Fibulin-5表达对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨fibulin-5表达在膀胱尿路上皮癌中的影响作用. 方法 经尿道切除获取膀胱尿路上皮癌标本20例,其中低级别(G_1和G_2)13例、高级别(G_3)7例.蛋白质印迹法检测fibulin-5在膀胱尿路上皮癌和正常膀胱黏膜组织中的表达.将PCR扩增的fibulin-5 cDNA克隆到pMD-19T载体中,构建p-EGFP-fibulin-5质粒.脂质体介导法将p-EGFP-fibulin-5质粒转染到人膀胱癌5637细胞株内,流式细胞仪分选,经G418筛选形成稳定的表达克隆.Boyden小室法检测未转染、转染空载体和转染fibulin-5的膀胱癌细胞迁移和侵袭能力. 结果 正常膀胱黏膜、低级别和高级别膀胱尿路上皮癌组织中fibulin-5蛋白相对表达量分别为1.16±0.28、0.57±0.32和0.44±0.42.与正常膀胱黏膜相比,膀胱癌组织中fibulin-5蛋白表达显著下调(P<0.01),低级别和高级别癌之间差异无统计学意义(P>0.05).转染成功的膀胱癌5637细胞显示绿色荧光.未转染、转染空载体和转染fibulin-5的膀胱癌细胞的迁移细胞数分别为136.9±5.7、139.3±7.7和127.6±3.1,侵 袭细胞数分别为31.7±4.7、31.5±4.8和8.05±3.1.转染fibulin-5后膀胱癌细胞侵袭力明显降低 (P<0.01),其迁移力虽低于对照组但差异无统计学意义(P>0.05). 结论 Fibulin-5蛋白表达减 少可能是膀胱癌发生和发展的机制之一,过表达fibulin-5可以抑制膀胱癌细胞侵袭力.     

重组组织因子途径抑制物-2对人胰腺癌细胞体外侵袭能力的影响

我们通过脂质体法将组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）基因转染人胰腺癌细胞株Pane-1，观察其对胰腺癌细胞体外侵袭、转移能力的影响。     

白细胞介素1α及其受体拮抗剂对大肠癌细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨白细胞介素1 α(IL-1 α)及其受体拮抗剂(IL-1ra)对大肠癌细胞株增殖、侵袭的影响.方法:选用高肝转移潜能的大肠癌细胞株WiDr及低肝转移潜能的大肠癌细胞株Caco-2和Colo-320,分别用RT-PCR和ELISA方法检测IL-1 α及IL-1 Ⅰ型受体(IL-1R I)的基因及蛋白在3种细胞中表达；用不同浓度的外源性IL-1 α或IL-1ra作用于上述细胞后,用WST-1法检测3种细胞的增殖情况以及Transwell小室检测WiDr与Caco-2细胞侵袭能力.结果:RT-PCR显示IL-1 α基因仅在高肝转移潜能的WiDr细胞中表达,在低肝转移潜能的Caco-2和Colo-320细胞中不表达,而IL-1R I基因在3种细胞中均有表达；ELISA检测WiDr细胞IL-1 α蛋白浓度为(7.85±0.52) pg/mL,而Caco-2和Colo-320细胞未检测到；外源性IL-1 α能明显增加Caco-2和Colo-320细胞的增殖能力(均P＜0.05),对WiDr细胞的增殖无明显影响(P＞0.05),但外源性IL-1ra能明显抑制WiDr细胞的增殖(P＜0.05)；外源性IL-1 α能明显增强Caco-2细胞的侵袭能力(P＜0.05),但对WiDr细胞侵袭能力无明显影响(P＞0.05),外源性IL-1ra能明显抑制WiDr细胞侵袭(P＜0.05),但对Caco-2细胞的侵袭能力无明显作用(P＞0.05).结论:大肠癌的肝转移潜能与IL-1 α表达有关,外源性IL-1ra能抑制大肠癌细胞的增殖与侵袭.     

