环氧合酶-2选择性抑制剂对肾癌细胞生长抑制和诱导凋亡作用机制的研究

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS-398对肾癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法 常规方法培养肾癌细胞株786-0,以不同浓度NS-398(25,50,100,150,200μmol/L)处理786-0细胞.MTT法检测NS-398对786-0细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测786-0细胞凋亡,Western blot检测COX-2及Bcl-2表达,EIA法检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)的含量.结果 NS-398可抑制肾癌细胞786-0生长,24 h最大抑制率为41.7%,48 h达50.4%;NS-398诱导肾癌细胞786-0凋亡,24 h细胞凋亡率达21.88%;NS-398可明显降低786-0细胞中产生的PGE2水平,下调COX-2和Bcl-2蛋白的表达.结论 NS-398通过抑制COX-2表达,减少肿瘤细胞中PGE2的产生、下调Bcl-2的抗凋亡活性,从而抑制肾癌细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

ω-3多不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸对胃癌细胞株AGS生长和增殖的影响

目的评价ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFA）体外抑制胃癌细胞株AGS增殖和诱导细胞凋亡的能力。方法在处于指数生长期的AGS细胞株培养剂中添加二十二碳六烯酸（DHA），采用噻唑蓝法、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法检测AGS细胞株的生长和增殖情况，并通过免疫组化检测经DHA处理前后细胞中COX-2的表达。结果经DHA作用后，AGS细胞增殖受抑制，随DHA浓度的递增AGS细胞增殖率逐次下降，呈现明显量效关系，同时诱导细胞凋亡；琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现典型的阶梯状条带；流式细胞仪检测出凋亡峰，细胞周期分析表明细胞阻滞于G0／G1期。ω-3PUFA对正常肠上皮细胞增殖无明显影响。经DHA作用后，AGS细胞中COX-2表达下调。结论DHA可能通过抑制COX-2而阻遏AGS细胞的增殖，诱发细胞凋亡。     

环氧化酶-2活性抑制对人膀胱癌T24细胞Survivin、Smad2、VEGFmRNA及其蛋白表达的影响

目的 观察环氧化酶-2（COX-2）活性抑制后，人膀胱癌T24细胞中Survivin、Smad2、VEGFmRNA及其蛋白表达的变化，探讨COX-2及其特异性抑制剂尼美舒利（NIM）对人膀胱癌生物学行为影响的可能机制。方法 体外培养的人膀胱癌T24细胞受终浓度为90μmol／L的NIM作用后，采用ELISA法检测细胞分泌PGE2变化，半定量RT-PCR法、Western Blot法检测COX-2、Survivin、Smad2、VEGFmRNA及其蛋白表达变化。结果 COX-2活性抑制后T24细胞分泌PGE：较对照组明显减少（P〈0.05）；实验组Survivin、VEGF mRNA及其蛋白表达较对照组减弱（P〈0．05），Smad2 mRNA及其蛋白表达增强（P〈0．05），而COX-2m RNA及其蛋白表达无显著变化（P〉0．05〉。结论 COX-2及其特异性抑制剂NIM可能通过PGE2调控凋亡负性调控基因Survivin、信号传导相关的Smad2基因及血管形成相关的VEGF基因的表达，进而影响膀胱癌的生物学行为。     

尼美舒利对胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用

目的研究选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939细胞增殖的抑制作用。方法应用MTT比色法观察尼美舒利对QBC939细胞增殖的影响，细胞凋亡采用透射电镜及流式细胞仪检测，应用免疫组化法检测尼美舒利对QBC939细胞COX-2及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的影响。结果尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制QBC939细胞的增殖，降低QBC939细胞COX-2和PCNA的表达，流式细胞仪检测结果显示，随药物浓度增加，细胞凋亡率显著增加，透射电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变。结论尼美舒利显著抑制QBC939细胞的增殖，诱导其凋亡，且呈时间、剂量依赖性，其机理可能与其下调细胞内COX-2蛋白表达有关。     

埃罗替尼和塞来昔布协同抑制胆管癌细胞生长

目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼(erlotinib)与环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对胆管癌细胞生长的协同抑制作用。方法:采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测胆管癌细胞株QBC939增殖,流式细胞术检测用药前、后细胞凋亡和细胞周期的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹方法观察用药前、后细胞中COX-2、EGFR下游信号及凋亡、细胞周期相关基因蛋白表达的变化。结果:QBC939细胞表达COX-2 mRNA和EGFR mRNA及相应蛋白。埃罗替尼、塞来昔布抑制QBC939细胞增殖,促进细胞凋亡,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。同时,塞来昔布增强了埃罗替尼抑制细胞生长、诱导细胞凋亡的作用。联合用药显著降低p-MAPK、p-Akt及PGE2表达。结论:塞来昔布和埃罗替尼均可抑制胆管癌细胞的生长,而联合用药具有协同作用,能同时阻断EGFR和COX-2信号通路。在胆管癌治疗中具有一定应用前景。     

