热休克蛋白70对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP 70 )对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法　体外培养大鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生HSP 70 ,用过氧化氢 (H2 O2 )造成心肌细胞损伤。采用免疫组化 ,DNALadder,流式细胞仪 ,细胞色素C氧化酶比活力的测定 ,电镜观察等作为检测指标。结果　温度诱导后HSP 70在胞浆中大量表达 ,损伤组与保护组凋亡率、细胞色素C氧化酶比活力差异有显著意义 (P <0 .0 1)电镜观察损伤组细胞的细胞膜、细胞器损伤明显 ,并出现凋亡小体。结论　HSP 70可延迟细胞凋亡 ,对心肌细胞具有保护作用     

过表达HSP20的慢病毒载体对H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的构建过表达大鼠热休克蛋白20(HSP20)基因慢病毒载体,探讨其对H2O2诱导的大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法构建大鼠HSP20基因pHIV-HSP20过表达质粒慢病毒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其转染效率;包装慢病毒并转染H9C2心肌细胞;72 h后观察其转染效率,RT-PCR法检测细胞HSP20 mRNA表达,CCK-8、Hochest33258染色法检测H2O2诱导后H9C2心肌细胞凋亡情况。结果成功构建了HSP20慢病毒过表达载体,经293FT细胞包装后,其对H9C2细胞72 h的转染效率为95%;与慢性病毒组比较,H9C2细胞转染72 h后HSP20 mRNA水平显著升高,细胞活力下降,心肌细胞凋亡率明显降低(P均<0.01)。结论过表达HSP20能显著抑制H2O2诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

胆碱对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的保护作用

目的 探讨M3受体激动对H2O2诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡的作用.方法 以 H2O2诱导大鼠培养心肌细胞损伤模型为基础,给予M3受体激动剂胆碱和M3受体阻断剂4DAMP进行干预.流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测凋亡抑制蛋白Bcl-2.结果 ①胆碱可显著降低 H2O2对心肌细胞的损伤,提高心肌细胞存活率,并降低细胞的凋亡率;②胆碱可增加凋亡心肌细胞Bcl-2的表达;③M3受体阻断剂4DAMP可逆转胆碱的上述作用(P＜0.01) .结论 激动M3受体对H2O2诱导的心肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与凋亡抑制蛋白Bcl-2有关.     

调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。     

热休克蛋白70抑制c-Jun氨基末端激酶通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察热休克蛋白70(HSP70)对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法培养大鼠心肌细胞,随机分为5组:对照组、H_2O_2组、热休克组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组。生化法测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)活性和丙二醛(MDA)水平,流式细胞仪分析心肌细胞凋亡,噻唑蓝(MTr)法测定心肌细胞相对活力,Western blot法检测JNK的表达。结果H_2O_2组LDH、MDA水平和CK活性明显高于其他组(P<0.01),而SOD活性则明显低于其他组(P<0.01)。细胞凋亡率H_2O_2组明显高于其他各组(P<0.01)。细胞活力H_2O_2组明显低于对照组(P<0.01),而热休克组、JNK抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组的细胞活力明显高于H_2O_2组(P<0.01)。JNK只在H_2O_2组有表达。结论HSP70对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能是HSP70大量表达后抑制了JNK信号的转导。     

热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌A549细胞凋亡相关基因的影响

目的探讨热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌(NSCLC)凋亡相关基因Bcl-2、Bax、热休克蛋白70(HSP70)的影响。方法培育NSCLC细胞株,分为热疗组、依托泊苷组、热疗联合依托泊苷组(联合组)和对照组,干预结束后提取RNA,用RT-PCR方法检测HSP70、Bcl-2、Bax的相对表达量和mRNA表达水平。结果热疗组、依托泊苷组及联合组Bcl-2、HSP70水平明显低于对照组(P均<0.01),Bax水平明显高于对照组(P<0.01)。结论热疗、依托泊苷均可一定程度地诱导NSCLC细胞凋亡,二者联合应用具有一定的协同作用,可进一步诱导NSCLC细胞的凋亡。     

