重组腺苷蛋氨酸合成酶酶促反应条件的研究

目的：对重组腺苷蛋氨酸合成酶催化L-蛋氨酸（Met）和三磷酸腺苷（ATP）合成腺苷蛋氨酸的反应条件进行研究。方法：将重组腺苷蛋氨酸合成酶制成粗酶液,对其酶促反应条件进行研究和优化,摸索反应的最适pH值、最适反应时间及最适酶量,解决产物抑制问题和产物分解问题。根据试验摸索的条件进行450L生物反应罐的中试放大。结果：重组腺苷蛋氨酸合成酶催化Met和ATP合成的反应最适pH值为7．0,反应时间为8h,选择硼酸钠-硫酸缓冲液作为反应的缓冲系统,确定了反应液中酶液的最佳比例为1：10,解决产物抑制问题的对甲苯磺酸钠的用量为9％。将镁离子和钾离子的盐酸盐形式改为硫酸盐形式,从而保证了最小限度的产物分解。中试放大结果：三批收率分别达到86．8％、87．1％和88．4％。结论：建立了重组腺苷蛋氨酸合成酶酶促反应的方法,为酶促法合成腺苷蛋氨酸大规模生产奠定了基础。     

血酮体定量及其临床应用

建立了一种血酮体定量方法。测定的最适条件是,硫酸浓度为9mol/L;高锰酸钾浓度为5%(170mmol/L);沸水浴加热时间20min;比色波长420nm。应用本法测定了25例正常人和60例糖尿病人血酮体量。糖尿病人血酮体量明显升高(P<0.001),Ⅰ型与Ⅱ型糖尿病人血中酮体量亦有显著的差别(P<0.001)。血酮体的定量测定有助于临床糖尿病的分型。     

山奈酚-锰配合物合成工艺的研究

目的:探讨山奈酚-锰配合物的最佳反应条件。方法:采用正交实验对山奈酚与氯化锰的配比、反应液pH值、反应温度、反应时间等合成条件进行研究。结果:反应时间对产率的影响显著,物质的量比次之,pH值影响最小。结论:最佳合成条件为山奈酚与氯化锰的配比为1∶2,pH值为6,反应温度25℃,反应时间3 h。     

纤维素酶转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的研究

目的 研究宝藿苷I的制备工艺。 方法 采用纤维素酶水解淫羊藿苷制备宝藿苷I,以转化率为指标,通过单因素考察pH值、温度、底物的浓度、酶用量、反应时间及金属离子对转化率的影响L9(34),正交试验优化制备工艺;采用MS, 1H-NMR、13C-NMR鉴定水解产物。 结果 酶解反应的最适条件为温度50 ℃、反应介质pH 5.2醋酸-醋酸钠缓冲液,底物浓度为10 mg/mL,酶与底物质量比1∶1,反应时间48 h,钠离子、钙离子、镁离子、锌离子、对酶解反应无显著影响(P>0.05),铁离子对酶解反应有抑制作用(P<0.01);反应产物相对分子质量为514,核磁图谱证实产物为宝藿苷I。结论 纤维素酶水解淫羊藿苷制备宝藿苷I,工艺简单可靠,反应条件温和,适合工业化生产。     

间接免疫酶染色检测小鼠组织内弓形虫及抗原

目的：用间接免疫酶法检测小鼠组织内弓形虫及抗原成份，为实验研究和制备诊断试剂盒提供材料。方法：选择最佳的实验条件，包括羊抗兔IgG-HRP的浓度、反应时间的选择，观察了消化液对染色的影响，并对该方法的敏感性、特异性、重复性进行了研究。结果：羊抗兔IgG-HRP的最适浓度为1：100。最适抗体抗原反应时间为24h，抗体与羊抗兔IgG-HRP反应时间为1h，最适显色时间为5min。间接酶法用于虫体涂片时．兔抗弓形虫血清1：800为最高稀释度。在肝脏、脾、肺和脑均可清楚显示弓形虫感染组织内弓形虫速殖子及抗原成份，染为棕黄色。结论：本方法敏感性高、特异性强、重复性好。该方法可用于弓形虫病的病理诊断。     