组织因子对人胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响

目的 构建稳定转染人组织因子(TF)的人胃癌细胞株SGC7901,研究TF对胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响.方法 采用巢式PCR技术自人胎盘组织克隆目的基因TF,应用脂质体介导的转染技术将其导入人胃癌细胞株SGC7901,采用G418筛选稳定表达TF的细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测TF mRNA及蛋白的表达,并进行Transwell实验及划痕实验观察细胞体外侵袭转移能力的变化.结果 经基因测序证实成功构建了稳定、高效表达TF的人胃癌细胞系SGC7901/TF.转染组TF mRNA及TF蛋白表达增高;与阴性对照组及空白对照组相比,转染组细胞的体外侵袭转移能力增强.结论 TF能够增强人胃癌细胞的体外侵袭转移能力.     

组织因子表达对原发性结直肠癌侵袭及转移能力的影响

目的探讨组织因子(TF)表达在原发性结直肠癌侵袭及转移中的作用,分析TF对人类大肠癌HT-29细胞侵袭能力的影响.方法应用免疫组织化学染色法研究85例原发性结直肠癌和6例结直肠良性腺瘤标本TF表达情况,分析TF表达与肿瘤侵袭转移及预后的关系;利用构建有正义/反义TFcDNA的质粒pcDNA3.1/Zeo,以脂质体法转染HT-29细胞; 转染成功的HT-29细胞采用Western印迹分析检测TF表达水平并进行基质胶体外侵袭实验观察细胞侵袭能力的变化.结果85例结直肠癌标本中40例(47.1%)TF表达阳性,正常黏膜和结直肠良性腺瘤均为TF阴性表达;TF阳性表达与结直肠癌的浸润深度密切相关(r=0.895, P<0.01);TF阳性表达与结直肠癌的同时性(r=0.974, P<0.01)和异时性(r=0.963 ,P<0.01)肝转移均密切相关;Logistic回归表明TF表达为结直肠癌肝转移的影响因素(P<0.01),多因素回归分析表明TF表达是影响原发性结直肠癌预后的因素之一(P<0.01);转染了正义TFcDNA的HT-29细胞的TF表达水平较未转染的HT-29细胞升高,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞的TF表达水平则降低;转染了正义TFcDNA的HT-29细胞的侵袭能力较未转染的HT-29细胞增强,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞的侵袭能力则减弱.结论TF可能参与原发性结直肠癌侵袭及转移的生物学过程,其阳性表达可能作为患者术后肝转移的预测指标应用于临床,TF表达是影响原发性结直肠癌预后的因素之一; TF表达的改变可以影响人类大肠癌HT-29细胞的体外侵袭能力.     

组织因子表达与肝癌微血管生成关系及临床意义

目的 探讨组织因子(tissue factor,TF)在人肝细胞肝癌组织中的表达与肿瘤组织微血管形成过程之间的关系和临床意义.方法 对54例人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及相应的癌旁肝组织标本,进行了TF和CD34免疫组织化学EnVisionTM法检测.结果 ①肝癌组织中TF阳性表达率为63.00%(34/54),MVD值为53.17±27.04:癌旁肝组织中TF阳性表达率为5.60%(3/54),MVD值为19.15±6.92.肝癌组织中TF的表达和MVD值之间存在正相关性(r=0.662,P<0.01);②肝癌组织中TF的表达与患者Edmondson-steinerⅢ Ⅳ、静脉浸润、肝内外转移、无或包膜不完整、甲胎蛋白(AFP)≤20 ng/ml有关(P<0.05);多因素Logistic回归分析表明:TF表达是肝癌静脉浸润的独立危险因素之一.结论 肝癌组织中异常表达增高的TF与肝癌微血管形成过程及部分侵袭转移指标相关,提示TF可能促进了肝癌的发生与侵袭转移.     

组织因子对大肠癌细胞侵袭及血行转移的影响

目的分析组织因子（TF）表达对人类大肠癌细胞侵袭和血行转移能力的影响。方法利用构建有正义／反义组织因子cDNA（TFcDNA）的质粒pcDNA3．1／Zeo,以脂质体法转染人类大肠癌细胞HT-29细胞及LoVo细胞;转染成功的HT-29细胞及LoVo细胞采用Western Blot检测TF表达水平,通过裸鼠皮下成瘤观察细胞体内侵袭能力的变化;通过建立裸鼠体内肺转移及肝转移模型观察细胞体内血行转移能力的变化。结果转染了正义TFcDNA的HT-29细胞及LoVo细胞的TF表达水平较未转染的HT-29细胞及LoVo细胞升高,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞及LoVo细胞的TF表达水平则降低;转染了正义TFcDNA的HT-29细胞的体内侵袭能力较未转染的HT-29细胞增强,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞的体内侵袭能力则减弱;转染了正义TFcDNA的LoVo细胞的体内血行转移能力较未转染的LoVo细胞增强,转染了反义TFcDNA的LoVo细胞的体内血行转移能力能力则减弱。结论TF可以促进人类大肠癌细胞的侵袭和血行转移的能力。     

