慢性肝炎新的疾病模型

众所周知,人的肝癌大部分是由肝炎病毒引起的,其发展过程通常为慢性肝炎→肝硬变→肝癌。日本癌症研究所樋野兴夫等制作了发生慢性肝炎的小鼠,并定期对其肝脏病理组织进行观察。具体方法是,把小鼠IFN-γ遗传基因连接到在肝脏中特异出现的SAP(血清淀粉样蛋白 P 合成基因)助催化剂中,制作把其引入的转基因小鼠,获得在肝脏     

肝癌相关基因DLK1转基因小鼠的构建与鉴定

目的 构建并鉴定肝脏特异性表达的DLKl转基因小鼠.方法 通过基因重组方法,将小鼠DLK1 cDNA片段置于小鼠白蛋白基因增强子和启动子序列下游,构建肝脏特异性表达的DLKl重组质粒,酶切重组质粒得到转基因片段,转基因在体外进行表达鉴定后,显微注射获得DLK1转基因首建小鼠,对首建小鼠进行传代,利用F1代小鼠进行DLK1转基因表达的鉴定.结果 逆转录(RT)-PCR和细胞免疫荧光显示,转基因DLK1片段可在小鼠肝癌细胞系Hep1-6中表达.RT-PCR和免疫组化结果显示,DLK1在F1代成年转基因小鼠肝脏中特异性表达.结论 成功构建了肝脏特异性表达的DLK1转基因小鼠.     

乙型肝炎病毒pX相关蛋白研究进展

目前已知在乙型肝炎病毒(HBV)的致癌过程中,HBV X基因及其产物X蛋白(pX)具有重要意义.虽然X基因的转基因小鼠可诱发肝癌(HCC)的发生[1],pX对多种癌基因均具反式激活作用[2],且pX有与p53蛋白结合的作用,在蛋白水平使靶细胞中抑癌基因及其产物的功能发生改变,但迄今为止pX的确切致癌机制仍不清楚.由于DNA的复制与转录、蛋白质的翻译和信号的传导等诸多代谢过程都是各种蛋白相互作用的结果,因此,寻找鉴定细胞内能与HBV pX相互作用的X相关蛋白(X-associated protein XAP,或X-interacting protein XIP)成为目前探讨HCC与pX关系研究的热点之一,并已取得初步结果.     

分子基因水平研究中医药防治肝癌的现状及展望

中医药治疗作为肝癌综合治疗的重要组成部分,有着鲜明的特色,现就近年来有关中医药防治肝癌分子基因水平研究现状作一简要概述和展望。 1 对癌基因、抑癌基因的影响 原发性肝癌的发生、发展是有众多的癌基因、抑癌基因参与其中,一些致病因子(如乙肝病毒、丙肝病毒)导致正常肝细胞基因损伤,引起相关癌基因的激活以及抑癌基因的失活是肝癌发生的分子生物学基础。若运用药物使异常表达     

WHV/myc转基因小鼠肝癌发生过程中的基因异常

目的探测ＷＨＶ／ｍｙｃ转基因小鼠肝癌发生过程中有关基因在肝脏中的异常表达。方法用原位杂交方法检测ＷＨＶ／ｍｙｃ转基因小鼠肝肿瘤形成的不同阶段,ｃ－ｍｙｃ转染基因、胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）基因ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－Ｈ－ｒａｓ等基因的表达。结果ｃ－ｍｙｃ转染基因和ＩＧＦ－Ⅱ基因在转基因小鼠出生后早期的肝脏中异常表达,随后表达水平即降低至不能测出。上述两基因的表达在肝肿瘤形成期重新出现。ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ｃ－Ｈ－ｒａｓ基因在转基因小鼠肝癌发生前肝脏中的表达强度明显高于正常小鼠。结论ｃ－ｍｙｏｔ染基因和ＩＧＦ－Ⅱ基因在小鼠出生后早期和肿瘤形成期的异常表达对肝肿瘤的发生和瘤细胞转化表型的维持可能具有重要意义;在ｃ－ｍｙｃ转染基因表达的“沉默”期,一些癌基因在肝脏中的异常表达对日后肝脏肿瘤的形成可能也具有一定作用。     