马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的提取及酶学性质的研究

目的 建立pNPG法测定马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的活性，研究马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质，为进一步阐明青黛炮制原理提供依据。方法 采用pNPG法考察马蓝叶中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件。结果 最适反应条件为总反应体积1 mL，反应时间45 min，底物pNPG体积0.2 mL，浓度25 mmol/L，缓冲液pH值6，反应温度55 ℃。在此条件下研究马蓝叶的粗酶液中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质，结果表明该酶在30～60 ℃热稳定性较差。该酶在pH 5.0～ 7.0比较稳定，而在酸性条件下酶活下降较快，酶的pH值稳定性范围较窄。酶在4 ℃下的保存稳定性较好。结论 确定了测定马蓝叶中β-葡萄糖苷酶活性的最佳条件，探索了马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的酶学性质，该酶的热稳定性、pH值稳定性和保存稳定性的研究为青黛炮制原理的研究奠定了理论依据。     

斑氏试剂与醛反应实验探讨

斑氏 (Benedict)试剂、裴林 (Fehling)试剂常用于醛、酮的鉴别 ,也常用于糖含量的测定。斑氏试剂有其碱性小、稳定性大、可以贮、其它杂质对反应干扰小等优点 ,但斑氏试剂与醛反应速度慢。例如裴林试剂与脂肪醛混合 ,水浴5分钟、或直接加热至沸 ,马上可看到到砖红Cu2 O沉淀 ;而斑氏试剂与脂肪醛混合 ,同样条件下看不到砖红色沉淀 ,因而往往被误认为“斑氏试剂与脂肪醛不反应”。笔者经摸索 ,得出在“近沸水浴中加热 1小时以上 ,慢慢冷却”的实验方法 ,取得了良好效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1 .1　试剂斑氏试剂 (新配 ) ,甲醛 3 7%～ …     

党参水溶性多糖含量测定方法的研究

目的:研究党参水溶性多糖的含量测定方法.方法:研究苯酚-硫酸法测定党参水溶性多糖时各因素对结果的影响,并对这些因素进行优化.结果:确定苯酚-硫酸法最佳反应条件为:在2 mL供试样品中加入1 mL苯酚,5 mL浓硫酸,沸水浴加热15 min,冷却至室温,在490 nm处测定吸光度值;同时进行了线性关系、精密度、重复性、稳定性及回收率等方法学考察,各项指标良好.结论:用苯酚-硫酸法结合3,5-二硝基水杨酸法来测定党参水溶性多糖的含量可用于党参多糖的质量控制.     

耐热脂肪酶产生菌的筛选及其产酶条件和酶学特性的研究

从福州温泉等地取样品若干，筛选耐热脂肪酶产生菌，最终获得一株脂肪酶产生菌wi-2，初步鉴定为细菌。经发酵产酶条件优化得到：Wi-2最佳产酶条件为：发酵周期35h，培养温度37℃（2，培养起始pH6．5，摇瓶装量25ml／250ml，接种量7％。用硫酸铵提取wi-2发酵液中脂肪酶，进行酶学特性的初步研究，结果：最适反应pH为8．2，最适反应温度为45℃（2。酶的热稳定性：在40℃下处理100min，酶活基本不损失，在60℃下处理100min，酶残余酶活为40％以上。     

γ-谷氨酰转肽酶酶学性质的研究

目的了解地衣芽孢杆菌菌体细胞中γ-谷氨酰转肽酶的一些基础酶学性质。方法采用溶菌酶法破碎细胞壁,经硫酸铵沉淀后透析得到粗酶后,采用紫外分光光度法测定该酶的酶活力。结果该酶在25～35℃的温度范围有很好的耐受性,在碱性条件下保持一定的活性,最适反应温度为45℃,最适反应pH值为8.0,Ca2＋、Mg2＋等金属离子在适当浓度时对酶活性有促进作用。结论本实验为利用该酶转化生产茶氨酸提供了依据。     