真核起始因子4A1在胃癌中的表达及其在胃癌细胞增殖、侵袭及迁移中的作用

目的:探讨真核起始因子4A1(eIF4A1)在胃癌中的表达及其在胃癌细胞增殖、侵袭及迁移中的作用。方法:收集116对胃癌组织及相应的癌旁正常组织,用免疫组化、RT-PCR及Western blot检测eIF4A1的表达;用MTT法检测不同浓度的eIF4A1抑制剂hippuristanol(0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L)对胃癌细胞株AGS、MGC-803及正常胃黏膜细胞GES-1增殖的影响;Transwell及划痕实验检测hippuristanol对胃癌细胞株的侵袭和迁移能力的影响。结果:免疫组化结果显示,eIF4A1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.05),RT-PCR及Western blot验证结果与免疫组化结果一致。MTT结果显示,hippuristanol呈浓度与时间依赖性抑制胃癌细胞株AGS、MGC-803的增殖,而达0.5μmol/L以上时才对正常胃黏膜细胞GES-1的增殖有抑制作用(均P0.05);用0.125μmol/L的hippuristanol处理的AGS、MGC-803细胞24 h后,两种细胞的侵袭能力及迁移能力均明显下降(均P0.05)。结论:eIF4A1在胃癌中呈高表达,且与胃癌细胞的恶性特征密切相关,eIF4A1抑制剂有望成为治疗胃癌的候选药物。     

低氧对肝癌细胞上皮间质转化及侵袭转移能力的影响

目的:观察低氧环境下肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)情况和侵袭转移能力的改变。方法:选取2种具有不同侵袭转移能力的人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2,通过1%O2低氧培养建立人肝癌细胞物理缺氧模型。动态观察2种细胞在低氧环境中的形态学改变;应用Westernblot方法检测上皮细胞标志蛋白E-cadherin和间质细胞标志蛋白vimentin表达的变化;应用Transwell小室检测肝癌细胞迁移、侵袭能力。结果:低氧环境中,该2种肝癌细胞均由原来的紧密排列上午上皮样状态转为较松散的纺锤体样改变;Western blot检测显示,2种肝癌细胞株的E-cadherin表达量明显下降(均P<0.01),而vimentin表达量明显升高(均P<0.01);Transwell迁移及侵袭实验显示,2种肝癌细胞的迁移及侵袭能力明显增强(均P<0.01);SMMC-7721细胞的上述变化均较HepG2细胞明显(均P<0.01)。结论:低氧环境可诱导肝癌细胞发生EMT,并增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。     

组织因子对结直肠癌细胞肺转移作用的研究

目的 探讨组织因子表达对结直肠癌细胞血行转移能力的影响。方法 利用构建有正义／反义组织因子cDNA（TFcDNA）的真核表达载体pcDNA3.1／Zeo，以脂质体法转染LOVO细胞，采用Western印迹分析检测转染成功LOVO细胞的组织因子蛋白表达水平。18只裸鼠（Babl／cnu／nu）随机分成3组，分别将转染了正义／反义TFcDNA的LOVO细胞及未转染的LOVO细胞通过尾静脉接种至裸鼠体内。8周后观察裸鼠发生肺转移的数目，以肺转移的数目反映LOVO细胞的转移能力。结果 转染了正义TFcDNA的LOVO细胞的组织因子表达水平及肺转移数目较未转染的LOVO细胞升高（P〈0.05，P〈0.01）；转染了反义TFcDNA的LOVO细胞的组织因子表达水平及肺转移数目较未转染的LOVO细胞相比则降低（P〈0.05，P〈0.01）。结论 组织因子可以增加人类结直肠癌细胞的体内血行转移能力。     