HBV感染研究的转基因小鼠模型

文章综述了各种用于ＨＢＶ所致的慢性肝病研究用转基因小鼠的制备与应用。 ( 1)以ＨＢＶ基因组作为转基因的系列转基因小鼠模型 ,如ＨＢＶ全基因转基因小鼠 ,包括普通ＨＢＶ转基因小鼠如Ｃ57ＢＬ、ＩＣＲ等 ,为免疫耐受型 ,能模拟人类无症状携带者。重症复合型免疫缺陷 (ＳＣＩＤ)转基因小鼠 ,由于淋巴细胞分化成熟受阻 ,因而体液免疫与细胞免疫均缺陷 ,免疫系统重建后 ,能引发类似人类的慢性乙型肝炎 ,为该病的发病机制的研究提供了较好的模型 ;以ＨＢＶ基因组部分基因制备的转基因小鼠 ,如ＨＢＶ Ｓ基因 ,ＨＢＶ Ｃ基因和ＨＢＶ Ｘ基因等…     

Ρ53基因与肝癌

肝癌(HCC)是常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居我国恶性肿瘤的第二位。近年来，随着分子生物学、细胞生物学、分子病毒学和人类基因组学等学科的发展，以及这些基础研究向肝癌研究领域的渗透，研究发现其病因与肝炎病毒感染和黄曲霉素摄入有关。主要涉及到致癌基因和抑癌基因的改变，在许多肝癌细胞中可检测到重要的抑癌基因-P53基因的异常，说明基因突变与HCC关系密切。     

健脾理气方对人乙型肝炎病毒转基因小鼠不同时相血清黄曲霉毒素B_1—白蛋白加成物水平的影响

为了探讨HBV与AFD_1协同致肝癌及健脾理气方防治肝癌的机理,预先予HBV转基因小鼠灌服健脾理气方2.5g/kg.wt,qd×15d,再予AFB1 1mg/kg.wt,I.P.,用RIA法测经治疗和未经治疗转基因小鼠及正常小鼠7个时相血清AFB_1—白蛋白加成物浓度。HBV转基因小鼠较正常小鼠易于聚积AFB_1毒性。高峰相加成物水平显著升高,24h相仍维持较高水平。健脾理气方能显著降低该加成物水平,在24h时相使其降至正常水平,该结果提示,HBV与AFB_1协同致肝癌是由于HBV致肝损伤,对毒性致癌物清除障碍所致,健脾理气方能通过加速毒性致癌物清除而抑制肿瘤发生。     

国内实验动物微卫星DNA标记的研究进展

近年来由于传染性疾病的大量流行,相关研究已成为许多专家关注的热点,特别是实验动物传染性疾病,如HBV和HIV感染的模型动物研究已取得了重大的进展。通过转基因和基因打靶技术建立的许多动物模型,如小鼠的基因敲除肝癌动物模型、小鼠转基因乙型肝炎动物模型和猕猴的HIV动物模型等,为各种传染性疾病的研究打下了坚实的基础,但这些模型是否能够再次复制,基因敲除后对于模型动物的遗传背景是否发生改变以及改变的程度等,还须要进行遗传背景的监测。     

Ρ53基因与肝癌

肝癌(HCC)是常见的恶性肿瘤之一,其死亡率居我国恶性肿瘤的第二位.近年来,随着分子生物学、细胞生物学、分子病毒学和人类基因组学等学科的发展,以及这些基础研究向肝癌研究领域的渗透,研究发现其病因与肝炎病毒感染和黄曲霉素摄入有关.主要涉及到致癌基因和抑癌基因的改变,在许多肝癌细胞中可检测到重要的抑癌基因-Ρ53基因的异常,说明基因突变与HCC关系密切.     

老年原发性肝癌与HBV感染59例临床分析

原发性肝癌(肝癌)是全球最常见的癌症,据国际癌症研究中心(IARC)估计2000年全球肝癌发病人数56.4万,死亡54.9万,其中中国肝癌死亡30万,其发病(死亡)数占全世界肝癌的一半以上,严重威胁着人们的健康。肝癌的发病原因与乙肝病毒(HBV)及丙肝病毒(HCV)感染、黄曲霉素(HFB1)、饮水污染、长期酗酒、缺硒和遗传等有关。而在我国肝癌则以HBV感染为主。本文肝癌325例,系我院1988-2003年住院病例,其中HBV感染236例,占     

