治疗胰腺癌新的途径。     

神经生长因子对人胆管癌细胞增殖作用的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）对人胆管癌细胞株QBC939增殖能力的影响。方法构建β-NGF的真核表达载体pcDNA3．0-NGF，经酶切鉴定后，采用脂质体lipofectamine转染人胆管埔细胞株QBC939。Western Blot检测蛋白的表达情况。MTT法检测转染前后细胞的增殖情况。结果成功构建β—NGF的真核表达载体pcDNA3．0-NGF：转染QBC939细胞后，能稳定表达β-NGF蛋白，且表达强度随转染质粒浓度的增加而增强，与对照组相比，差异有显著性（P〈0.0001）。MTT检测转染后的细胞增殖能力增强，与空白对照组和转染空质粒组相比，差异有显著性（P〈0．01）．且表现出量效依赖关系。结论NGF具有促进胆管癌细胞株QBC939增殖的作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的抗胰腺癌细胞的作用

目的 ：探讨腺病毒介导的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因对人胰腺癌株Panc-1细胞的抑制作用及其机制。方法 ：利用腺病毒载体Ad-TRAIL将人类TRAIL全长cDNA转染导入Panc-1细胞。分别利用RT-PCR和Western blot检测TRAIL在mRNA 水平及蛋白水平的表达。利用MTT法测定细胞增殖活性及TRAIL基因的旁观效应。利用流式细胞仪检测胰腺癌细胞的凋亡率，并用Western blot检测procaspase-8和procaspase-3蛋白的表达。结果 ：Panc-1细胞感染Ad-TRAIL腺病毒后，可稳定地高表达TRAIL。Ad-TRAIL能显著抑制Panc-1细胞的生长。高表达TRAIL的转染细胞能通过旁观效应导致未转染细胞的生长抑制。Ad-TRAIL实验组的凋亡率显著高于对照组（ P <0.01），且Ad-TRAIL能使procaspase-8和procaspase-3蛋白表达下降。结论 ：Ad-TRAIL对胰腺癌Panc-1细胞具有明显的抑制作用，其机制可能与促凋亡和旁观效应有关。