转染E1AF对膀胱癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究腺病毒早期转录单位增强子结合蛋白（Ｅ１ＡＦ）对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。方法 构建真核表达载体ｐｃ ＤＮＡ３－Ｅ１ＡＦ,并以此载体转染膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７。采用Ｂｏｙ－ｄｅｎ Ｃｈａｍｂｅｒ穿膜实验分别检测末转染的ＢＩＵ－８７细胞、转染后细胞和转染空载体细胞的体外侵袭能力。将末转染的ＢＩＵ－８７细胞和转染后的细胞分别接种至裸鼠进行体内实验。结果 转染后细胞侵袭能力较转染前明显增加,肿     

反义组织因子cDNA转染对LoVo细胞基质金属蛋白酶-7及其抑制物-1表达的影响

目的探讨反义组织因子cDNA转染对LoVo细胞基质金属蛋白酶(MMP)-7及其抑制物(TIMP)-1表达的影响。方法利用构建有反义TFcDNA的质粒pcDNA3．1/Zeo转染LoVo细胞系,应用Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染组和对照组细胞系中ProMMP-7/TIMP-1蛋白和mRNA表达水平。结果10%胎牛血清刺激组中,转染反义TFcDNA的LoVo细胞系中MMP-7 mRNA的表达水平明显低于空载体组和未转染细胞组(分别为0．07±0．02、0．25±0．05、0．24±0．06,P＜0．05),其ProMMP-7蛋白表达也低于对照组(分别为0．10±0．02、0．21±0．04、0．20±0．03,P＜0．05)；TIMP-1在三组细胞中的表达未见明显改变；MMP-7表达与各组细胞中的TF表达相关(r=0．938,P＜0．01)。结论MMP-7/TIMP-1表达的失平衡在组织因子促进人类大肠癌细胞侵袭转移的过程中发挥作用。     

侵袭性分化型甲状腺癌的治疗及预后分析

目的 总结侵袭性分化型甲状腺癌的临床特征和治疗方法,探讨影响患者预后的因素.方法 回顾性分析中山大学肿瘤防治中心头颈外科1985年1月-1997年12月收治的114例侵袭性分化型甲状腺癌患者的临床病理资料,评价治疗效果,对生存状况与预后因素进行统计分析.生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验,多因素分析采用Cox比例风险模型.结果 初次治疗结束后,全组有68例带瘤生存(68/114,59.7%).全组患者的5年累积生存率为91.9%,10年累积生存率为80.1%,其中无肿瘤残留组、局部微小癌残留组和局部明显癌残留组的10年累积生存率分别为88.5%、78.5%和53.1%.年龄、侵犯食管和术后肿瘤残留情况是影响侵袭性分化型甲状腺癌患者预后的独立因素. 结论侵袭性分化型甲状腺癌的治疗应该以手术为主,彻底清除肿瘤是影响预后的关键因素;该类肿瘤预后较差,年龄、侵犯食管和术后肿瘤残留是影响预后的独立因素.     

动脉导管灌注化疗栓塞对子宫颈癌VEGF的表达及肿瘤血管形成的影响

目的检测子宫颈癌经动脉导管灌注化疗栓塞(TACE)后残癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达及肿瘤微血管密度(MVD),并探讨其临床意义。方法用免疫组织化学法,分别检测24例单纯手术切除组(对照组)的肿瘤组织和22例TACE术后Ⅱ期手术切除组(TACE组)残癌组织中VEGF蛋白的表达,同时用第Ⅷ因子抗体标记血管内皮细胞检测MVD。结果TACE组VEGF阳性表达率为90.9%,对照组VEGF阳性表达率为66.7%,二者间统计学检验显著性差异。TACE组微血管密度(MVD)大于30为90.9%,对照组MVD值大于30为50.0%,二者之间有统计学意义(P<0.01)。结论子宫颈癌TACE后残癌组织中VEGF的表达升高,微血管密度明显增加。TACE可能促进了残癌组织中肿瘤血管的形成。     