肝细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立

目的 构建在小鼠肝细胞中特异表达Cre重组酶的转基因小鼠。方法 利用聚合酶链反应(PCR)获得小鼠肝细胞特异性启动子——白蛋白启动子，指导Cre重组酶在肝细胞中特异表达。通过受精卵显微注射的方法，将转基因载体导入小鼠受精卯中，获得转基因小鼠。利用逆转录聚合酶链反应(RT～PCR)检测转基因小鼠中Cre重组酶转录的组织特异性，并将转基因小鼠与Smad4条件基因打靶小鼠进行杂交，利用PCR和Southern Blot进一步检测Cre重组酶在小鼠体内表达的组织特异性及其介导lox P位点之间发生重组的活性。结果 获得了白蛋白启动子，构建了转基因载体pAlb-Cre。将转基因载体进行显微注射，共注射了837枚小鼠受精卵。PCR检测显示53只子代小鼠中有7只整合了Cre重组酶基因，Southern杂交结果证实共获得6只基因组上整合Cre重组酶基因的首建者小鼠。RT—PCR结果表明其中3只阳性小鼠的子代鼠在肝脏和睾丸中正确转录了外源基因。将在肝脏和睾丸中正确转录了外源基因的两只阳性鼠与Smad4条件基因打靶的小鼠杂交，通过PCR检测发现Cre转基因与Smad4条件基因打靶双阳性的子代鼠在肝脏中特异表达Cre重组酶，并能介导基因组中loxP序列间的基因重组，此结果通过Southern杂交得到了进一步证实。结论 成功构建了在小鼠肝细胞中特异表达Cre重组酶的转基因小鼠，为利用条件基因打靶技术研究基因在肝脏发育及相关疾病中的功能及机制奠定了基础。     

3-磷酸甘油醛脱氢酶通过调控磷酸甘油酸脱氢酶促进肝癌的形成

<正>【据《Hepatology》2017年4月报道】题:3-磷酸甘油醛脱氢酶通过调控磷酸甘油酸脱氢酶促进肝癌的形成(作者Liu SS等)3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)在多种癌症中上调,其具体作用及机制尚不明确。本研究利用GAPDH转基因小鼠和二乙基亚硝胺诱导的肝癌模型,揭示GAPDH能够激活细胞增殖、上调炎症相关因子,加剧肝癌的发生发展。研究发现在体外培养的肝细     

肝癌动物模型的建立

自20世纪初获得小鼠自发性肝癌动物模型以来，人们对肝癌动物模型的研究不断深入，逐渐建立了诱发性肝癌模型、移植性肝癌模型及转基因动物肝癌模型。下面就各类肝癌动物模型的建立方法和特点作一简述。     

壳寡糖对PNPLA3 I148M转基因小鼠肝脏脂质代谢的影响

目的探讨壳寡糖对PNPLA3 I148M转基因小鼠肝脏脂质代谢的影响。方法选取5周龄雄性PNPLA3 I148M转基因小鼠随机分为模型组和壳寡糖组,以同龄C57BL/6J小鼠为对照组。壳寡糖组小鼠每日给予200 mg/kg壳寡糖,模型组及对照组给予等量生理盐水。16周后,Western blot检测小鼠肝脏PNPLA3 I148M的表达。HE和油红O染色观察小鼠肝脏脂质蓄积情况,并测定肝脏甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量。同时检测血清中TG、TC、ALT及AST水平。结果模型组及壳寡糖组小鼠肝脏PNPLA3 I148M蛋白表达上调。HE染色示模型组小鼠肝脏发生明显脂肪变性,壳寡糖组小鼠肝细胞内脂肪空泡较少,未见明显脂肪变性;油红O染色示壳寡糖可显著降低转基因小鼠肝细胞内红染脂滴的数量及体积。壳寡糖可减轻PNPLA3I148M基因引起的TG增高,差异有统计学意义(P0.05);3组小鼠肝脏TC含量差异无统计学意义(P0.05)。壳寡糖可降低PNPLA3 I148M转基因小鼠血清TG、TC水平,而对ALT和AST水平无影响。结论壳寡糖能减轻PNPLA3 I148M转基因小鼠肝脏脂质沉积,为治疗NAFLD提供新的思路。     