哈巴苷对H2O2诱导的大鼠心肌细胞H9c2氧化应激损伤的保护作用

目的探究哈巴苷(HG)对大鼠心肌细胞氧化应激损伤的作用。方法将H9c2细胞随机分为对照组(H9c2组)、哈巴苷组、H2O2组和H2O2+哈巴苷组,用H2O2处理细胞,复制氧化损伤模型。用哈巴苷(4μmoL)处理细胞,CCK8检测细胞增殖,Hoechst染色检测细胞凋亡,二氯荧光乙酰乙酸盐(DCF)法检测细胞内活性氧(ROS),根据试剂盒说明书检测上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)浓度,Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果与H9c2组比较,H2O2组心肌细胞增殖倍数明显降低,哈巴苷作用细胞4d后,H2O2+哈巴苷组心肌细胞增殖倍数明显高于H2O2组;同时,与H9c2组比较,H2O2组细胞凋亡率明显升高;与H2O2组比较,H2O2+哈巴苷组细胞凋亡率显著降低;H2O2还能显著诱导H9c2细胞Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达,抑制Bcl-2表达;HG能显著减弱H2O2诱导Caspase-3和Caspase-9表达和抑制Bcl-2表达的作用;此外,H2O2组细胞内ROS活性及上清液中SOD和GSH浓度明显低于H9c2组,MDA浓度明显高于H9c2组,H2O2+哈巴苷组细胞内ROS活性及SOD和GSH浓度明显高于H2O2组,MDA浓度明显低于H2O2组。结论哈巴苷能通过抑制氧化应激抑制心肌细胞H9c2凋亡。     

热休克蛋白70通过Bcl-2抑制氧化应激所致C2C12细胞凋亡

目的 探讨C2C12肌原细胞内热休克蛋白70对Bcl-2表达的影响及Bcl-2对热休克蛋白70抗细胞凋亡作用的影响.方法 应用Western Blotting观察Bcl-2在转染热休克蛋白70真核表达质粒(pcDNA3.1-HSP70)或其反义寡核苷酸C2C12肌原细胞中的表达;采用基因瞬间转染技术使热休克蛋白70过表达的C2C12肌原细胞内Bcl-2表达抑制,应用流式细胞术检测H2O2处理所致细胞凋亡的发生情况.结果 转染热休克蛋白70真核表达质粒的C2C12肌原细胞中,热休克蛋白70和Bcl-2的表达明显高于空载体转染组(P<0.01);而转染热休克蛋白70反义寡核苷酸后,热休克蛋白70和Bcl-2的表达明显低于随机寡核苷酸转染组 (P<0.01);热休克蛋白70过表达的C2C12肌原细胞分别转染Bcl-2反义寡核苷酸及随机寡核苷酸,0.5 mmol/L H2O2处理24 h,Bcl-2反义寡核苷酸转染组的细胞凋亡率明显高于随机寡核苷酸转染细胞组.结论 热休克蛋白70能上调C2C12肌原细胞内Bcl-2的表达;热休克蛋白70的抗细胞凋亡功能可能与其上调Bcl-2表达相关.     

黄芪对病毒性心肌炎小鼠热休克蛋白70及Bcl-2、Bax基因表达的影响

目的:研究黄芪对病毒性心肌炎(VMC)小鼠热休克蛋白(HSP)70及凋亡相关基因蛋白产物表达的影响。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,用Western Blot观察心肌细胞HSP70、Bcl-2及Bax变化;120只Balb/c小鼠随机分为正常对照组、病毒组以及黄芪干预组,采用腹腔接种柯萨奇病毒制做VMC小鼠模型,免疫组化检测各组小鼠Bcl-2和Bax基因表达的情况,并用图像分析系统进行分析。结果:黄芪干预组心肌细胞HSP70及Bcl-2表达明显高于病毒组,2组Bax表达无差异;黄芪干预组心肌组织Bcl-2表达明显高于病毒组,2组Bax表达亦无差异。结论:黄芪可能通过上调心肌细胞Bcl-2、HSP70的表达来抑制病毒所致的心肌细胞凋亡。     

热休克蛋白70对供心细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对大鼠供心心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法Wistar大鼠18只,分为两组:对照组(C,n=9),腹腔注射生理盐水0.5ml,24h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液,4℃保存3h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注KH液2h;实验组(E,n=9)腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1μmol/kg(0.53mg/kg),腹腔注射24h后取离体心脏,处理方法同C组。运用免疫组化SP法测定心肌HSP70含量、Bcl-2、Bax蛋白的含量以及相关生化指标并进行统计学处理。结果HSP70含量E组(17.78±1.82)较C组(5.22±1.05)明显增高(P<0.01),Bcl-2的表达E组(41.88±5.09)较C组(31.36±3.27)明显增多(P<0.01),Bax的表达E组(22.61±3.49)较C组(40.52±4.17)明显减少(P<0.01),Bcl-2/Bax比值E组(1.86±0.11)较C组(0.77±0.01)明显增高。生化指标E组明显优于C组。结论心肌HSP70高表达对供心具有明显的保护效应,其促进心肌抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,减少促凋亡蛋白Bax表达,增加Bcl-2/Bax比率,以此抑制心肌细胞凋亡,从而发挥其对供心心肌细胞保护作用。     