可溶性血管内皮生长因子受体1基因转染结肠癌Lovo细胞的实验研究

目的研究人可溶性血管内皮生长因子受体1（sFlt-1）基因转染结肠癌Lovo细胞后对其细胞生长及培养上清液VEGF含量的影响。方法使用脂质体介导方法把含sFlt-1基因的重组质粒pcDNA3-sFlt-1转染Lovo细胞,通过RT-PCR及ELISA法鉴定sFlt-1的表达,MTT比色法及ELISA法检测该蛋白对Lovo细胞生长及VEGF含量的影响。结果pcDNA3-sFlt-1成功转染Lovo细胞．ELISA法检测到转染后培养上清液中sFlt-1蛋白的表达．MTT实验显示此培养上清液可抑制Lovo细胞的生长．转染后2、14、21和28d细胞培养上清的抑瘤率分别为（23．92±9．16）％、（13．98±10．21）％、（22．54±11．92）％和（33．43±9．34）％,与未转染组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;ELISA证实细胞培养上清中VEGF的含量降低,与未转染组比较,差异亦均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论将sFlt-1基因转染至结肠癌Lovo细胞后,可获得具有生物活性的sFlt-1蛋白．抑制癌细胞生长。     

反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞bcl-2基因的表达并增强凋亡的研究

目的　观察反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞bcl 2基因的表达并诱导凋亡和增强化疗的敏感性。方法　应用反义硫代寡核苷酸 (bcl 2SON)和顺铂共同处理结肠癌细胞系SW62 0 ,通过流式细胞仪观察其bcl 2蛋白表达的变化 ,并通过原位末端标记法 (TUNEL)染色和流式细胞仪检测细胞凋亡指数。结果　用bcl 2SON处理过的SW62 0细胞其bcl 2蛋白平均荧光强度 (MFI)为(40 .3± 8.7) %与空白对照及随机链对照组相比 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1 ) ,表明导入反义bcl 2后可明显抑制结肠癌细胞的bcl 2蛋白的表达。经bcl 2SON和 1 0mg/L顺铂共同处理的SW62 0细胞凋亡指数为 (64 .7± 8.4) % ,显著高于单纯顺铂处理组的 (2 3 .6± 6 .3) % (n =5 ,P <0 .0 1 )以及单纯bcl 2SON处理组的 (2 7.5± 5 .1 ) % (n =5 ,P <0 .0 1 )。而未经处理的对照组SW62 0细胞凋亡指数则为 (8.5± 1 .2 ) % ,显著低于后两组 (n =5 ,P <0 .0 5)。结论　bcl 2SON可通过抑制结肠癌细胞 (SW 62 0 )bcl 2蛋白的表达 ,诱导其凋亡 ,增强对化疗药物的敏感性     

反苯环丙胺对结肠癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨抑制赖氨酸特异性脱甲基酶1(lysine specific demet hylase 1,LSDl)活性对人结肠癌细胞迁移的影响.方法 本研究应用反苯环丙胺抑制LSD1酶的活性,通过划痕试验和Transwall实验在体外观察人结肠癌Lovo细胞迁移和侵袭的变化.用RT-PCR和Western blot法检测LSD1的表达和H3K4me2甲基化水平. 结果 经过不同剂量反苯环丙胺(40、60和80 μmol/L)处理后,细胞增殖实验结果显示对人结肠癌Lovo细胞增殖无影响(P＞0.05);60μmol/L反苯环丙胺干预后,划痕试验结果发现Lovo细胞迁移明显受抑制.TranswaⅡ实验发现穿过小室的细胞数:60 μmol/L反苯环丙胺组为(69.7±2.5),而对照组为(222.7±11.0),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测显示Lovo细胞中的LSDl mRNA和蛋白水平的表达无改变,但H3 K4me2甲基化水平升高.结论 60μmol/L反苯环丙胺能抑制结肠癌Lovo细胞的LSD1酶活性,降低细胞的迁移和侵袭能力.     

人γ-干扰素基因在大肠癌细胞中的表达研究

目的 探讨γ-干扰素用于基因治疗的有效途径。方法 将人γ-干扰素（huIFN-）全长cDBA经序列测定后克隆到真核表达质粒pcDNA-3-IFN-γ，利用阳离子脂质体Lipofectamine介导转传染人大肠癌细胞，用PCR、RT-PCR对该基因的整合和表达进行鉴定，并对细胞培养上清中γ-干扰素的活性进行检测。结果 该基因已经有效地进入人细胞内并实现了表达。结论 利用脂质体可以有效地将huIFN-γ基因悼入肿瘤细胞内，并获得稳定表达。