前列腺素E2在肾脏球旁器调节肾素分泌中的作用

目的 观察前列腺素E2（PGE2）对肾脏球旁器颗粒细胞（JGG）肾素分泌的调节作用。 方法 将小鼠肾脏致密斑细胞株（MMDD1）种植在特殊滤器上,滤器上下（细胞顶侧和基底侧）分别用不同培养基培养细胞,改变细胞顶侧培养基中钠离子、氯离子和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）浓度,分别测定不同时间点滤器上、下PGE2浓度。腹腔注射卡托普利（30 mg/kg）前后,放射免疫法测定野生型和环氧化酶基因敲除（COX-2-/-）小鼠血浆肾素活性(PRA)变化;原代分离COX-2-/-小鼠JGG,测定细胞上清肾素活性及其对PGE2刺激的反应。实时定量PCR测定低肾素（JGG细胞特异性Gsα基因缺失）小鼠肾脏皮质COX-2 mRNA表达。免疫组化法检测肾皮质COX-2蛋白表达。代谢笼中留取24 h尿,ELISA方法测定PGE2水平。 结果 (1)低氯刺激能使致密斑细胞分泌PGE2,不论基底侧还是细胞顶端PGE2浓度均显著增加（均P < 0.05）;但AngⅡ对致密斑分泌PGE2没有显著影响;(2)COX-2-/-小鼠基础PRA[（378.3±96.4）比（1115.0±210.0） ng AngI&#8226;ml-1&#8226;h-1,P ＝ 0.0051,n＝10]和JGG细胞肾素分泌[（153.7±14.7）比（672.4±129.0） ng AngI&#8226;ml-1&#8226;h-1,P ＝ 0.0162,n＝3]显著低于相同遗传背景的野生型小鼠;卡托普利能刺激COX-2-/-小鼠PRA增加32.8倍;PGE2能部分恢复COX-2-/-小鼠原代JGG细胞分泌肾素功能;(3)PGE2受体EP4耦联的Gsα基因敲除的低肾素小鼠,肾脏皮质COX-2 mRNA表达增加（8.07±1.08)倍（n=6,P = 0.0022),免疫组化显示致密斑和远端小管COX-2蛋白表达增加,24 h尿PGE2分泌增加[（1235±152） pg/24 h 比（385±140） pg/24 h,P = 0.0065]。 结论 致密斑PGE2直接受低氯调节,COX-2-/-小鼠基础肾素减少;下游的AngⅡ能直接作用于JGG细胞而不是致密斑负反馈调节肾素分泌。阻断JGG细胞自身的肾素产生（Gsα基因敲除）后,能负反馈上调致密斑的COX-2表达,故COX-2-PGE2-肾素在球旁器存在近距离精确调控机制。     

塞来昔布对人结肠癌细胞生长及裸鼠肝转移瘤形成的影响

目的探讨塞来昔布对体外培养的结肠癌细胞生长及裸鼠肝转移瘤的影响。方法以人结肠癌细胞株HT-29（COX-2高表达）和HCT-116（COX-2低表达）为研究对象，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测塞来昔布对2种细胞的增殖抑制效应，应用流式细胞术检测2种细胞的周期分布情况；将2种细胞接种裸鼠，观察其肝转移瘤形成情况。结果①塞来昔布对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应（P〈0．05，P〈0．01），且对HT-29细胞的作用强于HCT-116细胞（P〈0．05）。②塞来昔布可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布，明显降低其增殖指数。③塞来昔布具有明显的抑制裸鼠肝转移瘤生长的作用。结论塞来昔布可能通过抑制COX-2酶活性而抑制结肠癌细胞的分裂和增殖，诱导其凋亡，干预结肠癌的转移与复发。     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对膀胱癌T24细胞杀伤作用的研究

目的：体外观察塞来昔布对人膀胱癌T24细胞株的抑制作用,并探讨其可能的机制。方法i采用MTT法检测塞来昔布对T24细胞的生长抑制作用;采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态;采用Western印迹法检测塞来昔布作用前后T24细胞COX-2蛋白的表达变化;采用RT—PCR法检测塞来昔布作用前后T24细胞Bcl-2及Bax基因的表达变化。结果：塞来昔布（≥100μmol／L）作用24h及48h后能明显抑制T24细胞的生长并诱导凋亡;塞来昔布100μmol／L作用,24h及48h后,T24细胞COX-2蛋白表达量下降,Bcl-2基因表达亦下调,而Bax基因在塞来昔布作用24h后变化不明显,48h后表达上调。结论：塞来昔布能抑制T24细胞增殖并诱导其凋亡,可能与下调Bcl-2、上调Bax基因表达有关。     