丹参酮ⅡA对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及对JAK2/STAT3通路的影响

目的探讨丹参酮ⅡA(TA)对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)的影响及其对Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的影响。方法建立老年大鼠MIRI模型和心肌细胞缺氧/复氧损伤(HRI)模型,分别从体内和体外水平进行研究。采用超声心动图测定心功能,应用全自动生化检测仪检测大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)含量,全自动生化检测仪检测细胞上清液丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫印迹法(Western Blotting)检测相关蛋白表达水平。应用JAK2/STAT3抑制剂AG490干预心肌细胞,观察各项指标变化。结果TA可改善MIRI大鼠心肌梗死面积、心脏射血分数和缩短分数、血清CK和LDH水平(P<0.05),改善HRI心肌细胞活力和凋亡水平(P<0.05),提高HRI心肌细胞抗氧化能力,改善ROS、MDA和SOD水平(P<0.05)。Western Blotting检测结果显示,TA可改善p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2/Bax比值、cleaved Caspase-3水平(P<0.05),AG490干预可逆转上述指标变化(P<0.05)。结论TA对MIRI具有一定保护作用,可能通过激活JAK2/STAT3通路减少心肌细胞凋亡从而改善MIRI。     

人参皂甙Rh2对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的影响及机制探讨

目的观察人参皂甙Rh2（GS-Rh2）对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的影响,并探讨其机制。方法人脑胶质瘤细胞株U251经GS-Rh2处理后,采用MTT法测算细胞抑制率,用流式细胞术测算细胞凋亡率,用RT-PCR检测U251中Bcl-2、Caspase-3 mRNA,用Western blot法检测U251中Bcl-2、Caspase-3蛋白。结果 GS-Rh2对U251具有抑制作用,并呈剂量依赖性;根据细胞增殖抑制曲线计算出GS-Rh2作用于细胞的抑制浓度（IC）,求得IC30、IC50、IC70值分别为10.6、22.3、70.2μg/ml;GS-Rh2可诱导U251凋亡,并呈剂量依赖性。在GS-Rh2作用下,U251中Bcl-2 mRNA、蛋白呈明显低表达,随着GS-Rh2作用时间延长,Caspase-3 mRNA、蛋白表达逐渐增高。结论 GS-Rh2可明显抑制U251增殖,诱导其凋亡,其机制与GS-Rh2下调U251中Bcl-2 mRNA及蛋白表达、上调Caspase-3 mRNA及蛋白表达有关。     

miR-200c-3p靶向XIAP调控缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨miR-200c-3p对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法构建缺氧复氧(H/R)H9c2细胞。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-200c-3p、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)信使核糖核酸(mRNA)的表达。将H9c2细胞分为H/R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p组(转染anti-miR-200c-3p)、H/R+pcDNA组(转染pcDNA)、H/R+pcDNA-XIAP组(转染pcDNA-XIAP)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-NC组(共转染anti-miR-200c-3p和si-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-XIAP组(共转染anti-miR-200c-3p和si-XIAP),用脂质体法转染至H9c2细胞,再进行缺氧复氧处理。免疫印迹(Western blot)、噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测细胞中XIAP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2 X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)的表达、细胞增殖、细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-200c-3p与XIAP的结合力。结果成功构建缺氧复氧H9c2细胞;与正常培养的H9c2细胞比较,H/R组H9c2细胞中miR-200c-3p表达明显上调,XIAP表达明显下调;抑制miR-200c-3p、过表达XIAP均可抑制H/R H9c2细胞的凋亡,下调cleaved Caspase-3、Bax,上调Bcl-2;miR-200c-3p可显著抑制XIAP 3′UTR野生型报告基因活性,并负向调控XIAP的表达;敲减XIAP可逆转抑制miR-200c-3p对H/R H9c2细胞的凋亡抑制作用。结论 miR-200c-3p可诱导缺氧复氧心肌细胞的凋亡,其机制与靶向XIAP有关,可为心血管疾病的治疗提供新靶点。     

RNA干扰程序性细胞死亡因子4表达对缺氧/复氧H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨RNA干扰程序性细胞死亡因子4（PDCD4）表达对缺氧/复氧（H/R）H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 将H9C2心肌细胞分为对照组、H/R组、H/R+NC组和H/R+siPDCD4组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）分别检测4组H9C2心肌细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平,流式细胞仪检测其凋亡率,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其上清液中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）水平,Western blot检测磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路相关蛋白水平。结果H/R组H9C2心肌细胞PDCD4 mRNA和蛋白、活化的Caspase-3、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、上清液中LDH、MDA水平及凋亡率均高于对照组,而上清液中SOD水平、H9C2心肌细胞Bcl-2和p-AKT蛋白水平均低于对照组（P<0.05）。H/R+siPDCD4组H9C2心肌细胞PDCD4 mRNA和蛋白、活化的Caspase-3、Bax蛋白、上清液中LDH、MDA水平及凋亡率均低于H/R组,而上清液中SOD、H9C2心肌细胞Bcl-2和p-AKT蛋白水平均高于H/R组（P<0.05）。结论 RNA干扰PDCD4表达可抑制H/R引起的H9C2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与激活PI3K/AKT信号通路进而降低氧化应激反应有关。     