三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质

三相分离(TPP)是将硫酸铵与叔丁醇混合后形成有机相、中间沉淀相和水相。在20°C,调节发酵上清液的pH至6.0,加入硫酸铵使终浓度为400 g/L,溶解后加入与上清液等体积的叔丁醇,静置1 h分相,胆固醇氧化酶在有机相和水相之间形成蛋白沉淀,12 000 r/min离心10 min收集中间蛋白相,用pH 7.5,10 mmol/L的磷酸缓冲液溶解。结果表明:利用三相分离技术从乳化体系中分离纯化胆固醇氧化酶,比酶活提高了3.49倍,收率达93%。回收的酶液进一步经过DEAE-Sepharose Fast Flow纯化,比酶活从3.56 U/mg提高到30.15 U/mg。该酶最适反应温度为60°C,最适反应pH为7.5,酶的等电点为8.5,该酶在37°C,pH 6.0~8.0较为稳定。Hg2 和Ag 离子完全抑制胆固醇氧化酶的活性。     

特种纤维素酶催化水解壳聚糖及壳寡糖的制备研究

用凝胶渗透色谱法研究了特种纤维素酶催化水解过程中的分子量及其分布，制备了不同低分子量的壳聚糖和壳寡糖，详细研究了水解温度、pH值、时间和酶的用量等因素对酶催化水解产物的分子量及其分布的影响，制备壳寡糖的反应条件为壳聚糖质量分数w=0．01，水解温度58℃，pH=5．3，特种纤维素酶w=0．10，反应时间3h。     

中药血清药理学研究中血清处理方法探讨

目的 以具有子宫兴奋作用的坤血安作为分析药物，观察不同方法处理的空白血清以及给予坤血安后采集的血清对小鼠离体子宫的影响。方法 坤血安含药血清的制备：给小鼠灌服坤血安中间体470mg/kg,50min后小鼠摘眼球取血，分离血清，分别采用56℃加热30min处理（加热处理）、50％乙醇沉淀（醇淀）、56℃加热30min处理后再以50％乙醇沉淀（加热后再醇沉）、50％乙醇沉淀后再56℃加热30min处理（醇沉后再加热）等方法处理血清；空白血清实验前灌服生理盐水，再如前法制备及处理血清。所得血清加入恒温浴槽中，以PowerLab/8S系统观察受试血清对小鼠离体子宫平滑肌活动的影响。结果 不同方法处理后的空白血清中，以加热后再醇沉及醇沉后再加热2种方法所处理血清对离体子宫的干扰最小，且对药物作用影响不大。结论 在此实验中采用加热后再醇沉法或醇沉后再加热法制备血清比较适宜。     

发光分析测定体液中腺苷脱氨酶

利用化学发光分析技术建立了一种测定体液中腺苷脱氨酶活性的新方法，该方法简便易行，快速灵敏。对酶反应最佳条件进行了探讨，底物Km为0．31mmol／L，最佳pH为7．40，反应时间为10min。该方法的重复性CV为2．74％。该方法对结核性胸膜炎和癌性胸水的鉴别诊断有实用价值。     

一种诊断用谷氨酸脱氢酶酶学性质研究

目的研究一种国产谷氨酸脱氢酶的热稳定性、酸碱耐受性、最适温度、最适pH和动力学参数等性质。方法以α-酮戊二酸、铵离子及还原型辅酶I（NADH）为底物,在谷氨酸脱氢酶催化作用下,转变为谷氨酸和氧化型辅酶I（NAD）,利用NADH在340nm处有吸收峰,监测其反应速率（-△A Jmin）,计算谷氨酸脱氢酶的活力单位,采用Linewaeaver-Burk作图法（双倒数作图法）对谷氨酸脱氢酶的米氏常数进行测定。结果谷氨酸脱氢酶于50℃保温20min保留活力约为87．5％,而在60℃保温20min后残存活力为54％;最适反应温度为45℃;最适反应pH为7．5;在pH为5～10范围内酸碱耐受性较好,25℃放置20h残留活力为90％以上。结论动力学研究表明该酶与国外知名厂家产品相差不大。     