PC-1转基因小鼠的建立及其与2型糖尿病发病的关系

目的探讨PC-1基因高表达与肥胖、胰岛素抵抗及2型糖尿病的关系。方法构建pcDNA3.1/PC-1转基因质粒,经显微注射的方法获得G0代转基因小鼠;用PCR、Southern印迹、RT-PCR和Western印迹方法检测PC-1转基因小鼠的基因组整合和组织表达;对转基因小鼠进行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(ITT)。结果测序证明克隆的PC-1cDNA序列与GenBank相应序列相比无误,转基因质粒中PC-1插入方向正确;鼠尾基因组DNA PCR和Southern印迹表明共获得8个PC-1转基因阳性的G0代小鼠,分别与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得5个F1代PC-1转基因小鼠系;RT-PCR、Western印迹证实该基因在2个单系的骨骼肌和肝组织中有稳定表达;与野生型小鼠相比,转基因阳性小鼠的体重、空腹血糖、IPGTT和ITT结果无明显变化。结论成功构建稳定表达PC-1基因的转基因小鼠系,研究结果表明该基因在相关组织中的高表达不足以触发肥胖、胰岛素抵抗或2型糖尿病的发生。     

原发性肝细胞癌的分子生物学研究进展

本文较为详细地从分子生物学角度介绍了HBV的分子结构、HBV感染和癌基因表达在原发性肝细胞癌(PHC)发生中的作用。特别着重讨论了HBV X基因产物-HB_xAg的作用。HB_xAg是一个具有广泛非特异反式激活作用的蛋白因子,可能在HBV感染和PHC发生之间起到中介物的作用。此外,还介绍了黄曲霉素和HBV感染之间的关系和PHC发生的两个模型假说。     

肝螺杆菌感染与原发性肝癌相关性的研究进展

原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)全球发病率高,早期诊断率低,死亡率高,部分肝癌患者的病因仍不十分明确,随着A/Jr小鼠感染肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,Hh)后致雄性小鼠肝癌发生率明显升高现象的发现,人们开始思考是否存在肝螺杆菌感染人群致人类肝癌的发生率升高,为肝癌的病因提供一个新的视野,本文简述了Hh生物特性、检测方法、与肝癌的相关性、及致病机制,研究表明肝螺杆菌可能在部分原发性肝癌中充当着十分重要的角色.     

Claudin-7可诱导性条件性基因敲除小鼠模型的构建和鉴定

目的:应用Cre-Loxp系统构建Claudin-7蛋白在肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠模型,并进行表型分析.方法:构建Claudin-7打靶载体,通过电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负筛选法筛选阳性ES细胞并进行PCR鉴定和Southern鉴定,利用显微注射把发生正确同源重组的ES细胞注射进C57BL/6N小鼠囊胚,移入受体小鼠子宫以获得嵌合体小鼠.将得到的嵌合体小鼠与C57BL/6N小鼠交配获得Claudin-7-flox小鼠,该小鼠与PvillinCre ERT2转基因小鼠杂交,通过子代自交获得Claudin-7在肠道可诱导性条件性基因敲除(Cldn7fl/fl Villin-Cre ERT2)的小鼠,他莫昔芬(tamoxifen)药物诱导肠道Claudin-7基因敲除,对小鼠进行表型分析.结果:获得Claudin-7-flox小鼠及Claudin-7肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠数只,Claudin-7肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠出生时表型正常,发育良好,他莫昔芬(tamoxifen)药物应用后,诱导了小鼠肠道上皮细胞Claudin-7基因表达的缺失.小鼠出现脱水表现,活泼度降低,并出现死亡.结论:成功构建了Claudin-7肠道可诱导性条件性基因敲除小鼠模型,利用他莫昔芬诱导肠道Claudin-7基因敲除,初步构建了肠道炎症模型,为进一步研究Claudin-7在肠道肿瘤中的作用奠定了基础.     

胰岛素抵抗的HCV转基因鼠模型的建立

目的 建立胰岛素抵抗的丙型肝炎病毒(HCV)转基因鼠模型.方法 利用携带HCV Core稳定型表达载体,应用基因重组技术和显微注射技术,制备HCV转基因小鼠,用糖耐量试验和胰岛素耐量试验鉴定HCV转基因鼠出现胰岛素抵抗.结果 RT-PCR和Western blot结果表明成功构建了携带HCV Core转基因小鼠模型.1月龄转基因小鼠胰岛素水平明显高于正常鼠,胰岛素耐量试验异常,出现胰岛索抵抗.6月龄转基因小鼠出现肝脂肪变性.结论 成功制备胰岛素抵抗的HCV转基因鼠模型,为研究HCV核心蛋白所致胰岛素抵抗发病机制奠定了基础.