谷氨酰胺对脂多糖致大鼠心肌凋亡保护作用的研究

目的探讨谷氨酰胺（Gin）对脂多糖（LPS）致大鼠心肌凋亡的保护作用。方法选择雄性健康清洁级大鼠45只,随机分为对照组（Ns5m1）15只、LPS组（10mg／kg）15只和Gln（1g／kg）治疗组15只。大鼠腹腔注药后24h测定平均血压（MAP）、左室收缩末期压力（LVESP）、左室压力上升及下降最大变化速率（±dp／dtmax）等心功能指标;观察心肌病理变化,并分别用RT—PCR及免疫组化方法测定心肌Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达;TUNEL检测心肌细胞凋亡水平;比色法测定Caspase-3活性。结果LPS可促进大鼠心肌细胞Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达,致Bcl-2／Bax降低;增强Caspase-3活性,使心肌细胞凋亡增加,伴心功能减退。Gin可使Bcl-2／Bax增高（两组分别为3．24±0．20、5．62±0．31,P=0．036）,同时降低Caspase-3活性[（两组分别为（142．34±11．57）μmol／L、（94．50±8．91）μmol／L,P=O．027],部分抑制心肌细胞凋亡[（两组凋亡率分别为（45．15±4．83）％、（23．24±3．64）％,P=O．048],减轻心肌损伤,并部分改善心功能[两组±dp／dt一分别为（6534．76±138．51）mmHg／s、（7655．59±174．25）innlHg／s,P=-0．042]。结论Gln可部分抑制LPS致心肌凋亡作用,对LPS致心肌损伤具有一定保护作用。     

Syk对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨脾酪氨酸激酶(Syk)对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的H9c2心肌细胞分为5组:对照组(5.5 mmol/L葡萄糖,NG组)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖,HG组)、Syk抑制剂对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+1μmol/L BAY,NG+ BAY组)、Syk抑制剂高糖组(33 mmol/L葡萄糖+1μmol/L BAY,HG+ BAY组)、甘露醇高渗透压对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇,OC组).采用Western印迹方法检测磷酸化Syk(p-Syk)、cleaved-caspase-1及Bax、Bcl-2的蛋白水平;逆转录PCR检测caspase-1、Bax、Bcl-2 mRNA的表达;流式细胞仪检测H9c2心肌细胞凋亡率;MTT比色法检测细胞活力.结果 与NG组相比,HG组H9c2心肌细胞活力下降(F=37.3,P<0.05)、凋亡率增加(F=46.5,P<0.05),OC组、NG+ BAY组细胞凋亡率与细胞活力差异均无统计学意义(P均>0.05);且HG组p-Syk、cleaved-caspase-1及Bax表达增加,Bcl-2表达降低(F=8.4、80.5、7.6、37.4,P均<0.05),caspase-1及Bax mRNA表达升高,Bcl-2 mRNA表达降低(F=130.7、17.8、7.18,P均<0.05);与HG组相比,HG+ BAY组细胞活力升高(F=37.3,P <0.05)、细胞凋亡率降低(F=46.5,P<0.05),且cleaved-caspase-1及Bax表达降低,Bcl-2表达水平升高(F =80.5、7.6、37.4,P均<0.05),caspase-1及Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达升高(F=130.7、17.8、7.18,P均<0.05).结论 在高糖条件下,Syk可诱导心肌细胞凋亡,其作用是通过调控Bax、Bcl-2的表达.     

氨溴索对大鼠胃内容物吸入性肺损伤细胞凋亡的影响

目的研究细胞凋亡在胃内容物吸入性肺损伤中的作用机制,并初步探讨氨溴索对肺损伤发生后细胞凋亡的影响。方法 30只健康Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:对照组、损伤组、氨溴索组。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bc12(B cell lymphoma/lewkmia-2)蛋白、Bax(Bc12 associated x protein)蛋白及Caspase-3蛋白表达;DNA原位末端标记(TUNEL)法测定肺组织细胞凋亡指数。结果与对照组比较,损伤组中Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达增多,细胞凋亡指数增高;Bc12蛋白表达减少;差异均显著(P<0.05)。与损伤组比较,氨溴索组Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达减少,细胞凋亡指数降低;Bc12蛋白表达增高;差异均显著(P<0.05)。结论细胞凋亡参与了胃内容物吸入后肺损伤发病过程,氨溴索在吸入性肺损伤组织中发挥抗细胞凋亡作用,可能机制在于调控死亡信号通路中Bax/Bc12蛋白表达相关。