塞来昔布对PC12细胞的凋亡作用及对血管内皮生长因子表达的影响

目的体外探讨COX-2抑制剂塞来昔布对PC12细胞的生长影响及血管内皮生长因子VEGF的表达的调控。方法应用噻唑蓝（MTT）比色法观察塞来昔布对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞的生长抑制作用;Wrights-Giemsa染色法观察细胞形态学;流式细胞技术观察细胞在各时间点的凋亡率;Western blot检测VEGF-165蛋白的表达变化。结果塞来昔布呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞,24h半数抑制浓度（IC50）为100μmol/L;各点凋亡率均高于空白对照组;塞来昔布能抑制PC12细胞的VEGF-165蛋白表达,且跟时间正相关。结论 COX-2抑制剂塞来昔布能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制VEGF蛋白表达。     

Celebrex对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的抑制作用

目的 探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂Cetebrex对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞株的抑制作用及机制. 方法 体外培养人雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3,应用MTT法、RT-PCR和ELISA法检测Celebrex对PC3细胞生长的作用及对COX-2 mRNA、前列腺素E2(PGE2)和IL-6表达的影响. 结果 Celebrex在一定时间和剂量范围内可明显抑制PC3细胞的生长,Celebrex无论在时间-效应或剂量-效应关系上均不影响PC3细胞COX-2 mRNA的表达,但能明显减少PGE2和IL-6的表达. 结论 炎症因子的分泌增多可能是雄激素非依赖性前列腺癌细胞生长的动力,Celebrex对COX-2 mRNA的表达无明显影响,主要是通过抑制COX-2及其下游炎症因子PGE2和IL-6等的表达而对雄激素非依赖性前列腺癌发挥抑制效应.     

132例闭合性肝损伤的诊断和治疗

目的 探讨肝损伤最佳的诊断和治疗方法。方法 回顾性总结1988—1998年10年间本院收治的肝损伤132例诊断和治疗经过。其中非手术治疗31例,手术治疗101例,手术方式包括单纯清创修补,填塞修补,肝切除术。结果 非手术治疗组中,2例因合并多器官损伤而死亡,手术治疗组中,5例死亡。结论 非手术治疗适用于轻度单纯Ⅰ-Ⅱ级肝损伤,应根据伤情具体情况,选择不同的手术治疗方案。     

Impact of pathologically assessing extranodal extension in the thoracic field on the prognosis of esophageal squamous cell carcinoma

BackgroundThis study aimed to elucidate the impact of extranodal extension, pathologically assessed according to new diagnostic criteria, on the prognosis of esophageal squamous cell carcinoma. Extranodal extension has been shown to be a prognostic indicator for head and neck cancers; however, its utility in esophageal squamous cell carcinoma has not been demonstrated.MethodsWe enrolled 174 consecutive esophageal squamous cell carcinoma patients who had undergone esophagectomy with lymph node dissection in the three fields. Extranodal extensions from all metastatic lymph nodes were pathologically classified into grades 1–3. Then, relationships between extranodal extension and clinicopathologic factors, including overall survival and recurrence-free survival were examined. Recurrence patterns in the thoracic and abdominal fields were also examined.ResultsKaplan–Meier analyses showed that patients with grades 2 and 3 extranodal extension showed significantly poorer recurrence-free survival compared with those with intranodal involvement of esophageal squamous cell carcinoma cells (P = .0041 and P = .0011, respectively). Patients with pN3b (newly defined in this study as including at least one lymph node with grade 2–3 extranodal extension regardless of region or number of metastatic lymph nodes) was associated with significantly shorter overall survival and recurrence-free survival (P < .001). Moreover, multivariate analyses indicated that patients with grades 2–3 extranodal extension showed significantly reduced recurrence-free survival in the thoracic but not in the abdominal field (thoracic: P = .047; abdominal: P = .15).ConclusionThis study suggests that the extranodal extension grading system proposed in this study is a novel predictor of overall survival and recurrence-free survival in esophageal squamous cell carcinoma.     

后腹腔镜单纯性肾切除术6例报告

目的探讨后腹腔镜单纯性肾切除术的临床价值. 方法采用后腹腔镜行单纯性肾切除术6例,其中输尿管结石致肾积水无功能肾5例,肾结核1例.经后腹腔操作,分离出输尿管显露肾蒂, 肾动脉、肾静脉钛夹夹闭后切断,单纯采用钛夹处理肾蒂切除肾脏. 结果手术均获成功,无手术并发症发生.手术时间130～220 min,平均150 min;术中出血量80～150 ml,平均120 ml;术后住院5～7 d.5例输尿管结石随访3个月,肾功能正常;1例肾输尿管结核抗结核治疗6个月,随访无复发,血肌酐120 μmol/L稍高于正常. 结论腹腔镜单纯性肾切除术创伤小、恢复快,可成为单纯性肾切除的金标准术式.     