微波辐射合成7-硝基-4（3H）-喹唑啉酮

目的用微波辐射法合成7-硝基-4（3H）-喹唑啉酮,研究微波功率、微波辐射时间和酸胺摩尔比等对反应收率的影响。方法以2-氨基4-硝基苯甲酸、甲酰胺为原料,采用微波辐射合成7-硝基-4（3H）-喹唑啉酮,并通过正交设计实验优化反应条件。结果最佳条件为：微波功率95W,辐射时间9min,酸胺摩尔比1：12,收率可高达96．8％,与常规加热法比较提高了约35％。结论微波辐射法对合成7-硝基-4（3H）-喹唑啉酮具有非常好的效果,与传统加热方法及文献方法相比,缩短了反应时间,提高了反应速率和收率。     

槲皮素-镧配合物的合成与光谱表征

目的 合成槲皮素-镧配合物并进行光谱表征.方法 采用正交试验对反应温度、pH、反应时间等合成条件进行研究,利用紫外-可见光谱、红外光谱对槲皮素-镧配合物的结构进行表征.结果 反应温度对产率的影响显著,pH次之,反应时间影响最小.结论 最佳合成条件:反应温度80 ℃、pH 9、反应时间5 h.     

胞苷二磷酸胆碱酶促合成的研究

研究了胞苷三磷酸和磷酸胆碱在啤酒酵母磷酸胆碱胞苷酰转移酶催化作用下,直接合成胞苷二磷酸胆碱的反应条件,包括最适pH,底物浓度、镁离子浓度及反应时间的选择。在最适反应条件下转化率可达58%。此外,还测得了胞苷三磷酸的表观米氏常数K_M2×10~(-2)M,对酶的分离也作了初步的探索。     

用木瓜蛋白酶在两相系统中合成二肽甜味剂Aspartame

研究了多种因素对木瓜蛋白酶在水－有机溶剂两相反应体系中合成二肽甜味剂Ａｓｐａｒｔａｍｅ能力的影响，结果表明，在本实验条件下，水与乙酸乙酯的比例为６：１００～７：１００之间为宜；反应最适ｐＨ为５．２；最适温度３７℃；反应时间为９ｈ；酶用量为１００～１２０ｍｇ／ｍｍｏｌ底物；Ｌ－ＰｈｅＯＭｅ与ＣＢＺ－Ｌ－Ａｓｐ的摩尔比为１：１。     

单端羧基聚乙二醇／鱼精蛋白系统介导HSV-TK基因在官颈癌细胞中的体外研究

目的研究非病毒载体MPEG-C-鱼精蛋白系统的制备方法、其对不同剂量鱼精蛋白与单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV．TK）的结合能力以及对HeLa细胞的影响。方法将一定量的MPEG-C-和不同量的鱼精蛋白混合后与DNA室温孵育,得到MPEG-C-鱼精蛋白／DNA复合物;用琼脂糖电泳实验测定不同N／P比形成复合物时对HSV-TK的阻滞情况;用结合沉淀试验比较不同量鱼精蛋白对包裹HSV-TK的能力的影响;MTF法检测MPEG-C-鱼精蛋白对HeLa宫颈癌细胞的毒性作用及其复合物对HeLa细胞的转染率。结果MPEG-C-鱼精蛋白复合物包裹HSV-TK的能力随N／P比增大而增强：粒径随N／P比增大而减小,可达200nm左右;复合物的Zeta电位随N／P比增大而增强;与单独鱼精蛋白复合物相比．细胞转染率有所降低。结论MPEG-C-鱼精蛋白是一种制备工艺简单、对HSV．TK包裹能力高、细胞毒性小、具有一定价值的非病毒载体。