The prolongation of local anaesthetic action with dextran

Field blocks of the inguinal region were performed in two groups of patients, in one group using a mixture of 0.5% bupivacaine, 1:200 000 adrenaline and dextran 110 and in the second group using a mixture of 0.5% bupivacaine, 1:200 000 adrenaline and dextran 150; the study being performed in a double-blind fashion. The dextran 150 mixture produced a highly significant increase (p less than 0.01) in the duration of the block when compared with the dextran 110 mixture. The authors conclude that the use of dextran of increasing molecular weight increases the duration of action of local anaesthetics correspondingly.     

双侧肾上腺转移性非霍奇金淋巴瘤1例报告并文献复习

目的 探讨肾上腺转移性非霍奇金淋巴瘤的临床特点及诊治方法.方法 回顾分析1例双侧肾上腺转移性非霍奇金淋巴瘤患者的临床资料并复习相关文献.结果 患者为68岁男性,因纳差、体重下降2个月,发现双侧肾上腺肿块1天入院.CT提示双侧肾上腺区占位性病变,行左侧腹膜后肿块切除术,术后病检为非霍奇金淋巴瘤.结论 肾上腺转移性非霍奇金淋巴瘤临床少见,临床表现无明显特异性,主要通过CT等影像学检查结合临床表现来诊断,确诊需病理证据,治疗上主要采取以免疫化学治疗为主、结合放疗与手术的综合治疗.     

腹腔镜诊治未触及隐睾29例(34侧)

目的探讨腹腔镜技术诊断和治疗未触及隐睾的疗效。方法2002年7月～2005年3月对29例34侧未触及隐睾利用腹腔镜技术进行诊断和治疗。结果29例均得到明确诊断。21侧腹腔内隐睾中16侧行一期睾丸固定术，5侧行分期Fowler-Stephens睾丸固定；13侧为睾丸缺如。29例随访0，5～1年，睾丸无回缩或萎缩。结论腹腔镜对小儿未触及隐睾的诊断和治疗具有创伤小、恢复快、治疗效果好等优点，可作为未触及隐睾患儿的首选诊治方法，如条件许可，一期睾丸固定术也能取得满意的临床疗效。     

超声造影在肾细胞癌临床诊断中的应用价值

目的 通过观察肾细胞癌的超声造影表现,以探讨超声造影对肾细胞癌的临床诊断价值.方法 分析106例经手术和病理检查证实的肾细胞癌患者的常规超声及超声造影资料,比较两种方法对肾细胞癌假包膜的显示能力.结果 106例肾细胞癌中,肾透明细胞癌98例,多房性囊性肾细胞癌3例,乳头状肾细胞癌5例.超声造影显示假包膜80例(75.4％),而常规超声显示假包膜29例(27.3％),超声造影及常规超声均不显示假包膜26例,两者间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 超声造影对肾细胞癌假包膜显示率明显高于常规超声,超声造影对诊断肾细胞癌有重要的临床价值.     

Numb基因上调对人肾细胞癌细胞周期和增殖的影响

目的 研究Numb基因上调对人肾细胞癌的细胞周期和增殖能力的影响及相关机制.方法 选取人肾细胞癌细胞786-O为研究对象,使用Numb-ORF表达质粒转染细胞为实验组,设置阴性对照及空白对照组.采用荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹技术检测各组Numb基因和肿瘤增殖抗原Ki-67的表达;采用流式细胞技术检测细胞周期,计算G0/G1期细胞比例、增殖指数(PI)和S期分数(SPF);以MTS法检测细胞的增殖活力.结果 实验组Numb的相对表达水平为(18.97±1.49),显著的高于阴性对照组(3.34±0.41)和空白对照组(3.21±0.39);实验组Ki-67的相对表达水平为(4.31 ±0.58),明显少于阴性对照组(10.35±0.84)和空白对照组(9.89±0.73),差异有统计学意义(P＜0.01).细胞周期检测:实验组中G0/G1期细胞的比例(％)为60.47±1.58,明显高于阴性对照组(49.67±1.97)和空白对照组(52.52±2.47)(P＜0.01).实验组的PI和SPF均低于两对照组(P＜0.01).增殖检测:实验组在24、48、72h的吸光度(A)值均低于两对照组(P＜0.01).结论 在786-O细胞中上调Numb基因可以抑制Ki-67的表达,减低细胞的PI和SPF,促使细胞发生G0/G1期阻滞,抑制细胞的增殖活力,实验结果提示Numb基因在肾细胞癌中可能发挥抑癌因子作用.